Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 10
1.1. Особенности действия холодового фактора на структуру печени 10
1.2. Жизненный цикл Opisthorchis felineus 14
1.3. Патогенез развития паразитарного процесса. Клиническая картина при описторхозе 16
1.4. Гистоструктурные изменения в печени при описторхознои инвазии 24
1.5. Гистоструктурные изменения в печени при суперинвазионном описторхозе 27
Глава 2. Материалы и методы исследования 31
Глава 3. Макроскопическая характеристика печени при действии холодового фактора на фоне описторхоза 38
3.1. Влияние холодового фактора на структуру печени 38
3.2. Описторхозная инвазия 40
3.3 Суперинвазионный описторхоз 43
3.4 Холодовой фактор и описторхозная инвазия 45
3.5 Холодовой фактор и суперинвазионный описторхоз 48
Глава 4. Гистологическая характеристика печени при действии холодового фактора на фоне описторхоза 52
4.1. Тканевые и клеточные реакции печени при действии холодового фактора 52
4.2. Описторхозная инвазия 65
4.3 Суперинвазионный описторхоз 75
4.4 Холодовой фактор и описторхозная инвазия 85
4.5 Холодовой фактор и суперинвазионный описторхоз 95
Глава 5. Динамика ультраструктурных изменений в гепатоцитах при действии холодового фактора на фоне описторхознои инвазии и суперинвазионного описторхоза 106
Обсуждение 115
Выводы 133
Практические рекомендации 135
Список литературы 136
- Патогенез развития паразитарного процесса. Клиническая картина при описторхозе
- Гистоструктурные изменения в печени при суперинвазионном описторхозе
- Холодовой фактор и суперинвазионный описторхоз
- Тканевые и клеточные реакции печени при действии холодового фактора
Введение к работе
Актуальность проблемы. Холодовой фактор является одним из определяющих экологических факторов Ханты-Мансийского автономного округа. Проблема влияния низких температур на организм человека и животных в последние десятилетия приобрела особую актуальность [97, 194, 209]. Установлено, что низкие температуры, воздействуя на организм, вызывают в нём изменения, касающиеся почти всех систем, органов и тканей.
Взгляды авторов на данную проблему весьма противоречивы. Так, более подробно рассмотрено влияние гипотермии на органы с биохимических и физиологических позиций [12, 120, 200], нежели с позиций изменения морфологической структуры органов.
Действие холодового фактора на структуру печени интактных животных изучено в ряде исследований [24, 168, 178, 183, 199, 202, 204, 208, 209, 224, 225]. Однако мнения авторов на некоторые аспекты действия холода на печень остаются противоречивыми. Это касается количества двуядерных и гипертрофированных форм гепатоцитов, количества погибших гепатоцитов. Необходимо отметить отсутствие в доступной литературе сведений о клеточных инфильтратах и реакции со стороны клеток синусоидных капилляров печени при действии холодового фактора.
Проблема описторхоза в настоящее время является достаточно актуальной и занимает приоритетное место в медицине. Всего в мире описторхи-сами поражено не менее 20 млн. человек [26, 39, 59]. Обь-Иртышский бассейн, занимающий значительную часть Западной Сибири, в силу гидрологических и климатогеографических особенностей, создающих оптимальные условия для обитания промежуточных хозяев сибирской двуустки, является крупнейшим очагом описторхоза на территории России. Это определяет высокую пораженность населения описторхозной инвазией, достигающую в некоторых районах Тюменской области, по результатам эпидемиологических исследований, 80-90% [7, 140, 167]. По расчетам, основанным на массовых
5 обследованиях населения, число инвазированных лиц на территории России превышает 2 млн. человек [71, 75, 112, 167]. Наибольшее число больных и самые высокие показатели, превышающие среднефедеральный уровень, зарегистрированы в основных очагах описторхоза - Западной Сибири [19, 59, 75, ПО, 111, 131, 140, 166]. Эти данные свидетельствуют о гиперэндемичности по описторхозу северных территорий Сибири [29]. Нетрудоспособный период по поводу заболеваний органов пищеварения у инвазированных лиц длится в 12,6 раза дольше, чем у лиц с такой же патологией без описторхоза [111, 129].
Отмечается практически 100% заражение данным гельминтозом представителей коренных народов Севера. Как отмечает Гузеева Т. М. [37], высокая эндемичность заболевания обусловлена сочетанием благоприятных для описторхоза природных и социальных факторов: функционирование многочисленных биотопов промежуточного хозяина паразита, недостаточная степень благоустройства населенных мест [38], расположенных по берегам малых рек, развитое любительское рыболовство, укоренившаяся этническая особенность населения употреблять в пищу малосоленую и сырую рыбу. Значимость данного паразитоза, характеризующегося многочисленными осложнениями, определяется тем, что длительное течение, быстрое по темпам и массивности вовлечения в процесс новых контингентов населения существенно снижают активность и потенциал жизни людей гиперэндемичных очагов [27,43,78].
