Оптимизация лечения детей, больных контагиозным моллюском, на основе изучения клинических и иммунологических показателей (клинико-лабораторное исследование) [Электронный ресурс] Кондрахина Ирина Никифоровна

Содержание к диссертации

Введение

Глава I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Клинико-эпидемиологические особенности заболевания, вызываемого вирусом контагиозного моллюска

1.2 Лабораторные методы исследования в диагностике заболеваний у людей, вызываемых вирусами семейства Poxviridae

1.3 Иммунологические изменения у больных контагиозным моллюском

1.4 Методы лечения больных контагиозным моллюском

Глава II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Клиническая характеристика больных.

2.2 Штаммы микроорганизмов.

2.3 Направленная амплификация ДНК .

2.4 Электронная микроскопия.

2.5 Приборы и оборудование.

2.6 Реактивы и препараты.

2.7 Методы определения иммунологических показателей.

Глава III РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ 4ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1 Результаты изучения факторов возникновения, характера клинических проявлений, особенностей течения контагиозного моллюска у детей в современных условиях.

3.2 Результаты исследования по разработке методов обнаружения вируса контагиозного моллюска у детей.

3.2.1Выбор маркерных последовательностей ДНК вируса контагиозного моллюска.

3.2.2 Обоснование структуры праймеров для видоспецифической полимеразной цепной реакции с ДНК вируса контагиозного моллюска и условий проведения реакции с

выбранными праймерами.

3.2.3 Выбор и экспериментальная оценка метода подготовки проб к анализу в полимеразной цепной реакции.

3.2 Идентификации вируса контагиозного моллюска с использованием электронной микроскопии.

3.3 Результаты исследования количества циркулирующих иммунокомпетентных клеток с различными дифференцированными антигенами (СД 3+, СД4+, СД16+, СД 21+,СД38+), иммуноглобулинов (Ig A, Ig М, Ig G), цитокинов (интерфероны альфа и гамма, фактор некроза

опухолей,интерлейкины 2,6,8) у детей, больных контагиозным моллюском, до и после лечения.

3.4 Результаты лечения детей, больных контагиозным моллюском.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ 95-107

ВЫВОДЫ 108-109

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 110-123

• Клинико-эпидемиологические особенности заболевания, вызываемого вирусом контагиозного моллюска
• Направленная амплификация ДНК
• Результаты изучения факторов возникновения, характера клинических проявлений, особенностей течения контагиозного моллюска у детей в современных условиях.

Введение к работе

Актуальность темы. Контагиозный моллюск - доброкачественное вирусное заболевание, вызываемое ортопоксвирусом, который относится к семейству Poxviridae, подсемейству Chordopoxviridae, роду Molluscipoxvirus. Заболевание характеризуется появлением на коже и слизистых оболочках полушаровидных узелков величиной от булавочной головки до горошины с центральным пупковидным углублением (Скрипкин Ю.К., Мордовцев В.Н.,1999). Это заболевание встречается в основном у детей и имеет тенденцию к частым рецидивам (Smith KJ.,Skelton Н., 2002). По данным ГУ ЦНИКВИ заболевание контагиозный моллюск составляет около 10% от общего числа обращающихся за амбулаторной помощью на приёме у детских дерматологов. В последнее время наблюдается патоморфоз дерматозов, отмечается явная тенденция к увеличению торпидно текущих, резистентных к проводимой терапии кожных болезней (Кубанова А.А., Тихонова Л.И., 2004). Ухудшение экологической обстановки, неправильное питание и другие неблагоприятные факторы могут оказывать влияние на частоту возникновения и характер клинического течения контагиозного моллюска. Наряду с характерной клинической картиной заболевания, в последнее время наблюдается большое количество атипичных клинических проявлений контагиозного моллюска, особенно у детей, одним из диагностических критериев для подтверждения контагиозного моллюска является обнаружение в содержимом узелков внутриклеточных базофильных включений, так называемых «телец моллюсков» или «телец Гендерсона - Патерсона» при бактериоскопическом исследовании (Скрипкин Ю.К., Мордовцев В.Н., 1999). Однако при длительном течении заболевания, при атипичных клинических проявлениях не всегда удаётся определить внутриклеточные базофильные включения. При визуальной оценке клинической картины также возможны диагностические ошибки. Возможности светового микроскопа не позволяют обнаружить возбудитель.

