Содержание к диссертации
Введение
1. Взаимозависимость между гемостазом и липопероксидацией (обзор литературы) 13
1.1. Краткая характеристика системы гемостаза 13
1.2. Перскнспос окисление лппидов (лппоперокендацнп) 23
1.3. Связь лппоперокендацнп /ЛПО/с гемостазом, роль тромбоцитов 30
2. Материалы и методы исследований 54
3. Результаты исследований 62
3.1. Интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген /ВТФ/ и коагулпцноннан активность тромбоцитов при угнетении и активации ЛПО 62
3.1.1. ВТФ в крови экспериментальных животных при угнетении ЛПО 62
3.1.2. ВТФ в крови экспериментальных животных при ускорении ЛПО 71
3.2. Интенсивность ЛПО в тромбоцитах при угнетении и активации ВТФ 19
3.2.1. Интенсивность ЛПО при угнетении ВТФ 19
3.2.2. Интенсивность ЛПО при ускорении ВТФ 83
3.3. Влияние ингибиторов превращения арахпдоновоії кислоты на ВТФ в кровотоке в зависимости от интенсивности ЛПО 87
3.3.1. Влияние аспирина на ВТФ 87
3.3.2. Влияние мепакрина на внутрисосудистое ВТФ 89
3.3.3. Влияние дазоксибена на ВТФ 90
3.4. Очередность появлення изменении ЛПО, прокоагулпнтноп активности тромбоцитов и ВТФ при воздействии про- и антпокендаптов, активаторов н ингибиторов свертывании 93
3.4.1. Динамика изменений скорости ВТФ в крови экспериментальных животных на ранних стадиях угнетеЕшя ЛПО 94
3.4.2. Динамика ВТФ в крови экспериментальных животных на ранних стадиях активации ЛПО 97
3.5. Влияние антпокендаптов на интенсивность ВТФ в крови у больных с заболеваниями, сопровождающимися ускорением ЛПО 101
3.5.1. ЛПО и гемостаз у женщин с поздним гестозом легкой степени при обычной или дополненной антиоксидантами терапии 101
3.5.2. ЛПО и гемостаз у женщин после родов при введении витаминов А, Е, С и Р, перед родами и после них 104
3.5.3. ЛПО и гемостаз у женщин, получавших оральный контрацептив антеовин на фоне антиоксидантного комплекса селмевита и без него 107
3.5.4. ЛПО и гемостаз у больных с облитерирующим атеросклерозом артерий нижних конечностей (2Б 3-4 степени) до и после опреации 111
3.6. Изменения процессов ЛПО в тромбоцитах при активации и торможении самосборки фибрина 121
3.6.1. ЛПО при торможении самосборки фибрина 122
3.6.2. ЛПО при ускорении самосборки фибрина 125
3.6.3. Продолжительность самосборки фибрина при изменении процессов ЛПО в тромбоцитах — их активации и торможении , 128
Обсуждение результатов и заключение 131
Выводы 183
Список литературы 185
- Краткая характеристика системы гемостаза
- Связь лппоперокендацнп /ЛПО/с гемостазом, роль тромбоцитов
- Влияние дазоксибена на ВТФ
- ЛПО и гемостаз у женщин после родов при введении витаминов А, Е, С и Р, перед родами и после них
Введение к работе
Актуальность исследований. Зависимость многих систем жизнеобеспечения от процесса лнпопероксидации /ЛПО/ несомненна [Е.Б.Бурлакова, 1985, 1997; В.З.Ланкин, 1997; Ю.А.Владимиров, 1998; А.Ш.Бышевский, 2001 а, б; Г.А.Левин и др, 2001; Р.Г.Алборов, 2003; А.Э.Алиева, 2004; А.П.Власов и др., 2004; Schonauer е.а., 2003; Kurrmgai е.а., 2003]. В свою очередь, при многих патологических состояниях меняется интенсивность ЛПО [С.Л.Галян, 2003; И.П.Кайдашев и д Kumagai р., 1995; Г.Н.Алеева и др. 2001; Е.Н. Анисимова и др., 2001; П.ВЛоляков, 2001; В.А.Полякова, 2001; Г.Е.Кадочникова, 2002; Г.Х.Мирсаева и др., 2002; И.А.Карпова, 2003; Алиева А.Э., 2004; Д.В.Зитта, 2005; Abplanalp е.а., 1999; Ejima е.а., 1999; Eritsland, 2000; Lopes е.а., 2003; Schonauer е.а., 2003]. Рост уровня активных форм 02 - одна из причин злокачественных новообразований [Е.Ю.Королева, 1997], лучевой болезни [А.А.Устинова, В.Е.Рябинпн, 1999], дисфункции щитовидной железы [Е.Н.Антипенко, 1994], изменений, связанных с алкоголизмом [Н. Л.Саму сева, 2002], хроническим пародонтитом [И.П.Апальков, 2004], геморрагической лихорадкой [А.Т.Галиева, 2004], аллергозами [З.А.Ахророва и др., 2004; И.Физдель и др., 2004; О.И.Денисенко, 2004; Н.М.Хаитова и др., 2004], герпетическими кератитами [И.Г.Неясова и др., 2004] и другими заболеваниями.
Сдвиги ЛПО ведут и к нарушениям гемостаза [С.Л.Галян и др., 1997а, б, 2001, 2003; И.А.Дементьева, 1998; И.В.Ральченко, 1998; А.И.Волков, 2002; Schonauer е.а., 2003; O'Donnell, 2003; Sorensen е.а., 2003; Gorlach е.а., 2003].
В свою очередь, активация гемостаза ускоряет ЛПО и снижает антиокси-дантньтй потенциал [И.Е.Попова, 1999; Ю.В.Виноходова, О.И.Родина, 2001; Г.Х.Мирсаева, 2002; De Cristofaro е.а., 2003; Bacot е.а., 2003].
Есть немногочисленные сведения о роли тромбоцитов в реализации связи между ЛПО и гемостазом [В.Г.Соловьев, 1997; В.В.Юдин, 2001; 2002 а, б; Haszon е.а., 2003], что обусловлено наличием в этих клетках системы синтеза
простагландииов, определяющей интенсивность НПО в клетке, [В.А.Алмазов м др., 1990, 1992; В.П.Балуда и др., 1995; А.Ш.Бышевский др., 1999; И.А.Дементьева, И.В.Ральчснко, 1999; Ciavatti e.a., 1982; Lip e.a., 1997; Gawaz, 2001; Haszon e.a., 2003].
