Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Литературный обзор 10
1. Некоторые результаты применения метода ЭПР к исследование биологических: объектов . 110
2. Современное состояние диагностики давности наступления смерти 21
Глава 2. Материалы и методы эксперймшта 26
1. Методика приготовления образцов 26
2. Регистрация спектров ЭПР образцов 30
Глава 3. Посмертные изменения в печшїї, регистри руемые методом эпр 32
1. Состояние эндогенных ШЩ в посмертный период 32
2. Восстановление спиновых зондов в разные сроки давности наступления смерти 58
3. Образование комплексов 2,03 в разные сроки давности наступления смерти 69
Глава 4. Критерии диагностики дашости настушшия смерти методом эпр 73
1. Диагностика давности наступления смерти по состоянию эндогенных ШЩ печени 73
2. Диагностика давности наступления смерти с использованием спиновых зондов 90
3. Диагностика давности наступления смерти по реакции образования комплексов 2,03 93
Заключение 97
Выводы 132
Литература . 113
- Современное состояние диагностики давности наступления смерти
- Регистрация спектров ЭПР образцов
- Восстановление спиновых зондов в разные сроки давности наступления смерти
- Диагностика давности наступления смерти с использованием спиновых зондов
Введение к работе
Актуальность исследования, В последние годы метод электронного парамагнитного резонанса (ЭПР) широко применяется к решению ряда медико-биологических задач. Он довольно успешно используется в следующих исследованиях: изучение состояния метаболических реакций и их молекулярного механизма, изучение молекулярных механизмов патологических изменений и "установление возможности диагностики заболеваний методом ЭПР. Так, за прошедшие годы было установлено, что состояние эндогенных парамагнитных центров (ПМЦ) зависит от физиологического состояния организма (я.И.Ажипа с соавт., 1963, В64), изменяется при лучевой болезни (Н.М.Эмануэль, А.Н.Саприн, 1968), злокачественном росте опухолей (Н.М.Эмануэль с соавт., 1976; и другие). В ряде работ получены данные, по-видимому, имеющие значение для диагностики некоторых заболеваний (Я.И.Ажипа с соавт., 2Э63; 1966; В67; Н.М.Эмануэль с соавт., 1966, 1968, 1976, 3981; &>/»П1мег^а,19Ьг, 1963; и другие).
Несмотря на достигнутые успехи, недостаточно изучено влияние гипоксии и аноксии на состояние эндогенных ПМЦ. Как известно гипоксия и/или аноксия либо являются причиной патологических изменений органов и тканей, либо сопровождают другие патологические изменения на определенном этапе и*.развития. Так, гипоксия сопутствует ожоговой болезни, закономерно возникает при гетеротрансплантации органов и тканей} аноксия наступает при развитии злокачественных опухолей. Однако, в большинстве исследований молекулярных механизмов патологических изменений такое "неспецифическое" влияние гипоксии и/или аноксии на состояние органов и тканей и изменение при этом состояния эндогенных ШЦ
не учитывается. Поэтому исследование состояния эндогенных ЩЦ в условиях посмертной аноксии остается актуальным.
Эти исследования могут найти широкое применение в судебной медицине для решения вопросов диагностики давности наступления смерти. Эта проблема, как одна из важнейших, обсуждалась Высшими органами правосудия и была предложена для решения на коллегии MS СССР в ВЯЗ г. 1-ый Всесоюзный съезд судебных медиков (Киев, 1976), а также Всесоюзная конференция "Внедрение научно-технических средств и научных рекомендаций в практику расследования и судебного разбирательства уголовных дел*1, организованная Прокуратурой СССР, Щ СССР, МВД СССР и МЗ СССР (Москва, 1977), подтвердили актуальность проблемы точной диагностики давности наступления смерти.
По мнению ряда ученых - судебных медиков, успешное решение этой проблемы с точностью, удовлетворяющей требованиям органов правосудия, возможна только при использовании комплекса лабораторных взаимосвязанных биофизических и биохимических методов (Г.М.Ботвзату, 1975; СЛ.Мельников, В.В.Жаров, В78; и другие). Именно на этом пути возможна разработка объективных лабораторных критериев диагностики давности наступления смерти.
