Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Проблемы выживаемости больных раком поджелудочной железы при современных методах его лечения. Миграционная и метастатическая активность клеток рака поджелудочной железы (обзор литературы)
Глава 2. Характеристика больных и методы исследования
2.1. Общая характеристика больных
2.2. Методы исследования
2.3. Объекты и методики экспериментального исследования
Глава 3. Выживаемость больных раком поджелудочной железы при разных методах лечения
Глава 4. Миграционная и метастатическая активность клеток рака поджелудочной железы, ангиогенез в опухоли в зависимости от наличия альфа - 6/бета - 4 интегрина и D-6.1 тетраспанина в эксперименте
4.1 Миграционная активность клеток рака поджелудочной железы и ангиогенез в опухоли
4.2 Метастатическая активность клеток рака поджелудочной железы в зависимости от наличия альфа-6/бета-4 интегрина и D6.1 тетраспанина в эксперименте
Глава 5. Влияние антител к альфа-6/бета-4 интегринам и D 6. ] тетраспанинам на миграционную и метастатическую активность клеток рака поджелудочной железы в эксперименте
Заключение
Выводы
Практические рекомендации
Список литературы
- Проблемы выживаемости больных раком поджелудочной железы при современных методах его лечения. Миграционная и метастатическая активность клеток рака поджелудочной железы (обзор литературы)
- Выживаемость больных раком поджелудочной железы при разных методах лечения
- Метастатическая активность клеток рака поджелудочной железы в зависимости от наличия альфа-6/бета-4 интегрина и D6.1 тетраспанина в эксперименте
- Влияние антител к альфа-6/бета-4 интегринам и D 6. ] тетраспанинам на миграционную и метастатическую активность клеток рака поджелудочной железы в эксперименте
Проблемы выживаемости больных раком поджелудочной железы при современных методах его лечения. Миграционная и метастатическая активность клеток рака поджелудочной железы (обзор литературы)
Рак поджелудочной железы представляет собой важную медико-социальную проблему, так как является заболеванием с очень неблагоприятным прогнозом [54]. Анатомическая малая доступность поджелудочной железы - причина довольно поздних описаний в медицинской литературе клинического течения рака этого органа. Первые публикации появились в начале XIX века. Da Costa в 1858 г. проанализировал 97 больных. Все пациенты были старше 50 лет, у них был серозный асцит, жирный стул, сужение пилорического отдела желудка, расширенный желчный пузырь, метастазы в легкие. Больные быстро умирали [64]. В 50-80 годах в некоторых монографиях были отражены сведения о симптоматике и диагностике рака поджелудочной железы, подытожены скромные успехи хирургического лечения [6, 34, 36].
В 2000 году в России число заболевших раком поджелудочной железы составило более 13 тысяч [4]. Частота встречаемости рака поджелудочной железы в индустриальных странах составляет 9-10 на 100 000 населения [62]. В ежегодном статистическом анализе злокачественных новообразований в России, который проводит МНИОИ им. П.А.Герцена, показано, что с 1991 по 2000 г. частота опухолей поджелудочной железы возросла почта на J3 % и достигла показателя 9,05 на 100 000 населения.
Рак поджелудочной железы наиболее распространен в экономически развитых странах и, наоборот, реже встречается в африканских странах, Индии, Вьетнаме, Южной Америке [27, 118]. Это связано, скорее всего, с трудностями диагностики рака поджелудочной железы [111, 118]. В странах Европейского сотрудничества заболеваемость раком поджелудочной железы варьирует от 6 до 9 на 100 000 у мужчин и от 4 до 7,5 на 100 000 у женщин [66]. Наибольшая заболеваемость в Дании, Ирландии, Великобритании, наименьшая - в Испании, Португалии, Греции [66].
В России в (996 году рак поджелудочной железы был диагностирован у 12646 человек [8]. В структуре онкологической заболеваемости у мужчин на долю этой формы опухоли приходилось 3,2%, у женщин - 2,8% [8]. В стандартизованных показателях заболеваемость у мужчин составила 8,5 на 100000 (европейский стандарт), у женщин - 6,1 на 100000 [8]. Средний возраст заболевших был равен, соответственно, - 62,7 года и 69,0 лет [8]. За 5 лет с 1991 г. заболеваемость раком поджелудочной железы у мужчин увеличилась на 7,4%, у женщин - на 4,9% [8]. По уровню заболеваемости рак поджелудочной железы у мужчин занимал десятое место, у женщин -одиннадцатое.