Обращает на себя внимание, что у аборигенов Обского Севера клинически выраженная форма описторхоза практически отсутствует, что является их этнической особенностью [9, 62, 155], тогда как у лиц, впервые приехавших в неблагополучные по описторхозу районы из областей, свободных от него, при инвазировании развивается клинически ярко выраженная картина описторхоза [113, 123]. У коренного населения Ханты-Мансийского автономного округа и длительно проживающего в очаге пришлого чаще встречается суперинвазионный описторхоз, что связано с постоянной суперинвазией в результате употребления необезвреженной рыбы семейства карповых [43,78]. Имеются указания, что в организме человека и животных описторхи-сы могут жить до 10-25 лет [122]. В работах многих исследователей на уровне световой и электронной микроскопии рассмотрены морфологические изменения, возникающие в печени при описторхозной инвазии [36, 43, 50, 56, 60, 69, 78, 134, 135].
В то же время, в современных исследованиях остаются неизученными структурные изменения в печени при совместном влиянии на организм холодового фактора и описторхозной инвазии.
Таким образом, особый интерес и актуальность представляет изучение сочетанного влияния холодового фактора и описторхозной инвазии на организм, а, в частности, на изменения, возникающие в структуре печени. Анализ реакций, происходящих в печени под действием холодового фактора на фоне описторхозной инвазии, проведенный с использованием макро-, микроскопических, гистохимических, ультраструктурных и морфометрических методов исследования имеет теоретическую и практическую значимость.
Цель исследования
Выявить структурные изменения печени при действии холодового фактора на фоне описторхоза.
Задачи исследования:
Определить влияние холодового фактора на структурные преобразования в печени.
Выявить анатомические изменения печени и протоковых структур органа при действии холодового фактора на фоне описторхоза.
Установить макро- и микроскопические изменения печени при действии холода на фоне описторхозной инвазии и суперинвазионного описторхоза.
Научная новизна. Установлено, что при воздействии холодового фактора на организм структурные изменения в печени характеризуются определенной этапностью. Выявлено, что холодовое воздействие приводит к дис-
7 трофическим изменениям в гепатоцитах, максимальное количество погибших гепатоцитов определяется на 3-й и 30-е сутки эксперимента. Впервые показано, что выраженные структурные преобразования в печени при соче-танном воздействии на животных холодового фактора и описторхозной инвазии приводят к анатомическим изменениям долей печени и протоковых структур органа.
Установлено, что воздействие холодового фактора на фоне описторхозной инвазии и суперинвазионного описторхоза вызывает практически на всех сроках более значительные деструктивные изменения в паренхиме печени, чем только при описторхозной инвазии без холодового воздействия.
Определено, что при действии холодового фактора количество клеток синусоидных капилляров увеличивается с 3-х до 90-х суток, при действии холодового фактора на фоне описторхозной инвазии их увеличение наблюдается к 30-м суткам. При действии холодового фактора на фоне суперинвазионного описторхоза первое увеличение количества клеток синусоидных капилляров отмечается на 15-е сутки, повторное - на 60-е сутки эксперимента.
Установлено, что в составе клеточных инфильтратов при действии холодового фактора на всех сроках преобладают малые лимфоциты, при комбинированном влиянии холодового фактора и различных форм описторхоза на 60-90-е сутки в составе инфильтратов преобладают плазматические клетки.
Показано, что действие холодового фактора на организм приводит к вакуолизации цитоплазмы гепатоцитов и клеток Купфера, нарушению дву-контурности мембран митохондрий, при сочетании влияний холодового фактора и описторхозной инвазии наблюдается не только хорошее развитие гранулярной эндоплазматической сети, гипертрофия митохондрий, но и деструктивные изменения в гепатоцитах, а действие холодового фактора на фоне суперинвазионного описторхоза приводит преимущественно к деструктивно-некротическим изменениям в гепатоцитах.
Теоретическое и практическое значение работы. Установление характера макроскопических изменений, закономерностей развития воспалительных, деструктивных и репаративных процессов в паренхиме печени, оценка состояния микроциркуляторного и сосудистого русла печени и оценка реакции клеток синусоидных капилляров являются новыми знаниями, расширяющими представление о действии холодового фактора на фоне описторхозной инвазии. "
Определение ультраструктурных изменений в гепатоцитах при действии холодового фактора и различных форм описторхоза с выявлением дистрофических, деструктивных и воспалительных процессов позволяет говорить о закономерностях, протекающих на клеточном и субклеточном уровнях.
