Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Вопросы диагностики и лечения спаечной кишечной непроходимости (обзор литературы) 15
1.1 Диагностические мероприятия, используемые при спаечной кишечной непроходимости 15
1.2. Моторно-эвакуаторные нарушения при спаечной кишечной непроходимости 20
1.3. Методы электромиостимуляции кишечника в лечении послеоперационных моторно-эвакуаторных нарушений 23
1.4. Иммунологические аспекты спаечной кишечной непроходимости 27
1.5. Характеристика методов лечения больных со спаечной кишечной непроходимостью 29
Глава 2. Материалы и методы 34
2.1. Общая характеристика проведенных исследований 34
2.2. Экспериментальная часть 34
2.2.1. Протокол экспериментального исследования на крысах 36
2.2.2. Макроскопическая оценка изменений в брюшной полости и морфологическое исследование кишки в результате моделирования спаечного процесса у крыс 37
2.2.3. Иммунологические методы исследования системы нейтрофильных гранулоцитов периферической крови крыс 38
2.2.4. Протокол экспериментального исследования на щенках 39
2.2.5. Исследование сосудодвигательного аппарата кишки с помощью компьютерной реографии для оценки перестройки кровенаполнения, происходящее под влиянием электростимуляции в норме и при декомпенсации 43
2.2.6. Компьютерная регистрация электрической активности кишки с помощью имплантированных электродов «ПЭГ-8» для оценки развития декомпенсации мышечного аппарата и определения динамики восстановительных процессов после устранения сужения 46
2.2.7. Методика исследования гладких миоцитов мышечной оболочки тонкой кишки в условиях двигательных нарушений, обусловленных длительной механической обструкцией 47
2.3. Характеристика клинической части исследования 49
2.3.1. Принципы формирования клинических групп 49
2.4. Специальные методы 52
2.4.1. Анамнестический метод 52
2.4.2. Клиническое наблюдение 52
2.4.3. Лабораторные методы обследования 52
2.4.4. Рентгенологические методы обследования 53
2.4.5. Ультразвуковые методы обследования 54
2.4.6. Иммунологические методы обследования 54
2.5. Обработка результатов 55
Глава 3. Экспериментальное обоснование способа лечения и профилактики спайкообразования 56
3.1. Клинико-иммунологическая эффективность применения препарата «Лонгйдаза 3000 ME» для лечения спаечного процесса в эксперименте 56
3.1.1. Оценка частоты возникновения спаечного процесса, клинической картины, макроскопических и микроскопических изменений органов брюшной полости при различных способах введения препарата «Лонгидаза 3000 ME» 57
3.1.2. Фагоцитарная активность и переваривающая способность нейтрофильных гранулоцитов лабораторных животных при различных способах введения препарата «Лонгидаза 3000 ME» 63
3.1.3. Состояние NADP.H - оксидазной микробицидной системы нейтрофильных гранулоцитов лабораторных животных при различных способах введения препарата «Лонгидаза 3000 ME» 71
3.1.4. Динамика содержания неферментных катионных белков при различных способах введения препарата «Лонгидаза 3000 ME» 75
3.1.5. Динамика активности миелопероксидазы при различных способах введения препарата «Лонгидаза 3000 ME» 77
3.1.6. Оценка протеолитической ферментативной активности нейтрофилов лабораторных животных при спаечном процессе и различных путях введения препарата «Лонгидаза З000МЕ» 80
Глава 4. Экспериментальное обоснование прямой электростимуляции тонкой кишки для коррекции моторных расстройств после устранения хронической механической обструкции 83
4.1. Проявления последствий создания стеноза дистального отдела тонкой кишки 83
4.2. Влияние прямой электрической стимуляции кишки на ее сосудодвигательный аппарат у здоровых животных 83
4.3. Состояние сосудистого русла тонкой кишки при устранении частичной ее механической обструкции и в процессе использования электростимуляции с имплантированных электродов 88
4.4. Электрическая активность кишки в норме и при развитии стеноза 92
4.5. Влияние стимуляции с имплантированных электродов на электрическую активность кишки при ее декомпенсации 96
4.6. Морфологический статус гладких миоцитов мышечной оболочки тонкой кишки в условиях двигательных нарушений, обусловленных длительной механической обструкцией 102
