Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Теоритические и практические аспекты фотодинамической терапии гнойных ран мягких тканей 9
ГЛАВА 2. Материал и методы исследования 23
2.1.Общая характеристика исследуемых фотосенсибилизатора и веществ, применяемых
для его модернизации. 23
2.2. 1-я серия экспериментов – изучение фотокаталитической активности комплексов ПФС-АП, в модельной реакции фотоокисления триптофана в воде 31
2.3. 2-я серия экспериментов – сравнительное изучение особенностей течения I фазы раневого процесса под влиянием местной ФДТ с водным раствором фотодитазина и его комплексов с плюроником F127, в сочетании с наночастицами золота, плюроником F127 и КМЦ, и хитозаном 32
2.4. Микробиологические исследования . 39
2.5. 3-я серия экспериментов – сравнительное изучение динамики заживления гнойных
ран при местной ФДТ с использованием комплексов фотодитазина с плюроником F127, в
сочетании с плюроником F127,наночастицами золота и КМЦ, и хитозаном 41
ГЛАВА 3. Результаты экспериментальных исследований 44
3.1. Экспериментальная часть in vitro 44
3.2. Экспериментальная часть in vivo 49
3.2.1. Результаты бактериологического исследования . 49
3.2.2. Макроскопическая оценка клинической картины состояния ран 56
3.2.3. Статистическая оценка данных полученных путем планиметрии 59
3.2.4. Статистические результаты клинических наблюдений . 64
3.2.5. Результаты гистологического изучения 67
Заключение 84
Список литературы 94
- 1-я серия экспериментов – изучение фотокаталитической активности комплексов ПФС-АП, в модельной реакции фотоокисления триптофана в воде
- Микробиологические исследования
- Результаты бактериологического исследования
- Статистические результаты клинических наблюдений
1-я серия экспериментов – изучение фотокаталитической активности комплексов ПФС-АП, в модельной реакции фотоокисления триптофана в воде
Интерес к ФДТ и, как следствие, формирование научного и экспериментального подхода к изучению фотодинамического лечения начался с работы O.Raab [224], опубликованной в 1900 году. Автор обнаружил, что акридиновый и другие красители, которые химически инертны в темноте, при добавлении взвеси бактерий и при облучении их солнечным светом приводят к быстрой гибели некоторых видов микроорганизмов. Н. von Tappeiner[240] в своей статье высоко оценил это открытие, высказав предположение, что данный эффект найдет применение в практической медицине. Этим же автором в 1904 г. впервые был введен термин «фотодинамическая реакция». В 1924 году A. Passow и W. Rimpau исследовали фотодинамическое воздействие на грамположительные и грамотрицательные бактерии с различными фотосенсибилизирующими красителями. Эксперименты выявили значительно более низкую степень воздействия на колонии грамотрицательных бактерий по сравнению с грамположительными. Однако выявленный феномен инактивации бактерий под воздействием ФДТ , в дальнейшем не вызвал заметного интереса в научном мире и результаты исследований в клинической практике не использовались. Эта ситуация обуславливалась несколькими банальными причинами:
Однако стоит отметить тот факт, что в области лечения онкологических процессов, не смотря на все существующие трудности уже в 1905 году был совершен настоящий прорыв. A. Policarda выполнил и научно доказал, что при облучении ультрафиолетом некоторые злокачественные опухоли человека флюоресцируют в оранжево-красной области спектра. Эта работа заложила основу применения фотодинамической терапии в онкологии.
В России развитие, состояние на сегодняшний день и перспективы ФДТ , применяемой для борьбы со злокачественными опухолями наиболее полно отображено в работах профессора Странадко Е.Ф.[79]
Параллельно с этим не прекращались попытки применения фотодинамического воздействия для уничтожения бактерий.
Настоящий расцвет изучения фото динамической терапии начался после того как в мае 1960 американский физик Теодор Мейман запустил действующий макет рубинового лазера на длине волны 694.3 нм. (публикация вышла весной 1961 года). В 1961 году и в СССР создается первый лазер на рубине. В дальнейшие 5 лет было создано множество различных лазеров на различных средах: твердотельные (рубин, неодим, эрбий), газовые (гелий-неонный, СО2), на красителях и др. Все это способствовало формированию пула излучателей с различной длинной волны. С этого момента развитие ФДТ получило новый положительный импульс. Другим стимулирующим фактором возрождения интереса к возможности летальной фотосенсибилизации бактрий способствовал рост антибиотикорезистентных штаммов патогенных микроорганизмов и как следствие, возрастающая актуальность проблемы госпитальной инфекции и лечения гнойных и трофических ран. Изучение проблемы фотодинамического воздействия на патогенную микрофлору на сегодняшний день происходит уже на значительно более высоком научном уровне. Техническое оснащение научных исследований так же шагнуло далеко вперед.