Основные положения, выносимые на защиту:
При действии холодового фактора в печени происходят выраженные изменения на макро- и микроскопическом уровне, характеризующиеся определенной этапностью.
Комплекс морфологических перестроек в печени под действием холодового фактора определяет возможность восстановительных процессов в органе в экстремальных условиях.
Выраженность структурных преобразований в печени нарастает при влиянии на организм холодового фактора на фоне описторхозной инвазии и суперинвазионного описторхоза, по сравнению с описторхозной инвазией и суперинвазионным описторхозом без действия холодового фактора.
Ультраструктурные изменения гепатоцитов, выявляемые при действии холодового фактора, при действии холодового фактора на фоне описторхозной инвазии и суперинвазионного описторхоза характеризуются преобладанием деструктивных и деструктивно-некротических изменений.
Внедрение результатов работы. Результаты исследования внедрены в учебный процесс и научно-исследовательскую работу кафедры морфологии Сургутского государственного университета на курсе биологии и экологии; кафедре биологии с курсом микробиологии Ханты-Мансийской государственной медицинской академии на курсе биологии; кафедре гистологии Ханты-Мансийской государственной медицинской академии на курсе гистологии; кафедрах гистологии и патологической анатомии Тюменской государственной медицинской академии на курсах гистологии и патологической анатомии.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на конференции молодых учёных «Наука и инновации XXI века» (Сургут, 2006, 2007, 2008); в рамках научной сессии «Экологические риски здоровью населения на Крайнем Севере» (Надым, 2007); конференции молодых учёных и аспирантов (Ханты-Мансийск, 2008, 2009); 7-й Всероссийской университетской научно-практической конференции молодых ученых по медицине (Тула, 2008).
Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 16 статей, из которых 3 статьи опубликованы в журналах, рекомендованных перечнем ВАК.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 161 странице машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы материал и методы исследования, трёх глав собственных исследований, отдельными главами представлено обсуждение полученных результатов, выводы и список литературы. Диссертация содержит 16 таблиц и 43 рисунка. Список литературы включает в себя 233 источника, из них 193 отечественных и 40 иностранных авторов.
Патогенез развития паразитарного процесса. Клиническая картина при описторхозе
Влияние паразита на печень хозяина многообразно [14, 18, 116]. Паразит оказывает механическое воздействие, проявляющееся повреждением стенки желчных протоков и протоков поджелудочной железы присосками. Молодые гельминты могут повреждать также шипиками, находящимися на поверхности их тела. При передвижении паразиты захватывают и повреждают своими присосками эпителий протоков, что приводит к образованию множественных кровоточащих язв. В патогенезе поражений билиарной системы важную роль играют травматический и механический факторы. Как указывали Е.С. Белозеров и Е.П. Шувалова [20], особенно значительное травматическое повреждение стенок желчных и панкреатических выводных протоков происходит в ранней фазе болезни, когда молодые особи ранят ткани шипиками, расположенными на их кутикуле.
Наиболее подробно изучено механическое воздействие описторхисов в выводных протоках гепатопанкреатической системы. Мигрируя по выводным протокам, двуустка втягивает и отрывает кусочки эпителия протоков, оставляя на этом месте кровоточащие эрозии. Ответная регенераторная реакция эпителия проявляется аденоматозным разрастанием слизистой оболочки, в связи с чем, заполняется просвет желчных протоков и затрудняется отток желчи. Последнему способствует образование в просвете конгломератов из тел паразитов, скоплений клеток слущенного эпителия, слизи, продуктов жизнедеятельности гельминта [20, 175]. Повреждение эпителиальной выстилки такого рода не проходит бесследно и приводит к выраженной регенеративной гиперпластической реакции эпителия. Доказано, что описторхозная инвазия является сильным промотором, и приводит к развитию холангиоцеллюлярного рака печени [30, 104, 119, 125, 131, 149, 186, 195, 198, 205, 218, 219, 223, 231]. Железистая пролиферация эпителия желчных и панкреатических протоков способствует развитию рака поджелудочной железы, большого дуоденального сосочка и печени [58, 104, 196, 212, 229].
Также установлено, что описторхозная инвазия сопровождается значительным увеличением числа клеток с цитогенетическими нарушениями. Микст и моноинвазии описторхов и меторхов сопровождаются возрастанием числа клеток со структурными аберрациями хромосом, гипер- и полиплоидией в периферической крови. Наиболее высокий уровень цитогенетических нарушений отмечается в случае микст-инвазии, при этом, как отмечают авторы, разрывы хромосом локализуются преимущественно вблизи известных протоонкогенов и ломких участков хромосом 2,3,6,8 и 12 [5, 59, 60, 61].