4.6.1.Визуальное исследование морфологического статуса гладких миоцитов мышечной оболочки тонкой кишки в условиях двигательных нарушений, обусловленных длительной механической обструкцией 102
4.6.2. Компьютерная морфометрия гладких миоцитов мышечной оболочки тонкой кишки в условиях двигательных нарушений, обусловленных длительной механической обструкцией 104
Глава 5. Применение оптимизированного диагностического алгоритма у детей с поздней спаечной кишечной непроходимостью 109
Глава 6. Комплексная программа лечения больных с поздней спаечной кишечной непроходимостью 125
6.1. Общая характеристика клинического материала 125
6.2. Клинико-лабораторная эффективность консервативной терапии 127
6.3. Нарушения в системе нейтрофильных гранулоцитов у детей основной группы и их коррекция при проведении консервативной терапии 136
6.4. Клинико-лабораторное обоснование выбора оперативной тактики и послеоперационного ведения больных с поздней спаечной кишечной непроходимостью 142
6.5. Нарушения в системе нейтрофильных гранул оцитов у детей основной группы и их коррекция в послеоперационном периоде 151
6.6. Медико-социальная эффективность разработанной программы лечения детей с поздней спаечной кишечной непроходимостью 156
Заключение 159
Выводы 174
Практические рекомендации 176
Литература 177
Приложения 210
- Моторно-эвакуаторные нарушения при спаечной кишечной непроходимости
- Протокол экспериментального исследования на щенках
- Состояние NADP.H - оксидазной микробицидной системы нейтрофильных гранулоцитов лабораторных животных при различных способах введения препарата «Лонгидаза 3000 ME»
- Влияние прямой электрической стимуляции кишки на ее сосудодвигательный аппарат у здоровых животных
Введение к работе
Проблема спаечной кишечной непроходимости до настоящего времени является одной из значимых в абдоминальной хирургии. Ее актуальность обусловлена высокой частотой встречаемости - 25% - 80%, высокой летальностью от 7,6% до 25%, способностью приобретать рецидивирующий характер течения - 7% - 13%о [4; 66; 81; 89; 90; 95; 97; 146; 153; 206; 221; 235].
Ключевым для решения проблемы диагностики и лечения спаечной болезни, а также ее профилактики является комплексный подход к данному вопросу [8; 53; 129; 157; 194].
Данные литературных источников, свидетельствующие о
преимуществе какого - либо из существующих методов диагностики
непроходимости спаечного генеза, весьма противоречивы. В большинстве
случаев диагностика базируется на рентгенологических методах и в
последние годы на результатах ультразвукового обследования [22; 57; 74;
86; 106; 121; 142; 217; 227; 239; 255]. Однако, несмотря на положительные
моменты, эти методы не лишены недостатков. Они либо длительны по
времени, либо недостаточно информативны, особенно в случаях,
сопровождающихся острым нарушением мезентериального
кровообращения [95; 238].
Таким образом, нет ясности в вопросе порядка проведения диагностических мероприятий у лиц, поступающих в стационар с подозрением на кишечную непроходимость. В силу очевидных причин, актуальным остается вопрос выяснения объективных диагностических критериев, с использованием современных методов обследования, в определении различных форм поздней спаечной кишечной непроходимости (ПСКН) в детском возрасте.
Известно, что лечебные мероприятия напрямую связаны с формой кишечной непроходимости. В настоящее время существуют консервативные и оперативные методы, направленные на восстановление кишечного пассажа [74; 180; 245].
В последнее время приоритетным является использование лапароскопических методик в лечении непроходимости спаечного генеза [19; 21; 60; 61; 65; 77; 78; 202].
В послеоперационном периоде традиционными методами лечения
спаечной непроходимости кишечника остаются: антибактериальная
терапия, коррекция метаболических расстройств, медикаментозная и
электростимуляция моторики кишечника, энтеросорбция, продленная
эпидуральная блокада, гипербарическая оксигенация,
физиотерапевтические процедуры [20; 112; 124; 192].
Несомненный интерес представляет изучение иммунитета человека при спаечной кишечной непроходимости. Важная роль отводится должной коррекции иммунных механизмов в развитии послеоперационных спаек [66; 70; 119;148;178].