В то же время для диагностики вирусных заболеваний широко используются молекулярные методы исследования. Данные литературы свидетельствуют о возможности использования направленной амплификации видоспецифических фрагментов геномной ДНК вируса в полимеразной цепной реакции при диагностике контагиозного моллюска (Гинзбург А.Л., 1996). Проведение полимеразной цепной реакции обеспечивает высокую специфичность обнаружения вируса контагиозного моллюска в биоматериале от больных детей и позволяет использовать этот метод для дифференциальной диагностики заболевания. До настоящего времени в Российской Федерации не были разработаны методы молекулярной идентификации вируса контагиозного моллюска, также не встречались данные об исследование морфологической структуры вируса контагиозного моллюска.

Прогноз инфекционного заболевания, по мнению многих авторов, зависит от способности иммунной системы элиминировать патоген в результате активации (развития иммунного ответа) иммунокомпетентных клеток (Земсков А.В., Земсков В.М., Караулов А.В., 2005). Результаты изучения основных иммунорегуляторных, цитотоксических, активированных клеток, иммуноглобулинов, цитокинов, особенно обладающих цитотоксическим, противовирусным эффектом и участвующих в клеточных механизмах защиты у больных контагиозным моллюском, помогут выяснить роль иммунной системы в развитии различных клинических проявлений заболевания (распространенные или ограниченные высыпания).

Одним из основных методов лечения детей, больных контагиозным моллюском, является механическое удаление содержимого каждого элемента с его последующей обработкой дезинфицирующими средствами (Скрипкин Ю.К., Мордовцев В.Н., 1999). В последние годы у больных контагиозным моллюском показана эффективность крио - и лазеротерапии, иммуномодуляторов, интерферонов, противовирусных препаратов наружного и системного применения (Zabawski EJ.,2000). Однако ни один из методов лечения контагиозного моллюска у детей не дает гарантированного результата и очень часто наблюдаются рецидивы заболевания. Таким образом, очевидна необходимость оптимизации ведения больных контагиозным моллюском с внедрением новых диагностических методов, изучением состояния иммунной системы, использованием полученных данных для обоснования и оценки эффективности назначения лечебных мероприятий, что определило цель и задачи исследования.

Цель исследования. Оптимизация лечения детей, больных контагиозным моллюском, с учетом клинических особенностей течения заболевания и иммунологических показателей. Задачи исследования:

1. Изучить факторы риска возникновения и особенности клинического течения контагиозного моллюска у детей в современных условиях.

2. Разработать метод обнаружения вируса контагиозного моллюска с использованием направленной амплификации фрагментов его ДНК в полимеразной цепной реакции.

3. С помощью электронной микроскопии изучить морфологическую структуру вируса контагиозного моллюска.

4. Изучить уровень циркулирующих иммунокомпетентных клеток с различными дифференцировочными антигенами (CD3+,CD4+,CD8+,CD16+,CD21+,CD38+), иммуноглобулинов (IgA, IgM, IgG) и цитокины (интерфероны альфа и гамма, фактор некроза опухолей, интерлейкины 2,6,8) и на основании полученных показателей установить их особенности у детей с различной клинической картиной заболевания.

5. Изучить эффективность применения полусинтетического препарата микробного происхождения (ликопида) в комплексной терапии детей, больных контагиозным моллюском.

Научная новизна.

Впервые установлено, что в современных условиях контагиозный моллюск достоверно чаще возникает у детей в возрасте от 1 до 7 лет, часто болеющих острыми респираторно-вирусными инфекциями (ОРВИ), перенесших гнойно-воспалительные заболевания (отиты, ангины, пиелонефриты), детские инфекции (ветряная оспа, краснуха, скарлатина) и характеризуется распространенными высыпаниями, нередко атипичными, с экзематизациеи и частыми рецидивами. У 18,8% детей выявляются клинические проявления других заболеваний вирусного происхождения (вульгарные бородавки, простой герпес).