Определенное место в этом, разрабатываемом в последние годы в судебной медицине, комплексе может занять метод ЭПР, ранее в судебной медицине не применявшийся. Тем"более, что за послед-шее время его развитие привело к созданию целого ряда новых методических подходов, область применения которых в биологии и медицине полностью не очерчена. Так известно, что спиновые зонды могут быть редокс-индикаторами (А.З.Калмансон с еоавт.,1972; и другие). Однако не установлено в какой мере восстановление спиновых зондов отражает причины изменения окислительно-восстановительного состояния клеток. В ряде работ установлено, что
нитрозильные комплексы слабосвязанного негемового железа (комплексы "2,03") позволяют исследовать молекулярные механизмы обмена железа в организме (А.Ф.Ванин, В795* Однако механизм образования этих комплексов таков, что кинетика их образования, по-видимому, может отражать также изменения в других системах организма, а не только в системе депонирования и переноса железа.
Цель и задачи исследования. Все это и определило направление нашего исследования, целью которого было поставлено выявление связи изменений, развивающихся в печени в условиях посмертной аноксии и ишемии, с состоянием^ эндогенных парамагнитных центров печени, кинетикой восстановления спиновых зондов гомогенатами печени и кинетикой образования в печени ни тр о аильных комплексов славбосвязанного негемового железа; а также обоснование возможности практического применения метода ЭПР в судебной медицине для диагностики давности наступления смерти.
В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:
Изучить методом ЭПР зависимость от срока давности наступления смерти состояние эндогенных ІШД печени животных, кинетики восстановления спиновых зондов гомогенатами печени животных и кинетики образования комплексов "2,03% индуцируемых в печени животных экзогенным JY& и ^^ .
Установить механизм обнаруженных изменений и сопоставить обнаруженные зависимости с последовательностью и интенсивностью развития посмертных процессов в печени.
Провести сравнительный анализ результатов,полученных на животных и при исследовании экспертного материала для разработки объективных критериев диагностики давности наступления смерти методом ЭПР в практике судебно-медицинской экспертизы.
При решении поставленных задач были получены, данные, позволяющие судить о научной новизне и практической значимости.
Научная новизна. Впервые установлено, что состояние эндогенных ШЦ печени, кинетика восстановления спиновых зондов и кинетика образования комплексов п2,ОЗР в печени животных отражают последовательность и интенсивность развития посмертных процессов: аноксии, снижения рН, разрушения субклеточных орга-нелл, аутолиз белковых структур. Полученные данные позволяют уточнить молекулярные механизмы патологических' процессов, сопровождающихся аноксией или гипоксией.
Впервые показано, что кинетика образования комплексов "2,03" может быть индикатором функционального состояния цепей переноса электронов.
Впервые доказана возможность практического применения метода ЭШ? в судебно-медицинских исследованиях.
Практическая значимость. Впервые введенные объективные критерии диагностики давности наступления смерти методом ЭПР позволяют рекомендовать его для внедрения в практику судебно-медицинских исследований и экспертизы.
Структура диссертации. Диссертация состоит из 4-х глав, заключения, выводов и библиографического указателя, изложена на Ю& с. машинописи, содержит 5 таблиц и 25 рисунков.
Первая глава является литературным обзором, в котором приведены некоторые результаты применения метода ЭПР к исследованию состояния метаболических реакций в органах и тканях. Здесь же рассмотрено современное состояние судебно-медицинской диагностики давности наступления смерти. На основе литературных данных делается вывод; об актуальности изучения методом ЭПР посмертных изменений органов и тканей для исследования их реакции на гипоксические условия, и о возможности прак-
тического применения метода ЭПР к проблеме диагностики давности наступления смерти, для решения которой он практически не применялся.
Во второй главе описаны материалы и методы эксперимента. Приведены методики приготовления образцов, моделирования развития посмертных изменений, выбор объекта исследования. Приведены условия регистрации спектров ЗПР, методика измерения параметров сигналов ЭПР и статистической обработки результатов экспериментальных данных.
В третьей главе изложены результаты изучения состояния эндогенных ІШЦ печени крыс при различных сроках давности наступления смерти. При этом установлено возникновение после определенного срока давности наступления смерти сигналов ЭПР от эндогенных нитрозильных комплексов гемового железа, интенсивность которых возрастает в дальнейшем. Выявлена зависимость амплитуд сигналов ЭПР от эндогенных ПМЦ, содержащих ^?^^нег и і^гем от срока давности наступления смерти. Установленное влияние температуры хранения трупов на эти зависимости, влияние на них стабилизаторов мембран субклеточных органелл, а также моделирование некоторых характерных посмертных процессов, позволяет связать выявленные изменения состояния эндогенных ПМЦ с последовательностью и интенсивностью развития посмертных процессов.