Несмотря на значительные достижения в современной хирургии и интенсивной терапии, традиционные методы лечения больных со спаечной непроходимостью кишечника не всегда эффективны и требуют дальнейшего совершенствования. Оптимизация алгоритма ведения в послеоперационном периоде с учетом формы заболевания, возраста пациента и тяжести его состояния нуждается в детализации.
Следующим важным моментом является воздействие на двигательный аппарат измененной в результате спаечной непроходимости тонкой кишки. Перспективным видится использование прямой электростимуляции гладкой мускулатуры кишечной стенки с применением длинных импульсов под контролем регистрации электрической активности. Но эта технология требует экспериментального обоснования [7; 26; 75; 85].
Таким образом, для улучшения результатов лечения спаечной кишечной непроходимости, необходима комплексная клинико-экспериментальная разработка вопросов диагностики и лечения различных форм поздней спаечной кишечной непроходимости и экспериментальное обоснование возможности восстановления свойств двигательного аппарата кишки с использованием прямой электростимуляции.
Цель исследования: создание эффективной комплексной программы диагностики и лечения поздней спаечной непроходимости кишечника в детском возрасте.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
показать возможность диагностики различных форм поздней спаечной кишечной непроходимости у детей с использованием спиральной компьютерной томографии;
оценить иммунологический статус больных с поздней спаечной непроходимостью кишечника;
оптимизировать комплексную программу послеоперационного ведения больных с учетом формы заболевания, иммунологического фона, возраста и тяжести состояния пациента;
изучить влияние препарата «Лонгидаза 3000 ME» на развитие и течение спайкообразования в брюшной полости в эксперименте;
разработать модель двигательных нарушений при механической кишечной непроходимости и определить оптимальные параметры прямой электрической стимуляции для ускорения восстановительных процессов кишки после устранения механической непроходимости в эксперименте.
Научная новизна: 1) на основании проведенного компьютерно-томографичиского исследования органов брюшной полости с внутривенным контрастным «усилением», впервые дана характеристика различных форм поздней спаечной кишечной непроходимости в детском возрасте;
оптимизирован алгоритм диагностики поздней спаечной кишечной непроходимости у пациентов детского возраста;
впервые исследована иммунологическая эффективность препарата «Лонгидаза 3000 ME» для профилактики и лечения спаечного процесса в эксперименте и клинической практике; >
разработана комплексная программа консервативной терапии и послеоперационного ведения пациентов детского возраста с поздней спаечной кишечной непроходимостью с учетом формы, иммунологического статуса и тяжести состояния;
впервые описаны функциональные критерии различных уровней декомпенсации гладкой мускулатуры кишечной стенки и дана характеристика состояния ее сосудистого русла в результате экспериментального сужения просвета кишки;
определена закономерность влияния длительных импульсов с различной частотой на электрическую активность и функциональное состояние сосудистого русла кишки в эксперименте;
впервые экспериментально доказана возможность управления скоростью восстановительных процессов в кишке после устранения механического препятствия для пассажа кишечного содержимого.
Основные положения, выносимые на защиту:
разработанный диагностический алгоритм с использованием спиральной компьютерной томографии и ультразвуковой сонографии позволяет своевременно поставить клинический диагноз и проводить адекватное лечение;
используемая комплексная программа консервативной терапии и послеоперационного ведения детей с различными формами поздней спаечной кишечной непроходимости с включением иммуномодулирующей терапии, позволяет добиться хороших клинико-лабораторных и медико-социальных показателей;
разработанная модель двигательных нарушений тонкой кишки в эксперименте полностью отражает процессы нарушения пищеварительного пассажа при спаечной кишечной непроходимости в эксперименте;
использование прямой электростимуляции с отработанными параметрами на модели двигательных нарушений тонкой кишки при механической непроходимости позволяет ускорить восстановительные процессы после устранения непроходимости в эксперименте
Практическая значимость:
показана возможность ранней диагностики странгуляционной кишечной непроходимости с помощью СКТ с внутривенным контрастным «усилением» сосудистого русла кишки;
оптимизирован алгоритм диагностики различных форм поздней спаечной кишечной непроходимости с применением СКТ с внутривенным контрастным «усилением» сосудистого русла кишки и динамического ультразвукового мониторинга;
обосновано применение препарата «Лонгидаза 3000 ME» с противоспаечной целью у пациентов детского возраста;
апробирован и внедрен в клиническую практику алгоритм лечения детей с поздней спаечной кишечной непроходимостью;
Научная значимость:
разработан способ лечения спаечного процесса в брюшной полости в эксперименте;
создан способ моделирования двигательных нарушений тонкой кишки различной выраженности для экспериментальной практики;
разработан способ оценки функционального состояния кишки для решения экспериментальных задач.