Описторхис может находиться в ассоциации с вирусом простого герпеса [58]. При этом, как отмечают авторы, описторхозная инвазия повышает чувствительность клеток организма к вирусу герпеса второго типа, способствует формированию хронических очагов инфекции в печени. Также при совместном воздействии вирусов и описторхисов развивается более интенсивная пролиферация эпителия желчных ходов.
Питаются гельминты клеточным детритом и эпителиальными секретами. Трематоды вначале вызывают десквамацию эпителия желчных протоков, далее формируется гиперплазия, а иногда аденоматозные изменения. Появляются кистозные расширения мелких протоков; эти расширения окружены пролиферирующей фиброзной тканью. Гельминты проникают в мелкие желчные протоки, вызывая их закупорку, а в последующем вторичный хо-лангит. Изучены особенности эхографической картины печени и билиарной зоны при описторхозе [74]. В патогенезе заболевания важное значение имеет вторичное инфицирование билиарной системы. Гельминты проникают в печень, как через желчные протоки, так и гематогенным путем. Нарушение оттока желчи у больных описторхозом в результате дискинезии желчного пузыря и желчных протоков и их механической закупорки гельминтами, слизью и слущенным эпителием создают благоприятные условия для развития вторичного инфицирования. На присутствие паразитов организм хозяина отвечает различными типами реакций. Эти реакции можно разделить на клеточные, тканевые и гуморальные. Гуморальные реакции в ранней фазе опи-сторхоза развиваются из-за токсического воздействия описторхисов.
Клеточные реакции являются наиболее распространённым ответом на внедрение паразитов. Примером клеточной реакции на паразиты является гипертрофия одной или нескольких прилежащих клеток хозяина. Тканевая реакция заключается в образовании вокруг паразита соединительно-тканной капсулы, которая более или менее изолирует паразита от окружающих тканей [134].
В основе морфологических изменений печени при описторхозной инвазии, по мнению большинства авторов [9, 20, 56, 57, 107, 121, 192], лежит аллергический механизм. Аллергический компонент воспаления в ранней фазе болезни подтверждается при экспериментальных исследованиях на животных [56, 57, 78, 133]. В пользу аллергической природы описторхоза свидетельствуют клинические проявления болезни: температурная реакция, крапивница, отёк типа Квинке, летучие инфильтраты в легких, гиперлейкоцитоз эозинофильного характера. Органная патология при описторхозе, как это было установлено в исследованиях Н.Н. Озерецковской [107, 108, 109], связана с внедрением гельминта и выделением им субстанций, подобных гемагглю-тининам человека a, b, Р, N. Последние в крови определенной групповой принадлежности больного обусловливают гемагглютинацию и гемолиз, цир-куляторные расстройства, повышенную проницаемость стенки сосудов, дез 19 организацию соединительной ткани. Подобный механизм лежит в основе поражений слизистых оболочек органов пищеварения, выделительной системы и др. Поэтому миграция и локализация гельминта лишь частично влияет на характер клинических проявлений ранней фазы болезни. Всё-таки, в основном, клиническая картина определяется стереотипной реакцией организма на антигенное раздражение гельминта [20].
Аллергическая перестройка организма возникает в результате сенсибилизации его продуктами обмена веществ и распада описторхисов, а также ау-тосенсибилизации продуктами распада собственных тканей (клеток эпителия, выстилающего желчные протоки, подвергающихся некрозу при травма-тизации их описторхисами) [57, 192]. Аллергия представляет собой один из видов иммунологической реактивности [9, 49, 85]. Выраженность, или сила аллергической реакции зависит от наследственных, конституционных свойств, пола, возраста, биологического вида хозяина, воздействия многообразных факторов внутренней и окружающей среды, при гельминтозах — от вида и популяции возбудителя, степени облигатности паразита для данного хозяина и других факторов. Она резко возрастает в случаях повторного заражения тем же видом гельминта или при заражении другим видом, имеющим с первым общие антигенные компоненты [9, 78].
Гистоструктурные изменения в печени при суперинвазионном описторхозе
Структурные изменения в структуре печени у экспериментальных животных при суперинвазионном описторхозе ранее изучались рядом авторов [43,68,69,78, 117].
Как отмечали В.Г. Бычков с соавт. [69], А.Г. Гиновкер [32] в ходе развития суперинвазионного процесса равновесие системы паразит-хозяин постепенно сдвигается вследствие необратимых структурных изменений. В большинстве биоптатов у больных с суперинвазией выявляется морфологическая картина, характерная для хронического активного гепатита [86]. В этих случаях дистрофия гепатоцитов сопровождается развитием мелких очагов некробиоза и некроза клеток, обнаруживается мононуклеарная инфильтрация междольковой и внутридольковой ткани. Также отмечаются признаки склероза — перигепатоцеллюлярного, междолькового, септального, очагового и портального [43, 114].