В этой же главе рассматриваются результаты изучения реакции восстановления спиновых зондов гмомогенатами печени в различные сроки давности наступления смерти. При этом выявлена зависимость константы скорости реакции восстановления от срока давности наступления смерти. Установленное влияние на эту зависимость температуры хранения трупов животных, стабилизаторов мембран субклеточных органелл и ингибиторов W-rpynn
позволяет выявить механизм реакции восстановления и связать зависимость константы скорости реакции восстановления с последовательностью и интенсивностью посмертных изменений печени.
здесь же изложены результаты изучения кинетики образования нитрозильных комплексов слабосвязанного негемового железа, индуцируемых в печени экзогенным Л& и ^. Установлена зависимость концентрации комплексов п2,03и от срока давности наступления смерти. При этом обнаружена корреляция этой зависимости с зависимостью константы скорости реакции восстановления спиновых зондов. Это позволяет сделать вывод о возможности использования комплексов "2,03й как индикаторов функционального состояния цепей переноса электронов, восстанавливающих Jd~w)A%>.
В четвертой главе обосновывается выбор объективных критериев диагностики давности наступления смерти методом ЭПР. В качестве критериев предлагаются: отношение сигналов ЭПР от эндогенного М?\ ^гем» константа скорости реакции восстановления спиновых зондов, концентрация комплексов "2,03й индуцируемых -4Фъ уЩ,. Приводятся также данные применения этих критериев к экспертному материалу.
В заключении суммируются результаты проведенного исследования, устанавливается научная новизна и практическая значимость полученных результатов, обсуждаются перспективы применения метода ЭПР в судебной медицине, приводятся практические рекомендации по возможному применению метода ЭПР в судебно-медицинской экспертной практике.
Библиографический указатель содержит 131 работу отечественных авторов и 60 работ иностранных авторов.
Современное состояние диагностики давности наступления смерти
Установление давности наступления смерти является одной из важных задач судебной медицины. В экспертной практике от точности и быстроты решения этой задачи часто зависит правильность расследования дел преступлений против личности. На значение и важность диагностики давности наступления смерти в процессе раскрытия преступления указывают как судебные медики (Е.М.Евгеньев-Тиш, 3983; В.М.Смольянинов, 1971; и другие), так и юристы (А.Н.Васильев, 1954; А.П.Егоров, I960). Вследствие этого к методам диагностики давности наступления смерти предъявляются жесткие требования: метод до жен давать в 9 случаях из ю погрешность в определении срока давности наступления смерти не более I часа (Э.Й.Кантер, А.С.Гаркави, 1975). Однако,до сих пор разработка методов диагностики давности наступления смерти, удовлетворяющих данному требованию, находится в стадии поисковых исследований, В экспертной судебно-медицинской практике для установления давности наступления смерти до сих пор используются методы, основанные на визуально-описательной характеристики так называемых трупных явлений; образование трупных пятен, трупном окоченении, трупное охлаждение, высыхание. Визуальное описание этих процессов субъективно и практически все эти методы позволяют судить о сроке давности наступления смерти сугубо ориентировочно только для сроков не больше 3-х - 4-х суток. Так, появление трупных пятен является достоверным признаком смерти. Однако, время возникновения и развития трупных пятен различными учеными указывается противоречиво. Первая стадия трупных пятен длится: от 20145 мин. до 2+-Зч, (Б.Д.Левченко, 3968), от 0,5+ 2 ч. до 12 ч. ( 5 2 / 3966), от 14- 4 ч. до 10 Ч- 32 ч. (В.П.Ципковский, I960), от 2 4? 4 ч. до 6 4- 12 ч. (А.П. Громов, 3970). Время восстановления окраски трупного пятна при дозированном давлении (С.Н.Бакулев, 3949, 1966; Н.Н.Туровец, 1962) че- рез 2-3 мин. после снятия нагрузки соответствует сроку давности смерти: 2 г 4 ч. ( / / 4 В72), Ю ч. (В.П. Суханов, 1968), 12 16 ч. (В.Н.Кононенко, 1968), 6 + 8 ч. (;. Мельников, В.В.Жаров, В78). Поэтому можно считать, что установление срока давности наступления смерти по трупным пятнам может быть только приблизительным, хотя их наличие достоверный признак смерти.