Рак тела и хвоста поджелудочной железы встречается в 11 % случаев [128], тогда как локализация опухоли в головке поджелудочной железы преобладает и составляет 78% [128].
Существует только две локализации, при которых показатели смертности выше показателей заболеваемости: рак печени и поджелудочной железы [78]. Смертность в странах Европейского сотрудничества варьирует у мужчин от 5,5 до 8,5 на 100000 и от 3,5 до 7,5 на 100000 - у женщин [66]. Около 5% всех онкологических смертей в США связаны с раком поджелудочной железы (четвертая причина). К сожалению, данные по смертности от рака поджелудочной железы в России не доступны из-за того, что эти показатели включены в сборную группу "опухоли других органов пищеварения и брюшины" [31].
Известно, что ранних симптомов рака поджелудочной железы нет, одной из проблем данной патологии является его поздняя диагностика (у 90% больных) и невозможность проведения радикального лечения [22]. На момент выявления опухоли у 40 % пациентов уже имеются метастазы в печень, а у 80-85% - в регионарные лимфатические узлы [71]. Данные о возможности радикального лечения противоречивы. По мнению [26, 29, 1! 5] оно возможно только у 10-15% больных, по мнению [11] - у 2,8 - 10% больных, по мнению [128] - в 15 - 20% случаев, по другим авторам [99]-только в 20-30 % наблюдений. В тоже время по данным [74] только у 17% пациентов, которым выполняется лапаротомия, рак поджелудочной железы операбелен. Сами радикальные операции сопряжены со значительной агрессией, что влечет за собой риск развития высокой послеоперационной летальности [19, 39]. Все это указывает на необходимость дальнейшего изучения проблемы.
У основной массы больных опухоли поджелудочной железы диагностируются на поздних стадиях, что определяет и неудовлетворительный прогноз [8]. По данным Setter S. (1999) по локализации опухоль в головке поджелудочной железы встречается в 78%, в теле и хвосте в 11% [128]. Выявление рака головки поджелудочной железы в начальной стадии составляет от 10 до 30 % [б]. Среди опухолей поджелудочной железы в 95% случаев встречаются различные формы аденокарцином, при этом самой частой является протоковая аденокарцинома, которая встречается в 80 % случаев [8]. Роль симптомов и данных анамнеза в установлении диагноза, стадийности процесса не играют решающей роли. Преимущественная локализация рака в области головки поджелудочной железы обусловливает раннюю обструкцию общего желчного протока, и как следствие появление механической желтухи, которая встречается в 47 % случаев рака поджелудочной железы [44]. Основные симптомы рака поджелудочной железы - желтуха и боли. Эти симптомы отмечаются у 90% заболевших. Третий важный симптом РПЖ - необъяснимая для пациентов потеря веса, даже при сохранении аппетита. Наблюдается она у 92% больных с локализацией рака в головке и у 100% при поражении тела или хвоста. Потеря массы тела вероятнее всего связана со стеатореей [77, 88]. С калом выделяется повышенное содержание нейтрального жира, жирных кислот - из-за нарушения внешнесекреторной функции поджелудочной железы. Опухолевое образование в животе, в околопупочной области, асцит, спленомегалия (обусловленная сдавленней воротной или селезеночной вен) определяются у части пациентов уже при первом визите к врачу. Метастазы по брюшине могут обусловить сдавление кишечника с симптоматикой запоров или непроходимости. Нередко до постановки диагноза РПЖ развивается картина диабета. Часты нарушения свертываемости крови -тромбозы, тромбофлебиты. Почти 67% больных находятся в тяжелой психической депрессии [77, 88].
