Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. CLASS Обзор литератур CLASS ы 9
1.1. Роль вторичного метаболизма растений 9
1.2. Полынь эстрагон (Artemisia dracunculus L. сем. Asteraceae) -общая характеристика, химический состав, биологические свойства и применение 15
1.2.1. Историческая справка. 15
1.2.2. Биологическая характеристика 30
1.2.3. Распространение и особенности агротехники 35
1.2.4. Применение 36
1.2.4.1.Применение в промышленности и быту 36
1.2.4.2.Применение в народной медицине 37
1.2.5. Химический состав 40
1.2.5.1. Эфирное масло 41
1.2.5.2. Кумарины 44
1.2.5.3. Флавоноиды 44
1.2.5.4. Пероксидаза и азотистые основания 47
1.2.6. Биологические свойства 47
1.2.6.1. Микробиологические исследования 47
1.2.6.2. Фармакологические исследования 48
1.2.6.3. Клинические исследования 52
Глава 2. Материалы и методы исследований 53
2.1. Объекты исследований 53
2.2. Изучение морфолого-анатомического строения 54
2.3. Получение экстрактов 55
2.4. Анализ химического состава 56
2.4.1. Определение содержания эфирного масла 56
2.4.2. Определение содержания кумаринов 56
2.4.3. Определения содержания флавоноидов 58
2.4.4. Определение содержания свободных органических кислот 60
2.4.5. Определение содержания хлорофилла и каротиноидов 61
2.4.6. Определение содержания суммы водорастворимых полисахаридов 63
2.4.7. Определение содержания аскорбиновой кислоты 63
2.4.8. Определение содержания микро- и макроэлементов 64
2.4.9. Определение содержания экстрактивных веществ 65
2.4.10.Определение содержания золы 65
2.5. Газохроматографический анализ СК-СОг-экстрактов 66
2.6. Оценка биологических эффектов экстрактов 66
2.6.1. Бактериостатическая активность 67
2.6.2.0ценка острой токсичности 67
2.6.3. Оценка противогипоксического действия 68
2.6.4. Оценка анальгезирующего действия 69
2.6.5.Оценка действия экстрактов на функциональное состояние ЦНС 69
2.6.6. Оценка противовоспалительного действия 70
2.6.7. Оценка гастропротекторной активности 71
2.6.8. Оценка диуретической активности 72
2.6.9. Оценка желчегонных свойств 72
2.6.10. Оценка гепатопротекторных свойств 72
2.7. Методы статистической обработки результатов 73
Глава 3. Результаты и обсуждение 74
3.1. Мофолого-анатомические исследования 74
3.1.1. Морфологическое исследование 74
3.1.2. Анатомическое изучение 75
3.2. Определение содержания основных групп веществ 90
3.2.1 .Определение эфирного масла 90
3.2.2. Определение содержания кумаринов 91
3.2.3. Макро- и микроэлементный состав 93
3.2.4. Определение содержание флавоноидов 94
3.2.5. Определение хлорофилла и каротиноидов в листьях эстрагона. 98
3.2.6. Количественное определение свободных органических кислот. 99
3.2.7. Определение экстрактивных веществ 100
3.2.8. Определение золы 101
3.2.9. Определение суммы водорастворимых полисахаридов 102
3.2.10. Количественное определение аскорбиновой кислоты 103
3.3. Газохроматографический анализ 104
3.3.1. Характеристика и природа СК-СОг-экстрактов 104
3.3.2. Газохроматографический анализ СК-С02-экстрактов и эфирного масла 106
3.4. Биологическая оценка полыни эстрагон 123
3.4.1. Бактериостатическая активность 124
3.4.2. Результаты оценки острой токсичности 125
3.4.3. Оценка противогипоксического действия 126
3.4.4. Анальгезирующий эффект 128
3.4.5. Изучение влияния настоек эстрагона на функциональное состояние ЦНС 132
3.4.6. Изучение противовоспалительной активности 132
3.4.7.0ценка гастропротекторной активности 135
3.4.8.Оценка диуретической активности 136
3.4.9. Изучение желчегонных свойств 138
3.4.10. Изучение гепатопротекторных свойств 139
Заключение 144
Выводы 147
Список использованной литературы 149
- Полынь эстрагон (Artemisia dracunculus L. сем. Asteraceae) -общая характеристика, химический состав, биологические свойства и применение
- Определение содержания кумаринов
- Определение содержания кумаринов
- Изучение влияния настоек эстрагона на функциональное состояние ЦНС
Введение к работе
Актуальность темы.