Впервые обоснована структура видоспецифических праймеров, использование которых при постановке полимеразнои цепной реакции обеспечивает высокую специфичность обнаружения вируса контагиозного моллюска в биоматериале больных детей и позволяет использовать этот метод для дифференциальной диагностики заболевания.

Впервые показано, что применение у детей, больных контагиозным моллюском, полимеразнои цепной реакции и электронно-микроскопического анализа повышает качество и достоверность диагностики заболевания.

Впервые установлено, что у детей с распространенными высыпаниями контагиозного моллюска и страдающих частыми ОРВИ, другими заболеваниями вирусного и бактериального генеза, наблюдаются как достоверное повышение количества зрелых Т- лимфоцитов (СДЗ+) и лимфоцитов, обеспечивающих первую линию защиты (СД8+, СД16+), так и показателей активированного состояния иммунной системы (иммуноглобулины, цитокины) наряду со снижением относительного количества основных иммунорегуляторных клеток (СД4+). У детей с ограниченными высыпаниями имеются сдвиги меньшего количества иммунологических параметров при отсутствии признаков активации клеток иммунной системы.

В результате применения полусинтетического иммуномодулирующего препарата микробного происхождения глюкозаминилмурамилдипептида (ликопида) после удаления высыпаний контагиозного моллюска у детей исчезают рецидивы заболевания, уменьшается частота ОРВИ, которые сопровождаются положительной динамикой лабораторных показателей активности патологического процесса.

Практическая значимость. Предложен лабораторный метод идентификации вируса контагиозного моллюска с помощью полимеразной цепной реакции. Показано, что электронно-микроскопическое исследование позволяет выявить скопления типичных форм вируса в пробах от больных.

Разработаны показания к применению полусинтетического иммуномодулирующего препарата микробного происхождения ликопида, которые заключаются в том, что после удаления высыпаний ликопид назначается по 1 мг 3 раза в день в течение 10 дней детям с распространенными высыпаниями, часто рецидивирующим течением, особенно после перенесенных заболеваний бактериального и вирусного генеза.

Основные положения, выносимые на защиту:

Особенности контагиозного моллюска в современных условиях характеризуются возникновением распространенных, рецидивирующих и атипичных высыпаний, с экзематизацией достоверно чаще у детей в возрасте от 1 до 7 лет, часто болеющих ОРВИ, после перенесения гнойно-воспалительных заболеваний (отиты, ангины, пиелонефриты), детских инфекций (ветряная оспа, краснуха, скарлатина).

Направленная амплификация концевой последовательности фрагмента гена ДНК-зависимой РНК - полимеразы вируса контагиозного моллюска с использованием пары праймеров в полимеразной цепной реакции обеспечивает -быстрое видоспецифическое обнаружение возбудителя в биоматериале от детей, больных контагиозным моллюском.

Лабораторная идентификация контагиозного моллюска, основанная на методе полимеразной цепной реакции и электронно-микроскопического анализа, повышает достоверность и качество диагностики.

У детей с распространенными высыпаниями контагиозного моллюска и страдающих частыми ОРВИ и другими заболеваниями вирусного и бактериального генеза имеются достоверные признаки активированного состояния иммунной системы наряду со сниженными показателями Т-клеточного звена иммунной системы.

Рецидивирующее течение контагиозного моллюска с распространенными высыпаниями у детей, страдающих частыми ОРВИ, другими заболеваниями вирусного и бактериального происхождения с измененными иммунологическими показателями явилось основанием для применения полусинтетического иммуномодулирующего препарата микробного происхождения ликопида. Ближайшие и отдаленные результаты лечения с учетом динамики иммунологических показателей свидетельствуют об обоснованности и целесообразности включения ликопида в терапию детей, больных контагиозным моллюском.