Внедрение результатов в практику:
Рекомендации к практическому применению внедрены в работу хирургического отделения №3 Краснодарской краевой детской клинической больницы, ^ Краснодарского краевого диагностического центра, Детской городской больницы г. Сочи (приложения 2.1-2.7). На предложенные мотоды обследования и лечения оформлены 4 акта внедрения. Материалы диссертации используются на семинарах и лекциях со студентами 5 и 6 курсов Кубанского государственного медицинского университета, занятиях по повышению квалификации детских хирургов Краснодарского края. По результатам исследования опубликовано 14 печатных работ, получена приоритетная справка на выдачу патента РФ (приложение 6). Изданы методические рекомендации для студентов, врачей-интернов и практических врачей по теме: «Спаечная непроходимость кишечника у детей».
Апробация работы:
Материалы диссертации доложены и обсуждены на Российской научно-практической конференции с международным участием «Современные аспекты кишечной непроходимости», (г. Анапа, 2007); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы лечения и современные технологии в педиатрии», (г. Краснодар, 2007); V Конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины», (г. Москва, 2008); Краевой научно-практической конференции детских хирургов «Современные технологии диагностики и лечения хирургических заболеваний детского возраста», (г. Новороссийск, 2008); 43-й Всероссийской конференции с международным участием студентов и молодых ученых «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации», (г. Тюмень, 2009); 63-й Итоговой научной конференции молодых ученых Ростовского
государственного медицинского университета с международным участием, посвященной 70-летию СНО (MHO), (г. Ростов-на-Дону, 2009); Российском симпозиуме детских хирургов с международным участием «Приобретенная кишечная непроходимость у детей», (г. Ставрополь, 2009); VII Съезде аллергологов и иммунологов СНГ, (г. Санкт-Петербург, 2009); IV Российской научно-практической конференции хирургов с международным участием «Современные аспекты перитонита», (г. Анапа, 2009).
Публикации: по теме диссертации опубликовано 14 работ.
Объем и структура диссертации:
Материалы выполненной работы изложены на 230 страницах. Работа состоит из «Введения», глав «Обзор литературы», «Материалы и методы», 4-х глав собственных исследований, «Заключения», «Выводов», «Практических рекомендаций», «Литературы», «Приложений». В главе «Литература» использовано 197 работ отечественных и 77 работ зарубежных авторов. Иллюстративный материал представлен 29 таблицами, 64 рисунками и 1 схемой. Получено положительное решение на выдачу патента РФ. Работа выполнена на кафедре хирургических болезней детского возраста Кубанского государственного медицинского университета (заведующий кафедрой - доктор медицинских наук, профессор В.А.Тараканов).
Завершая вводную часть диссертации выражаю искреннюю благодарность своему учителю - д.м.н., профессору Виктору Александровичу Тараканову, д.м.н., профессору Ирине Вадимовне Нестеровой, д.м.н. Владимиру Владимировичу Оноприеву, коллективу кафедры хирургических болезней детского возраста Кубанского государственного медицинского университета, сотрудникам Детской краевой клинической больницы г. Краснодара.
Моторно-эвакуаторные нарушения при спаечной кишечной непроходимости
Оперативные вмешательства на органах брюшной полости, по данным ряда авторов, в 13-86% случаев сопровождаются моторно-эвакуаторными нарушениями, требующими специального лечения в 69% случаев. Такие нарушения принимают характер более легких форм — в виде пареза, а в ряде случаев могут приводить к тяжелым формам функциональной непроходимости кишечника [31, 242].
Длительный послеоперационный парез кишки может стать причиной ряда нежелательных осложнений, в том числе спаечной кишечной непроходимости [42; 43; 96]. Развивающийся при этом «синдром энтеральной недостаточности», включающий в себя нарушение двигательной, секреторной, всасывательной и барьерной функций кишечника, приводит к нарастанию уровня эндогенной интоксикации, превращая кишку в «недренируемый гнойник» [3; 124; 183]. Парез кишечника и нарушение транзита химуса способствуют транслокации микробов в кровеносное русло и брюшную полость, поддерживая тем самым воспалительный процесс и , создают предпосылки к патологическому спайкообразованию [156; 192].