Одной из важных особенностей, отличающих представителей царства растений от животных, является их прикрепленность к субстрату, вследствие чего у растений отсутствует поведенческая адаптация. Это ограничение преодолевается за счет более мощных механизмов биохимической адаптации. Проявляется это в более развитой и разнообразной системе вторичного обмена у растений по сравнению с животными. Разнообразие продуктов вторичного обмена позволяет растениям реагировать на самые незначительные изменения внешних условий варьированием химического состава органов и тканей [Харборн, 1985; Федяев и др., 2001; Kutchan, 2001; Ryu е.а., 2004; Dudareva е.а., 2004].
Исследование биохимических адаптации у растений является одним из актуальных направлений современной биохимии. Адаптации на биохимическом уровне не всегда сопровождаются изменениями морфологии и зачастую являются единственным признаком, с помощью которого можно различать близкие формы, сходные морфологически [Федяев и др., 2001; Kutchan, 2001].
Род полыней Artemisia L. (сем. Asteracea) объединяет свыше 100 видов, распространен по всему земному шару и представляет собой пример разнообразия биохимических и морфологических адаптации. Не всегда эти адаптации у полыней сопровождаются существенными морфологическими изменениями. Например, вид Artemisia dracunculus L. в природе представлен несколькими хеморасами, отличающимися по химическому составу в зависимости от условий обитания, в то время как морфологически эти хеморасы практически неразличимы [Кононенко, 1978; Бухарин и др., 1989]. Это говорит о том, что биохимические адаптации у рода полынь играют важную роль. Многие из видов полыней используются в официальной и народной медицине, парфюмерно-косметической и пищевой промышленности. Поэтому исследование особенностей химического состава полыней представляет значительный интерес. В этих целях для сравнения взяты два сорта A. dracunculus - «Французский» и «Русский», уже давно используемые в пищевой промышленности и народной медицине. Морфологически эти два сорта весьма близки друг другу. Однако по вкусовым качествам и аромату заметно отличаются [Кононенко, 1978; Бухарин и др., 1989].
В литературе имеются немногочисленные сведения о химическом составе растений сорта «Русский» и практически отсутствуют данные о составе сорта «Французский» [Greger, Bohlman е.а., 1977; Greger, 1979; Greger, Bohlman, 1979; Куркин и др., 1996; Куркин и др., 1997; Hoffmann, Herrman, 1985; Kavvadias е.а., 2000].
Учитывая широкое использование A. dracunculus в пинту и в качестве лечебного средства, представляет значительный интерес изучение химического состава и биологической активности экстрактов этих двух сортов.
Цели и задачи исследования. Целью работы является изучение химического состава продуктов вторичного обмена, содержания микро- и макроэлементов в различных органах A. dracunculus в онтогенезе и оценка биологической активности ее экстрактов.
Поставленная цель реализуется при решении следующих задач:
1. Изучение динамики содержания кумаринов, органических кислот, микро- и макроэлементов в зеленой биомассе в онтогенезе растения.
2. Исследование содержания флавоноидов, аскорбиновой кислоты и водорастворимых полисахаридов в органах растения.
3. Анализ состава эфирного масла и экстрактов, полученных диоксидом углерода в сверхкритическом состоянии (СК-С02-экстракты) зеленой биомассы A.dracunculus.