Установлено, что антиоксиданты ограничивают гемокоагуляционные сдвиги при заболеваниях, протекающих с гипероксидацией, снижают частоту тромботических осложнений при оксидативном стрессе [Т.П.Шевлюкова, 2001; И.А Карпова, 2002, 2003; В.В.Юдин, 2002а, б, в; С.Г.Зражевская и др., 2004; Е.А.Близшок и др., 2004; С.С.Дубовская, М.Б.Наврузов, 2004; Ciavatti e.a., 1984; Senftleben, Suchner, 2000; Laroia e.a.2003; Pawlak e.a., 2003; Anto-niades e.a., 2003; Banfi e.a., 2003]. To же показано и экспериментально [Э.А.Шабанов, 2001; П.Я.Шаповалов, 2000, 2001; А.И.Волков, 2003; И.И.Шахматов и др., 2004; Mary е.а., 2003].
Сформулированы первые предположения о механизмах связи гемостаза и ЛПО, на их основе предприняты успешные попытки использовать антиоксиданты в коррекции гемостатических сдвигов у терапевтических и хирургических больных, при лечении акушерской и гинекологической патологии, эндокринных расстройств [А.Ш.Бышевский, 1994, 2005; Е.А.Винокурова, 1999; М.В.Дурова, Ї999; И.Е.Попова, 1999; А.В.Соловьева, 1999; АЛО.Рудзевич, 2000; А.А.Нелаева и др. 2003; Gomba е.а., 1976; Sadani е.а., 1996; Anonymos, 2003; GromnatskiT, Medvedev, 2003; Daui e.a., 2003; Afanac'eva e.a., 2003; Mary e.a., 2003], у больных с ранними геморрагическими инсультами, гипопрокон-вертинемией с мезенхимальными дисплазиями, с болезнью Виллебранда [З.С.Баркаган и др., 2004 а, б, в; Г.А.Суханова и др., 2004], в процессе фармакологической реабилитации после медицинского аборта [И.А.Карпова, 2002, 2003; В.А.Полякова и др., 2004]
При изучении влияния антиоксидантов на гемостаз в условиях активированной ЛПО нередко оценивали отдельные показатели плазмокоагуляции в сочетаниях, не позволяющих делать выводы об интенсивности взаимодействия
между тромбином и фибриногеном, что не дает возможность судить об интенсивности внутрисосудистого свертывания крови (далее для краткости - ВСК). Интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген (или интенсивность ВСК) отражает степень напряжения многокомпонентной системы гемостаза [Д.М.Зубаиров, 1978, 2000; АЛ. Момот, 1990; Р.У. Колмен (ред.), 1988; А.Ш.Бышевский и др., 1990; А.И.Грицюк и др., 1994; З.С.Баркаган, 1998; Т.А.Батрак, 1999; В.П.Скнпетров и др., 1999; В.Ф.Киричук и др., 2002; Haszon е.а., 2003; Spronk, 2003].
Изменения интенсивности взаимодействия тромбин-фибриноген в значительной мере определяют наклонность к тромбозам или к гипокоагуляции [З.С.Баркаган, 1978, 1998; Д.М Зубаиров, 1989; И.Ы.Бокарев, 2000 а, б, в, 2002; Haszon е.а., 2003; Levi М., 2004; Spronk , 2003], что особенно заметно при изучении интенсивности ВСК в циркадном и сезонном ритмах [Б.И.Кузник, и др., 1976; В.П.Балуда и др., 1978; А.Ш.Бышевский, В.Н.Кожевников, 1986].
Не всегда оценку гемо коагуляции сопровождает контроль за тромбо-цитарным компонентом [И.Е.Попова, 1998, 1999; Ю.И.Цирук, 1998; Chen, Yeh, 2003], хотя тромбоциты - клетки, весьма зависимые от ЛПО [К.Ф.Селиванова, 1969; И.В.Селиванова, 1994; В.В.Юдии, 2002 а, б, в; И.А.Карпова, 2003; Grom-natskiT, Medvedev, 2003; Gear, Camerini, 2003]. При изучении ЛПО нередко не контролировали антиоксидантный потенциал [П.Я.Шаповалов, Т.Д.Арсаева, 2001; Л.Ф.Панченко, С.ВЛирожков, 2003; Davi е.а., 2003].
Широкое распространение синдрома гипероксидации [Е.Б.Бурлакова, 1985, 1997; В.Н.Ушкалова и др., 1994 а, б; В.З.Ланкин, 1997; Ю.А.Владимиров, 1998; С.Л.Галян и др., 2001; Г.Д.Кадочникова, 2002; А.Ш.Бышевский и др. 2003 а, б, в; Manson J.J., Isenberg, 2003] актуализирует необходимость выяснить, существует ли зависимость между интенсивностью ЛПО и антиоксидантный потенциалом с одной стороны, и интенсивностью взаимодействия тромбин-фибриноген (следовательно, и ВСК) - с другой. Важно и охарактеризовать эту зависимость. Сказанное определило направленность нашей работы.
Цель исследовании: установить, связана ли интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген в кровотоке с липопероксидацией, охарактеризовать эту связь и оценить возможность и целесообразность коррекции интенсивности взаимодействия тромбин-фибриноген воздействием на антиоксидантный потенциал и липопероксидацию. Задачи исследований:
Изучить интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген в кровотоке при изменениях липопероксидации и антиоксидантного потенциала про- и антиоксидантами и другими факторами;
Изучить липопероксидацию и антиоксидантный потенциал при экспериментальном изменении интенсивности взаимодействия тромбин-фибриноген в кровотоке введением антикоагулянтов и другими воздействиями, модифици-рующими гемостаз; , ,
Изучить эффект ингибиторов отдельных этапов превращения арахи-доновой кислоты на взаимодействие тромбин-фибриноген в кровотоке в зависимости от интенсивности липопероксидации;
Изучить последовательность (во времени) появления сдвигов в гемостазе и липопероксидации в опытах с небольшими интервалами между отборами проб при воздействиях, изменяющих интенсивность ге.чостаза или липопероксидации;
Изучить влияние антиоксидантов на интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген в кровотоке при некоторых заболеваниях, сопровождающихся увеличением гемостатического потенциала и липопероксидации (послеродовый период, поздний гестоз, атеросклероз артерий нижних конечностей).