Таким образом, борьба с парезом кишки является приоритетным направлением в снижении спайкообразования.
Практически нетронутыми остаются вопросы развития декомпенсации двигательного аппарата кишки при нарушенном пассаже вследствие спаечной деформации кишечной трубки. Лишь клиническое наблюдение позволяет оценить манифестацию моторных нарушений, тогда как их скрытые формы остаются без должного внимания, что зачастую приводит к запоздалому принятию лечебных решений. В связи с этим нельзя переоценить значение объективных методов оценки развития функциональных расстройств. Углубленное изучение этой проблемы представляет ценность для возможного создания эффективных методов лечения определенного контингента больных.
Для исследования моторной функции ЖКТ предложен манометрический метод [263]. Данный способ отличается высокой чувствительностью и незначительным воздействием на пациента, однако для того, чтобы корректно отразить функциональное состояние ЖКТ, исследование колебаний внутрипросветного давления необходимо проводить не менее шести часов [49; 175].
В настоящее время известны методики регистрации биопотенциалов ЖКТ с поверхности тела, однако существуют факторы, которые, по мнению ряда авторов, не позволяют достаточно уверенно и четко трактовать полученные данные [233; 262]. На характер сигнала влияют перистальтика, сердечные сокращения, деятельность скелетной мускулатуры. Искажение электрических импульсов требует в данном случае использование фильтров - усилителей [250; 257].
Наиболее точным является метод прямой электромиографии. Авторами показано, регистрация электрической активности со стороны серозной оболочки органа достаточно адекватно отражает электрические процессы, происходящие в его стенке, позволяя избежать недостатков других методик. Прямая электромиография позволяет выявлять патологические проявления задолго до клинической манифестации, в то же время этот метод позволяет быстро и точно оценивать эффективность терапевтических мероприятий [128; 136; 214; 271; 272].
Однако в литературе также имеются сообщения о ситуациях, когда электромиография не всегда отвечает на поставленные вопросы. Так Waldhausen J.H. et al., (1990г) не нашел достоверных признаков, прогнозирующих разрешение илеуса после лапаротомий. Hotokezaka М., Mentis Е.Р., Schirmer B.D. (1996) не смогли установить электромиографические признаки восстановления моторики желудка.
Наряду с оценкой моторно-эвакуаторных нарушений целесообразно уделить внимание состоянию кровоснабжения ЖКТ. В печатных работах присутствуют сведения о нарушениях процессов микроциркуляции в стенке кишки в условиях острой кишечной непроходимости [31; 44; 172], однако конкретных сведений о регистрации таких нарушений мы не встретили.
Метод реографии используется для выяснения особенностей регионарного кровотока, позволяет оценить состояние артериального, капиллярного и венозного русла. Анализ в динамике таких показателей как амплитуда волны, дикротический индекс, диастолический индекс, максимальная скорость быстрого и медленного кровенаполнения, дает ценную информацию о состоянии сосудистого русла в норме и при патологии [72].
Существующий метод чрескожной реографии широко применяют для исследования функции паренхиматозных органов, функции головного мозга, оценки кровоснабжения нижних конечностей. В доступной литературе имеются данные об использовании прямой реографии для оценки кровоснабжения стенки желудка, но не достаточно освещен вопрос об изучении состояния сосудистого русла сегмента тонкой кишки с помощью прямой реографии [128].
Однако очевидно, что для решения исследовательских задач перспективным является использование прямой реографии кишечной стенки при условии определения границ реографических показателей в норме и патологии.
Протокол экспериментального исследования на щенках
В группе А под общим обезболиванием, 5-ти животным выполнили срединную лапаротомию. Для осуществления гистологического контроля брали полнослойную биопсию тонкой кишки с последующим ушиванием дефектов кишечной стенки атравматичной нитью PDS 5/0. Далее формировали подкожный тоннель, заканчивающийся на холке, через который в брюшную полость проводили 3 электрода «ПЭГ - 8». Имплантация электродов осуществлялась в перпендикулярном кишке направлении, серо-серозными швами, атравматической нитью PDS 5/0. Электроды были установлены в 5-ти, 10-ти и 15-ти см от илеоцекального угла по направлению к желудку (Рис. 2.2.4.1.). Петлю кишки с имплантированными электродами погружали в брюшную полость, лапаротомную рану ушивали послойно. Электроды нумеровали.