4. Исследование бактериостатического, антигипоксического, спазмолитического, анальгезирующего, гепатопротекторного, гастропротекторного и диуретического эффектов различных экстрактов A. dracunculus. Научная новизна. Впервые систематически исследовано содержание классов соединений в органах A. dracunculus сорт «Французский» в онтогенезе. Найден ряд новых соединений в СК-СОг-экстрактах зеленой биомассы A. dracunculus. Проведен сравнительный анализ состава СК-С02-экстрактов сортов «Французский» и «Русский» A. dracunculus. Исследована биологическая активность различных экстрактов A. dracunculus сорта «Французский».
Теоретическая и практическая значимость работы. Обширный экспериментальный материал по химическому составу органов A. dracunculus может быть использован для построения теории биохимической адаптации растений. Результаты исследований могут быть широко использованы в практической медицине.
Основные положения, выдвигаемые на защиту:
1. Специфика содержания основных групп вторичного обмена -флавоноидов, кумаринов, водорастворимых полисахаридов, пигментов, аскорбиновой кислоты в органах A. dracunculus закономерно изменяется в онтогенезе.
2. Два сорта A. dracunculus, близкие по морфологическим признакам, существенно отличаются по химическому составу продуктов вторичного обмена. Химический анализ СК-СОг-экстрактов сортов «Французский» и «Русский» A. dracunculus, проведенный методом газожидкостной хроматографии выявил новые соединения, ранее не обнаруженные в А. dracunculus. СК-С02-экстракты сорта «Русский» имеют более широкий спектр соединений по сравнению сортом «Французский».
3. Спиртовые экстракты обладают бактериостатической, антигипоксической, спазмолитической, анальгетической, диуретической, желчегонной и гепатопротекторной активностью, сравнимой и в ряде случаев превосходящей активность стандартных, рекомендованных Минздравом, средств.
Апробация работы. Основные положения, материалы и фрагменты диссертационной работы доложены: на 57-ой региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, 2002), Всероссийской научно-практической конференции (Махачкала, 2002), VI-M симпозиуме по фенольным соединениям (Москва, 2004), 57-й научной конференции молодых ученых и студентов (Махачкала, 2005), IV-ой Международной конференции «Регуляция роста, развития и продуктивности растений» (Минск, 2005), 10-ом Междунар. съезде «Фитофарм 2006» (Спб, 2006).
Полынь эстрагон (Artemisia dracunculus L. сем. Asteraceae) -общая характеристика, химический состав, биологические свойства и применение
Полынь эстрагон или тархун (Artemisia dracunculus L. сем. Asteraceae) в народе еще называется астрагон, драгун-трава, перец душистый, острогонь, торгуй и др. [Словарь..., 1954; Абу, 1956; Минц, 1962; Блинова, 1975; Мировые..., 1969; Базарон, Асеева, 1985; Растения..., 1989; Словарь..., 1989; Новейший..., 2002]. Разнообразие названий этого растения связано с его повсеместным распространением и широким использованием с давних пор в быту и народной медицине. Эстрагон популярен, главным образом, на Ближнем и Среднем Востоке, в Северной Африке. Его лечебные свойства упоминаются известными врачами Абу Мансуром, Авиценной, Ибн Байтаром, которые отмечали у дикорастущего и садового тархуна наличие жаропонижающего и противолихорадочного эффекта, способности «очищать верхние дыхательные пути от мокроты и облегчать дыхание [Гроссгейм, 1952; Алиев и др., 1967; Губанов и др., 1976; Муханова и др., 1976; Гончарова, 1997; Воронина и др., 2001], «снимать горечь лекарств и способствовать хорошему сну» [Землинский, 1958; Демидовская и др., 1976; Середин, Соколов, 1978; Растения..., 1989; Завражнов и др., 1993; Растительные..., 1996; Дикорастущие..., 2001]. В средние века в Армении эстрагон применяли при злокачественных язвах, сок (внутрь) - во время эпидемии чумы, в Европе его назначали как ветрогонное средство, для возбуждения аппетита и улучшения процессов пищеварения, спиртовую настойку - как успокаивающее и противосудорож-ное средство при эпилепсии, судорогах, как витаминное при цинге и авитаминозах [Середин, Соколов, 1978; Растения..., 1989; Растительные..., 1996; Лавренов, Лавренов, 1999]. В быту трава тархуна использовалась в свежем виде для приготовления сока и напитков, в высушенном виде как пряность [Пряно-ароматические..., 1963; Эстрагон..., 1973; Эстрагон..., 1982; Съедобные..., 1989; Растения..., 1996; Энциклопедический..., 1999;].