Методы диагностики РПЖ делятся на неинвазивные и инвазивные. К первым относят ультразвуковое исследование, компьютерную томографию и диагностику с помощью ядерно-магнитного резонанса. Инвазивные методы включают в себя эндоскопическую диагностику, биопсии, лапароскопию. Цели диагностических методов обнаружить первичный очаг в поджелудочной железе, определить потенциальную резектабильность или нерезектабильность и осуществить биопсию опухоли. Приоритетными исследованиями в диагностики рака головки поджелудочной железы являются ультразвуковое исследование в сочетании со спиральной компьютерной томографией с болюсным контрастированием сосудов [35]. Ультразвуковое исследование позволяет выявить опухоль в поджелудочной железе размером не менее 1,5 см, определить пораженный отдел поджелудочной железы, визуализировать главный панкреатический проток, внутри- и внепеченочные желчные протоки. При поражении печени, можно обнаружить очаги (вероятные метастазы) размером не менее 1 см и увеличенные лимфатические узлы [27]. РХПГ проводится для уточнения уровня препятствия во внепеченочных желчных и панкреатических протоках, использование КТ, ЯМР томографа позволяет, при наличии опухоли увидеть распространение ее инвазии [13]. Необходимо добиваться морфологического подтверждения диагноза. Важной задачей является взятие материала для морфологического исследования., При эндоскопической ретроградной холангиопанкреатографии имеется возможность получения панкреатического сока с последующим его цитологическим анализом. При паллиативном лечении достаточным считается аспирационная игловая биопсия. Подробное гистологическое исследование проводится после выполнения резекции опухоли [68, 91]. Биопсия необходима в расчете на последующую адъювантную химиотерапию. Роль биопсии важна тогда, когда нет прямых признаков нерезектабельности опухоли, но имеются очаги, подозрительные на метастазы в печень. Выявлен ряд прогностических неблагоприятных факторов у больных раком поджелудочной железы: желтуха, метастазы в печень [83]. При дифференциальной диагностики желтухи используются следующие исследования: лабораторный анализ крови, УЗИ, ЭРХПГ, чрескожная чрес печеночная холангиография под контролем УЗИ, данные обследования позволяют сократить диагностический период у больных с механической желтухой, а следовательно улучшить исходы хирургического лечения [24]. Другие авторы считают неблагоприятными прогностическими факторами при раке поджелудочной железы следующие: метастазы в регионарные лимфатические узлы, инвазия в стенки окружающих крупных сосудов, прорастание «капсулы» поджелудочной железы, низкая дифференцировка клеток опухоли [5, 57]. Для получения биопсии используются следующие методы: ЭРХПГ с биопсией инфильтрированной стенки двенадцатиперстной кишки, забора желчи и панкреатического секрета; пункционная цитобиопсия под контролем УЗИ или РКТ; лапароскопия [27]. Для установления диагноза применяют также ангиографические исследования (целиакография, возвратная мезентерикопортография), незаменимо для определения степени вовлечения в опухолевый процесс прилежащих крупных сосудов [27].
Выживаемость больных раком поджелудочной железы при разных методах лечения
Анализ выживаемости 523 больных раком поджелудочной железы показал, что в группе больных, у которых проводилась, преимущественно симптоматическая терапия, в срок до 3 месяцев в живых осталось 87 (41,0%) из 212 больных (табл. 16, 17). По сравнению с этим уровнем число выживших больных к 6 месяцам уменьшилось на 17,0% (р 0,001), к 9 месяцам - на 19,3% (р 0,001), к 12 месяцам - на 22,3% (р 0,001), к 2 годам на 28,7% (р 0,001). Между отдельными этапами наблюдения статистически значимая разница была лишь между данными на 9 месяцев и года, когда она составила 9,4% (р 0,02).
В течении 3 месяцев после пробной лапаротомии выжило 51 (50,0%) из 102 больных. По сравнению с этим уровнем к 6 месяцам после пробной лапаротомии выжило на 21,6% больных меньше (р 0,01), к 9 месяцам -меньше на 26,5% (р 0,001), к 1 году - на 30,4% (р 0,001), к 2 годам - на 38,2% (р 0,001).
Анализ выживаемости больных на отдельных этапах наблюдения показал, что к 2 годам количество выживших пациентов было меньше через 6 месяцев на 16,6% (р 0,01), через 9 месяцев на 11,7% (р 0,05).