После оценки результатов, полученных при выполнении пунктов 1-5, возникла необходимость в решении ещё одной задачи:
6. Изучить зависимость неферментативного этапа превращений фиб
риногена (самосборки фибрина) от состояния липо перо ксидации.
Научная новизна
Впервые экспериментально показано:
что активация или угнетение липопероксидации введением прооксидан-тов или антиоксидантов, дозазависимо ускоряет или снижает интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген в кровотоке;
что экзогенная и эндогенная гипертромбинемия, ускоряя взаимодействие тромбин-фибриноген в кровотоке, сопровождается активацией перекисного окисления липидов в степени, зависящей от уровня гипертромбинемии;
что ингибиторы трансформации арахидоновой кислоты, ограничивают рост прокоагулянтной активности тромбоцитов в большей мере на фоне повышенной антиоксидантной активности и замедленной липопероксидации, замедляя взаимодействие тромбин-фибриноген в кровотоке.
Впервые установлено, что при патологических состояниях, отличающихся по этиологии и патогенезу, но сходных в том, что им сопутствует ускорение липопероксидации, взаимодействие тромбин-фибриноген в кровотоке существенно ускорено.
В итоге с помощью новых подходов подтверждено наличие взаимосвязи между липопероксидацией и гемостазом, уточнен характер взаимосвязи. Показано, что сдвиги ЛІТО отражаются на значениях интегрального показателя состояния гемостаза - взаимодействии тромбин-фибриноген в кровотоке (следовательно, и на интенсивности непрерывного внутрисосудистого свертывания крови).
Впервые показано, что антиоксид анты целесообразно использовать для ограничения изменений интенсивности ВТФ при заболеваниях, сопровождающихся активацией перекисного окисления липидов.
В совокупности полученные данные свидетельствуют о тесной двусторонней связи между важными системами жизнеобеспечения: системой гемостаза и свободнорадпкальными процессами (на уровне перекисного окисления липидов).
Практическая значимость работы заключена в том, что её результаты обращают внимание практикующих врачей на возможность ограничивать гемокоагуляционные сдвиги (соответственно и частоту тромботических осложнений) назначением антиоксидантов, замедляющих липопероксидацию и повышающих антиоксидантиый потенциал. Показано, что в качестве антиоксидантов могут использоваться доступные витаминные комплексы, практически не имеющие противопоказаний к применению.
Результаты работы позволили предположить, что использование антиоксидантов позволяет уменьшить дозы ингибиторов агрегации тромбоцитов (т.н. антиагрегантов) в клинике, т.е. обосновывают целесообразность проведения соответствующих исследований.
Показано также, что антиоксиданти можно использовать для моделирования (в эспернментальных целях) мягкой гипокоагулемии, обусловленной ограничением интенсивности взаимодействия тромбин-фибриноген в кровотоке.
На защиту вынесены следующие положения:
Содержание в плазме крови прямых и косвенных маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген повышается (или снижается) при воздействиях, активирующих (или угнетающих) липопероксидацию и соответственно снижающих (или повышающих) антиоксидаитный потенциал в тромбоцитах.
При воздействиях, повышающих (или снижающих) уровень маркеров ВТФ, активируется (или угнетается) липопероксидация в тромбоцитах, падает (или растет) их антиоксидаитный потенциал.
Неферментативный этап 3-й фазы свертывания (самосборка фибрина) не зависит от интенсивности процесса липопероксидации и от антиоксидантного потенциала, следовательно, связь между гемостазом и липопероксидаци-ей реализуется на уровне 1-й и 2-й фаз плазмокоагуляции.
Влияние витаминов с антиоксидантными свойствами на интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген не связано со специфической активно-
стыо витаминов, но обусловлено их способностью ограничивать липоперокси-дацшо и повышать антиоксидантный потенциал.
При физиологических и патологических состояниях, сопровождающихся оксидативным стрессом, повышено содержание в плазме крови маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген независимо от этиологического фактора, вызвавшего его. Введение антиоксидантов в этих случаях ограничивает активацию гемостаза и сокращает период восстановления его исходного состояния гемостаза.
Связь ЛПО с взаимодействием тромбин-фибриноген, следовательно, и с непрерывным внутрпсосудпстым свертыванием крови, реализуется через тромбоциты, сдвиги липопероксидации в которых предшествуют во времени повышению прокоагулянтной активности тромбоцитов, которое в свою очередь предшествует интенсификации ВТФ.
Апробация и публикации. Результаты работы отражены в 46 публикациях: журнальных статей - 35 (из них 15 в изданиях, рекомендованных ВАК); монографий — 2, главы в монографиях - 3, материалы конгрессов, симпозиумов и конференций - 6), использованы при написании двух монографий («Связь гемостаза с перекисным окислением лнпидов» / А.Ш.Бышевскии, М.К.Умутбасва, Р.Г.Алборов // М.: Медицинская книга. - 2003. - 95 е.; «Антиоксидапты в коррекции гемокоагуляционных сдвигов» / А.Ш.Бышевскии, М.К.Умутбаевя, Р.Г.Алборов // М.: Медицинская книга. - 2004. - 80 с), использованы при оформлении заявки на «Способ определения толерантности животных к тромбину» (Патент № 2219546, приоритет от 04.05.2000, регистрация 20.12.2003).
Материалы исследований доложены на: Всесоюзном биохимическом съезде (М., 1986); 5-й Всероссийской конференции «Тромбозы, геморрагии, ДВС-синдром. Проблемы лечения» (М., 2000); 6-й национальной конференции «Атеротромбоз, артериальная гипертензия» (М,, 2001); сессии (с международным участием) Всероссийской ассоциации тромбозов, геморрагии и патологии сосудов им. А.А.Шмидта-Б.А.Кудряшова (М, 2003); конференции «Актуальные вопросы экспресс-диагностики в хирургии» (М., РНЦХ РАМН, 2003);
конференции РАЕ «Фундаментальные и прикладные исследования в медицине» (Греция, 2003); 2-й конф. РАЕ «Гомеостаз и эндоэкология» (Египет, 2004); конференции биохимиков Урала, Западной Сибири и Поволжья (Оренбург, 2003); на 14 когрессе Дунайской ассоциации гемостазиологов (С.-Петербург, 2004) заседании Тюменского отделения ВБО (Тюмень, 2004); заседании регионального отделения РАЕ (Тюмень, 2005).