Разноречивые данные приводятся и в отношении трупного окоченения. Г.Корнфельд (1885) считает, что трупное окоченение развивается через 4 22 ч. после смерти, исчезает через 72464 ч. Б.Д.Яевченкое(1968-), А.П.Громов (1970) и некоторые другие ученые отмечают начало трупного окоченения через 2- 4 ч. после смерти. В то время как Эммерт (l90l) указывал, что трупное окоченение начинается в сроки 24 мин. -2 ч. и полностью развивается через 20 ч. По мнению р.Л.Мельникова и Б.Б.Жарова (1978) через б ч. после смерти трупное окоченение еще слабо выражено. А.С.Торосян (І96і) в свою очередь относит начало трупного окоченения к 1,54-2 ч. после смерти, причем по его данным не удается установить каких-либо закономерностей в появлении признаков трупного окоченения. Более перспективным для установления давности наступления смерти по сравнению с вышеописанными трупными явлениями является исследование трупного охлаждения. Наступление смерти, как известно, сопровождается разрушением механизмов теплообразования и теплорегуляции. Это приводит к снижению температуры тела, в конечном счете,до уровня температуры внешней среды, исследование трупного охлаждения сводится к измерению температуры тела трупов или органов, вследствие чего возможно получение объективных данных, поддающихся математической и статистической обработке. Однако и при этих исследованиях не удалось избежать разногласий. Так, по мнению в.М.Смольянинова с соавт. (1963, В75) процесс выравнивания температуры трупа до температуры внешней среды завершается чаще всего к концу первых суток. Другие ученые указывают различные сроки завершения этого процесса: 16 часов (, #,, 1938), 36 часов ( Sc6e& j te &;/te/ / г#тр 4 В53), 70 часов ( /#, 1958). Наиболее перспективными в практическом, отношении являются способы глубокой термометрии, при которых измеряется температура внутренних органов или ректальная температура. При этом удается частично избежать сильных воздействий внешней среды. По исследованиям Н.П.Марченко (1967 ) точность установления давности наступления смерти такими методами в первые 24 30 часов равна 4 5 часов. А.Й.Ольнев (В71,1974? по измерениям температуры печени определял давность наступления смерти с точностью 2 3 часа. Г.А.Ботезату (1975) использовал метод измерения ректальной температуры трупа. Автор применил регрессионный анализ и вывел формулы, позволяющие устанавливать давность наступления смерти по ректальной температуре с точностью, не превышающей 4-5-8 часов. исследование трупных явлений показало, что установление по ним давности наступления смерти не удовлетворяет в достаточной степени требованиям экспертной судебно-медицинской практики по различным причинам: либо они оказываются субъективными, либо дают невысокую точность. В качестве альтернативы предлагались методы, основанные на исследованиях переживаемости органов и тканей трупа. Например, исследование зрачковой реакции или электровозбудимости мышц. Но эти методы по тем же причинам не нашли широкого применения в экспертной практике (Г.Н.Назаров, 1973). Вследствие этого, в современных научных судебно-медицинских исследованиях разрабатываются методы установления давности наступления смерти по динамике посмертных изменений в жидкостях, тканях и органах трупа, определяемых с помощью морфологических, гистологических, гистохимических, биохимических и биофизических методик. Эти исследования, правда, за редким исключением, не прошли пока широкую проверку в экспертной судебно-медицинской практике. Однако уже сейчас можно отметить основное преимущество этих методов: возможность количественной регистрации посмертных изменений, что несомненно будет способствовать более объективной конкретизации сроков давности наступления смерти. И, во-вторых, возможность применения комплексных методов, которые по справедливому замечанию многих авторов представляют наибольшую ценность и дают хороший практический результат (К.И.Хижнякова, 1965, 1968, 1970;-? , Sz4&$tes Г , 1967; В.Ж.Смодьянинов, 1969; Г.И.Бот«зату, 1975; Ю.Я.Мельников, В.В.Іаров, 3978?.
