Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 8
1.1. Понятие о наночастицах и наномаїериалах 8
1.2. Нанотехнологии в медицине 11
1.3. Золото и нанотехнологии. Биомедицинское применение золотых наночасгиц 15
1.4. Токсичность папомаїериалов 22
Глава 2. Материалы и методы исследования 29
Глава 3. Морфологические изменения в органах лабораторных животных при длительном пероралыюм введении золотых наночастиц 38
3.1. Морфологические изменения в желудочно-кишечном тракте 38
3.3. Морфологические изменения в сердце 82
3.4. Морфологические изменения в легких 82
3.5. Морфологические изменения в селезенке 100
3.6. Морфологические изменения в почках 109
3.7. Морфологические изменения в головном МОЗІС 1 16
Заключение 1 18
Выводы 130
Практические рекомендации 131
Список литературы
- Нанотехнологии в медицине
- Золото и нанотехнологии. Биомедицинское применение золотых наночасгиц
- Морфологические изменения в сердце
- Морфологические изменения в почках
Введение к работе
Актуальность исследования
В последнее время все больше исследований в области нанотехнологий направлены на решение задач практической медицины. Предполагается, что в ближайшем будущем использование наноматериалов приведет к революционным достижениям в лечении многих заболеваний. Уже сегодня коллоидное золото применяют в качестве носителя для доставки лекарственных веществ, генетического материала, антигенов и как собственно лекарственное или диагностическое средство при терапии опухолей или ревматоидного артрита (Khlebtsov N.G., Dykman L.A., 2011).
Однако практически одновременно с началом медицинских применений наноматериалов возникли острые вопросы по поводу их возможного токсического воздействия на клетки и ткани живых организмов. Несмотря на то, что наноматериалы в мире уже используются более 10 лет, ни один вид наночастиц не был изучен в полном объеме на безопасность ни в одной из стран мира (Онищенко Г.Г., 2007). Анализ современных данных показывает, что, с одной стороны, на базе научных разработок появляются новые «прорывные» технологии и материалы, с другой стороны, активное развитие нанотехнологий может привести к появлению нового класса соединений, оказывающих токсическое влияние на организм человека и животных.
Учитывая, что в перспективе ожидается тесный контакт человека и других биологических объектов с наноматериалами, изучение вопросов потенциальных рисков их использования представляется первостепенной задачей (Онищенко Г.Г., 2007). Именно поэтому в специальной литературе последних 4-5 лет особое внимание уделяется вопросам биораспределения и токсичности наноматериалов. В частности, безопасное применение золотых наночастиц (ЗНЧ) невозможно без решения вопросов их потенциальной токсичности с учетом размеров, длительности и способов введения. Особое значение в этом аспекте имеет определение характера и выраженности повреждающего влияния ЗНЧ на организм лабораторных животных с обязательным морфологическим исследованием внутренних органов. Это обусловлено тем, что оценка морфологического состояния органов, в первую очередь ответственных за метаболизм и экскрецию, непосредственно после окончания введения исследуемого вещества позволяет визуально оценить патологические изменения в структуре органа и охарактеризовать их количественно (Хабриев Р.У., 2005). Кроме того, изучение морфологического строения внутренних органов через определенный период времени после окончания введения вещества с исследованием тех же показателей дает возможность судить об обратимости выявленной патологии.
До настоящего времени анализ морфологических изменений и их обратимости во внутренних органах лабораторных животных, возникающих в ответ на увеличение длительности перорального введения ЗНЧ разного размера, не проводился. Перечисленные и нерешенные задачи, связанные с оценкой воздействия размерных эффектов ЗНЧ на организм лабораторных животных, определили актуальность и целесообразность выполнения настоящего исследования.
Цель исследования
Оценить выраженность и обратимость морфологических изменений в органах лабораторных животных при длительном пероральном введении золотых наночастиц разного размера.
Задачи исследования
-
Изучить влияние размера перорально вводимых золотых наночастиц на морфологическое строение органов лабораторных животных.
-
Провести сравнительный анализ морфологических изменений в органах лабораторных животных при различных сроках введения ЗНЧ размером 1-3, 15 и 50 нм и выявить органы-мишени, характерные для поражения золотыми наночастицами определенного размера.
-
Изучить обратимость морфологических изменений в органах лабораторных животных после окончания перорального введения золотых наночастиц разного размера.