При суперинвазии дополнительное поступление описторхозных антигенов в сенсибилизированный организм, по-видимому, вновь приводит к развитию антигенного гепатита. Показатели обострения воспалительного процесса снижаются после патогенетической терапии [191].
В результате длительного течения гельминтоза формируются предпосылки интер-, интра-, экстраканаликулярной обтурации желчных путей, скопления в них половозрелых описторхисов, образование внутрипротоковых гранулём и перидуктальный фиброз. Гистоструктурные изменения затрагивают и желчные пути: отмечается формирование подкапсульных и внутриор-ганных холангиоэктазов, расширение и деформация их просвета, истончение стенок.
Г.Г. Крылов, С.А. Соколов [77] отмечали, что характерной особенностью изменений печени лиц при сочетании вирусного гепатита и суперинвазионного описторхоза является выраженный фиброз: перидуктулярный, но-дулярный и перицеллюлярный, а также феномен «капилляризации» синусои 28 дов и склероз стенок центральных венул. Такие факторы, как фиброз, «ка-пилляризация» синусоидов и перицеллюлярный склероз существенно затрудняют трофику паренхиматозной ткани и усиливают цитолитический эффект вируса. Таким образом, сочетание суперинвазионного описторхоза и вирусного гепатита приводит к более тяжёлым деструктивным процессам в печени, нежели только при суперинвазионном описторхозе.
Автором [78] выявлены значительные изменения макроскопической характеристики органа. Так, на 30-е сутки суперинвазионного описторхоза поверхность печени бугристая за счёт узлов-регенератов, подкапсульные желчные протоки склерозированы. Из просвета протоков выделяются опи-сторхисы и чёрные крошащиеся массы. К 60-м суткам суперинвазии печень бугристая с лёгким мускатным рисунком с расширенными извитыми подкап-сульными желчными протоками. На 90-е сутки суперинвазионного описторхоза практически всю толщу печени составляют узлы-регенераты и интраму-ральные кисты. На разрезе отмечается неоднородность окрашивания паренхимы печени от красно-коричневого до зелёно-жёлтого цвета.
При микроскопическом исследовании в ранние сроки после повторного поступления заразного начала наблюдается обострение воспалительных, деструктивных, пролиферативных реакций, акцент которых в ранний период суперинвазий приходится на холангиоцеллюлярный дифферон [43,78]. В толще перидуктальных и междольковых инфильтратов происходит образование псевдожелезистых структур пролиферирующими элементами.
Митотическая активность эпителия желчных протоков повышается. В перидуктальном воспалительном инфильтрате отмечается тенденция нарастания числа эозинофильных гранулоцитов. Высокий удельный вес в клеточном составе инфильтрата занимают плазмоциты, лимфоциты, фибробласты, уменьшается количество гистиоцитов. Происходит усиление деструктивных процессов в дуктулярном эпителии [78].
Одной из характерных черт мезенхимальных реакций при многочисленных суперинвазиях является увеличение числа макрофагальных гранулем, находящихся на разных стадиях развития. Существенным отличием проли-феративной активности холангиоцитов при суперинвазиях от аналогичного процесса при инвазиях является большая протяженность во времени, т.е. пролиферация клеток холангиоцеллюлярного дифферона при суперинвазионном описторхозе является перманентной. Авторы [43, 78] рассматривают суперинвазионный описторхоз как форму гельминтоза потенциально наиболее способную к реализации канцерогенеза.
На 7-е сутки суперинвазии обостряются воспалительные, деструктивные и пролиферативные реакции с большим повреждением холангиоцитов [43, 78]. Отмечается усиление митотической активности в холангиоцитах. В перидуктальных инфильтратах наблюдается высокое содержание эозинофи-лов, плазматических клеток и лимфоцитов. К 15-м суткам суперинвазии происходит дальнейшее повышение митотического индекса холангиоцитов по сравнению с предыдущим сроком, регистрируются аденоматозные разрастания эпителия желчных протоков, в перидуктальных инфильтратах снижается содержание эозинофилов и лимфоцитов и повышается удельный вес плазматических клеток, гистиоцитов и фибробластов. На этом же сроке отмечается увеличение количества паразитарных гранулём.
