Содержание к диссертации
Введение
Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9
Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Материалы исследования 41
Методы исследования 42
Глава III. РАЗРАБОТКА РЕЦЕПТУРЫ КОНСЕРВИРУЮЩЕГО И РЕ -СУСПЕЩЩРУЩЕГО РАСТВОРА ДЛЯ ЭРИТРОЦИТНОЙ МАССЫ
1. Изучение, эффективности различных консервирующих сред 51
2. Разработка нового консервирующего и ресуспендирующего раствора для эритроцитной массы 68
3. Биологическая характеристика нового консервирующего и ресуспендирующего раствора 71
Глава ІV. БИОХИМИЧЕСКАЯ И МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕ -РИСТИКА ЭРИТРОЦИТНОЙ МАССЫ, КОНСЕРВИРОВАННОЙ НА НОВОМ РАСТВОРЕ
1. Биохимическая характеристика эритроцитной массы 74
2. Реологическая характеристика эритроцитной массы 93
3. Морфологическая характеристика эритроцитной массы .99
4. Приживаемость эритроцитной массы ПО
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ИЗ
ВЫВОДЫ 123
УКАЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ - 125
ПРИЛОЖЕНИЕ 150
- ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
- МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
- Изучение, эффективности различных консервирующих сред
- Биохимическая характеристика эритроцитной массы
Обзор литературы
Успехи современной трансфузиологии в значительной мере зависят от достижений в области консервирования цельной донорской крови и ее компонентов.
Под "консервированием" понимают создание условий для дли -тельного поддержания крови вне организма стерильной с сохране г нием биологических свойств и функциональных способностей клеток крови, а также нормального состава плазмы [3]. Идея консервирования крови берет начало у самых истоков переливания крови (В.Сутугин, 1865). Однако, эта идея была претворена в жизнь лишь после того, как появилось научное обосно -вание и предпосылки для распространения переливания крови как безопасного и эффективного лечебного метода (открытие групп крови и законов совместимости) и предотвращения свертывания крови при помощи антикоагулянтов [2].
Кровь состоит из форменных элементов ( эритроцитов, тром -боцитов, лейкоцитов), взвешенных в плазме. Эти клетки имеют различный удельный вес [155]:
Эритроциты - уд.вес 1.095 г/мл
Лейкоциты - уд.вес 1.060 г/мл
Тромбоциты - уд.вес 1.050 г/мл
Плазма - уд.вес 1.027 г/мл
Цельная кровь-уд.вес 1.058 г/мл
Различный удельный вес компонентов крови позволяет осуществлять их дифференцированное выделение как путем спонтанного оседания, так и с помощью центрифугирования.
Эритроциты (красные кровяные клетки) составляют основную массу форменных элементов крови. В нормальных условиях в I мм3-крови содержится около 5,000.000 эритроцитов. Их суммарный объем составляет около половины всего объема крови [13,27,38],Время жизни эритроцитов, повидимому, определяется скоростью денатура -ции в них белков, и составляет в организме человека около 100 -120 дней
Материалы и методы исследования
Объектами исследования служили эритроцитная масса (ЭМ) и эритроконцентрат (ЭК), полученные из донорской крови, заготов -ленной во флаконах и пластикатных контейнерах "Гемакон" на отечественных гемоконсервантах Глюгицир и Цитроглюкофосфат.
Эритроцитную массу получали несколькими способами: 1) Через 1-2 суток после заготовки консервированной крови от доноров и хранения при +4С ее центрифугировали при 750а в течение 20 минут при комнатной температуре и в условиях бокса с соблюдением мер асептики отсасывали плазму и лейко-тромбослой (ЛТС), Гематокритное число такой ЭМ составляло 0,6-0,7. В ряде опытов над эритроцитами оставляли ЛТС и небольшое количество плазмы ( гематокрит - 0,55-0,6). 2) Через 2-3 часа после заготовки кровь центрифугировали при 750Q в течение 20 минут и стерильно отсасывали плазму, ос тавляя над ЛТС приблизительно один сантиметр плазмы. Гематокрит такой ЭМ составлял 0,6-0,7. Эритроконцентрат получали следующим образом:
Через 2-3 часа после заготовки кровь подвергали центрифу -гированию при 750п или ІІООо в течение 20 минут и в условиях бокса стерильно отсасывали плазму и ЛТС с эритроцитами, прилегающими к нему в количестве 50 мл ( на дозу крови). Гематокритное число ЭК составляло 0,85-0,95.