-
Сопоставить скорость восстановления морфологических изменений в органах с длительностью перорального введения золотых наночастиц разных размеров.
Научная новизна
Впервые в экспериментах in vivo исследованы особенности влияния длительного перорального введения ЗНЧ разного размера на организм лабораторных животных. Описаны морфологические изменения во внутренних органах, возникающие в результате перорального введения ЗНЧ размерами 1-3, 15 и 50 нм в течение 8, 16 и 30 дней. Проведен сравнительный анализ морфологических изменений во внутренних органах при различных сроках введения ЗНЧ и установлены органы-мишени, характерные для поражения ЗНЧ определенного размера. Установлена зависимость обратимости патологических процессов во внутренних органах от длительности перорального введения ЗНЧ различных размеров. Предложен методологический подход к оценке морфологических изменений в органах лабораторных животных, основанный на количественной оценке дистрофических, некробиотических и репаративных процессов в ответ на введение золотых наночастиц различного размера.
Практическая значимость
Результаты выполненного исследования дополняют современные представления о характере и динамике развития морфологических изменений во внутренних органах лабораторных животных в ответ на введение ЗНЧ. Данные, полученные при изучении влияния длительности введения ЗНЧ различных размеров на морфологическое строение внутренних органов, могут быть использованы в работе лабораторий научно-исследовательских институтов и учебных заведений, а также при разработке стандартов безопасного применения коллоидного золота в практической медицине.
Разработанный методологический подход к оценке альтеративно-пролиферативных процессов, развивающихся во внутренних органах в ответ на введение ЗНЧ, основанный на количественных показателях, позволяет выявить степень их токсического воздействия и обратимости развивающихся патологических процессов.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Длительное пероральное введение золотых наночастиц размерами 1-3, 15 и 50 нм вызывает морфологические изменения в органах лабораторных животных, характер и выраженность которых обусловлены размером золотых наночастиц и длительностью их введения.
-
Патологические процессы, развивающиеся в органах, носят обратимый характер.
-
Предложенный методологический подход, основанный на определении количественных показателей повреждения и пролиферации, позволяет оценить степень токсичности ЗНЧ и обратимость развивающихся патологических процессов в органах.
Внедрение результатов работы в практику
Полученные научные данные используются в учебном процессе на кафедрах патологической анатомии, гистологии, цитологии и эмбриологии ГБОУ ВПО «Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского» Минздрава России, в научно-исследовательской работе НОЦ «Фундаментальной медицины и нанотехнологий» НИИ фундаментальной и клинической уронефрологии ГБОУ ВПО «Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского» Минздрава России.
Апробация работы
Основные материалы диссертационного исследования доложены и обсуждены на III Международном форуме по нанотехнологиям (Москва, 2010); III эмбриологическом симпозиуме Всероссийского научно-медицинского общества анатомов, гистологов, эмбриологов «ЮГРА-ЭМБРИО-2011» (Ханты-Мансийск, 2011); международных конференциях Saratov Fall Meeting – 2011 (Saratov, 2011); European Network of Excellence for Biophotonics – 2011 (Saratov, 2011); Saratov Local Cluster Meeting 2011 (Saratov, 2011); Saratov Fall Meeting 2012-Annual School for Young Scientists and Students of Optics, Laser Physics and Biophotonics (Saratov, 2012); заседании Саратовского областного общества патологоанатомов (Саратов, 2013).
Публикации по теме диссертации
По теме диссертации опубликовано 13 печатных работ, из них 5 в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 158 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов работы, главы собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 20 таблицами и 47 рисунками. Библиография содержит 176 источников (36 отечественных и 140 зарубежных).
Нанотехнологии в медицине
На сеіодпяшний день наномедицина занимасі одно из лидирующих мест в обласіи наноіехнологий. Согласно мнению большинства экспертов методы наномедицины в ближайшем будущем стану і основополагающими (Hleb Е. и соаві., 2008). І ак, например. Американский Национальный институт здоровья включил наиомедиципу в пяіерку самых приоритетных областей развития медицины в XXI веке. Методы наномедицины все активнее применяются в конкретных медицинских специальностях, обеспечивая решения проблем лечения сердечно-сосудисшх, эндокринных, онкологических заболеваний, а также заболеваний нервной, пищеварительной, дьіхаїсльной сисіем и оиорно-двигаїельного аппарата (Шляхто Е.В., 2009; Fukumori Y и соаві. 2006). Уже сейчас нанотехнологии в медицине активно применяются как плаїформьі для создания сисіем доставки активных лекаре і венных веществ, разработки новых методов и средств лечения, диагностики in vivo и in vitro, а так же синтеза медицинских имплантагов.
