Введение к работе
Актуальность проблемы. К настоящему времени накоплен боль
шой фактический материал, свидетельствующий об универсальной ро
ли свободнорадикального окисления липидов в регуляции гомеостаза
[В.Карножицкий, 1972; Л.К.Обухова, Н.М.Эмануэль, 1983] и значения
ПОЛ в причинно-следственных механизмах развития разнообразных
патологических состояний [Г.М.Богдан и соавт., 1995; В.П.Михин и
соавт., 1996; Д.В.Морозов и соавт., 1996; В.Б.Шнейвайс, Г.С.Левин,
1996; Е.П.Шувалова и соавт., 1996; С.Л.Плавинский, А.С.Кузнецов,
1997; Р.М.Сафаров и соавт., 1997]. Среди них особое значение приоб
ретают те, которые сопровождаются одновременным нарастанием ге-
мостатического потенциала, что нередко приводит к развитию ДВС
[А.Ш.Бышевский и соавт., 1995; С.С.Селицкая и соавт., 1996 ]. Данные
о параллелизме активации свертывания крови и ПОЛ, полученные в
условиях клиники [В.П.Мищенко, 1981; Л.В.Шатилина и соавт, 1996] и
эксперимента [Г.А.Лобань-Череда, 1992], сведения о способности ан-
тиоксидантов ограничивать гемокоагуляционные сдвиги
[В.А.Полякова, 1994; И.Ш.Весельский, А.В.Сонник, 1997; Yoshikawa е.а., 1986] обосновали необходимость выяснения механизмов взаимосвязи между свободнорадикальными процессами и гемостазом, что до сих пор детально не изучалось.
Учитывая тот факт, что все пути запуска коагуляционного каскада приводят к образованию центрального фермента свертывания крови - тромбина [Д.М.Зубаиров, 1978], мы предположили, что многократно выявленная зависимость между гиперкоагулемиеи и активацией ПОЛ может реализовываться посредством тромбинемии. В случае подтверждения этой гипотезы возникала необходимость исследования механизмов влияния тромбинемии на свободнорадикальные процессы крови.
Так как преимущественными субстратами свободнорадикального окисления являются жирнокислотные компоненты мембранных липидов, наше особое внимание в этом плане привлекли клетки крови, как структуры, потенциально способные реагировать на тромбин активацией внутриклеточных пероксидных реакций. В большей степени это относилось к тромбоцитам и эндотелиоцитам, имеющим рецепторы к тромбину [Г.Ю.Григорян, 1989; Jamieson е.а., 1980] и ферментные системы образования эндоперекисей простагландинов [Sicard, Lagarde, 1985; Siess, 1989], в меньшей - к эритроцитам. В то же время, сведения о модификации мембранных липидов под влиянием свободнорадикального окисления и роли фосфолипидов в формировании тромбо-пластической активности [Ю.А.Губский, 1978; Zwaal е.а., 1980] представляли интерес для изучения вклада ПОЛ в инициацию тромбиноге-неза. Установление, таким образом, связей "тромбинемия—^активация
ПОЛ" и "активация ПОЛ->тромбинемия" позволяло бы утверждать о взаимоусилении двух процессов, что является важным не только с точки зрения теории, но и для обоснования комплексного подхода к предупреждению тромбогеморрагических осложнений совместным назначением антикоагулянтов и антиоксидантов.
Цель работы - изучить взаимосвязь активации тромбиногенеза и свободнорадикальных процессов в крови, оценить роль тромбоцитов, эритроцитов и эндотелиоцитов в ее реализации.
Задачи исследования : 1) Изучить состояние ПОЛ плазмы, тромбоцитов и эритроцитов при тромбинемии in vitro. 2) Изучить состояние ПОЛ тех же объектов при экзогенной и эндогенной тромбинемии. 3) Исследовать влияние гепарина на сдвиги ПОЛ плазмы, тромбоцитов, эритроцитов, провоцируемые громбинемией. 4) Изучить влияние про-оксиданта (свинца) на гемокоагуляционные сдвиги, в обычных условиях и на фоне введения антиоксидантов. 5) Изучить влияние антиоксидантов на коагуляционный и тромбоцитарный гемостаз в условиях экзогенной и эндогенной тромбинемии и выживаемость животных при введении токсичных доз тромбопластина. 6) Изучить влияние тромбинемии на ПОЛ в тромбоцитах и эритроцитах. 7) Изучить влияние тромбинемии на морфофункциональное состояние тромбоцитов. 8) Изучить влияние антиоксидантов на агрегационную активность, высвобождение факторов Р4 и Р9, морфологию тромбоцитов при тромбинемии. 9) Исследовать влияние антиоксидантов на антитромбиновую, антиагрегационную и громбопластическую активности эндотелия аорты крыс. 10) Изучить влияние антиоксидантов на состояние мембранных фосфолипидов эритроцитов и тромбоцитов и сопоставить его с тромбопластической активностью изучаемых клеток. 11) Оценить в сравнении влияние антиоксидантов и гепарина на сдвиги ПОЛ, вызываемые тромбинемией.