Запись электрической активности тонкой кишки осуществлялась натощак, в утренние часы, по 30 минут, ежедневно на протяжении 5-ти дней. В данной группе, подбирая эффективные параметры стимуляции, вначале производили 10-ти минутную запись базального ритма. Параллельно осуществляли регистрацию параметров кровотока кишки и запись ЭКГ во втором стандартном отведении. Затем, на электрод, располагавшийся в 15-ти см от илеоцекального клапана, подавали электрические импульсы, используя электростимулятор «ЭнтероСтим-001». Параллельно с нижележащих электродов регистрировали моторную деятельность кишки и показатели состояния сосудистого русла. Для поиска наиболее эффективных параметров активизации электрической активности использовали стимуляцию по принципу «лестницы».
На 5-ти животных группы В и 5-ти животных группы С была разработана модель двигательных нарушений кишки. После срединной лапаротомии, в рану эвентрировались петли тонкой кишки вместе с илеоцекальным углом. Отступя 5 см от илеоцекального угла, на кишку накладывалось суживающее просвет градуированное кольцо, изготовленное из мягкой пластмассы. Степень сужения и не превышала 60% просвета кишки (Рис. 2.2.4.2.). Лапаротомная рана ушивалась наглухо.
В процессе наблюдения за животными в послеоперационном периоде, на фоне развития хронической кишечной непроходимости, оценивали их внешний вид, аппетит и активность, определяли вес.
На 14-е сутки после наложения на кишку суживающего кольца, животным группы В и С под общим обезболиванием выполняли релапаротомию. Визуально оценивали выраженность супрастенотического расширения (Рис. 2.2.4.3. А), выполняли послойную биопсию кишечной стенки в 5-ти и 10-ти см выше уровня непроходимости с последующим восстановлением целостности кишки атравматической нитью PDS 5/0. Далее по вышеописанной методике имплантировались 3 электрода «ПЭГ -8» в стенку кишки (Рис. 2.2.4.3. Б), электроды нумеровали, удаляли суживающее просвет кишки кольцо, а лапаротомную рану послойно ушивали.
У животных группы В в течение последующих пяти дней осуществляли регистрацию электрической активности кишки. Запись осуществлялась по 30 минут, в утренние часы натощак. На 20-е сутки от начала эксперимента под наркозом выполняли релапаротомию, осуществляли послойную биопсию кишечной стенки для гистологического исследования. Целлостность кишки восстанавливали атравматической нитью PDS 5/0, рану послойно ушивали. По окончании исследований, электроды удалялись «потягиванием» без видимых усилий.
У животных группы С в последующие пять дней проводили сеансы прямой пристеночной стимуляции кишечной стенки. В работе использовали параметры стимуляции, полученные в результате исследований на животных группы А. Стимуляция выполнялась в утренние часы, натощак. В течение 10 минут осуществляли запись базального ритма, реограммы. Затем, в течение 10 минут подключали стимулятор с заданными параметрами: сила тока 1 мА, продолжительность импульса 100 мс, частота следования импульсов 18 в минуту. По окончании сеанса стимуляции записывали электромиограмму, реограмму и ЭКГ во втором стандартном отведении еще в течение 10 минут.
На 20 сутки от начала эксперимента, завершая исследования в данной группе, под общим наркозом выполняли релапаротомию. Осуществляли послойную биопсию кишечной стенки с восстановлением ее целостности атравматической нитью PDS 5/0. Рану послойно ушивали. Электроды удалялись «потягиванием» без видимых усилий.
В послеоперационном периоде все животные содержались в условиях вивария КГМУ, в отдельных клетках, в надлежащей чистоте. Рацион питания не менялся. По окончании исследований подопытные были помещены в специализированный приют для животных.