Регистрация спектров ЭПР образцов
Бее спектры ЭПР регистрировали на радиоспектрометре "Рубин" отечественного производства, снабженного вариатором температур "Диапазон". Условия регистрации спектров ЭПР образцов были выбраны следующие. Амплитуда высокочастотной модуляции выбиралась опытным путем, так, чтобы не было искажения формы линии сигнала ЭПР, а амплитуды сигналов были максимальны» При регистрации спектров ЭПР эндогенных ШЦ и комплексов "2,03" амплитуда модуляции всегда была равна 0,4 мТл, а при регистрации спектров ЭПР спиновых зондов 5 мкТл. Спектры ЭПР эндогенных ПИЦ печени и нитрозильных комплексов измерялись при температуре 77 К. Спектры ЭПР спиновых зондов при температуре 20С, поддерживаемой в резонаторе радиоспектрометра вариатором температур "Диапазон". Скорость развертки магнитного поля выбиралась так, что в спектре ЭПР не было искажений формы линий сигналов. Измерялись следующие параметры сигналов ЭПР: -фактор, сУ -амплитуда, d - ширина линии. Определение g-фактора и ширины линии сигналов производили по общепринятой методике - по известной величине -фактора 3-ей и 4-ой компонент СТО сигнала ЭПР от кристаллического J6t2 решетке Л-/ . Раечет этих величин делали с помощью таблиц, составленных В.Г.Кривенко. Погрешность в определении Т фактора не превышала ± 0,005. Амплитуду сигнала ЭПР определяли в сравнении с амплитудой сигнала ЭПР от эталона - 6-ая компонента СТО сигнала от yt/ss2 в решетке s/?, с последующим расчетом на единицу массы образца.
Погрешность в определении амплитуды сигналов ЭПР от образцов, приготовленных из кусочков печени одного и того же животного, не превышала +%, что существенно меньше погрешности, обусловленной различием уровня метаболических реакций. Измеренные значения параметров спектра ЭПР обрабатывались статистически с учетом данных о функциях распределения амплитуд сигналов ЭПР (О.А.Коваленко с соавт., 1972). При статистической обработке общепринятыми методами (П.А.Рокицкий, i960; Д.Хадсон, В74) рассчитывались следующие параметры выборок: математическое ожидание, стандартное отклонение математического ожидания; 9д$ доверительный интервал. Достоверность различия средних определялась вычислением критерия стьюдента - Фишера и сравнением его значения со значением для доверительной вероятности Р 0,05 и Р 0,01. Расчет константы скорости восстановления спиновых зондов по спектрам ЭПР делали методом наименьших квадратов. Погрешность в определении константы скорости реакции восстановления для образцов, приготовленных из гомогенатов печени одного и того же животного, не превышала 0, $, что существенно меньше, чем погрешность, обусловленная различием уровня метаболических реакций разных животных. Объем измерений составил 1350 спектров ЭПР.
Сравнение спектров ЭПР печени крыс от ЭГ-I со спектрами ЭПР печени КГ показало, что состояние эндогенных ПМЦ достоверно изменяется в посмертный период. Эти изменения проявляются, во-первых, в том, что через определенный промежуток времени после смерти амплитуды некоторых сигналов ЭПР изменяются по величине. Во-вторых, в спектрах ЭПР регистрируются сигналы от эндогенных ПМЦ, не регистрируемых в образцах КГ. Сравнение ЭПР спектров ЗГ.-І и ЭГ-2 между собой показало, во-первых, одинаковую последовательность изменений состояния эндогенных ШЦ и, во-вторых, влияние на эти изменения температуры хранения трупов. Последнее проявляется в том, что экстремальные изменения состояния ПМЦ возникают в разные сроки давности наступления смерти для ЭГ-1 и ЭГ-2. Зависимость состояния эндогенных ШЦ печени от срока давности наступления смерти и температуры хранения трупов животных позволяет связать последовательность изменений спектров ЭПР эндогенных ПМЦ с последовательностью и интенсивностью посмертных процессов, развивающихся в печени в условиях посмертной аноксии и ижемии. При этом обнаружено, что состояние эндогенных ПМЦ печени отражает в посмертный период следующую последовательность, а также интенсивность развития посмертных процессов: нарушение транспорта электронов, снижение рН в условиях посмертной аноксии, аутолиз белковых структур, разрушение субклеточных орга-нелл.