В результате полноценного и всестороннего изучения проблемы ФДТ стало формулирование основных условий для успешного проведения реакции:
Наличие фотосенсибилизатора, обладающего достаточным сродством к бактериальному агенту и способным проникать внутрь микроорганизма. Кроме того фотосенсибилизатор должен обладать способностью поглощать световое излучение и опосредованно вызывать выработку в биологическом объекте синглетного кислорода, который и будет обладать необходимым цитотоксическим действием.
Не смотря на большое количество предлагаемых методик применения ФДТ традиционно выполняется по 2-х шаговому протоколу:
Во время первого этапа к клеткам - мишеням осуществляется доставка фотосенсибилизатора, а так же создаются условия для проникновения фотосенсибилизатора внутрь клеток
Вторым этапом производится облучения зоны расположения ткани - мишени светом соответствующей длины волны. Все проистекающие в дальнейшем реакции приводят к образованию реактивных форм кислорода (ROS). Это в свою очередь соответственно приводит к гибели клеток, накопивших сенсибилизатор. Уникальность ФДТ заключается в том, что после воздействия может запускаться оба способа гибели в клетках – мишени: апоптоз, и некроз.
Некроз, или пассивная гибель клетки, является энтропийным событием, может быть результатом экстремальных внешних условий например: изменения кислотности среды, изменения температуры, давления, осмотических условий. Другим вариантом, приводящим к развитию некроза является жесткое клеточное повреждение, индуцируемое химическими процессами: метаболическими ингибиторами, суперлетальными дозами ионизирующего излучения, или другого рода токсическими субстанциями. В основном, некроз сопровождается, потерей мембранной целостности и метаболического гомеостаза в связи с неконтролируемой клеточной дезинтеграцией. Некроз является необратимым процессом. Пассивная гибель клетки в большинстве случаев проистекает с характерными морфологическими изменениями в клетке, которые включают клеточное набухание и разрыв мембраны, кариолизис и хроматин шероховатой формы, плохо очерченную цитоплазму.
Апоптоз или «активная гибель клетки» представляет собой регулируемый клеточный суицид. Процесс апоптоза контролируется как внутриклеточными, так и внеклеточными факторами. В не зависимости от фактора, запускающего процесс он всегда заканчивается характерной последовательностью морфологических, биохимических и энергетических изменений. Это приводит к системной и контролируемой деструкции клетки и к концентрации клеточных компонентов в апоптическких телах, которые могут быть распознаны фагоцитами и фагоцитированы [65,64,124]. Процесс апоптоза предотвращает неконтролируемое выделение внутриклеточного материала в окружающее пространство и предотвращает повреждение соседних клеток и тканевое воспаление. Морфологически апоптоз можно охарактеризовать сморщиванием клетки, конденсацией ядерного хроматина, фрагментацией ядра и сегрегацией клетки в апоптическое тело, которое опознается фагоцитами и подвергается фаголизису. Все это смело можно назвать отличительными признаками апоптоза.
Апоптоз является, контролируемым и требующим энергии процессом, следовательно, он является полной противоположностью некрозу. В различных модельных системах было наглядно показано, что ФДТ эффективно индуцирует апоптоз. Именно способность ФДТ возбуждать апоптический каскад в любых клетках насыщенных фотосенсибилизатором, даже в тех клетках, которые не восприимчивы к химио и лучевой терапии, делают эту методику наиболее подходящей для лечения онкологических процессов. Было наглядно показано, что сигнал для запуска процесса апоптоза, вне зависимости от его поступления с наружной или с внутренней стороны клетки, воспринимаются в митохондриях. Запуск каскада, приводящего к апаптозу клетки при ФДТ связан с тем, что ROS (реактивные формы кислорода), образующиеся в результате фотодинамического воздействия, могут непосредственно повреждать митохондрии, которые, как и описывалось выше, являются стартерами активной гибели клеток. Другая значимая роль митохондрии заключается в том, что после поступления сигнала начала апоптоза включается выделение протеинов из межмембранного пространства в цитоплазму. Данный процесс часто сопровождается открытием пор на внутренней или наружной мембране митохондрии [76, 73, 151], но детальный механизм этого процесса все еще остается неясным. К настоящему времени, известны по крайней мере, четыре различные теории открытия пор [39, 90].
Микробиологические исследования
Входе экспериментальных и клинических исследований было доказано, что применение НИЛИ оказывает благотворное влияние на все стадии процесса заживления раны.
Однако, необходимо отметить факт, наличия в литературе описания экспериментальных работ, в которых показано, что при применении НИЛИ мощностью более 1 минуты и мощностью излучения более 50 мВт провоцируется значительная задержка сроков заживления ран.