Апробация работы. Основные материалы, представленные в диссертации, доложены и получили положительную оценку на заседаниях Ученого Совета Федерального Государственного Учреждения «Центральный научно-исследовательский кожно-венерологический институт Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (2002-2006), на Всероссийской научно-прикладной конференции «Генодиагностика инфекционных заболеваний» (Москва, 2002); на Всероссийской конференции «Достижения и перспективы развития дерматовенерологии» (Екатеринбург, 2006). Публикации. По материалам исследований опубликованы 4 печатные работы.

Объём и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 123 страницах компьютерного текста, состоит из введения, списка сокращений, обзора литературы, описания материалов и методов, глав собственных исследований (иллюстрированы 13 таблицами, 8 рисунками), заключения, выводов, указателя использованной литературы, включающего 142 источника отечественных и иностранных авторов.

Внедрение в практику. Полученные результаты внедрены в практику консультативно-диагностического отделения Федерального Государственного Учреждения «Центральный научно-исследовательский кожно венерологический институт Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Клинико-эпидемиологические особенности заболевания, вызываемого вирусом контагиозного моллюска

Моллюск контагиозный имеет синонимы: заразительный моллюск, заразительная эпителиома, оспенноподобное акне [1,2]. В латинской транскрипции molluscum contagiosum - molluscum epitheliale, epithelioma contagiosum, molluscum sebaceum, Dellwarze, acne valioliforme [3].

Моллюск контагиозный - антропонозная инфекционная болезнь, вызывается одноименным вирусом[16]. Источником инфекции является больной человек. Заболевание передается как при непосредственном контакте с больным, так и через предметы общего пользования[17]. Заражение может происходить при сексуальных контактах. Нередки семейные заболевания супругов и детей. Возможны вспышки контагиозного моллюска в детских учреждениях, а также среди спортсменов. Наблюдали случаи аутоинфекции в результате расчесывания узелков [1-3,5,9,11-13].

Естественная восприимчивость людей, по-видимому, не очень высокая, но усиливающаяся у лиц с иммунодефицитными состояниями [8,9,85], в частности, при СПИДе наблюдаются обильные высыпания. Частота выявления контагиозного моллюска и ареал его распространения заметно возросли после развития пандемии СПИД.

Вирус контагиозного моллюска встречается во всем мире с более широким распространением в тропических районах. Последние 30 лет частота регистрации контагиозного моллюска увеличивалась, главным образом, как сексуально передаваемого заболевания, отчасти, как результат ВИЧ - инфекции [1].

Эндемичным заболевание является на островах Океании, Японии, Австралии, но в последние десятилетия контагиозный моллюск распространился практически повсеместно, варьируя в различных популяциях. Мировая инцидентность оценивается между 2 % и 8 % [91]. Так, например, по данным, полученным в течение 1989-1997 гг. в одном из госпиталей Mumbai (Индия), среди больных дерматозами при гистопатологических анализах кожных повреждений у 195 пациентов с ВИЧ и ВИЧ-ассоциированными инфекциями в 53% случаев причинами были инфекционные болезни, а из них 27 % (28 больных) составляли больные контагиозным моллюском [1,20]. Менее 5 % детей в США инфицированы вирусом контагиозного моллюска. От 5 % до 20 % пациентов с ВИЧ инфекцией имеют симптоматику контагиозного моллюска [20].

Чаще всего заболевание встречается в государствах Фиджи, Новая Гвинея и Заир [102]. Так, у 4,5 % популяции населения государства Фиджи имеются специфические кожные поражения контагиозным моллюском [49]. Заболеваемость в европейских странах относительно невелика и пик ее приходится на возрастную группу 1-12-летних детей, в то время как на острове Фиджи до 25 % младенцев инфицированы и пик заболеваемости отмечается в возрастной группе 2-3-летних детей. У взрослых контагиозный моллюск наиболее часто отмечается в возрастной группе сексуально активной части популяции, поскольку передается при половых контактах так же, как и другие заболевания, передаваемые половым путем [1,18].