Как отмечал автор [78], на 30-е сутки суперинвазионного описторхоза выявляется начало яйцепродукции суперинвазионными описторхисами, происходит резкое расширение дуктул, организация внутрипротоковых гранулём. В крупных желчных протоках наблюдается аденоматоз и папиллоскле-роз. В перидуктальных инфильтратах на данном сроке происходит усиление пролиферации вновь образованных дуктул, повышение доли плазмоцитов и плазмобластов, а представительство эозинофилов заметно снижается. К 60-м суткам суперинвазии степень воспалительных реакций ослабляется и усиливаются склеротические процессы. В перидуктальных клеточных инфильтратах увеличивается доля гистиоцитов и фибробластов. На 90-е сутки гельминтоза в воспалительных клеточных инфильтратах в основном повышается содержание эпителиальных клеток, содержание же остальных клеток в составе инфильтратов заметно снижается. Также отмечалось повышение числа синусоидальных клеток печени. Динамика изменения двуядерных клеток печени при суперинвазионном описторхозе следующая: максимальный подъём отмечается на 3-7 сутки с постепенным снижением их количества к концу эксперимента.
Кроме того, Бычков В.Г. с соавт. [106] установили, что суперинвазионный описторхоз у сирийских хомяков вызывает выраженную пролифератив-ную активность овальных клеток печени, являющихся мультипотентными предшественниками стволовых клеток. Пролиферирующие овальные клетки локализовались вокруг терминальных желчных протоков, вен, в строме, на территории триад и перисинусоидально. Дифференцировка овальных клеток осуществляется главным образом в холангиоциты, формирующие желчные протоковые структуры и поликистозные образования.
Холодовой фактор и суперинвазионный описторхоз
Эксперимент 30 суток инвазии. Печень неравномерной окраски. Поверхность органа несколько бугристая. Резко утолщены (до 0,5см) и склеро-зированы общий желчный проток, долевые печёночные и пузырный протоки. В протоках определяются паразиты. Расширенные подкапсульные протоки (по 2-3) подходят к каждой доле печени. В двух случаях отмечается гипертрофия 1-й доли и раздвоение 2-й доли печени. Желчный пузырь бело-жёлтого цвета, значительно увеличен. В нём определяются чёрные массы (паразиты). Масса печени составляет в среднем: 4,73±1,36 г; масса хомяков 80,80±12,82 г. Желчный пузырь: длинник 0,51±0,08 см, ширина 0,32±0,04 см.
Эксперимент 60 суток инвазии. Поверхность печени неоднородная, мелкозернистая, бугристая. Наблюдается утолщение стенок желчных протоков: общего желчного, пузырного и долевых печёночных протоков. Общий желчный проток значительно расширен (до 0,55-0,6 см), холангиоэктазы расширены до 0,3-0,4 см. Отмечается наличие холангиоэктазов в количестве 2-3 (к каждой доле). В 1-й доле печени обнаружено 4-5 холангиоэктазов. Масса печени составляет в среднем: 4,66±0,78 г; масса хомяков 64,43±13,67 г. Желчный пузырь - длинник 0,38±0,04 см, ширина 0,25±0,05 см.
Эксперимент 90 суток инвазии. Поверхность печени бугристая. Отмечается наличие спаечных процессов с желудком. Общий желчный проток утолщен до 0,45-0,55 см. С диафрагмальной поверхности 2-й доли отмечаются резко расширенные подкапсульные холангиоэктазы. Расширенные холангиоэктазы составляли до 0,4 см в диаметре. В 1-й доле определялось 3-4 холангиоэктаза, во 2-й доле — до 5-6 холангиоэктазов. В 1-й доле печени холангиоэктазы занимают до 70% её поверхности, во 2-й - до 40-50%. В 3-й и 2-й долях, на хвостатой доле печени имелись крупные узлы-регенераты. В одном случае во 2-й доле определялся узел-регенерат, занимающий 40-50% её поверхности (рис. 5).
Нередко отмечается гипертрофия 4-й доли печени. Описторхисы обнаруживаются в желчных протоках и желчном пузыре. В одном случае из желчного пузыря выделено 12 жизнеспособных описторхисов. В 1-й и 2-й долях определяются узлы-регенераты, занимающие 50-80% её поверхности. Масса печени составляет в среднем: 4,77± 0,59 г; масса хомяков 76,95±11,03 г. Желчный пузырь: длинник 0,4±0,12 см, ширина 0,3±0,07 см.
Таким образом, при охлаждении происходит уменьшение относительной массы печени на 35% в динамике эксперимента (с 3-х до 90-х суток), усиление сосудистого рисунка печени, определяются кровоизлияния на поверхности органа. С увеличением воздействия холодового фактора усиливается кровенаполнение печени.