Краткая характеристика системы гемостаза
Так как система свертывания крови описана в представительных монографиях, в том числе и в последние годы [А.И.Грицюк и др., 1994; В.П.Балуда и др., 1995; Г.И.Козинец, В.А.Макаров (редакторы), 1997; В.П.Скипетров и др., 1999; Д.М.Зубаиров, 2000; А.С.Шитикова, 2000; Gawaz, 2001], мы приводим только основные сведения, необходимые читателю, для которого эта проблема не является основной.
Гемостаз - биологическая система, обеспечивающая сохранение жидкого состояния крови, необходимого для выполнения транспортной функции, предупреждая кровопотерю, поддерживая целостность сосудистой стенки и образование кровоостанавливающих тромбов при повреждении сосудов [З.С.Бар-каган, 1988, 1998; А.Ш.Бышевский и др., 1990; В.П.Балуда и др., 1995; Д.М.Зубаиров, 1978, 2000; И.Н.Бокарев, 2002; Gawaz, 2001].
Функции гемостаза реализуются взаимодействием плазменных ферментных систем (коагуляционный гемостаз), клеток крови (тромбоцитарный гемостаз) и элементов сосудистой стенки (сосудистый гемостаз).
Плазменные прокоагулянты (протеазы, белки-акцелераторы) обеспечивают формирование фибринового сгустка на фосфолипидных мембранах при 2+ участии Са . Их перечень, сведения о химической структуре и биологаческих свойствах освещены в ряде книг и научной периодике [Д.М.Зубаиров, 1978, 2000; А.Ш.Бышевский и др., 1990; А.И.Грицюк и др., 1994; В.П.Балуда и др., 1995; З.С.Баркаган, 1998; Л.П.Папаян, 2003; Cooper, 2004]. Взаимодействие факторов свертывания протекает в три стадии: 1-я стадия - активация ф. X (ф.Х — ф. Ха) - протекает по двум путям: внутреннему и внешнему. Внутренний путь инициируют активация ф.ХН катехоламинамн [Л.Г.Попова, 1982; Д.М.Зубаиров, 2000] и неэстерифицированными жирным» кислотами [Didisheim, Mibasham, 1963], контакт с чужеродной поверхностью и коллагеном субэндотелия [В.П.Балуда и др., 1995; Ratnoff, 1966], протеолиз и калликреин-кининовая система [Liu е.а., 1977]. Далее взаимодействие фф. Х1а, 1Ха и VIII:К (на фосфолипидных матрицах при участии Са24") ведет к образованию ф.Ха [С.А.Шитикова, 2000; Gavvaz, 2001]. По внешнему пути генерацию ф.Ха инициирует поступление в кровь тканевого фактора (ф.Ш), который активирует ф.УП (ф. VII - ф.УПа) [Д.М.Зубаиров, 2000; Л.Д.Зубаирова и др., 2005 а, б]. Оба пути взаимодействуют между собой [А.Ш.Бышевский и др., 1990; Л.П.Папаян, 2003; Seligsohn, 1979; Gear, Camerini, 2003]. 2 стадия - тромби нообраз о ванне: ф.Ха на фосфолипидных мембранах при участии ф.Уа и Са2+ катализирует реакцию ф.Н —» ф.Иа [Б.А.Кудряшов, 1975; Д.М.Зубаиров, 2000; Л.П.Папаян, 2003; Adams, 1981; Adam, 2003]. 3 стадия - образование фибрина: тромбин отщепляет низкомолекулярные пептиды А и В в молекуле фибриногена (ф.1), высвобождая фибринмономеры, которые в процессе аутололимеризации (самосборки) образуют фибринполи-меры, агрегирующие в фибрин растворимый (ф.15), последний под действием ф. ХШа, образующего поперечные карбамидные сшивки, превращается в фибрин нерастворимый (ф.1;) [Д.М.Зубаиров, 2000; Е.И.Синауридзе и др., 2003 ]. Аитнкоагулянты, обеспечивающие сохранение жидкого состояния крови, условно разделяют на антитромбины (антитромбин III и кофакторы, протеины Си S, белки-антипротеазы фракции а-глобулинов), вторичные антикоагулянты, образующиеся в процессе плазмокоагуляции и фибринолитики (плазмтш и его тканевые активаторы [П.Дж.Гаффни, С.Балкув-Улютин, 1982; З.С.Баркаган, 1988; В.П.Балуда и др., 1995]. Соотношение между про- и антикоагулянтами регулируют нейро-гуморальные механизмы, что обеспечивает жидкое состояние крови при со 15 хранении готовности к быстрому тромбообразованшо в местах повреждения сосудистой стенки. Компоненты сосудистой стенки (преимущественно интимы). Ведущая роль интимы определена её контактом с кровью. Клеточная поверхность эндо-телиоцита образует три замкнутых и связанных между собой слоя: внешний (гликокалике), средний (плазматическая мембрана) и внутренний (субмембранный). Основа глнкокалнкса - белки, протеоглнканы, гликопротснды и гликолипиды. Около 80% гликозаминогликанов представлены гепарансульфатом и дерматаисульфатом с отрицательным зарядом, обеспечивающим резистентность к тромбообразованшо [Э.