Инкубационный период заболевания от 1 недели до нескольких месяцев, в среднем - 2-7 недель [1,4,18,23,24]. Клинические признаки характеризуются высыпанием на лице, особенно веках, носу, шее, груди, коже наружных половых органов, реже на всем кожном покрове одиночных или множественных узелков диаметром 0,2-0,5 см, но иногда достигают 1,5 см и более. У детей образования чаще располагаются на лице, туловище и конечностях, у взрослых - внизу живота, на лобке, внутренних поверхностях бедер, гениталиях [17,18,24,34].

Узелки полушаровидной или слегка уплощенной формы, плотные, безболезненные на ощупь, цвета нормальной кожи, нередко с восковидным блеском, с пупковидным углублением и расположенным в центре отверстием. Располагаются изолированно на неизмененной коже, реже окружены слабо выраженным воспалительным ободком. При сдавлении узелков с боков из центрального отверстия выделяется белая, крошковатая (кашицеобразная) масса, состоящая из ороговевших клеток «моллюсковых телец» [32]. В редких случаях поражаются слизистые оболочки. В единичных случаях наблюдали моллюск губ, языка, щек [11]. Поражение век может сопровождаться конъюнктивитом. В подавляющем большинстве случаев эти образования ничем не беспокоят пациента и представляют для него лишь косметическую проблему. Обычно заболевание является самоограничивающимся и морфологические элементы даже без лечения самопроизвольно исчезают спустя несколько месяцев. Изредка, перед разрешением инфекции, может появляться экзема вокруг морфологического элемента, обусловленная вторичной инфекцией. Очень часто встречается затяжное течение контагиозного моллюска (от 6 месяцев до 5 лет) как результат аутоинакуляции возбудителя из имеющихся морфологических элементов [2,3,5,110]. По мере развития узелки могут превращаться в нагнаивающиеся папулы.

Направленная амплификация ДНК

Все подтипы вируса контагиозного моллюска вызывают клинически одинаковые повреждения на кожном покрове. Более превалирующие (75-90 %) вызываются субтипом I, чем II, III и IV, за исключением иммунокомпроментированных индивидуумов.

Субтипы вируса контагиозного моллюска значительно отличаются друг от друга в центральной высоко консервативной области. Однако методом перекрестной гибридизации было показана идентичность их нуклеотидных последовательностей [88].

Открытая рамка считывания, начинающаяся на левом конце генома вируса контагиозного моллюска субтип I, II, кодирует 43-КД полипептид, который имеет высокий процент аминокислотной гомологии с эпитопным протеином вируса вакцины р37К.

Анализ секвинированного генома возбудителя показал, что вирус контагиозного моллюска содержит 20 полипептидов, гомологичных клеточным белкам человека. Промоторы, сайты терминации, транскрипции и другие регуляторные последовательности являются высоко консервативными в отношении поксвирусов. Филогенетический анализ свидетельствует, что вирус контагиозного моллюска, очевидно, произошел от общего предка поксвирусов после дивергенции авипоксвирусов.

В геноме вируса контагиозного моллюска существуют уникальные гены, детерминирующие устойчивость к факторам воздействия иммунной системы инфицированного организма человека [86,87]. Три таких белка MC51L, MG53L и MC54L имеют от 20 % до 35 % гомологии в последовательности аминокислот с человеческим интерлейкином -18 (IL-18) [89,90].

Выявлены последовательности, кодирующие синтез белков, ответственных за антиапоптозное действие возбудителя. Так, полагают, что геном вируса контагиозного моллюска кодирует белок МС159 , который ингибирует Fas-фактор, фактор некроза опухолей (TNF) и TNF-связанный апоптозиндуцирующий лигант (TRAIL-индуцированный апоптоз), что, возможно, играет роль в антиапоптозных свойствах возбудителя контагиозного моллюска [91,93]. В отличие от большинства поксвирусов, вирус контагиозного моллюска не имеет гомологов с белками E3L и K3L вируса вакцины, которые контролируют антивирусную и проапоптическую dsRNA-зависимую протеинкиназу (PKR). Было установлено, что МС159 непосредственно не ингибирует РКП [92].