2. Биологическая характеристика.
Происхождение вида Artemisia dracunculus L. географически связывают со степями Восточной Сибири и Монголии [Флора..., 1961; Минатуллаев, 1965]. Считается, что видовое название dracunculus (от лат. «дракончик») эстрагон получил из-за формы листьев, напоминающих язычки дракона [Минц, 1962; Блинова, 1975].
Эстрагон характеризуется следующими морфологическими признаками. Это многолетнее растение с деревянистым корневищем 0,5 - 1,5 см толщиной, негусто покрытое корневыми мочками и снабженное иногда хорошо развитыми, подземными побегами; все растение голое, гладкое, зеленое, редко в молодом состоянии ветвистое. Стебли прямостоячие, одиночные или в числе нескольких, 150 см высотой, ребристые, более или менее ветвистые, с нижними ветвями, не несущие цветков. Листья цельные, линейно-ланцетовидные или почти линейные 1,5-8 см длиной и 1-10 (14) мм шириной, самые нижние стеблевые иногда на конце трехлопастные. Корзинки многочисленные, шаровидные, поникающие, 2-4 мм шириной, собранные на верхушке стебля и ветвей кистями, образующие метельчатое соцветие; листочки обертки гладкие, наружные продолговатые почти ланцетные, внутренние округло-овальные, по краю широко, початоокаймленные, краевые цветки пестичные, обычно их 7, венчик трубчатый, к основанию расширенный, лопасти рыльца узколинейные, островатые, выставляющиеся из трубки, отклоненные. Цветки диска тычиночные в числе 11-14, венчик конический, пятизубчатый, пыльники линейные, конечный придаток туповатоугольный, островатый, ба-зальные короче, туповатые, рыльце рудиментарного пестика цельное, на верхушке воронковидное. Семена мелкие, 0.6 мм длиной, плосковатые, яйцевидные, тонкобороздчатые, бурые [Флора, 1961; Машанов, Покровский, 1991]. Масса 1000 семян - 0.3-0.5 г.
Анатомическое строение полыни эстрагон сорта «Русский» мы встретили в работе Березовской, Кононенко и зарубежных авторов [Кононенко, 1978; Зайцев, 1984; Белоногова, 1999; Zassanyi, 1976; Vienne М., 1989].
В результате микроскопического исследования травы полыни эстрагон были обнаружены следующие диагностические признаки надземной части растения
Лист. Листу характерен изолатеральный тип строения. Мезофилл состоит, главным образом, из столбчатой паренхимы, расположенной симметрично с обеих сторон листа в два ряда. Губчатая паренхима располагается участками вблизи центральной жилки. Губчатая паренхима располагается участками вблизи центральной жилки. Эпидермис листа покрыт толстым слоем кутикулы. Вокруг сосудисто-волокнистых пучков располагаются эфиромасличные вместилища. Эпидермис листа извилистостенный, устьица аномоцитного типа с обеих сторон. Лист опушен крупными звездчатыми волосками.
Определение содержания кумаринов
Определение содержания эфирного масла производили путем его перегонки с водяным паром из навески зеленой биомассы с последующим измерением объема. Определение проводили методом 1 Государственной Фармакопеи XI изд [Государственная..., 1989].