Состояние NADP.H - оксидазной микробицидной системы нейтрофильных гранулоцитов лабораторных животных при различных способах введения препарата «Лонгидаза 3000 ME»
Оценку состояния NADP.H - оксидазной микробицидной системы нейтрофильных гранулоцитов по показателям NBT - теста. Установлено, что процентное содержание формазанпозитивных гранулоцитов в спонтанном варианте (%ФПКСП) теста интактных животных составило 3,00 (1,00; 5,25) %, при этом средний цитохимический индекс (СЦИ) находился в пределах 0,13 -0,23, равняясь 0,18 усл. ед. В условиях дополнительной антигенной стимуляции зафиксирована активация данного механизма микробицидной системы, проявившаяся в возрастании %ФПКСТ и СЦИст в 2 раза. Соотношение NBTCT к NBTcn (КМ) было равно 2,00 (0,95; 4,75) усл. ед.
В группе животных №2, относительно интактных животных, %ФПКСП был снижен более чем в 2,5 раза и на 3-й, и на 7-е, и на 14-е сутки эксперимента (Р=0,016, Р=0,042, Р=0,016). При этом выявлена тенденция к снижению СЦИсп до 1,00 (1,00; 1,25) усл. ед. Тенденция к увеличению значений %ФПКСТ и СЦИст проявилась лишь к 14-м суткам. При этом КМ находился в пределах нормальных величин.
Возрастание показателей КМ в 1,5-2 раза, NBTcn - теста более чем в 3 раза, а на фоне дополнительной антигенной нагрузки более чем в 5 раз в обеих группах на 7-е сутки после операции, свидетельствует о максимальном стимулирующем эффекте препарата «лонгидаза» в эти сроки (Рис. 3.1.3.1, А,Б; Рис. 3.1.3.2, А,Б; Рис. 3.1.3.3).
Таким образом, препарат «лонгидаза 3000 ME» оказывает стимулирующее NADP.H - оксидазную микробицидную систему НГ действие. Максимальный эффект выражен на 7 сутки после операции, при этом путь введения препарата не имеет значения.
Цитохимическое исследование периферической крови условно здоровых лабораторных животных группы №1 показало, что содержание катионного белка в цитоплазме НГ в среднем равняется 1,42 (1,06; 1,56) усл. ед. (Таб. 3.1.4.1.).
В группе №2 уровень КБ на 3-й сутки эксперимента был снижен в 3,3 раза по сравнению с интактными животными, соответственно 0,43 (0,30;057) и 1,42 (1,06;1,56) усл. ед. (Р=0,042). Далее продолжалось постепенное снижение уровня КБ, которое к 14-ым суткам достигло 0,26 (0,21;0,34) усл. ед. (Р=0,010).
Уровень КБ животных группы №3 после однократного внутрибрюшного введения был более чем в 2 раза выше чем в группе №2. Несмотря на недостоверное снижение активности КБ после трех- и пятикратного внутрибрюшного введения препарата (Р 0,05), показатели КБ превышали аналогичные в группе №2 и на 7-е и на 14-е сутки в 3 и 3,5 раза соответственно (Р 0,05), однако не достигали значений интактных животных. Достоверность установлена, Р 0,05.
На фоне однократной внутримышечной инъекции препарата в группе №4, активность неферментных КБ на 3-е сутки в среднем была равна 0,56 (0,43;0,73) усл. ед. Данные значения были выше аналогичных группы №2 и ниже аналогичных группы №3, хотя статистически значимых отличий зарегистрировано не было (Р=0,13, Р=0,31). После трехкратного парентерального введения препарата отмечено повышение уровня КБ к 7-м суткам относительно исходного фона почти в 2 раза (Р=0,02). Относительно группы №2 значения превысили аналогичные более чем в 3 раза (Р=0,02), по отношению к группе №3 наметилась лишь тенденция к повышению. Стоит отметить, что активность КБ относительно интактной группы была ниже лишь на 3 сутки, а к 7-м и 14-м достигала их уровня. После пятикратного внутримышечного введения препарата показатели КБ достоверно отличались от группы №2 и были выше их более чем в 3,5 раза (Рис. 3.1.4.1) (Р=0,02). Между группами статистически значимых отличий в данный период зарегистрировано не было.
Влияние прямой электрической стимуляции кишки на ее сосудодвигательный аппарат у здоровых животных
При анализе реографических кривых применялся классический подход, основанный на трактовке внешней формы реографической волны и ее отдельных деталей с использованием специальных цифровых расчетов [72]. Вначале были определены параметры кровотока кишки животных группы А до и после воздействия электростимуляции (Табл. 4.2.1).