Ген, кодирующий антиапоптозный белок МС159 и взаимодействующий с другими белками, обеспечивает блокирование апоптоза уже на ранней его стадии. Ген белка MC148R, который является вирусным гомологом хемокинового белка (отличается от него №і2-концевой областью), приводит к ингибированию воспалительной реакции за счет неактивного рецепторобразуемого комплекса. Ген белка MC080R, который конкурирует со сборкой и транспортировкой хозяйских МНС-белков, предотвращает представление пептидов на поверхности инфицированных клеток. Кроме того, ген белка МСОбб L защищает компоненты инфицированных клеток от оксидантного повреждения эндогенными пероксидазами.

Геном вируса контагиозного моллюска последовательностью 190-килобас пар оснований потенциально кодирует 163 белка, из которых 103 имеют гомологии с вирусом натуральной оспы. Вирусу контагиозного моллюска не хватает копий к 83 генам вируса натуральной оспы, включая такие важные, как подавление ответа хозяина на инфекцию, биоинтез нуклеотида и клеточную пролиферацию. В то же время вирус контагиозного моллюска обладает 59 генами, которые кодируют ранее неохарактеризованные белки, включая большой гистокомплекс-класс 1, хемокин и гомологи глютатионпероксидазы, которые определяют специфическую стратегию вируса контагиозного моллюска в отношении человека и гомологи которых не найдены в других поксвирусах [78,95,132,133].

Таким образом, очевидно, наличие уникальных генов в геноме вируса контагиозного моллюска позволяет ему вызывать в организме человека персистентную инфекцию. Однако окончательный механизм молекулярных основ антиапоптозных свойств вируса контагиозного моллюска не установлен. Учитывая наличие и степень распространения в мире подтипов вируса контагиозного моллюска, при разработке молекулярно-биологических методов идентификации возбудителя целесообразно отдать предпочтение первоочередному выбору генетических маркеров вируса контагиозного моллюска типов I и П.

class3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ class3 .

Результаты изучения факторов возникновения, характера клинических проявлений, особенностей течения контагиозного моллюска у детей в современных условиях

Поскольку ДНК микроорганизмов, выявляемая в полимеразной цепной реакции, непосредственно не представлена на их поверхности, большую роль в обеспечении требуемой чувствительности обнаружения возбудителей играет метод получения препарата ДНК в ходе пробоподготовки. Выделение препаратов нуклеиновых кислот из эукариот и прокариот является достаточно хорошо изученным вопросом в молекулярной биологии. Известные методы получения препаратов ДНК и РНК в зависимости от предназначения различаются по продолжительности, эффективности извлечения, сохранению исходного размера молекул, чистоты конечного препарата, стоимости и т.д. В целом, накопленный молекулярной биологией опыт позволяет выбирать и адаптировать к конкретным задачам разнообразные методы получения препаратов нуклеиновых кислот, в том числе предназначенные для исследований с использованием направленной амплификации ДНК.

Для экспрессного выделения суммарных препаратов ДНК из вируссодержащих препаратов нами был применен разработанный ранее метод, основанный на использовании лизирующих и хаотропных свойств высокомолярных растворов гуанидина тиоцианата, а в качестве нуклеосорбента использовалось пористое стекло CPG-10/12Q (Serva, Германия) [124].

Метод нуклеосорбции на микрочастицах стекла с использованием гуанидина тиоцианата (хлорида) для пробоподготовки к различным вариантам постановки полимеразнои цепной реакции успешно применялся в отношении бактерий, вирусов /118, 124/. Выделенные препараты хромосомной ДНК, рРНК, геномной РНК позволяют проводить исследования как непосредственно в полимеразнои цепной реакции, так и в полимеразнои цепной реакции с предварительной обратной транскрипцией РНК (ОТ-ГЩР). По сравнению с другими методами неспецифическая нуклеосорбция обладает определенными преимуществами при исследовании проб объектов окружающей среды [118,124]. При наличии носителя-нуклеосорбента значительно облегчаются операции промывки и концентрирования с использованием встряхивателей и настольных миницентрифуг. Сорбционные свойства применяемых носителей позволяют эффективно сорбировать нуклеиновые кислоты, но не вещества, способные ингибировать ферментативный синтез (ионы тяжелых металлов, протеины, органические растворители, поверхностно-активные вещества).