В течении 3 месяцев после паллиативных операций выжило 75 (58,1%) из 129 больных раком поджелудочной железы. По сравнению с этими данными к 6 месяцам количество выживших больных уменьшилось на 29,4% (р 0,001), к 9 месяцам - на 35,6% (р 0,001), к і году - на 38,0% (р 0,001), к 2 годам - на 42,6% (р 0,001). На 6 месяц наблюдения количество выживших больных было больше, чем через 2 года на 13,2% (р 0,02).
В течении 3 месяцев после радикальной операции выжило 46 (74,2%) из 62 больных раком поджелудочной железы. Изменения этого показателя через 6 месяцев после операции (62,9%) были статистически не значимыми.
Зафиксированный уровень выживаемости к 3 месяцам после операции стал статистически значимо ниже к 9 месяцам, когда он снизился на 22,6% (р 0,02). К 12 месяцам он стал ниже на 35,5% (р 0,001), к 2 годам - на 48,4% (р 0,001). По сравнению с 6 месяцем после операции уровень выживаемости больных уменьшился к 12 месяцу на 24,2% (р 0,02), к 2 годам - на 37,1% (р 0,001).
Количество выживших больных к 2 годам после операции было меньше, чем к 9 месяцам на 25,8% (р 0,01).
В течении 3 месяцев после химиолучевой терапии выжило 14 (77,8%) из 18 больных раком поджелудочной железы. По сравнению с этим периодом к 6 месяцам количество выживших больных уменьшилось на 33,4% (р 0,05), к 9 месяцам - на 50,0% (р 0,01), к 1 году - на 55,6% (р 0,001), к 2 годам на 66,7% (р 0,001). К 2 годам после химиолучевой терапии количество выживших было меньше, чем через 6 месяцев после на 33,3% (р 0,05).
Сравнительная оценка выживаемости больных разных групп на этапах наблюдения показала, что между группой больных раком поджелудочной железы, получавших симптоматическое лечение, и у тех, у которых была выполнена пробная лапаротомия, статистически значимых различий не было.
Паллиативные операции (3 группа больных) и химиолучевая терапия (5 группа) позволили увеличить выживаемость больных по сравнению с теми, кто получал только симптоматическое лечение, только в первые 3 месяца наблюдения, в среднем соответственно на 17,1% (р 0,01) и 36,8% (р 0,01).
Радикальные операции по поводу рака поджелудочной железы по сравнению с больными, у которых проводилось симптоматическое лечение или пробная лапаротомия, на всех этапах наблюдения позволили увеличить выживаемость больных. В срок до 3 месяцев выживаемость больных после радикальных операций превысила данные при симптоматическом лечении и после пробной лапаротомии на 33,2% (р 0,001) и на 24,2% (р 0,01) соответственно, к 6 месяцам - на 38,9% (р 0,001) и на 24,5% (р 0,001), к 9 месяцам - на 29,9% (р 0,001) и на 28,1% (р 0,001), к 12 месяцам - на 20,0% (р 0,01) и на 19,1% (р 0,02), к 2 гадам - на 13,5% (р 0,05) и на 14,0% (р 0,05).
Выживаемость больных раком поджелудочной железы после радикальных операций была выше, чем после паллиативных вмешательств в срок до 3 месяцев на 16,1% (р 0,05), к 6 месяцам - на 14,2% (р 0,001), к 9 месяцам - на 29,1% (р 0,001), к I году-на 18,6% (р 0,02).
Выживаемость больных после химиолучевого лечения в срок до 3 месяцев была выше, чем при симптоматическом лечении на 36,8% (р 0,002), чем после пробной лапаротомии - на 27,8% (р 0,02). Она не отличалась от больных после паллиативных и радикальных операций. В последующие сроки наблюдения выживаемость больных после химиолучевого лечения статистически значимо не отличались от больных других групп.
Среди 300 пациентов, сталированных по системе TNM, у которых не проводилось лечение (I группа) 80,0% были с IV стадией рака поджелудочной железы, на III стадией заболевания приходилось 16,5% (табл. 18), II А стадия отмечена - у 3,5% . Метастазы в регионарные лимфатические узлы были у 3,5 % пациентов.
Во всех 5 группах была III стадия заболевания. Наибольшее количество больных - 41,9% выявлено в 4 группе, их было больше на 8,6% чем в 5 группе, на 20,1% - 3 группы и соответственно на 33,1% и 25,4%, чем во 2 и 1 группах.