Немедленно после центрифугирования к ЭМ и ЭК прибавляли изучаемые ресуспендирующие растворы в различных соотношениях ( 1:1; 3:2; 3:1; 2:1 ).
Ш и ЭК, ресуспендированные растворами служили опытом.
Нересуспендированные ЕМ и ЭК - контролем. Пробы с опытными и контрольными образцами помещали в холодильник и хранили при 4 + 2С. Исследования проводили в день, получения эритроцитной взвеси и далее еженедельно.
Изучение, эффективности различных консервирующих сред
Благоприятное влияние диоксиацетона, никотинамида, аскор -бата натрия, фруктозы на функциональную полноценность эритроцитов в процессе консервирования привлекло внимание многих исследователей. Однако, в составе рецептур ресуспендирующих раство -ров для ЭМ эти соединения не изучались.
Вначале исследовали влияние этих соединений на функциональную полноценность ЭМ с гематокритным числом 0,65-0,8.х В практике Службы крови в период проведения исследований 1975-1976 гг еще не использовали ЭК.
Наїли было разработано несколько консервирующих и ресуспен -дирующих растворов для ЭМ с включением в их состав вышеперечис -.ленных соединений.
Материалом для исследования служила 31, полученная из цельной крови, заготовленной на гемоконсервантах Глюгицир и Цитроглю-кофосфат. ЭМ получали способами, описанными в разделе материалы исследования.
Соотношение ЭМ и разрабатываемых нами консервирующих и ре -суспендирующих растворов меняли для выявления оптимального эффекта применяемых добавок на метаболизм эритроцитов. В части опытов к ЭМ добавляли растворы в соотношении 3:ї, что позволяло получать концентрированные взвеси клеток с гематокритным объемом порядка 0,5 и более, в других случаях добавляли раствор в объеме снятой плазмы, т.е. в отношении 1:1, при этом гематокритное число эритровзвеси составляло 0,3-0,4.
Всего в работе было проверено 32 различных консервирующих и ресуспендирующих растворов, основу которых составлял изотонический раствор хлорида натрия (154 мМ). С одной стороны, такая концентрация этого вещества обеспечивала необходимое осмотичес -кое равновесие между клеткой и окружающей средой, с другой -улучшало реологические характеристики эритровзвесей, так как известно, что ин витро хлорид натрия обладает дезагрегирующим действием. [168],
Биохимическая характеристика эритроцитной массы
Б этой серии исследований ( п = 23) дозу крови от донора забирали во флаконы с гемоконсервантом Глюгицир. Кровь в день заготовки центрифугировали 20 минут при 750о или IIOOo . Б условиях бокса стерильно через иглу отсасывали плазму и ЛТС с 50 мл ЭМ ( в расчете на дозу крови). Полученный таким образом ЭК, тлеющий гематокритное число 0,86 + 0,041 являлся контролем; ЭК, ресуспендированный в растворе НАФ имел показатель гематокрита 0,55 ± 0,062 - опытом.
Результаты биохимических исследований представлены в табл. 6. Щелочной рН ресуспендирующего раствора и присутствие в нем аденина и никотинамида сохраняет в процессе хранения многие биохимические параметры в опыте по сравнению с контролем: так, на 28 день хранения концентрация АТФ сохранялась на 80% в опыте, в то время как в контроле концентрация этого соединения составляла лишь 33%; наблюдали тенденцию к сохранности кислородтранспорт-ной функции: показатель Р50 в опыте составлял на 28 день хранения 18,8 мм рт.ст. (аналогичные значения наблюдали в цельной крови на гемоконсерванте Глюгицир на 7-й день хранения). В опыте также лучше сохранялась концентрация 2,3-ДФГ - на 50% на 14 день хранения, в сравнении с 27% в контроле.
В опыте наблюдали меньшее содержание свободного гемоглоби -на и ионов калия в супернатанте (данные пересчитаны на гемато -крит 0,55); отмечались более высокие показатели рН ( на 14 день хранения рН в опыте был тот же, что и в свежезаготовленной крови на гемоконсерванте Глюгицир).