Восстановление спиновых зондов в разные сроки давности наступления смерти
Изучение спектров ЭПР спиновых зондов, инкубируемых с гомогенатами печени крыс экспериментальных групп и контрольной группы, показало, что во все исследованные сроки давности наступления смерти все использованные спиновые зонды восстанавливаются. Для всех изученных ЭГ реакция восстановления является реакцией первого порядка по радикалам. Это позволило для характеристики её кинетики использовать только одну величину -константу скорости реакции восстановления, определяемую по зависимости амплитуд спектров ЭПР спиновых зондов от времени их инкубации с гомогенатами печени. Определение константы скорости реакции восстановления спиновых зондов выявило ее зависимость от срока наступления смерти»типа спинового зонда.и влияние на эти зависимости температуры хранения трупов. Последнее проявляется в том, что экстремальные значения константы скорости для ЭГ-1 наблюдаются в другие сроки давности наступления смерти, чем для ЭГ-2, а характер зависимости константы скорости от продолжительности посмертного периода не меняется.
Выявленная зависимость константы скорости реакции восстановления от давности наступления смерти и температуры хранения трупов, а также предприятое исследование возможных восстановителей спиновых зондов,позволило связать последовательность изменений константы скорости с последовательностью и интенсивностью посмертных процессов, развивающихся в условиях посмертной шоксии - распад митохондрий и накопление восстановленной формы глутатиона. Перейдем теперь к подробному изложению изменений константы скорости реакции вхстановления и выявления связи этих изменений с последовательностью и интенсивностью развития посмертных процессов.
Изучение сигналов ЭПР спиновых зондов, инкубируемых с гомогенатами печени в различные сроки давности наступления смерти, показало, что ширина и форма линий всех трех компонент СГС сигнала ЭПР, а также расстояние между центрами этих компонент не меняется. Обнаружено только изменение амплитуд компонент сигнала ЭПР. Постоянство параметров спектров ЭПР спиновых зондов за исключением амплитуд компонент СГС, а также тождественность изменения амплитуд каждой компоненты при увеличении времени инкубации спиновых зондов (рис.ю), позволяет считать, что в условиях наших опытов происходит только реакция восстановления спиновых зондов. Одна и та же зависимость от времени инкубации амплитуд каждой компоненты СТО, позволяет также считать, что амплитуда центральной компоненты СТС в условиях эксперимента пропорциональна концентрации не восстановленных спиновых зондов.
Линейная зависимость логарифма амплитуд компонент СТС от времени инкубации спиновых зондов с гомогенатами печени крыс (рис.ю) показывает, что в условиях наших экспериментов реакция восстановления спиновых зондов является реакцией первого порядка по радикалам. Это согласуется с данными других ученых о том, что при концентрациях спиновых зондов, не превышающих 10" % реакция их восстановления является реакцией первого порядка (Ю.Е.Кавцов, А.Э.Кашансон, 1977). Вследствие этого, реакцию восстановления спиновык зондов гомогенатами печени в условиях наших экспериментов можно характеризовать только константой скорости реакции К., определяемой из зависимости от времени инкубации амплитуды центральной компоненты СТС сигнала ЭПР спиновых зондов. Ее значение будет пропорционально концентрации молекул, восстанавливающих спиновые зонды. Изменение их концентрации или изменение условий доступности к ним спиновых зондов в условиях посмертного торможения транспорта электронов и водорода будет приводить к зависимости константы скорости реакции восстановления от срока давности наступления смерти.
Определение константы скорости реакции восстановления спиновых зондов гомогенатами печени крыс ЭГ показало, что её значение зависит от срока давности наступления смерти, типа использованного спинового зонда и температуры хранения трупов животных (рис.II, 12, табл.2). Эта зависимость имеет симбатный характер как для разных спиновых зондов, так и для ЭГ-I и ЭГ-2. Это позволяет считать, что процессы, ответственные за восстановление спиновых зондов, одинаковы для всех типов использованных спиновых зондов, а изменение значения температуры хранения трупов не меняет этой последовательности процессов, а меняет только их интенсивность.
Характер зависимости константы скорости реакции восстановления спиновых зондов от срока давности наступления смерти следующий. В начальный период после смерти (-1ч. для ЭГ-I и — 2 ч. для ЭГ-2? константа скорости остается практически постоянной, затем наблюдается резкое значительное увеличение к сроку давности наступления смерти 2 ч. для ЭГ-I и 4 ч. для ЭГ-2, После этого значение константы скорости также резко уменьшает-" ся, достигая минимума к 4 ч. и 12 ч.,для ЭГ-I и ЭГ-2 соответственно. В дальнейшем значение константы скорости медленно увеличивается.