II стадия рака поджелудочной железы преобладала в 4 группе пациентов - 33,9%, это значительно больше - на 30,4%, чем в 1 группе, на 28,3% 5 группы и на 22,4%, чем в 3 группе. Больные с этой стадией не выявлены во 2 группе.
I стадия рака поджелудочной железы была только в 4 группе (9,7%).
Во 2 группе пациентов с пробной лапаротомией, так же как и в 1 группе преобладала IV стадией рака поджелудочной железы - у 91,2% больных. Оставшееся количество пациентов приходилось на III стадией заболевания 8,8%. В 87,7 % - метастазы в регионарные лимфатические узлы.
У больных получивших паллиативное хирургическое лечение (3 группа) в 66,7% имела место IV стадия рака поджелудочной железы, III стадией заболевания - у 21,8%, II А стадия отмечена - у 5,1% и ПВ стадия -у 6,4%. У 20,5% наблюдались метастазы в регионарные лимфатические узлы.
У радикально оперированных больных (4 группа) основное количество пациентов было с III стадией заболевания - у 41,9%, II А стадия отмечена - у 22,6%, ПВ стадия - у 11,3% и только в 9,7% имела быть I стадия процесса. 21%случаев были метастазы в регионарные лимфатические узлы.
Химиолучевая терапия (5 группа больных) проведена у 61,1% пациентов с IV стадией рака поджелудочной железы, у 33,3% с III стадией заболевания и у 5,6% со II В стадией. У 61,1% - метастазы в региональные лимфатические узлы.
Среди больных всех групп преобладали пациенты с IV стадией рака поджелудочной железы, наибольшее их количество 91,2% было во 2 группе, что больше на 11,2% по отношению к 1 группе, на 24,5% к 3 группе и на 30,1% к 5 группе. В 4 группе больные с IV стадией заболевания составляли 14,5% в основном были больные молодого возраста с Т2-3 и метастазами в отдаленные лимфатические узлы.
Возрастной состав в группах распределился следующим образом.
В первой группе 85,9% больных были в возрасте 50 лет и старше (табл.19). На 40-49 лет пришлось 10,6%, а оставшиеся 0,6%-до 40 лет.
Во второй группе, так же как и в первой, основное количество пациентов - 87,7% были в возрасте 50 лет и старше. 40-49 лет - у 8,8%, 0,6% моложе этого возраста.
В третьей группе больные распределились следующим образом - 50 лет и старше - 83,3%, 40-49 лет - 12,8% и моложе 40 - 3,8%.
Значительно меньше пациентов в возрасте 50 лет и старше в четвертой группе - 53,2%. больше больных в возрасте 40-49 лет - 30,6% и моложе 40 лет-16,1%.
В пятой группе основное количество пациентов в возрастной группе 50 лет и старше - 72,2%, 40-49 лет - 22,2% и моложе 40 - 16,1 %.
Метастатическая активность клеток рака поджелудочной железы в зависимости от наличия альфа-6/бета-4 интегрина и D6.1 тетраспанина в эксперименте
При исследовании метастатической активности рака поджелудочной железы по данным определения радиоактивности печени и крови после инъекции AS - клеток, меченных Сг-51, внутрибрюшинно в сроки через 24, 48,72,96 и 120 часов после инъекции был получен отрицательный результат (табл.32,33).
При определении радиоактивности крови через 72,96 и 120 часов после внутрибрюшинного введения AS - В5.5 клеток рака поджелудочной железы. меченных Сг-51, зарегистрирована радиоактивность в крови. В сроки 24 и 48 часов она не определялась. При измерении радиоактивности печени крыс после введения внутрибрюшинно AS - В5.5 клеток, меченных Сг-51, в период от 24 до 120 часов она не выявлялась.
После внутрибрюшинного введения AS - D6.I клеток рака поджелудочной железы, меченных Сг-51, через 24,48,72,96 и 120 часов радиоактивность в крови и в печени не выявлялась.