С учетом изложенного выше нами в качестве метода подготовки проб к полимеразнои цепной реакции нуклеиновых кислот был выбран метод неспецифической нуклеосорбции нуклеиновой кислоты на микрочастицах стекла с использованием лизирующих и хаотропных свойств концентрированных растворов гуанидина тиоцианата.

Экспериментально показали, что данный метод обеспечивает эффективное выделение препаратов нуклеиновых кислот из вируссодержащих проб, пригодных для последующего анализа в полимеразнои цепной реакции. Исследованная нами пара праймеров (VC5 - VC6) обеспечила специфическую амплификацию фрагментов ДНК в полимеразнои цепной реакции с матричной ДНК, выделенной нуклеосорбцией.

Таким образом, в результате проведенных экспериментальных исследований выбран метод пробоподготовки материалов, содержащих вируса контагиозного моллюска, обеспечивающий получение препаратов нуклеиновых кислот, пригодных для последующего анализа в полимеразной цепной реакции.

Для реализации разработанного нами метода обнаружения вируса контагиозного моллюска с использованием направленной амплификации ДНК в условиях стационарной лаборатории можно применить типовой комплект лабораторного оборудования, поставляемого российским рынком.

Таким образом, проведенные исследования позволяют заключить, что выбранный и оцененный нами метод пробоподготовки в сочетании с разработанным нами методом обнаружения вируса контагиозного моллюска направленной амплификацией видоспецифических фрагментов геномной ДНК может явиться основой для молекулярно-биологической идентификации вируса контагиозного моллюска.

Применение разработанного нами метода обнаружения вируса контагиозного моллюска с использованием направленной амплификации ДНК пригодно для выделения его ДНК и позволило в течение 4-5 часов обнаруживать вирус контагиозного моллюска в пробах от больных людей.

Похожие диссертации на Оптимизация лечения детей, больных контагиозным моллюском, на основе изучения клинических и иммунологических показателей (клинико-лабораторное исследование) [Электронный ресурс]

Оптимизация лечения больных пиодермитами с учета роли иммунной системы в патогенезе заболевания (клинико-иммунологическое и экспериментальное исследование)Волкова Елена Николаевна

Оптимизация лечения больных псориазом детей с учетом роли активности процессов пероксидацииМусаева Екатерина Олеговна

Терапия больных псориазом на основе изучения показателей активности ферментов нуклеинового обмена и цитокиновСаруханова Анна Генриховна

Иммунохроматографический метод исследования в диагностике сифилитической инфекции (клинико-лабораторное исследование)Османова Севиля Решатовна

Комплексное ультразвуковое исследование для обеспечения лечебно-диагностического процесса в практике дерматовенеролога (клинико-ультразвуковое исследование)Резайкин Александр Васильевич

Функциональный статус неспецифического звена клеточного иммунитета у больных микозами стоп и комплексная патогенетическая коррекция интрацеллюлярных нарушений (клинико-цитохимическое исследование)Свирид, Сергей Григорьевич

Комплексное лечение больных распространенными и тяжелыми формами псориаза с использованием фотохимиотерапии, гипербарической оксигенации и метотрексата (клинико-морфологическое исследование)Даллул, Махмуд Хабиб

Особенности иммуногенетики и иммуногенеза при сифилисе (Клинико-экспериментальные исследования)Ким, Эдуард Григорьевич

Лечение больных псориазом, злоупотребляющих алкоголем, с учетом нарушений обмена углеводов и психоэмоционального статуса (клинико-лабораторное исследование)Евстафьев, Владимир Викторович

Особенности течения дерматозов и их лечения у больных сахарным диабетом (Клинико-морфологическое исследование)Дудченко, Николай Алексеевич