Введение к работе
Актуальность проблемы. Методы ковалентного присоединения люминесцентных красителей к нуклеозидам, нуклеотидам, олиго- и полинуклеотидам в настоящее время довольно хорошо разработаны, поскольку сфера применения таких кокъюгатов обширна. Так, флуоресцентные производные нуклеозид-5'-трифосфатов широко используются для автоматизированного секвенирования ДНК, а флуоресцентные конъюгаты олигонуклеотидов - как ДНК-зонды. Важной задачей является расширение круга красителей для мечения ДНК и разработка методов их сайт-специфического введения в олигонуклеотиды. Особый интерес представляют флуорофоры, которые могут служить источником информации о структурных изменениях в процессе различных взаимодействий нуклеиновых кислот (гибридизации с образованием дуплексов или триплексов, взаимодействия с белками, пептидами и смешанными биополимерами). В настоящей диссертации предложены новые флуоресцентные производные нуклеозидов, пригодные для синтеза меченых олигонуклеотидов.
Цель работы. Диссертация посвящена синтезу и исследованию спектральных свойств 5-арилэтинильных производных 2'-дезоксиуридина, содержащих я-сопряженный с нуклеиновым основанием остаток ароматического красителя, и получению модифицирующих реагентов для твердофазного синтеза флуоресцентных олигонуклеотидных конъюгатов.
Научная новизна и практическая ценность работы. В работе предложены новые тс-сопряженные конъюгаты нуклеозидов и флуоресцентных красителей (пирена, перилена и 2-фенилбензоксазола), содержащие в качестве линкера тройную С-С-связь. Показано, что такой способ присоединения флуорофора к нуклеозиду влияет на спектральные свойства красителя. Флуоресцентные производные нуклеозидов полностью совместимы с условиями олигонуклеотидного синтеза и позволяют вводить краситель в заданные положения олигонуклеотидной цепи.
Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на 12-ом международном симпозиуме "Nucleosides, Nucleotides and Their Biological Applications" (La JoUa, CA, 1996), на научной сессии, посвященной 100-летию со дня рождения Н.А. Преображенского (Москва, 1996), международной конференции "Nucleic Acids and Related Macromolecules: Synthesis, Structure, Function and Applications" (Ulm, Germany, 1997) и Украинской конференции "Химия азотсодержащих гетероциклов" (Харьков, 1997).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 работ, в том числе t обзорная статья.
Структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (обобщены сведения о синтезе, строении и спектральных свойствах
алкинилированных нуклеозидов и их аналогов), обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка цитируемой литературы, включающего 314 работ. Работа изложена на 141 странице, содержит 9 таблиц, 21 схему и 9 рисунков.