После внутрибрюшинного введения AS - В5.5 - D6.1 клеток рака поджелудочной железы, меченных Сг-51, радиоактивность в крови определялась через 96 и 120 часов после инъекции. В более ранние сроки она не определялась. Аналогичные данные получены при измерении радиоактивности в печени. Начиная с 96 часов, после инъекции опухолевых клеток, в группе с AS - В5.5 - D6.1 (с альфа-6/бета-4 интегринами и D6.1 тетраспанинами), при измерении радиоактивности печени, мы получили положительный результат.
При исследовании радиоактивности крови и печени, после внутрибрюшинного введения клеток рака поджелудочной железы, меченных Сг-51, установлено, что в группе сравнения с AS клетками в сроки 24, 48, 72, 96 и 120 часов она не выявлялась (табл. 32). Также отрицательный результат в эти сроки получен в группе с AS - D6.1 (с D6.1 тетраспанинами) клетками. В группе с альфа-6/бета-4 интегринами (AS - В5.5) при измерении радиоактивности крови получен положительный результат в сроки 72, 96 и 120 часов. В крови крыс, которым вводили AS - В5.5 - D6.1 клетки, меченные Сг 51, начиная с 96 часов, после инъекции опухолевых клеток, начала выявляться радиоактивность. Таким образом, можно сделать вывод, что опухолевые клетки, экспрессирующие альфа-б/бета-4 интегрины способны проникать через стенку сосуда в кровь и таким образом распространяться. Опухолевые клетки, которые экспрессируют помимо альфа-6/бета-4 интегринов и D6.I тетраспанины (AS - В5.5 - D6.1), способны не только мигрировать в кровяное русло, но и поражать печеночную ткань. Видимо сочетание альфа-6/бета-4 интегринов и D6.1 тетраспанинов придает клеткам рака поджелудочной железы не только миграционные, адгезионные способности, но и свойства, которые способствуют метастазированию опухолевых клеток в печень.
При измерении радиоактивности печени крыс установлено, что в группах с AS; AS - В5.5 (с альфа-б/бета-4 интегрином); AS - D6.1 (с D6.1 тетраспанином) клетками, радиоактивности не зарегистрировано. В группе животных, которым вводили опухолевые клетки AS - В5.5 - D6.1 (с альфа-б/бета-4 интегринами и D6.1 тетраспанинами) зарегистрирована радиоактивность. Из этого можно сделать следующий вывод, что опухолевые клетки, которые экспрессируют альфа-б/бета-4 интегрины и D6.1 тетраспанины обладают такими свойствами, как мигрировать и образовывать дочерние опухоли.
При оценке макроскопической картины в брюшной полости после внутрибрюшинного введения клеток рака поджелудочной железы установлено, что в группе сравнения после введения AS — клеток наблюдалось поражение только поджелудочной железы. Опухолевый конгломерат составлял 0,5-1 см, а количество асцитической жидкости варьировало от 2 до 5 мл. Цвет ее - светло желтый.
После внутрибрюшинного введения AS - В5.5 клеток рака поджелудочной железы наблюдались поражения поджелудочной железы и забрюшинных лимфатических узлов. Количество асцитической жидкости светло желтого цвета было менее 2 мл, размеры опухолевого конгломерата -менее 0,5 см.
После внутрибрюшинного введения AS - D6.1 клеток рака поджелудочной железы количество асцитической жидкости было более 10 мл, она носила геморрагический характер (красноватого цвета).
Через два месяца после внутрибрюшинного введения AS - D6.1 клеток рака поджелудочной железы выявлено ее поражение, а опухолевые конгломераты были размерами более 1 см.
После внутрибрюшинного введения AS - В5.5 - D6.1 клеток рака поджелудочной железы в брюшной полости выявлена асцитическая жидкость в количестве от 2 до 5 мл, светло-красного цвета. В этой группе конгломераты располагались на висцеральной и париетальной брюшине, по размерам от 0,5 до 1 см. Наблюдались поражения поджелудочной железы, печени, селезенки, забрюшинных лимфатических узлов.
Сопоставления результатов исследований в группе сравнения и в подгруппах основной группы позволило выявить определенные различия.
Наличие асцитической жидкости.