С.Габриелян, С.Э.Акопов, 1985; В.П.Ба-луда и др., 1995]. Обнажение важного компонента су бэнд отел пально го слоя -коллагена - способствует адгезии тромбоцитов и контактной активации ф.ХН [Т.П.Калишевская и др., 1992; Н.Н.Петрищев, 1994; Duncan е.а., 1980; Andrews е.а., 1997; Gawaz, 2001], с чем связана возможность тромбозов при деэндоте-лизации или повреждении интимы. В норме эндотелий тромборезистентен за счет отрицательного заряда гли-кокаликса и способности синтезировать антикоагулянты и антиагреганты: 1. Простациклин (Pg 12) - антиагрегант, синтезирующийся в эндотелии со судов ( и в тромбоцитах) из арахидоновой и эйкозопентаеновой (серии \ аЗ) кислот через образование эндопере кисеи PgGj и PgH2, которые под действием простациклинсинтазы превращаются в Pgl2 [Н.Н.Петрищев, 1994; Marcus е.а., 1980; Gawaz, 2001]. Образование и секрецию простациклина ускоряют тром бин и вазоконстрикторы [Bartha е.а., 1989; D Orleans-Juste е.а., 1992; Gawaz, 2001]. Простациклин тормозит агрегацию тромбоцитов и в меньшей степени — адгезию. Инактиватор простациклина - цитоплазматическая 15-гидрокси простагландиндегидрогеназа [Chen е.а., 1981]). В артериальной крови концен трация простациклина выше, чем в венозной [Hartiala е.а,, 1980; Garcia Hernandez, 2004]. 2, Антитромбіні III - белок, синтезирующийся эндотелиоцитами [Chan, Chan, 1981] и гепатоцитами [Owens, Miller, 1980] - основной носитель антн-тромбиновой активности сосудистой стенки, его активность повышается гепарином, с которым он образует комплексы на поверхности эндотелиоцитов [Rosenberg, 1984; Brummel-Ziedins, 2004]. 3. Протеин С локализован на поверхности эндотелиоцитов, активируется тромбином (активацию ускоряет тромбом одул и н), ингибирует фф. Va и VIII: К -її (кофакторы - протеин S, фосфолипиды и Са ), угнетает ингибитор активатора плазминогена [Сотр, 1984; Brass е.а., 1997; Dahlback, 2004]. 4. Активатор плазминогена (анпгокішаза) - серпневая протеаза, аффинная к плазминогену, выход в кровь ускоряют вазоконстрикторы, окклюзия сосудов, физическая нагрузка [Kerins е.а., 1989]. 5. Ф. Виллебранда (VIII:OB) - кофактор адгезии тромбоцитов к коллагену I и III типов [Gavvaz, 2001] и их агрегации ристомицином [Н.Н.Петрищев, 1994; Baumgartner е.а., 1982; Fai, 2004]. 6. Фактор, активирующий тромбоциты /ФАТ/, образуется под действием лейкотриенов С-4 и D-4, индуцирует агрегацию тромбоцитов независимо от АДФ и арахидоната [Whatley е.а,, 1987; Gawaz, 2001]. 7. Тканевой фактор /ТФ/ - высокомолекулярный липопротеин мембран эндотелиоцитов и мнопгх других клеток, содержит апопротеин III [Д.М.Зубаиров, 2000]. Тромбопластическая активность эндотелия растет под действием тромбина, адреналина, эндотоксинов, компонентов комплемента, тромбоцитов и при повреждении интимы [Johnsen е.а., 1983; Вгох е.а., 1984; Jaffe, 1990; Dietzen е.а., 2004].
Связь лппоперокендацнп /ЛПО/с гемостазом, роль тромбоцитов
При гиперкоагулемиях разного происхождения свободнорадикальные процессы активированы [С.Н.Ельдецова, 1990; СЛ.Галян, 1993, С.Л.Галян и др., 1997 а, б; А.Ш.Бышевский и др., 1996, 1997; И.Е.Попова, 1999; Т.П.Шев-люкова, 1996, 1999, 2000; Р.Г.Алборов, 2001 а, б, 2003; Korantzopoulos е.а., 2003], Возможно, это реализуется через синтез простагландинов, изменяющих функции клеток крови, преимущественно, тромбоцитов [И.А.Дементьева, 1998; А.Ш.Бышевский и др., 2000, 2003 а; Р.Г.Алборов, 2001а,б, Р.Г.Алборов, А.И.Бродер, 2001; Balakrishnan е.а., 2003].
Превращения арахидоновой кислоты по лнпооксигеназному и циклоокси-геназному путям включают образование липоперекиссй, которые, активируя тромбоциты [И.В.Ральченко, 1998; А.Ш.Бышевский и др., 2003 a; Belch, 1992], ускоряют тромбиногенез. Это и обусловило внимание к изучению влияния продуктов ЛПО на активность тромбоцитов.