Содержание эфирного масла в пересчете на абсолютно сухой вес рассчитывали по формуле:
Х- содержание эфирного масла, % на г сухого веса
V- объем эфирного масла, мл;
тх - масса навески зеленой биомассы, г
W- потеря в массе, при высушивании, %
Точную навеску зеленой биомассы массой 0,5 г, проходящего сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, экстрагировали 10%-ным этиловым спиртом 30 мин в кипящей водяной бане с обратным холодильником. Полученные извлечения фильтровали, фильтр и сырье трижды промывали горячим 10%-ным этанолом. К объединенному фильтрату прибавляли 2 мл 10%-го раствора ацетата свинца, выдерживали на водяной бане 3 мин. Извлечение с выпавшим осадком отфильтровывали, осадок на фильтре и колбу промывали трижды 10%-ным этанолом. К объединенному фильтрату добавляли 1 г однозамещенного фосфата калия, выдерживали в кипящей бане 3 мин. Извлечение с выпавшим осадком фильтровали в колбу, осадок на фильтре и колбу промывали трижды горячим 10%-ным этиловым спиртом. Объединенный фильтрат остужали, прибавляли 20 мл хлороформа и настаивали в течение 12 часов. Затем содержимое колбы количественно переносили в делительную воронку и хлороформный слой сливали. Водно-спиртовое извлечение трижды экстрагировали хлороформом порциями по 20 мл. К объединенному хлороформному извлечению добавляли 5 г безводного сульфата натрия и оставляли на 12 часов. Полученный хлороформный экстракт фильтровали через вату, промывая колбу и вату небольшими порциями хлороформа и упаривали досуха. Сухой остаток количественно переносили в мерную колбу, растворяя в 96%-ном этаноле. В полученном растворе определяли оптическую плотность при длине волны 310 нм на спектрофотометре СФ-56 в кювете с толщиной слоя 10 мм.
В качестве стандарта мы использовали кумарин, имеющий в этанольном растворе максимумы поглощения при 275 (280) и 310 нм (Рис. 3).
Содержание суммы кумаринов (в %) в пересчете на кумарин и на абсолютно сухое сырье рассчитывали по формуле:
Для количественного определения суммы флавоноидов использовалась методика дифференциальной спектрофотометрии, основанная на реакции комплексообразования с раствором алюминия хлорида в нейтральной и слабокислой среде [Бандюкова, 1965]. В условиях методики реакция является селективной для флавоноидов и позволяет определить их содержание в присутствии сопутствующих веществ [Государственная..., 1987; Куркин и др., 2003]. Использованная нами методика заключается в следующем: около 0,5 г сырья (точная навеска), проходящего сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 15 мл 70% спирта. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и экстрагируют на водяной бане в течении 30 мин с момента закипания экстрагента. Горячее извлечение фильтруют через вату в мерную колбу вместимостью 50 мл так, чтобы частицы сырья не попадали на фильтр. Вату помещают в колбу и экстрагирование проводят еще дважды по 5 мин. После охлаждения объем извлечения доводили до метки 70% спиртом и перемешивали. Извлечение фильтровали через бумажный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата (раствор А). Далее использовали раствор, приготовленный по схеме: к 5 мл раствора А прибавляли 5 мл 2% спиртового раствора алюминия хлорида, 1 мл 10% спиртового раствора уксусной кислоты, объем доводили в мерной колбе до 25 мл 70 % спиртом. В качестве раствора сравнения использовали смесь, приготовленная аналогично анализируемой без алюминия хлорида. Через 40 мин измеряли оптическую плотность раствора на спектрофотометре СФ-56 при обнаруженном максимуме (402 нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм. Расчет содержания флавоноидов производили по стандартному веществу, в качестве которого мы использовали ГСО рутина.
Приготовление стандартного раствора
Около 0.2 г рутина (точная навеска) помещали в мерную колбу 50 мл и растворяли в 70%о этиловом спирте, объем раствора доводили объем до метки. 1 мл полученного раствора помещали в мерную пробирку, прибавляли 1 мл 2% раствора алюминия хлорида (III), 0.5 мл 5% уксусной кислоты и доводили до 5 мл 70% спиртом. Раствор сравнения готовили аналогично, но без алюминия хлорида. Через 40 минут проводили измерения.