В отношении действия НИЛИ на организм существует несколько гипотез. В отношении течения раневого процесса наиболее целесообразно рассматривать концепцию, в основе которой лежит фотодинамический механизм воздействия НИЛИ. В качестве основных положений данной концепции считают:
1. В красной области спектра поглощения лазерного излучения эндогенные порфирины считаются хромофорами и их так же называют фотосенсибилизаторами (ФС)
2. При проведении НИЛИ происходит поглощении световой энергии порфиринами и, как следствие, индуцирование фотосенсибилизированных свободнорадикальных реакций. Это в свою очередь приводит к увеличению ионной проницаемости клеточных мембран, в первую очередь для ионов Са2.
3. При увеличении количества ионов Са2 в процессе цитолиза лейкоцитов происходит запуск Са-зависимых процессов. При активации данного происходит повышение уровня функциональной активности клеток, за счет прайминга лейкоцитов. Кроме данного процесса так же происходит повышение продукции различных биологических соединений таких как: гипохлорит-ион, оксид азота и др. Некоторые из этих биологически активных обладают способностью влиять на микроциркуляторное русло, другие обладают выраженной бактерецидной активностью. Оксид азота обладат расслабляющим эндотелий сосудов свойством за счет того, что является предшественником так называемого EDRF (Endotelium Derived Relaxing Faktor). За счет данного свойства достигается целый ряд эффектов, которые применяются в клинике при проведении лазерной терапии.
В процессе исследования ФДТ было разработано несколько поколений фотосенсибилизаторов, применяемых в клинической практике. Коммерческий препарат первого поколения Фотофрин представляет собой смесь, содержащую менее 20% неактивных мономеров и более 80% активных димеров и олигомеров. Время от времени на рынке появлялись другие коммерческие «очищенные» формы Фотофрина, они включали: Фотокарцинорин (Китай), Фотосан (Германия), Фотогем (Россия) и Гематодрекс (Болгария). Преимуществами Фотофрина являются простота изготовления из широко доступных веществ; бесспорная эффективность в качестве фотосенсибилизатора при ФДТ .
Однако, как позже выяснилось фотосенсебилизаторы первого поколения (фотофрин, фотогем, и др.) обладали рядом недостатков:
Их фотодинамическая активность не значительна; препараты недостаточно селективен, а фотосенсибилизация нормальной кожи продолжается в течении нескольких недель;
Они хуже, чем в других областях спектра, поглощает в красном диапазоне (примерно при 630 нм).[89] Второе поколение фотосенсибилизаторов представлено рядом разработок в основе которых лежат различные комплексы- на основе Хлорина е6, например- "Фотодитазин". "Фотодитазин" фактически не токсичен (LDGO-168 мг/кг при терапевтической дозе 0,7-1,4 мг/кг), имеет полосу поглощения 662 нм (при этом фотодинамический эффект может развиваться в тканях на глубине до 1,7-2 см) с достаточно высоким квантовым выходом синглентного кислорода, обладает высокой тумаротропностью превышение содержания по отношению к здоровой ткани в 8-19 раз.
"Фотодитазин" в отличие от фотосенсибилизаторов первого поколения доказано вызывает минимальное повреждение окружающих тканей при фотодинамической терапии. Другим немаловажным преимуществом является минимальная фотосенсибилизация кожи, что практически исключает вероятность возникновения ожогов, вызванных солнечным светом.
По данным Толстых П.И.[95]препарат "Фотодитазин" выводится из организма за период не более чем 26 часов, что так же является немаловажным аспектом в фотодинамической терапии. Данный фактор влияет на качество жизни пациента. Чем дольше фотосенсибилизатор находится в организме пациента, тем дольше пациент вынужден соблюдать ограничения, направленные на исключение возникновения побочных эффектов после проведения ФДТ . Необходимо сказать, что, по мнению некоторых авторов, применение "Фотодитазин"а в лечении злокачественных заболеваний эффективно в 62-83 % в зависимости от стадии и вида заболевания. Подобных исследований фармакокинетики "Фотодитазин"а и других известных фотосенсибилизаторов второго поколения для лечения гнойных процессов не проводилось в единичных случаях при лечении ожоговых ран. [40] При исследовании механизмов реакции in vivo, протекающих в организме в процессе процедуры ФДТ и после ее завершения установлено, что в дополнении к прямому повреждению мембран и других клеточных структур свободными радикалами, происходит выделение клетками воспалительных и иммунных медиаторов[. Среди них идентифицированные цитокины ИЛ6, ИЛ2, фактор некроза опухолей, гранулоцитарный колониестимулирующий фактор, факторы роста и другие иммуннорегуляторы, компоненты коскадокомплемента, вазоактивные субстанции Все вышеперечисленные компоненты запускают цитохимическую реакцию, которая в конечном итоге приводит к апаптозу клеток.