По количеству и наличию асцитической жидкости мы получили в группе сравнения (AS) до 5 мл, светло-желтого цвета (табл.34). В группе с AS - В5.5 (с альфа-6/6ета-4 интегринами) клетками, мы обнаружили следы асцита (менее 2 мл), также светло-желтого цвета. В группе с опухолевыми клетками, экспрессирующих D6.1 тетраспанины (AS - D6.1), мы выявили выраженный асцит, более 10 мл, насыщенного красного цвета. В группе с AS - В5.5 - D6.1 клетками - асцит в количестве до 5мл, светло-красного цвета.
Следовательно, в группе животных, с опухолью, которая экспрессирует Об.ітетраспанин, образуется геморрагический асцит. Наибольшее количество жидкости наблюдается в группе с AS - D6.1 клетками. Наименьшее количество асцитической жидкости в группе животных с альфа-6/бета-4 интегринами (AS - В5.5 клетки).
Наличие опухолевых конгломератов на париетальной и висцеральной брюшине.
Через два месяца, после инъекции опухолевых клеток, при лапаротомии, выявлено в брюшной полости множество опухолевых конгломератов (табл. 35). Конгломераты располагались на висцеральной и париетальной брюшине, по размерам они были от 0,5 см до 1 см и более. В зависимости от введенных опухолевых клеток размер опухолевых конгломератов существенно различался. Наименьший размер, менее 0,5 см, наблюдался в группе с AS - В5.5 (с альфа-6/бета-4 интегринами) клетками. Наибольший размер, более 1 см, мы наблюдали в группе с AS - D6.1 (с D6.1 тетраспанинами) клетками. Размер от 0,5 см до 1 см, был в группах с AS (группа сравнения) и с AS - В5.5 - D6.1 (с альфа-6/бета-4 интегринами и D6.1 тетраспанинами) клетками.
Таким образом, во всех четырех линиях опухолевых клеток:А5; AS -В5.5; AS - D6.1; AS - В5.5 - D6.1, мы при обследовании, выявили наличие конгломератов из опухолевых клеток, располагающих, как на париетальной, так и висцеральной брюшине. Опухолевые конгломераты были различные по величине, но наиболее большие (более 1 см), конгломераты с AS - D6.1 (с D6.1 тетраспанинами) клетками.
Изменение (поражение) внутренних органов.
Через два месяца после инъекции опухолевых клеток, после выполнения лапаротомйи, во всех группах было установлено поражение поджелудочной железы (табл. 36). Поражение забрюшинных лимфатических узлов (парааортальных), наблюдалось в двух случаях - это в группе с AS -В5.5 (с альфа-6/бета-4 интегринами) и с AS - В5.5 - D6.1 (с альфа-6/бета-4 интегринами и D6.1 тетраспанинами) клетками. Поражение печени и селезенки (ее ворот) только в группе с AS - В5.5 - D6.1 (с альфа-6/бета-4 интегринами и D6.1 тетраспанинами) клетками. Все выше перечисленные органы как пораженные, так и не пораженные, удалялись и для достоверности исследовались гистологически, таким образом, опухолевые поражения органов подтверждались при помощи иммуногистоморфологии.
Влияние антител к альфа-6/бета-4 интегринам и D 6. ] тетраспанинам на миграционную и метастатическую активность клеток рака поджелудочной железы в эксперименте
В группах экспериментов, при которых в брюшную полость вводились клетки рака поджелудочной железы с антителами в вариантах AS - В5.5 + At В5.5, AS - D6.1 + At D6.1, AS - B5.5 - D6.1 + At B5.5, AS - B5.5 - D6.1 + At D6.1, AS - B5.5 - D6.1 + At B5.5 - D6.1, конгломераты опухоли на брюшине были примерно сопоставимы (табл. 37). В группе же с AS - В5.5 - D6.1 + At D6.1, конгломераты были менее выраженны по размерам и плотности (рис. 14). Обращает на себя внимание, что At В5.5 как бы стимулирует опухолевые клетки к слиянию в конгломераты, напротив At D6.1 блокирует процесс слияния опухолевых клеток AS - В5.5 - D6.1 в конгломераты (табл. 38).
Наличие отдельных фиксированных к брюшине и свободно плавающих клеток.