Определение содержания кумаринов
Полынь эстрагон (Artemisia dracunculus L. сем. Asteraceae) входит в группу кумариноносных полыней, содержащих более 1,0% кумаринов, среди которых обнаружены соединения подгруппы кумарина (кумарин, эскулин, эскулетин, герниарин) и изокумарина (артемидин, капиллярин и их производные) [Березнеговская, 1978; Ханина, 1999]. Они составляют группу биологически активных соединений, которые совместно с эфирным маслом, сесквитерпеновыми лактонами и флавоноидами обеспечивают спектр фармакологической активности эстрагона, важнейшими среди них, являются следующие:
- спазмолитическая активность [Барабой, 1976];
- антилейкодермическая [Парфенов, Смирнов, 1988; Ханина, 1999; Георгиевский и др, 1990];
- противоопухолевая [Михайлова и др., 1969, Парфенов, Смирнов, 1988; Ханина, 1999].
У кумаринов обнаружено действие:
- на центральную нервную систему (наркотическое, стимулирующее, седативное [Лесиовская, 1993, Парфенов, Смирнов, 1988];
- в области чувствительных нервных окончаний (анастезирующее, желчегонное, слабительное, мочегонное [Глушков и др., 1970; Зайцев, 1984; Парфенов, Смирнов, 1988; Пастушенков, Лесиовская, 1991; Кириллова и др., 1999; Ханина, 1999];
- на тканевой обмен (Р-витаминная активность, кровоостанавливающее действие), антикоагулянтное действие кумаринов связывают с антагонизмом к витамину К [Казанцев, 1968; Парфенов, Смирнов, 1988; Дюмаев и др., 1995; Ханина, 1999]; - противомикробное, противовирусное, антифунгальное, противопаразитарное [Казанцев, 1968; Блинова, 1975 Георгиевский и др., 1990].
Следует отметить, что кумаринами богаты в большей степени травянистые растения, многие из которых входят в пищевой рацион человека и сельскохозяйственных животных. В процессе эволюции организм человека не только адаптировался к кумаринам, но и использует их. Важную роль в молекулярных механизмах взаимодействия кумаринов с животным организмом играют антиоксидантные свойства данных веществ [Парфенов, Смирнов, 1988; Бунятян и др., 1999; Ханина, 1999].
Таким образом, кумарины относятся к высокоактивным соединениям, обладающим широким спектром биологической активности.
Синтез кумаринов полыни эстрагон начинается на самых ранних стадиях развития и в возрасте 3 месяцев их содержание может достигать 1,3%. Максимальное содержание кумаринов наблюдается у эстрагона в пятилетнем возрасте (до 6,6%), затем наступает его постепенное снижение [Амельченко и др., 1996; Ханина, 1999 186]. Установлено, что биохимические закономерности, влияющие на накопление кумаринов в траве эстрагона, обусловлены генетически и сохраняются при его выращивании в условиях культуры. Поэтому интересным и актуальным является определение взаимосвязи между этапами развития растения и накоплением кумаринов применительно к эстрагону, интродуцированному в Дагестане.
Содержание кумаринов в траве эстрагона мы определяли в фазах стрелкования (март - апрель), бутонизации (конец мая - июнь), массового цветения (июль) и плодоношения (август - октябрь). Результаты представлены на рис. 29.
Полученные данные свидетельствуют, что содержание кумаринов в надземной части полыни эстрагон, культивируемой в Дагестане, превышает 1%. Максимальное их накопление приходится на фазу цветения (1,4%), значительное количество кумаринов остается и в фазе плодоношения (1,2%).
Известно, что элементный состав растения зависит от множества факторов окружающей среды, главным образом, состава почвы, а также биохимических особенностей производящего растения [Гагарин, 1966; Листов и др., 1990; Битюцкий, 2005].
Изучение макро- и микроэлементного состава становится одним из необходимых этапов в исследовании растений, поскольку в настоящее время сформировано целое направление в медицине - терапия микроэлементозов, нарушений в элементном статусе организме человека [Листов и др., 1990]. Для элементного анализа точную навеску подвергали сухой минерализации путем сжигания и прокаливания в муфельной печи. Затем золу обрабатывали концентрированным раствором серной кислоты, объем раствора доводили в мерной колбе до 25 мл. Определение проводили методом спектрального анализа на атомно-абсорбционном спектрофотометре AAS IN на базе химического факультета Дагестанского государственного университета [Тарчевский, 2001]. Результаты определений представлены в таблице 3.