Свободные радикалы, особенно вторичные продукты ЛПО, являясь детер 31 гейтами, деформируют лппопротеиднын комплекс мембран, увеличивают их проницаемость, меняют активность мембраносвязанных энзимов, что приводит к цитолизу и гибели клетки [Е.Б.Бурлакова, 1975; И.П. Кайдашев и др, 1995; В.Г.Соловьев, 1997]. Антиоксиданти снижают активность фосфолипаз, способствуя сохранению фосфолнпидов в мембранах [В.П.Мищенко и др., 1981]. Обогащение организма антиоксидантами повышает вязкость бислоя и снижает прокоагулянтую активность тромбоцитов, замедляет тромбиногенез. Активация ЛПО в тромбоцитах ускоряет инкорпорацию в них АК, что повышает активность клеток пропорционально приросту уровня продуктов превращения АК. Интенсивность деструктивных сдвигов в мембранах связана ещё и с ослаблением антиоксидантной защиты [А.А.Кубатиев, С.В.Андреев, 1981; В.Г.Соловьев, 1997; А.А.Нелаева и др., 1999; П.В Поляков, 2001; Коуа е.а., 2003], Так, при дефиците аитиоксидантов гиперкоагуляция ускоряет выход в кровь прокоагулянтов, в том числе факторов Р3 и Р4 [И.В.Ральченко, 1998]. Одна из природных моделей гипероксидации - атеросклероз. При этом заболевании растет содержание субстратов ЛПО (холестерола, липопротеинов, фосфолнпидов), накапливаются гидроперекиси и свободные радикалы, вызывающие деструкцию мембран или способствующие её развитию [О.В.Кор-кушко, А.Н.Коваленко, 1985; Belch, 1992; Morishita е.а., 1996, 1998; Meurisse е.а., 2000]. Гипоксия также сопровождается гиперкоагулемией. Дефицит Ог активи 2 рует ЛПО, что сопровождается накоплением АДФ и ионов F . В итоге повышается проницаемость мембран и тромбопластическая активность тромбоцитов, их адгезивность и способность к агрегации [В.А.Полякова и др., 1992; ВГ.Соловьев, 1993, 1997; М.В.Дурова, 1999; Л.И.Рейхерт, 1999]. Атеросклероз и гипоксия - не единственные состояния, характеризующиеся гиперкоагулемией и активацией ЛПО. То же наблюдается при воспалении, травме, физическом и эмоциональном стрессе, инфекционных и паразитарных заболеваниях, новообразованиях, старении, гестозе и других ситуациях [Е.Б.Бурлакова,1975; С.Н.Ельдецова, 1990; Т.П.Шевлкжова, 2000; А.Ш.Бышевский и др., 2003 а, б, в; Н.Н. Лавинская и др., 2003; Chaurasia е.а., 1997; Mano е.а., 1997;Venditti е.а., 1997; 1998; Schafer, 2004]. Убедительно подтверждается связь гиперкоагуляция-ЛПО данными об антикоагулянтном эффекте полифенолов, витаминов-антиоксидантов [Г.А.Ло-бань и др., 1994; И.В.Ральченко, 1998; А.Ш.Бышевский и др., 1999, 2003 а; Niki ел., 1986, Oshima е.а,, 1993 а, Ь; Мало е.а., 1997], данными, свидетельствующими о том, что при нормальной ЛПО антиоксиданты не влияют заметно на гемостаз [СЛГалян, 1993; В.Г.Соловьев, 1997]. Косвенно о том же свидетельствует то, что у лиц с группой крови А(П) повышена прокоагулянтная и снижена антиоксидантная активность, что у лиц с нестабильной стенокардией или с ИБС скорость и агрегация тромбоцитов коррелируют с ростом содержания липопероксидов и снижением активности СОД [В. А.Алмазов и др., 1992; Buczynski А. е. а., 1989]. При гемофилии с гипокоагулемией уровень малонового диальдегида /МДА/ в тромбоцитах ниже нормы почти в 2 раза. Так как накопление МДА -признак активации синтеза Тх А2 и ускорения ЛПО [А.Ш.Бышевский и др., 1996], можно допускать, что интенсивность ЛПО и прокоагулянтная активность растут параллельно. Уровень МДА - маркер активности тромбоцитов [В.А.Алмазов и др., 1990, 1992; Stuart, 1979]: ингибитор синтеза Тх (аспирин) угнетает, а стимуляция тромбоцитов усиливает синтез МДА. На фоне аспирина синтез Тх ослабляется, как и агрегация [Livio е. а., 1980]. Кроме того, в эксперименте показано, что проагрегантная активность тромбоцитов пропорциональна концентрации в них продуктов ЛПО [И.А.Дементьева, 1998; И.В.Ральченко, 1998; А.И.Волков, 1999: О.А.Терсенов и др., 2001; Р.Г.Алборов, 2003]. О зависимости между свободнорадикальными процессами и коагуляци-онной активностью тромбоцитов свидетельствуют и следующее: 1) дефицит селена, вызывающий недостаточность селензависимой глута-тионпероксидазы, повышает афегабельность тромбоцитов; 2) наличие обратной зависимости между агрегацией тромбоцитов и концентрацией селена в плазме; 3) внесение глутатионпероксидазы во взвесь тромбоцитов тормозит ара-хидонат-зависимое образование МДА и тромбоксана; 4) Н2О2 ускоряет АДФ-, тромбин- и коллаген-агрегацию; 5) антиоксиданти тормозят синтез МДА в тромбоцитах [Guidi е. а., 1984]. Связь гемостаза с ЛПО, т.е. связь между тромбинемией и активацией сво бодиорадикальных процессов, в значительной мере обеспечивают клетки крови [И.В.Ральченко, 1998] и эндотелиоцнты при ведущей роли тромбоцитов [И.В.Селиванова, 1994; С.Л.Галян, 1997; В.Г.Соловьев, 1997; А.В.Соловьева, 1999; Т.П.Шевлюкова, 2001а; В.В.Юдин, 2002 а, б, в]. Видимо, агрегация тромбоцитов сопряжена с ЛПО: при стимуляции тромбином растет содержание МДА и других липоперекисей, ускоряется синтез Тх, падает антиокси-дантный потенциал. В итоге нарушается структура мембран, ускоряется высвобождение коагулоактивных факторов. Антпоксиданты, угнетая ЛПО, защищают мембраны, ограничивая рост прокоагулянтной активности тромбоцитов. Ускоренный тромбиногенез, как обязательный компонент гиперкоагуляции, активирует тромбоциты, и это сопровождается усиленным высвобождением тромбоцитарных факторов свертывания, следовательно, аутокаталитическим ускорением тромбиногеиеза и повышением активности тромбоцитов (положительная обратная связь). Так как активные формы О2 - нормальные продукты превращений АК по пути образования Pg, а в активации тромбоцитов важную роль играют свободнорадикальные процессы, в частности ЛПО, ускорение липопероксидации активирует гемокоагуляцию через активацию тромбоцитов. Антпоксиданты, подавляя ЛПО.