Научная новизна. Впервые установлено, что контакт тромбина с кровью, в том числе и освобожденной от фибриногена, активирует в ней свободнорадикальные процессы. Эффект тромбина на ПОЛ реализуется через тромбоциты, эритроциты и эндотелиальные клетки.
Впервые установлено, что рост ПОЛ, вызываемый тромбинемией, стимулирует агрегацию, реакцию высвобождения и потребление тромбоцитов, что ограничивается предварительным введением антиоксидантов.
Впервые установлено, что антиоксиданты ограничивают деструкцию тромбоцитов при гипертромбинемии, ослабляя дополнительный приток в кровь тромбопластических субстанций.
Показано, что активация свободнорадикальных процессов, сопровождаясь изменением фосфолипидного состава клеточных мембран, вызывает рост тромбопластической активности тромбоцитов, эритроцитов и эндотелиоцитов и увеличивает их вклад в тромбшшгенез.
Впервые установлено, что торможение ПОЛ повышает антитром-биновую активность эндотелия сосудов, и снижает его ангиагрегаци-онные свойства.
Впервые установлено, что активация ПОЛ в изучаемых клетках крови при ipoMOiiiiL-MJiii является механизмом усиления тромииногене-за. Совместное применение антикоагулянтов и антиоксидантов более эффективно чем их раздельное введение разрывает замкнутый цикл "тромбинемия-*активация ПОЛ в клетках крови—угромбинемия".
Практическая ценность работы. В процессе выполнения исследований разработаны : 1.Способ определения суммарного содержания фибринмономеров и продуктов деградации фибрина в плазме крови (Авторское свидетельство N 1779693). На авторское свидетельство получен патент № 1779693 от 12.01.1994 г.; 2. Способ количественного определения общей коагуляционной активности тромбоцитов (Авторское свидетельство N 2061953). На авторское свидетельство получен патент № 2061953 от 10.06.1996 г.
Материалы исследований использованы для написания монографий "Витамины и здоровье женщины" (Красноярск, 1991, авторы -А.Ш.Бышевский, В.Н.Кожевников), "Биохимические сдвиги в диагностике патологических состояний (с элементами патохимии)" (Новосибирск, 1993, авторы А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян), "Витамины в профилактике тромбогеморрагических осложнений" (Тюмень, 1995, соавторы - А.Ш.Бышевский, В.А.Полякова, С.Л.Галян, А.М.Мкртумян),-"Тромбоциты" (Тюмень, 1996, соавторы - А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, И.А.Дементьева, А.А.Нелаева).
Полученные данные использованы при составлении инструкции по клиническому испытанию ВИТАКОМПЛЕКСА к заявке в Фармакологический Комитет МЗРФ.
Результаты работы внедрены в практическую деятельность ряда клинических учреждений г.Тюмени.
Апробация и публикации. Основные положения диссертации доложены на Всесоюзных конференциях "Клиническая витаминоло-гия"(Москва, 1991); "Физиология и патология перекисного окисления липидов, гемостаза и иммуногенеза" (Полтава, 1991, 1993); Зональной научно-практической конференции "Здоровье человека и экологические проблемы" (Киров, 1991); Региональной конференции биохимиков Урала, Западной Сибири и Поволжья (Тюмень, 1992); Всесоюзной научной конференции "Тромбоцит - как связующее звено гемостаза" (Москва, 1992); Международном симпозиуме "Биологически активные добавки к пище - нутрицевтики - и их использование с профилактической и лечебной целью при наиболее распространенных заболеваниях" (Тюмень, 1995); Всероссийской конференции "Актуальные вопросы службы крови и трансфузиологии" (Санкт-Петербург, 1995); 9-ой Европейской конференции по гемореологии (Сиена, 1995); Меж-
дународном симпозиуме "Медицина и охрана здоровья" (Тюмень, 1996, 1997).
По материалам диссертации опубликовано 40 печатных работ.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 229 страницах машинописи и состоит из введения, обзора литературы, описания ::2г. ;льзовап;:„:\ методов исследования, главы с изложением собственных исследований, обсуждения, выводов и списка использованной литературы. Работа иллюстрирована 50 таблицами, 10 рисунками, 2 фотографиями. Библиографический указатель включает 332 работы отечественных и зарубежных авторов.
![Перекисное окисление липидов и барьерная функция кожи в условиях старения организма [Электронный ресурс]](/i/i/4505/199416.png "Перекисное окисление липидов и барьерная функция кожи в условиях старения организма [Электронный ресурс] Ермакова Екатерина Юрьевна")