Установлено, что пракіически 95% применяемых сегодня в терапевіических целях лекарств обладают плохой фармакокинетикой и биофармацевтическими свойствами (Brayden DJ, 2003) Кроме того, большая часів используемых в пасіоящес время в іерапсвгической практике препараюв оказывает токсическое влияние на организм. Именно поэтому одним из важных направлений наномедицины являеіся разработка эффективных систем направленной доставки вешеств с минимальными нежелаїельньїми побочными свойствами на здоровые окружающие ткани. С помощью напоісхітолоіий появилась возможносіь контролировать высвобождение некоторых лекарств и обеспечить их длительное действие.
Диагностика с применением нанотехнологий или нанодиагностика при использовании определенных типов ианочасгиц дает возможность прижизненно обнаружить отдельные патологические сосюяния клеток и даже молекул, являющихся маркерами заболеваний. Благодаря развитию нанодиагностики появилась возможность существенно повысить чувствительность и специфичность методов определения биохимических и молекулярных маркеров заболеваний. В перспективе с помощью нанотехнологий будет возможно одновременно проводить диагностику и терапию заболеваний (Lapotko D. и соавт., 2007; Larson Т.А. и соавт., 2007).
Особый интерес для наномедицины представляют дендримеры (Семчиков Ю.Д., 1998). Такие уникальные свойства дендримеров, как высокая степень всівления, июбулярпая форма и легкость функционализации поверхности, делают тій соединения перспективными носителями лекарственных препаратов (Cheng Y. et al., 2008). Дендримеры способны транспортировать и гидрофобные и гидрофильные молекулы, а сам процесс высвобождения лекарственных вещесів являемся контролируемым. Особенно перспективными дендримеры являюіся для применения в качестве носителей химиогерапевіических препараюв (Kojima С. et al., 2000), ДНК (Fu H.L. et al., 2007) и контрастных агентов для магнитно-резонансной томографии (Kobayashi П. et al., 2003). По данным Y. Cheng и соавторов (2008) иесгероидпые противовоспалительные средства, противомикробные и противовирусные аіенгьт могу і транспортироваться путем связывания с дендримерами. единственной известной в настоящее время лекарственной формой созданной на основе полилизипового дендримера (трехмерная разветвленная монодисперсная макромолекула), обладающей противовирусными свойствами, является ват инальный гель, который блокирует передачу вируса иммунодефицита человека и вируса герпеса (Bawarski W.E. ctal., 2008). Углеродные папочасіицьі (фуллсрены) синіезируются на основе углерода размером 100 им и менее. К л ой группе наночасгиц относятся углеродные ючки, наноалмазы, однослойные и мноюслойные наногрубки. Растворимые в воде производные фуллерена С60 применяются в терапевтической практике, в частности, в качестве противовирусного (Schinazi R.K et al., 1993) и ангибакіериальною аіенюв (Bosi S. et al., 2000). Проведенные исследования показали зффекіивносіь фуллеренов для фотодинамической іерапии онкологических заболеваний (Mroz P. et al., 2007). По мнению ряда исследователей аптиоксидантные и антиапоптотические свойсіва фуллеренов могу і применяіься в терапии бокового амиогрофичсского склероза и болезни Паркипсона (Dugan L.L. et al., 2000). Полимерные мицеллы в медицинских целях в первую очередь представляют интерес как переносчики гидрофобных лекарственных препаратов (Шляхю Е.В., 2009). І Іапримср, они могуі применяться при парентеральном введении іаких лекарсівенньїх средств, как амфоіерицин В, пропофол и паклиіаксел (Kwon G.S., 2003). В лиіерагуре описаны бифункциональные полимерные мицеллы, которые предназначены для одновременной досіавки лекарсівенньїх препараюв и визуализации поврежденных іканей (1-ahmy I .М. et al., 2007).