Влияние дазоксибена на ВТФ
В качестве активатора ЛПО в этой серии экспериментов мы выбрали тироксин, который в дозе 1.5 мг/кг (табл. 8) начинает повышать скорость ЛПО в малой степени уже на 3-й день введения. Эффект постепенно нарастает к 10-му дню при одновременном увеличении активности гемостаза, проявляющемся в том числе и усилением ВТФ. Т4 вводили ежедневно по 1.5 мг/кг массы тела, пробы брали на 3-й, 5-й, 6-й, 8-й и 10-й дни (табл. 24). Как следует из приведенных в табл. 24 данных, на 3-й день введения Т4 уже заметно увеличилась скорость ЛПО: повысился уровень ДК и ТБК (на 50 и на 8 % соответственно), сократился и период индукции (на 9 %). Остальные показатели оставались равными контрольным. На 5-й день прирост содержания ДК и ТБК-продуктов - 150 и 12 % соответственно, период индукции /ПИ/ сократился на 12 %, а скорость окисления /СО/ увеличилась на 22 %. Появились признаки активации тромбоцитов: ОКАТ увеличилась на 4 %, С А - на 12 %, АДФ-АГ - на 8 %, высвобождение фф. Р3 и Р4 - на 4 и 24 % соответственно. Сократились АВР и АЧТВ на 10 и на 12 % соответственно (рост общей свертываемости крови), а содержание ПДФ и РКМФ возросло на 20 и 14 %, содержание D-димеров увеличилось на 26%. На 6-й день прирост содержания ДК и ТБК-продуктов составил соответственно 200 и 15 %, степень укорочения ПИ — 15 %, прирост СО - 25 %. Продолжала расти активность тромбоцитов: ОКАТ выше исходной на 15%, С А — на 18%, АДФ-АГ - на 12%, высвобождение фф. Р3 и Р4 - на 5% и 30 %. АВР и АЧТВ сократились на 20% и 15 %, содержание ПДФ и РКМФ увеличилось на 26 и 10 %, а уровень D-димеров - на 61 %. На 8-й день изменения содержания ДК и ТБК нарастали: прирост против контроля составил 225 и 28 %, ПИ был короче контроля на 20 %, а СО повысилась на 30 %. Активность тромбоцитов также продолжала нарастать относительно контроля: ОКАТ - на 23, С А - на 27 %, АДФ-АГ - на 19 %, высвобождение фф. Р4 и Р4 — на 10 и на 36 %. АВР несколько удлинилось, оставаясь короче контрольного на 15 %, а АЧТВ уже не отличалось от контрольного. Содержание ПДФ и РКМФ увеличилось на 51 и 20 %, содержание D-димеров увеличилось против контроля на 87 %. На 10-й день содержание ДК и ТБК повысилось против контроля на 300 и 32 %, ПИ сократился на 29 %, СО повысилась на 36 %. Активность тромбоцитов стала заметнее: ОКАТ увеличилась на 30, С А — на 32, АДФ-АГ - на 18 %, высвобождение фф. Р3 и Р4 - на 14 и 48 % соответственно. АВР в этот срок было короче контрольного, но в меньшей мере, чем ранее - на 12 %, а АЧТВ удлинилось на 13 % против контроля, т.е. наблюдалась диссоциация показателей, характерная для ДВС-синдрома [З.С.Баркаган, 1988]. Содержание ПДФ и РКМФ оказалось выше контрольной величины на 69 и на 28 % соответственно, а содержание D-димеров к этому сроку увеличилось на 130 %. Видимо, с ускорением ВТФ связано выявившееся на 8-й и 10-й дни снижение содержания фибриногена. Ниже приводим данные о степени изменения показателей относительно контроля, выраженные в процентах (табл. 25). Заключая рассмотрение данных, полученных в экспериментах с малыми интервалами между отбором проб крови, выделим основное: - подтвердилось то, что было найдено в опытах с большими промежутками времени между отборами проб: угнетение ЛПО сопровождается снижением скорости ВТФ в кровотоке, а рост интенсивности ЛПО — её повышением; - на воздействия, угнетающие или активирующие ЛПО, реагируют в первую очередь тромбоциты снижением или повышением агрегационной и «высвобождающей» активности; позже изменяется общая свертываемость крови (гипо- или гнперкоагуляция на разных этапах эксперимента) и замедляются (либо ускоряются) процессы ВТФ; - при глубоком угнетении НПО содержание индикаторов ВТФ становится заметно ниже нормы, свидетельствуя о значительном замедлении процессов внутрисосудистого свертывания крови; - при значительной активации НПО интенсивность ВТФ в крови увеличивается до степени, которая может проявиться в виде диссеминированного внутрисосудистого свертывания кровн; - не исключено, что антиоксиданты, к числу которых относятся витамины, играющие роль ловушек активных форм кислорода, а также комплексы, включающие эти витамины и селен, ограничивают взаимодействие тромбина с фибриногеном при заболеваниях, сопровождающихся активацией этого физиологического процесса. Последнее предположение основывается не только на полученных нами экспериментальных данных, которые приведенны выше, но и на данных литературы последних лет, согласно которым соединения с антиоксидантной активностью снижают частоту тромбогеморрагических осложнений при разно-оброазных патологических состояниях, протекающих с повышением гемоста-тического потенциала [С.Л. Галян, 1993; В.Л.Полякова, 1994; А,Ш. Бышев-ский и др., 2000; Ю.Ф.Удалов и др., 2000; Н.В Грачева, 2002; А.Ш.Бышевскин и др., 2005; Brox, Nordoy, 1983; Ciavatti е.а.,1984; Kellie.a., 1996; Chaurasia е.а., 1997; Venditti е.а., 1997; Ben-Amotz е.а. 1998]. Это и послужило для нас основанием необходимости проведения совместно с клиницистами наблюдений, результаты которых представлены ниже: наблюдали за состоянием гемостатического потенциала у лиц с отличающимися по патогенезу заболеваниями, общей чертой которых являются изменения свертывающей активности крови и активация перекисного окисления ли-пидов. Выбор наблюдавшихся больных был обусловлен наличием сведений об активации гемостаза и ЛПО при этих заболеваниях.
ЛПО и гемостаз у женщин после родов при введении витаминов А, Е, С и Р, перед родами и после них
На другом этапе эксперимента (через 60 мин после введения тканевого фактора (табл. 17), когда содержание индикаторов ВТФ уже нормализовалось, возвратилось к норме содержание липопероксидов, скорость окисления и период индукции (на графиках отклонений эти этапы не могут быть отражены -здесь рассматривается степень отклонения, а их отклонение равно нулю).
Эти данные, как и выше обсужденные, можно рассматривать как признак того, что активация ВТФ в кровотоке влечет за собой активацию липоперокси-дации. Нет оснований полагать, что активация ЛПО обусловливается взвесью вводимого тканевого фактора - липопротеина со специфической белковой частью - апопротеином III [Д.М.Зубаиров, 1978, 2000; Л.П.Папаян, 2003]. Напротив, препараты тканевого тромбопластина отличаются слабо выраженными антиоксидантными свойствами [С.Н.Ельдецова, 1990].
Близкие результаты мы получили, исследуя те же показатели после введения адреналина, который повышает свертывающую активность крови.