В группе, с клетками AS - В5.5 - D6.1 + At В5.5 не обнаружены фиксированные отдельные клетки, а были лишь свободно плавающие, хотя в группе с AS - В5.5 - D6.1, без введения антител, фиксированные к брюшине клетки, имели место. Таким образом, At В5.5 блокируют фиксацию опухолевых клеток к брюшине. В группе с AS - В5.5 - D6.1 + At D6.1 не обнаружены свободно плавающие клетки, лишь фиксированные на брюшине. В остальных случаях выявлены как фиксированные, так и свободно плавающие опухолевые клетки.
Фиксированные к брюшине клетки: адгерентные и неадгерентные к ранее существовавшим сосудам брыжейки (артериям).
Адгерентные к сосуду клетки обнаружены только в одной группе: с AS -В5.5 - D6.1 + At D6.1 (рис. 15), в остальных случаях, лишь неадгерентные клетки. Таким образом, можно предположить, что At В5.5 блокирует адгезионные способности опухолевых клеток. В группе с AS - В 5.5 - D6.1 +
Изменения формы опухолевых клеток.
Изменение формы наблюдалось лишь в одной группе: с опухолевыми клетками и антителами AS - В5.5 - D6.1 + At D6.1 (рис. 15) , в остальных случаях, изменение формы клеток обнаружено не было (табл. 41, 42). Можно предположить, что антитела альфа-6/бета-4 интегринов (At В5.5), блокируют миграцию клеток, путем стабилизации их формы (рис. 16), неспособность к формированию псевдоподий, в группе, где опухоли экспрессируют альфа-6/бета-4 интегрины, клетки формируют как бы многочисленные удлинения, по внешнему виду похожие на псевдоподии.
Миграция клеток по брюшине и проникновение в сосуд.
Наблюдения за адгерентньши клетками, не позволили обнаружить, ни в одном случае, миграцию и проникновение в сосуд (артерию) (табл. 43). Если учесть, что миграцию в сосуд наблюдали у животных с опухолями, экспрессирующих альфа-6/бета-4 интегрины (AS - В5.5; AS - В5.5 - D6.1), то напрашивается вывод, что антитела В5.5 полностью блокируют миграционные способности клеток рака поджелудочной железы (рис. 17). Отдельные клетки, собранные в конгломераты, при введении антител В5.5 плохо фиксируются к брюшине (рис. ] 8; табл. 44).
Ангиогенез в опухоли.
Ангиогенез установлен лишь в серии эксперимента с AS - В5.5 - D6.I + At В5.5 (рис. 19). Данный ангиогенез в опухоли соответствовал ангиогенезу, как у животных с опухолевыми клетками экспрессирующих тетраспанины без антител (AS - D6.1). Можно думать, что антитела D6.1 обладают свойствами блокировать ангиогенез в опухолевых узелках. Антитело AS - В5.5 ангиогенез не блокирует (рис. 20). На рис. 21 отображено как выглядит опухоль, состоящая из AS - В5.5 - D6.I + At В5.5-D6.1. Нет ангиогенеза, края конгломерата четкие, отдельные клетки не склонны к отделению. Нет ангиогенеза и при опухоли, состоящей из AS -D6.1 +АЮ6.1(рис. 22).
Наличие опухолевых конгломератов на париетальной и висцеральной брюшине.
Через два месяца, после инъекции опухолевых клеток с антителами при лапаротомии в брюшной полости было выявлено множество конгломератов. Но это были совершенно другие опухолевые процессы по сравнению с аналогичными опухолями без антител. At В5.5 практически никак не влияют на размеры и образования конгломератов, напротив At D6.1, существенно уменьшают размеры и количество конгломератов (табл. 47; 48).
В остальных группах было менее 2 мл. Если учитывать, что в группе экспериментов с AS - D6.1 клетками без антител, количество асцита было более 10 мл, а при введении At D6.I стало менее 2 мл, можно сделать вывод. что антитело D6.! купирует каким то образом образование асцита (табл. 46). Что интересно, во всех группах, при лапаротомии, асцит по цвету был светло-желтый, геморрагический не встречался.
![Сравнительная характеристика различных методов паллиативного хирургического лечения рака панкреатодуоденальной зоны [Электронный ресурс]](/i/i/4408/207509.png "Сравнительная характеристика различных методов паллиативного хирургического лечения рака панкреатодуоденальной зоны [Электронный ресурс] Карпачев Александр Александрович")