Диагностика давности наступления смерти с использованием спиновых зондов
Из результатов изучения методом ЭПР реакции восстановления спиновых зондов гомегенатами печени крыс ЭГ следует, что кинетика реакции восстановления, характеризуемая константой скорости, отражает последовательность и интенсивность развития посмертных процессов в печени (глава Ш, 2). При исследовании реакции восстановления гомогенатами печени "мышей КГ и ЭГ было обнаружено, что константа скорости реакции восстановления СЗ-І и в этом случае по своей зависимости от срока давности наступления смерти симбатна её зависимости для печени при ЭГ (рис.22, табл.4). Это отражает тот факт, что процессы, приводящие к наблюдаемым изменениям константы скорости реакции восстановления спиновых зондов идентичны для различных видов животных. Все это позволяет использовать константу скорости реакции восстановления спиновых зондов гомогенатами печени, определяемую по спектрам ЭПР спиновых зондов, как количественный критерий судебно-медицинской диагностики давности наступления смерти. Вычисление константы скорости реакции восстановления СЗ-І образцами экспертного материала показало, что существует определенная тенденция в её зависимости от срока давности наступления смерти - возрастание с увеличением срока (рис,23, табл.4).
Отметим, что на образцах экспертного материала не получено резких изменений константы скорости. Это может отражать тот факт, что распад митохондрий, с которым мы связываем резкое возрастание значений константы скорости (см.глава 3, 2), происходит раньше - до момента начала судебно-медицинской экспертизы. Значительная вариабельность константы скорости реакции восстановления СЗ-І в образцах экспертного материала с близким значением срока давности наступления смерти может быть обусловлена влиянием алкоголя на восстановление C3-I. Таким образом, результаты сравнительного изучения реакции восстановления спиновых зондов гомогенатами печени животных и экспертного материала доказывают, что константа скорости реакции восстановления спиновых зондов может быть количественным критерием диагностики давности наступления смерти методом ЭПР. Поскольку концентрация нитрозильных комплексов слабосвязанного негемового железа,предуцируемых в печени крыс ЭГ, как было установлено нами (глава Ш, 3), отражает процесс распада мембранных структур, мы исследовали, в целях поиска количественного критерия давности наступления смерти, образование этих комплексов в печени ЭГ мышей и образцах экспертного материала. Определение концентрации комплексов 2,03 показало (рис.24,табл.5) что её зависимость от срока давности наступления смерти для печени шшей ЭГ симбатна её зависимости для печени крыс ЗГ, отличаясь только сроком начала резкого возрастания, что скорее всего отражает факт более быстрого посмертного распада мембранных структур в печени мышей, чем в печени крыс. Поскольку процесс распада мембранных структур в экспертном материале происходит позже (через 4 ч после смерти по данным (Е.Ф.Лушников, Н.М. Шапиро, 1974), то можно ожидать такой же зависимости и для концентрации комплексов 2,03, индуцируемых в экспертном материале.
Однако при изучении кинетики образования комплексов 2,03 в образцах экспертного материала было обнаружено практическое постоянство их концентрации (рис.25, табл.5). Такая зависимость концентрации комплексов 2,03 отражает тот факт, что распад, мембранных структур произошел раньше - до мо-мента начала судебно-медицинской экспертизы, что коррелирует со значениями константы скорости реакции восстановления С 3-І в образцах экспертного материала. Полученная на экспертном материале зависимость концентрации комплексов 2,03 не позволяет ввести количественного критерия, аналогичного критериям, описанным выше (глава 4, 1,2) Однако определение концентрации комплексов 2,08, индуцированных J/0, в сравнении с ее значением при индукции JYO f позволяет ввести качественный критерий, указывающий, что срок давности наступления смерти превышает б ч. Так как в опыте обнаружено различие концентраций комплексов 2,03 для этих способов их индукции (рис.25), а по данным исследований на животных (рис.14, рис.24) при малых сроках давности наступления смерти эти концентрации совпадают. їаким образом, определение значения концентрации комплексов 2,03, индуцируемых в печени JSO и .4, могут служить качественным критерием различия малых сроков давности наступления смерти от больших сроков.