Использовали дозу и путь введения, апробированные ранее в опытах, в которых адреналин использовали в качестве активатора свертывания крови [В.П.Балуда, 1951, 1958; В.П.Бабич, 1973]. зультатов (рис. 19), ускорение свертывания воздействием, которое активирует гемокоагуляцшо преимущественно за счет изменения функции тромбоцитов [Е.А.Алексеева, Голиков, 1989; В.П.Балуда и др., 1995; А.С.Шитикова, 2000; Ardlie, 1982; Blache е.а., 1985; Block е.а., 1985; Jones е.а., 1985; Umemura e.a,, 1988], сопровождается активацией ЛПО, степень которой зависит от интенсивности изменения показателей ВТФ. Зависимости между показателями содержания маркеров ВТФ и интенсивностью ЛПО здесь не линейны, хотя ли-попероксидация ускоряется параллельно активации гемостаза агентом, влияющим на гемо коагуляцию: на обоих этапах опыта: росту уровня индикаторов ВТФ соответствует увеличение показателей, отражающих интенсивность липопероксидации. Выше мы отметили, что в случае, когда угнетение ВТФ в кровотоке осуществляется специфическим воздействием (торможением синтеза активных компонентов плазмокоагуляции с помощью антивитамина К), наблюдается близкая к линейной пропорциональность между степенью угнетения ВТФ и степенью активации ЛПО. В других экспериментальных ситуациях торможение ВТФ на всех этапах наблюдений сопровождается снижением интенсивности ЛПО, однако линейной зависимости не наблюдается. Это ещё раз подтверждает, что взаимосвязь между ВТФ и ЛПО реализуется не только через компоненты гемостаза, но и иными путями. При воздействиях, первично активирующих ВТФ, также интенсифицируются процессы липопероксидации. И в этом случае не выявлено строго пропорциональной зависимости, однако повышенному уровню продуктов, характеризующих ускорение взаимодействия тромбина с фибриногеном, всегда сопутствует рост показателей, отражающих интенсивность липопероксидации и снижение антиоксидантного потенциала в тромбоцитах. Можно заключить, что зависимость между интенсивностью ВТФ и липо-пероксидацией в тромбоцитах является двусторонней, следовательно, активация одной из этих систем может сопровождаться активацией второй исследуе- мой системы. Поэтому возможно взаимоусиление сдвигов по обратной положительной связи, что можно выразить следующим образом: - активация или торможение ВТФ вызывает активацию или торможение ЛПО; активация или торможение ЛПО вызывает активацию или торможение ВТФ; Из этого следует, что воздействуя на один из двух процессов, можно изменять в необходимом направлении второй из них. С позиций, существенных для практической медицины, важно то, что в качестве неспецифических воздействий, снижающих активность внутрисосу-дистого свертывания, могут использоваться антиоксиданты, в частности, витамины. Это было продемонстрировано нами экспериментально и объяснило ранее установленную, но непонятную способность ряда витаминов снижать гемостатический потенциал и повышать толерантность к тромбину [А.Ш.Бы-шевский, В.Н.Кожевников, 1986; Е.А.Винокурова, 1999; Г.Н Алеева и др., 2001; Ciavatti е.а., 1984; Venditti е.а., 1997 КеШ е.а., 1996; Lee е.а., 1999]. Анализ результатов проведенных нами экспериментальных исследований, позволяет также заметить, что во всех наблюдениях ускорению ВТФ сопутствует активация тромбоцитов, а в большинстве наблюдений, кроме того и рост общей свертываемости крови, хотя имели место случаи, когда при активации ВТФ общая свертываемость снижалась. Последний эффект мы объясняем чрезмерным ускорением ВТФ, сопровождающимся усиленным потреблением факторов плазмокоагуляции. Такая трактовка обоснована результатами наших экспериментальных наблюдений в экспериментальных ситуациях, при которых находили снижение уровня фибриногена и количества тромбоцитов в периферической крови при развитии гипокоагулемии, пришедшей на смену гиперкоагуляции. То же находили и в клинике [И.Е.Попова, 1999]. Одновременное снижение концентрации фибриногена и количества тромбоцитов может рассматриваться как указание на ускоренное потребление [З.С.Баркаган, 1978; Г.И.Козинец, В.Л.Макаров (редакторы), 1997; Д.М.Зубаиров, 2000; А.Ш.Бы-шевский и др., 2005]. Изменение активности тромбоцитов при сдвигах ВТФ и ЛПО (падение или рост активности при торможении или ускорении ВТФ и ЛПО соответственно), указывает на роль тромбоцитов в реализации связи между внут-рисосудистым свертыванием и процессами липопероксндацип. Это вызвало необходимость выяснить, можно ли модифицируя активность тромбоцитов воздействием на процесс, обеспечивающий их участие в липопероксндацип (превращения арахидоновой кислоты), изменять интенсивность ВТФ и, следовательно, непрерывного внутрисосудистого свертывания. Изучая влияние ингибиторов торможения арахидоновой кислоты на содержание индикаторов ВТФ мы обнаружили, что ингибиторы фосфолипазы, циклооксигеназы или тромбоксанспнтазы (мепакрин, аспирин и дазоксибеи соответственно) в дозах DI30%, угнетая прокоагулянтную активность тромбоцитов, снижают интенсивность ЛПО. В этом плане наши данные подтверждают и уточняют найденное ранее [А.А.Вакулин, 1998; И.В.Ральчеико, 1998; Р.Г. Ал боров, 2000]. В дополнение к сказанному, мы нашли, что в этих условиях снижается и скорость ВТФ в кровотоке. Сопоставление степени снижения интенсивности ВТФ и степени снижения интенсивности ЛПО при введении ингибиторов превращения арахидоновой кислоты, выявило связь этих изменений.
![Влияние половых стероидов (этинилэстрадиола и левоноргестрела) на взаимодействие тромбин-фибриноген в кровотоке (экспериментальное исследование) [Электронный ресурс]](/i/i/4500/209024.png "Влияние половых стероидов (этинилэстрадиола и левоноргестрела) на взаимодействие тромбин-фибриноген в кровотоке (экспериментальное исследование) [Электронный ресурс] Матейкович Елена Александровна")