С увеличением сроков инвазии при суперинвазионном описторхозе увеличивается масса печени. При суперинвазионном описторхозе к 60-90-м суткам относительная масса печени выше, чем при описторхозной инвазии в аналогичные периоды. При описторхозе с увеличением сроков инвазии долевые печёночные, пузырный и общий желчный протоки становятся всё более деформированными, утолщенными, извитыми, отмечается их подпаян-ность к долям, гипертрофия отдельных долей печени.
К 60-90 суткам поверхность печени становится крупнобугристой за счет преобладания склеротических процессов в структуре органа.
При описторхозе на поздних сроках наблюдения (60-90-е сутки) по мере развития склеротических изменений происходит выраженная деформация протоковых структур, значительное утолщение стенок желчных протоков (долевых печёночных, пузырного и общего желчного протоков). На поверхности органа при сроке инвазии 60-90-е сутки отмечаются узлы-регенераты.
Наиболее грубые изменения в макроскопической картине печени с увеличением сроков инвазии выявляются при описторхозной инвазии и суперинвазионном описторхозе и действии холодового фактора: поверхность органа становится бугристой, отмечается наличие кровоизлияний и усиление сосудистого рисунка печени, наблюдается выраженное утолщение стенок желчных протоков (до 0,55-0,6 см), расширение множественных холангио-эктазов (до 0,5 см), определяется наличие перигептальных спаек, узлы-регенераты составляют от 50 до 80% поверхности 1-й и 2-й долей печени. Все вышеописанные изменения в конечном итоге приводят к нарушению топографоанатомического взаимоотношения долей печени и протоковых структур органа.
Эксперимент 3-й сутки. При микроскопическом исследовании определяются явления зернистой дистрофии. Цитоплазма гепатоцитов вакуолизи-рована, в отдельных клетках отмечается пикноз ядер. Отмечается наличие очагов некроза гепатоцитов и нечёткость их границ. Выявляется полнокровие всех сосудов печени. Эти явления сопровождаются диапедезными кровоизлияниями. Регистрируется очаговое полнокровие синусоидов.
В сосудах преобладают явления вазодилатации. Констатирован феномен «сладжа», агрегация эритроцитов с формированием «монетных столбиков», расширение пространств Диссе и синусоидов. Митозы в эпителии желчных протоков составляют 1,83±0,9%о. Количество погибших гепатоцитов составляет 102±7,62%о на 1000 печеночных клеток (табл. 2).
Митотическая активность гепатоцитов составляет 0,73±0,63 %о. Апопто-тический индекс гепатоцитов составляет 1,53±0,93%о. Количество двуядер-ных гепатоцитов было 43,8±3,81%о, гипертрофированных гепатоцитов -37,13±2,52%о. Содержание клеток синусоидных капилляров регистрируется на уровне 165,1±8,04%о.
Клеточные инфильтраты занимают 1,03±0,6% площади среза. Протоки на срезе составляют 0,43±0,05% площади. Стромально-паренхиматозные отношения смещены в сторону преобладания паренхимы печени (строма органа 9,03±2,23%). Основным клеточным типом в структуре клеточных инфильтратов являются малые лимфоциты - 64,07±8,99%
Тканевые и клеточные реакции печени при действии холодового фактора
При микроскопии печени кровеносные сосуды полнокровны. По ходу синусоидов печеночных долек и в околососудистой зоне триад обнаруживаются мелкие узелковые скопления звёздчатых макрофагов (клеток Купфера). Отмечается пролиферация эндотелия меж-дольковых вен, вокруг которых формировались скопления из лимфоцитов и клеток Купфера. Перипортальная ткань отёчна и инфильтрирована гистиоцитами и малыми лимфоцитами. В гепатоцитах снижено количество гликогена. В цитоплазме отдельных гепатоцитов отмечается накопление зёрен, что свидетельствует о развитии зернистой дистрофии слабой степени.
Количество некротизированных гепатоцитов составляет 113,9±7,22%о, апоптотический индекс гепатоцитов 0,8±0,55%о. Митотическая активность гепатоцитов составила 0,8±0,48%о. Митотический индекс эпителия желчных протоков составляет 0,6±0,49%о. Содержание клеток синусоидных капилляров составляет 159±6,1%о на 1000 гепатоцитов. Желчные протоки занимают 2,46±0,81% площади среза, клеточные инфильтраты 2,6±0,62%. Количество стромы на данном сроке составляет 16,5±3,8%.Содержание двуядерных гепатоцитов находится на уровне 87,67±4,43%о, гипертрофированных гепатоцитов - 60,3±2,23%о на 1000 печёночных клеток. В составе инфильтратов преобладающими клеточными элементами являются малые лимфоциты — 53,87±9,25%, эозинофилы составляли - 11,57±2,66%, фибробласты 1,36±2,02%, гистиоциты — 4,16±2,76%, плазматические клетки — 5,76±1,61%, большие лимфоциты - 1,73±0,78%,нейтрофилы - 0,16±0,74%, клетки Куп-фера - 7,93±2Д%, фиброциты - 2,2±2,18%, макрофаги - 9,8±3,45%, эпителиальные клетки— 1,46±1,06%.