Квантовые ючки (полупроводниковые нанокрисіалльї) обладают небольшими размерами, которые сопоставимы с размерами молекул белков и нуклеиновых кислот. Уже сегодня квантовые точки активно используются для детекции опухолевых клетк (Wu W. et al., 2003), маркирования внутриклеточных оріанелл (Hanaki К. et а! , 2003), визуализации микрососудов (Lim Y.T. et al., 2003) и многих других биомедицинских исследованиях.
Нанопористые материалы (мембраны с напопорами) могут быть использованы в качестве коніейнеров (например, в микрокапсулах) для доставки лекарсівенньїх среде і в, применяться для фильтрации жидкостей организма от токсичных веществ и вирусов (Шляхто ЕВ., 2009).
Золото и нанотехнологии. Биомедицинское применение золотых наночасгиц
После стандартной гистологической проводки в спиртах возрастающей концентрации материал заливали в парафин. Серийные срезы толщиной 5-7 мкм готовили на роторном микроіомс и окрашивали гематоксилином и эозином (для обзорных исследований морфологических изменений). При морфологическом исследовании с использованием полуколичесІ венных показателей, применяли следующие критерии выраженности признака: «-» -признак огсуїствуеі (0%); «+» - слабо выраженный признак ( 30%); «++» -умеренно выраженный признак (30%-60%); «+++» - сильно выраженный признак ( 60%). Для дифференциальной диагносіики гемосидерипа и конгломераюв ЗЫЧ проводилась реакция Перлса.
При морфомеїрическом анализе і исюлогических препаратов опытных и контрольных групп оценивали частоту встречаемости различных морфологических изменений, их выраженность и распространенность. Морфометрическое исследование выполняли в 10 полях зрения с использованием специальной морфомстрической сетки (Лвтандилов Г.Г., 1972, 1992) системы анализа цифровых изображений Микровизора медицинского p-Vizo-101 ЛОМО.
Иммуногистохимичсское исследование Иммуногисюхимическос исследование (ИГХ) препаратов печени с целью изучения пролифераіивпой акіивносіи при длиіельном пероралытом введении ЗЫЧ разных размеров проводили с использованием кроличьих поликлональных антител (Anti-Ki67, Abeam, United Kingdom).
Ki-67 являемся ошимальным и более специфическим пролиферагивпым маркером для широкого использования в патологоанагомической практике (Богданова Т.И. и соавт., 2000; Пожарисский К. М., Леенман С. L. и соавт., 2000; Упоров А.В. и соавт. 2000). Антиген Ki-67, впервые описанный Gerdcs и соав. в 1983 г., состоит из 2 полипешидных цепей с молекулярной массой 345 и 395 кДа. Ki-67 являеіся ядерным белком, коюрый экспрессируется во всех фазах митотического цикла (Gl, S, G2 В М-фазах), кроме фазы покоя (GO) (Ross J.S., 1996; Oijen M. el al. 1998). Во время интерфазы антиген определяется исключительно в ядре, в го время как в стадию митоза большее количество белка перемещается на поверхность хромосом. Для иммуної исюхимическою исследования (ИГХ) парафиновые срезы толщиной 4-5 мкм помещали на поли-Ь-лизиновые сіелка и высушивали при температуре 37С в течение су і ок. Иммуногисюхимическое исследование проводили в 4 тіапа. I этап. Дснарафинировапис и реї идраіация. II этап. Демаскировка ашигепов Прспараіьі обрабаїьівали 5 мин в 3% перекиси водорода, заіем оімьівали в PBS-буфсре 5 мин. Демаскировку клеточных ашигепов, осущссівляли пуіем наїревания с целью усиления иммуногистохимической реакции на срезах, фиксированных в формалине. Препараты погружали в буфер-конценграт (Target retrieval solution, рН=9, Dako) и помещали в микроволновую печь. Устанавливали мощность и время обработки — дважды 560 В і по 5 мин с интервалами между циклами 1-2 мин. Далее нагревали при мощности 280 Вт в течение 20 мин. После окончания обрабоїки препарат ос і ы вал и при комнатой іемперагуре не менее 15-20 мин. Стекла ополаскивали в двух порциях дисіиллированной воды, затем 5 мин в буфере (Tns buffered saline, Dako). III этап Проведение иммуногистохимической реакции. Удалив избыток буфера, наносили первичные апіиіела (Anti-Ki67, Abeam), разведенные 1 100 в Antibody diluent и инкубировали при комнатной температуре в іечение I часа. Промывали 3 раза в буфере (Tris buffered