Изучение качественного и количественного состава восьми элементов, имеющих важное значение для организма человека, показало, что максимальная доля принадлежит сумме щелочных и щелочноземельных металлов. Терапевтически значимыми во всех образцах являются количества цинка и меди. Значимое содержание основных микроэлементов также наблюдается в фазу цветения и фазу плодоношения.
Изучение влияния настоек эстрагона на функциональное состояние ЦНС
Оценку влияния экстрактов эстрагона на процесс воспаления проводили по общепринятым тестам на 30 половозрелых крысах-самцах массой тела 180-200 г и 30 беспородных мышах массой 16-20 г.
Антиэкссудативные свойства экстрактов оценивали на модели формалинового отека лапы крысы и адреналинового отека легких мышей.
Острый отек легких, вызванный введением адреналина, моделировали на белых нелинейных мышах массой тела 16-20 г. Контрольной группе животных вводили зондом в желудок очищенную воду, экспериментальной группе мышей - исследуемые извлечения. Всем животным через 1 час подкожно вводили 0,05% раствор адреналина гидрохлорида в дозе 5 мг/кг массы тела животного. Через час после введения адреналина проводили эвтаназию, извлекали легкие и взвешивали их массу. О развитии отека легких делали заключение по величине легочного коэффициента - отношению массы легких в граммах к 100 граммам массы тела животного.
Формалиновый отек. Крысам субплантарно вводили 0,1 мл 1%-ного раствора формалина [Растительные..., 1993]. Измеряли объем лапы крысы с помощью онкометра до начала опыта и через 4 часа после введения раствора формалина - в момент максимального развития отека. Спиртовые извлечения вводили зондом в желудок за 1 час до введения флогогенного агента. В качестве препарата сравнения использовали фенилбутазон. Антиэкссудативные свойства изучаемых экстрактов оценивали в процентах по разнице между объемами конечности по отношению к контролю. Результаты исследований процесса экссудации на модели формалинового отека лапы показали, что изменение объема лапы для контрольной группы животных составил 0.62 мл. Использование 40%-ной и 70%-ной спиртовых настоек снижает степень отека лапы на 80%. Их эффективность сопоставима с препаратом сравнения фенилбутазоном (табл. 15, рис.44). 70%-ная настойка на модели адреналинового отека легких оказывает противовоспалительный эффект, превосходящий по своему действию фенилбутазон (табл.16, рис.45)
Способность препятствовать язвообразованию оценивали на модели бутадионовой язвы у крыс [Руководство..., 2000]. Водные извлечения вводили вводили зондом в желудок в соответствующих дозах в течение 7 дней, контрольные животные получали воду очищенную. В качестве препарата сравнения использовали масло облепихи (1 мл/кг). Животных содержали в условиях свободного доступа к воде и кормили за 4 часа до и через 1 час после введения извлечения или воды. На 8 сутки, через 4 часа после последнего введения, крыс умерщвляли и производили исследование слизистой желудка на наличие. Определяли степень изъязвления желудка как среднее число деструкции, приходящееся на одно животное и процент животных с язвами в группе. Для оценки противоязвенной активности (ПА) изучаемых извлечений использовали индекс Паулса (ИП). Интегральный показатель числа деструкции. ИП рассчитывали по формуле:
А- среднее число деструкции на одно животное;
Б- число животных с изъязвлениями в группе, %
ПА извлечений определяли как соотношение индекса изъязвления контрольной группы к ИП опытной. Изучаемое извлечение считали активным, если ПА его терапевтической дозы равнялась 2 и более единицам.
Оценивая состояние слизистой оболочки желудка при использовании модели бутадионовой язвы, было установлено, что спиртовые настойки полыни эстрагон оказывают выраженное противоязвенное и противовоспалительное действие. Максимальный эффект, превосходящий препарат сравнения, наблюдали у настойки, приготовленной на 70%-ном этаноле. Таким образом, установлено, что спиртовые настойки обладают выраженным антиульцерогенным эффектом (табл 17), превосходящий облепиховое масло.