При изучении влияния прямой электромиостимуляции кишки на ее сосудодвигательный аппарат у животных группы А, применяли поэтапное увеличение частоты стимулирующих импульсов с минимального - 14 импульсов в минуту, до максимального — 24 импульсов в минуту.
На рисунке 4.2.1. заметно увеличение амплитуды реографической волны при стимуляции с импульсами частотой 16-18 в минуту (Рис. 4.2.1,
При воздействии стимулирующих импульсов на стенку кишки здоровых животных, в зависимости от параметров стимулирующих импульсов, наблюдались различные сосудодвигательные реакции (Табл. 4.2.1). Так, при частоте, равной 14 импульсов в минуту, относительная величина пульсового кровенаполнения (РИ) возросла в три раза, при этом период полного раскрытия кровеносного сосуда (а, аі, а2) относительно исходных показателей не изменялся.
При увеличении частоты до 16 импульсов в минуту отмечено возрастание РИ более чем в 14 раз. Показатели а, а1 и а2 существенных изменений не претерпели. При частоте импульсов 18 в минуту пульсовое кровенаполнение также возросло почти в 5 раз по сравнению с исходом, а при 24 импульсах в минуту отмечена тенденция к снижению данного показателя в 1,4 раза.
Время распространения реографической волны (ВРР) при частоте импульсов 14; 16 и 24 в минуту снизилось в 2-2,3 раза, что свидетельствует о повышении суммарного сосудистого тонуса, а при частоте импульсов 18 в минуту тоническое состояние сосудов на отрезке от сердца до исследуемого участка существенно не менялось.
Максимальное повышение показателей дикротического индекса (ДКИ) относительно исходного уровня, свидетельствующее о возросшем тонусе артериол более чем в 3 раза, зафиксировано при проведении стимуляции с частотой импульсов 18 в минуту. Минимальными же были значения ДКИ при частоте 24 в минуту и имели лишь тенденцию к повышению относительно исходного фона. Однако, стоит отметить, что при стимуляции медленными импульсами с меньшей частотой (14-16 импульсов в минуту), также отмечено повышение тонуса артериол кишечной стенки, но полученные значения были достоверно ниже, чем при частоте импульсов 18 в минуту.
Аналогичные изменения получены при изучении показателей состояния оттока крови из артерий в вены в кишечной стенке. Диасистолический индекс (ДСИ), отражающий состояние тонуса вен, был максимальным при частоте стимулирующих импульсов 18 в минуту, и достигал 90,7±6,84%, что более чем в три раза выше аналогичного показателя исходного фона и достоверно выше аналогичных показателей, полученных при частоте импульсов 14, 16 и 24 в минуту.
Исходный показатель максимальной скорости быстрого наполнения сосудов (Умакс), характеризующий наполнение крупных артерий у здоровых животных, был равен 1,23±0,13 Ом/сек. При проведении сеансов электростимуляции получено достоверное увеличение Умакс относительно исходных цифр. Так, наибольших значений данный показатель достиг при частоте импульсов 16 в минуту - 24,05±1,41 Ом/сек. При используемой частоте импульсов 14 в минуту и 18 в минуту также зарегистрировано достоверное увеличение наполнения крупных артерий кишки до 4,99±0,64 Ом/сек и 4,47±0,35 Ом/сек соответственно (Р 0,05). При этом, показатель адекватности тонуса крупных артерий (Таї) имел тенденцию к повышению, хотя статистически значимых отличий относительно исходных значений выявлено не было. Необходимо отметить, что при увеличении частоты импульсов до 24 в минуту, достоверного повышения наполнения и адекватности тонуса крупных артерий зарегистрировано не было, напротив, наблюдалась тенденция к снижению данных показателей (Табл. 4.2.1).
Аналогичная картина наблюдалась при изучении значений средней скорости медленного кровенаполнения, характеризующих наполнение мелких и средних артериальных стволов кишки (Усред.) и показателя адекватности тонуса мелких артерий (Таг).
Таким образом, проведенный эксперимент позволил выявить влияние внешних электрических импульсов на функциональное состояние сосудодвигательного аппарата тонкой кишки. Это влияние обладает закономерностью, состоящей в появлении наибольшего пульсового кровенаполнения при 16-18 импульсов в минуту. Полученные данные позволяют полагать, что это может быть связано с перераспределением тонуса в различных отделах сосудистого русла тонкой кишки при изменении частоты стимулирующих импульсов.