saline, Dako). Наносили на срезы Mouse Specifying Reagent и инкубировали при комнатной температуре в течение 10 мин Промывали 2 раза в буфере (Tris buffered saline, Dako) Наносили на срезы Goat anti-rabbit HRP и инкубировали при комнатной температуре в течение 15 мин. Промывали 4 раза в буфере (Tris buffered saline, Dako). Наносили раствор DAB (20ц1 DAB Plus Chromogen и 1ml DAB Plus Substrate) на 5 мин. Промывали 4 раза в буфере (Tris buffered saline, Dako). Срезы докрашивали гематоксилином Майера в течение 1 мин. Промывали в дистиллированной воде. IV этап. Просветление и заключение срезов. Обезвоживали в спиртах, просветляли в ксилоле и заключали в канадский бальзам. Результаты реакций оценивали по системе подсчета Histochemical score. Система подсчета включает в себя интенсивность иммуногистохимической окраски по 3-бальной шкале и долю (%) окрашенных клеток, и представляет собой сумму произведений процентов, отражающих долю клеток с различной интенсивностью окраски на балл, соответствующий интенсивности реакции. Интенсивность окраски: 0-нет окрашивания; 1-слабое окрашивание; 2-умеренное окрашивание; 3-сильное (рис. 4). Формула подсчета следующая: Histochemical score = Р(і) х і где, і - интенсивность окрашивания, выраженная в баллах от 0-3 Р(і) - процент клеток, окрашенных с различной степенью интенсивности.
Морфологические изменения в сердце
С увеличением длиісльности введения ЗНЧ 1-3 нм скорость восстановительных процессов замедляется. Минимальное количество не измененных гепатоцитов (364,7± 14,3, Р 0,001), максимальное количество гепатоцитов в состоянии дистрофии и некроза (59±8,9, Р 0,001) и, как следствие, наименьшее значение КПП (6,1±0,5, Р 0,001) выявлено в группе животных 30-дневного введения ЗНЧ 1-3 нм. Следует отметить, что среди групп животных с введением ЗНЧ размером 1-3 нм наименьшее отклонение от показателей контрольной группы обнаружено при исследовании через 14 день после окончания 8-днсвпого введения: количество гепатоцитов в состоянии дистрофии и некроза составило 41 ±3,9 Р 0,05, число не измененных гепатоцитов -383,9±11,7, Р 0,001, КНП - 9,3±0,7, Р 0,001.
Прекращение введения ЗНЧ повлияло на активность моноцитарно-макрофагальной системы печени. При исследовании обратимости выявленных изменений во всех группах животных с введением ЗНЧ 1-3 нм отмечалось увеличение общею числа НПЭ печени, лимфоцитов и клеток Купфера и Ито. Количесіво лимфоциюв во всех группах увеличивалось более чем в 2 раза по сравнению с і руппой кон і роля. Однако зависимости между увеличением длительное і и введения ЗНЧ 1-3 нм и количеством лимфоцитов нами не обнаружено. Количесіво Клеток Купфера и Ито увеличивалось постоянно с увеличением срока введения ЗНЧ и к 30 дню превышало кон і рольные значения более чем в Зраза.
Наличие зависимости между количеством двуядерных гепатоцитов и длительное 1ЫО введения ЗНЧ 1-3 им нами не обнаружено. Однако, следует оіметиіь, чю во всех опьпных і руинах отмечаеіся значиїельное увеличение количесіва двуядерных геїіаіоциюв по сравнению с конірольной группой, что свидетельствует о высокой активности репаративных процессов Таким обраюм, результаты морфологического исследования печени показали, что череі 14 дней после окончания пероралыюго введения ЗНЧ размером 1-3 нм развившиеся ишспения уменьшаются во всех группах, при этом интенсивность восстановления структуры зависит от длительности введения ЗНЧ Следует отмстить тот факт, чю полного восстановления показателей до исходных значений в указанные сроки не наблюдалось ни в одной из групп животных с введением ЗНЧ данного рашера При введении ЗНЧ размером 15 им в течение 8, 16 и 30 дней выраженность и обратимость морфологических изменений в печени так же определялась длительное і ыо эксперимента При 8-дневном введении ЗНЧ отмечалась незначительная дистрофия гепатоцитов При увеличении сроков эксперимента до 16 и 30 дней дистрофические изменения гепатоцитов приобретали более выраженный харакіер Полнокровие центральных вен и синусоидных капилляров во всех опьпных группах носило умеренный характер, феномен сепарации крови отсутствовал.