Эксперимент инвазии 7 суток. Отмечается повышенное кровенаполнение органа. Эндотелий пролиферирует в просвет сосудов. В крупных артериях наблюдается очаговое разволокнение как наружной, так и внутренней эластических мембран. В стенках артерий мелкого и среднего калибра определяется набухание, округление, пролиферация эндотелиальных клеток и плазматическое пропитывание стенки. Выявляется повышенная проницаемость стенок сосудов, полнокровие капилляров. Просветы желчных протоков умеренно расширены, в них залегают неполовозрелые описторхисы.
Аллергическая альтерация сопровождается набуханием холангиоцитов, повышением проницаемости мембран. Наблюдается прерывистость эпителия желчных протоков в некоторых участках (эрозивные участки). В некоторых участках эпителий многорядный. При этом происходит формирование эпителиальных подушечек и сосочковых выростов соединительной ткани. В эпителии протоков возрастает количество бокаловидных клеток. Митотический индекс холангиоцитов составляет 1±0,58%о, степень расширения протоков -1,6±0,77%, степень выраженности инфильтратов 2,7±0,83% площади среза.
В клетках печени констатированы явления зернистой и умеренной гид-ропической дистрофии по периферии долек. Количество погибших гепатоци-тов повышается до 135±6,64 %о на 1000 клеток, что выше, чем на предыдущем сроке инвазии. Митотический индекс гепатоцитов находится практически на том же уровне 0,86±0,57%о. Повышается содержание клеток синусо-идных капилляров до 175,4±7,99%о. Клетки Купфера набухшие, овальной формы, ядра их гиперхромны. В гепатоцитах уменьшается количество гликогена. Апоптотический индекс гепатоцитов составляет 0,9±0,71%о.
Воспалительные инфильтраты формируются в паренхиме печени, около крупных и мелких желчных протоков, паравазально и в портальных триадах. В составе инфильтратов среди клеточных элементов преобладают ней-трофилы 40,5±6,82% и большие лимфоциты 21,83±8,24%. Отмечается некоторое снижение площади стромы, по сравнению с предыдущим сроком эксперимента, до 12,03±2,83%. Количество двуядерных гепатоцитов так же несколько ниже, чем на предыдущем сроке (80,67±4,35%о), количество гипертрофированных гепатоцитов - 57,83±1,78 %о.
Эксперимент инвазии 15 суток. В одних случаях в артериях прогрессируют деструктивные изменения, которые выражаются в нарастании некроза эндотелиоцитов и выраженности плазматического пропитывания стенок сосудов. Отмечаются более выраженные, по сравнению с предыдущим сроком, деструктивные изменения эластических мембран сосудов. В других случаях в стенках артерий эндотелиальные клетки пролиферируют, интима и медия утолщаются, просвет сосудов суживается. В соединительной ткани происходит дальнейшее нарастание отёка. Стенки протоков ещё более утолщаются, одновременно с этим, просвет их расширяется, в них обнаруживаются половозрелые гельминты. На срезе желчные протоки занимают 3,96±1,12% площади (табл. 6).
Нередко в протоках наблюдаются бухтообразные углубления эпителия, иногда довольно выраженные. Митотический индекс холангиоцитов достигает максимальных цифр 5,3±1,46%о для данной группы животных. Перидук-тальные инфильтраты и инфильтраты в паренхиме увеличиваются в объёме и занимают 7,13±1,57% площади среза.
Существенно меняется качественный состав инфильтратов: в их составе преобладают эозинофилы 45,63±6,08% и малые лимфоциты 29,2±2,80%. Происходит дальнейшее нарастание площади стромы (до 20,8±4,42%). В ге-патоцитах прогрессируют дистрофические и некротические процессы. Количество погибших гепатоцитов доходит до 146,1±6,68%о.
Отмечается застойное полнокровие синусоидных капилляров. Регистрируются явления воспаления в стенках вен и формирование тромбов в их просвете. Содержание клеток синусоидных капилляров повышается до 248,6±8,70%о. Отмечается увеличение количества двуядерных гепатоцитов 94,9±4,25%о и количество гипертрофированных гепатоцитов до 72,6±2,54%о. Митотический индекс гепатоцитов увеличивается до 1,43±0,72%о, апоптоти-ческий индекс гепатоцитов до 1,7±0,91%о. Уменьшается содержание гликогена в гепатоцитах.