Резулыаты морфометрическою исследования, проведенного в группах животных с 8, 16 и 30-днсвною введения ЗНЧ 15 нм подтверждают наличие зависимости морфолої ических изменении от длительности эксперимента Увеличение длительное і и введения ЗНЧ приводило к повышению количества іепатоцитов с признаками дисірофии и некроза, снижению числа не измененных гепаюциюв и уменьшению КНП Наибольшее количесіво гепатоцитов в состоянии дисірофии и некроза (148,8±10,5, Р 0,001) нами обнаружено в группе 30-дневного введения ЗНЧ 15 нм В этой же группе животных отмечалось максимальное снижение числа не измененных гепаюцигов(122±33,13, Р 0,001) и КНП (0,82±0 43 Р П,ПП!) Подсчет НПЭ печени показал, чіо с увеличением длительности введения ЗНЧ размером 15 нм происходит общего числа НПЭ. Количество лимфоцитов в группе 8-дневного введения ЗНЧ 15 нм увеличивается более чем в 2 раза (до 38,3±9,12) по сравнению с контролем; к 16 дню их количество уменьшается, хотя и превышает контрольные показатели. К 30 дню количество лимфоцитов опять начинает нарастать и достигает 36,3±11,8. Количество клеток Купфера и Ито увеличивалось постоянно с увеличением срока введения ЗНЧ и к 30 дню увеличилось практически в 3 раза. Количество двуядерных гепатоцитов при сравнении между группами статистически значимо не изменялось, по было незначительно выше по сравнению с контрольной группой. Анализ обратимости морфологических изменений в печени после прекращения введения ЗНЧ размером 15 нм с учетом его длительности показал, что восстановление структуры органа зависит от длительности эксперимент. Так, во всех группах введения ЗНЧ 15 нм дистрофические изменения в гепатоцитах носили пезначиїельньїй характер, в то время как полнокровие сосудов при 8 и 16-дневном введении во всех случаях было умеренным, а при 30-дневном введении в 70% наблюдений носило умеренный характер, в 30% - выраженный.
По данным морфомеїрического анализа количество не измененных гепатоцитов через 14 дней после окончания введения ЗНЧ 15 нм ни в одной из исследуемых групп не достигло контрольных значений. Однако количесіво гепатоциіов в сосюянии дисірофии через 14 дней после 8-дневного введения ЗНЧ снизилось до коні рольных значений (36,6±9,21, при контроле - 37,2±4,08, Р 0,05). В то время как при 16 и 30-дневном введении ЗНЧ 15 им данный показатель сосіавил 44.3±6.4 и 51,8±5,6
Морфологические изменения в почках
Таким образом, анализ полученных данных показал, что нарушения морфологического строения селезенки при введении ЗНЧ разных размеров носят однотипный характер, при этом наиболее выраженные изменения вызывают ЗНЧ размером 50 нм. Следует так же отметить, что в группах животных с введением ЗНЧ размерами 1-3 и 15 нм, наиболее выраженные изменения нами обнаружены при 16-дневном введении, и при этом же сроке введения ЗНЧ обратимость развивающихся процессов в селезенке наименее выражена.
Максимальное восстановление структуры органа наблюдалось после окончания введения ЗНЧ размерами 1-3 и 15 нм в течение 8 дней.
При гистологическом исследовании почек во всех группах животных, получавших ЗНЧ разного размера в течение 8 дней, в препаратах четко определялись капсула, корковое вещество с почечными тельцами и извитыми канальцами, мозговое вещество. Хорошо выявлялся сосочек и почечная лоханка, выстланная переходным эпителием.
При введении животным ЗНЧ в течение 8-дневного периода существенных отличий морфологической картины между группами введения ЗНЧ разного размера не обнаружено. В группе животных, получавших ЗНЧ размером 1-3 нм, в 65% наблюдений полнокровие сосудов коркового вещества носило умеренный характер, в 35% случаев - выраженный. В группе животных, получавших ЗНЧ размером 50 нм, умеренное полнокровие сосудов коры было отмечено в 75% случаев, а выраженное полнокровие - в 25%. Во всех случаях введения ЗНЧ размером 15 нм была обнаружена умеренная степень полнокровия сосудов коркового вещества.
Во всех группах клубочки имели нормальные размеры или были незначительно расширены за счет полнокровия, просвет капсулы свободный. Капиллярные петли клубочков были умеренно расширены, заполнены эритроцитами. Клетки эпителия канальцев имели кубическую форму, были несколько увеличены в объеме, имели неровный апикальный край, контуры клеток были нечеткие, циюплазма в состоянии зернистой дистрофии. Просвеї извитых канальцев был сужен, имел звездчаїьій вид, в некоторых полях зрения в просвеї є оімечался слущенный эпителий. В единичных эпигелиоцшах оісутствовали ядра Базальные мембраны канальцев имели тонкий, ровный вид. Прямые канальцы в мозговом веществе и собирательные трубочки - без особенностей.
В ходе дальнейшего выполнения исследования нами была изучена обратимость морфологических иімепений в почках В группах животных, которым вводили ЗНЧ 1-3 и 50 нм, отмечалось частичное восстановление кровенаполнения почек Например, если полнокровие сосудов коркового вещества после окончания 8-дневного введения ЗНЧ 1-3 нм в 65% наблюдений носило умеренный характер, в 35% случаев -выраженный, то через 14 дней в 60% наблюдений отмечалось умеренное полнокровие, в 25% случаев - выраженное, в 15% - незначительное. Полнокровие в группе живошых с введением ЗНЧ 50 нм через 14 дней после окончания эксперимента приобретало умеренный характер. В группе животных, получавших ЗНЧ размером 15 нм, сохранялось умеренное полнокровие сосудои коры
В строении клубочкового аппарат почек через 14 дней после окончания введения ЗНЧ размерами 1-3 и 50 нм отмечалось уменьшение размеров клубочков, с запустеванисм капиллярных петель В то же время при введении ЗНЧ 15 им клубочки сохраняли нормальные размеры, капиллярные петли были в умеренном количестве заполнены эритроцитами. і] Во всех исследуемых группах мезангиальные клетки в обычном количестве располагались между капиллярными петлями. Базальные мембраны капилляров были ровные, окрашивались гомогенно, имели вид тонкой эозинофилыюй линии. Просвет капсулы клубочка был свободен. Через 14 дней после окончания введения ЗНЧ 15 нм только в нескольких полях зрения сохранялись учасіки незначительной дистрофии эпителия извитых канальцев. В ipymiax животных с введением ЗНЧ 1-3 нм и 50 нм в большинстве в большинстве случаев сохранялась зернистая дистрофия зпиіелия канальцев, сохранялись единичные некрошзированные эпителиоциты. Канальцы имели округлую форму, просвеї их был заполнен слущенным эпителием, расширен.
Таким образом, при исследовании обратимости максимальное восстановление морфолоїической каріиньї почек оімсчалось в группе введения ЗНЧ 15 нм.
При морфологическом исследовании почек в группах животных с 16-дпевным введения ЗНЧ отмечались признаки нарушения кровообращения разной сіепени выраженности. Полнокровие сосудов коры при введении ЗНЧ 1-3 нм в 30% случаев носило незначиїельньїй характер, в 45% - умеренный, в 25% - выраженный. В группе животных, которых вводили ЗНЧ 15 нм, в 60% случаев оімечалась умеренная сіепень полнокровия сосудов коры, в 40% - выраженная. При введении ЗНЧ 50 нм обнаружена умеренная степень полнокровия сосудов коры.
В группах животных с введением ЗНЧ 1-3 и 50 нм отмечалось уменьшение размеров клубочков, с запусісванием капиллярных петель, в то время как в группе введения ЗНЧ 15 нм клубочки имели нормальные размеры, капиллярные петли были в умеренном количестве заполнены эритроцитами. Во всех исследуемых группах мезангиальные клетки в обычном количестве располагались между капиллярными петлями.
![Лучевая диагностика изменений органов грудной полости после различных видов оперативных вмешательств на легких [Электронный ресурс]](/i/i/4488/212902.png "Лучевая диагностика изменений органов грудной полости после различных видов оперативных вмешательств на легких [Электронный ресурс] Балицкая Наталья Владимировна")