Воспалительный процесс в окружающих тканях может способствовать формированию эффективного иммунного ответа. Среди вариантов иммунного ответа может присутствовать противовирусный, противомикробный, противоопухолевый.
Стоит отметить, что выраженного положительного влияния на течение гнойных процессов при применении фотосенсибилизаторов первого поколения отмечено не было. С появлением фотосенсибилизаторов второго поколения ситуация с лечением воспалительных процессов несколько изменилась, однако отдельного, целенаправленного исследования влияния ФДТ с использованием фотосенсибилизаторов второго поколения на гнойные процессы в мягких тканях долгое время не проводилось. В литературе существовали отдельные разрозненные публикации, в которых высказывалось, что постулаты на которых основана ФДТ злокачественных новообразований может быть применена и при лечении гнойно-воспалительных поражений мягких тканей..
Результаты бактериологического исследования
После окончания облучения поверхность кольца снова укрывали пленкой. Процедуру повторяли на 3-и сутки после нанесения раны. На 4-е сутки после нанесения раневого дефекта и его инфицирования (следующие сутки после последнего сеанса ФДТ ) животных выводили из эксперимента внутрибрюшинным введением 2,0 мл 25% раствора сернокислой магнезии. Тефлоновые ограничительные кольца удаляли из ран и полностью иссекали ткань, заполняющую рану на всю глубину до собственной фасции, без кожи (рис.7) Изъятый биоптат направляли для дальнейшего гистологического изучения.
Методика гистологических исследований. Изъятый материал фиксировали в 10% растворе нейтрального (забуференного) формалина. После 3-х суток фиксации из биоптата (вдоль диаметра от края до края иссечённого пласта ткани) вырезали полоску щириной 0,5-0,6 см и заливали в парафиновые блоки по стандартной методике. Парафиновые срезы 4-5 микрон окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван-Гизону (для выявления коллагеновых волокон). Полученные микропрепараты изучали с использованием светового микроскопа Olympus BX51 (Olympus, Япония), оснащенного цифровой видеокамерой SDU-252 («Спецтелетехника», Россия). Изображения, полученные с помощью камеры, сохраняли в формате Tiff (16 bit).
При просмотре микропрепаратов получали изображения не менее 5 полей зрения в каждом препарате. Затем, с помощью программы Adobe Photoshop CS3 проводили измерения толщины слоя грануляционной ткани в нескольких точках в каждом из полей зрения. Для преобразования единиц измерения использовали заранее определенные с помощью объект-микрометра геометрические коэффициоенты, устанавливающие для каждого из объективов микроскопа соотношение между числом пикселей изображения и физическим размером измеряемых объектов. Полученные данные обрабатывали статистически. Методы статистической обработки
Статистический анализ проводили с использованием стандартного пакета программ SPSS for Windows 13.0. Анализировали частоту встречаемости оценок признаков у животных разных групп с использованием таблиц сопряженности. В зависимости от формы таблиц сопряженности, а также распределения значений по полям таблиц, для оценки наличия связи между режимом воздействия и выраженностью морфологических признаков использовали критерии хи-квадрат Пирсона, V Крамера. Корреляционные связи анализировали с применением коэффициента корреляции Пирсона (Rs). Сравнение выраженности морфологических признаков у животных разных групп проводили с помощью непараметрических тестов для нескольких независимых выборок (тест Краскела-Уоллиса, KW) и путем попарного сравнения групп (тест Манна-Уитни, MW), при условии выявления существования статистически значимых различий на этапе группового сравнения (KW). Уровень значимости различий p был принят равным 0,05. Во всех случаях использовали двусторонние тесты.
Исследования выполнены под руководством проф.А.Б.Шехтера на базе лаборатории экспериментальной медицины НИИ Молекулярной медицины Первого МГМУ им.И.М.Сеченова.
Микробиологические исследования имели целью установить степень локальной антабактериальной активности ФДТ с различными фотосенсибилизаторами в отношении раневой микрофлоры. Исследования проводили в дни сеансов ФДТ (на 1-е и 3-и сутки после нанесения и инфицирования раны). Перед проведением засветки из каждой раны были взяты мазки с целью определения инициальной микробной обсемененности. Порядок проведения исследования. Количественный бактериальный контроль проводили при помощи метода Е.D. Rotheram. Кожу вокруг раны, выступающие бортики ограничительного кольца и покрывающую его защитную пленку обрабатывали тампоном, смоченным 70% этиловым спиртом или другим антисептиком. После высыхания дезинфектанта с поверхности кольца снимали защитную пленку. Если в полости кольца присутствовал экссудат, раневой детри, их избыток удаляли стерильным марлевым тампоном. После этого на раневую поверхность внутри кольца стерильным инструментом помещали стерильную марлевую салфетку размером 1,0х1,0 см, слегка прижимая её ко дну раны. Салфетку, пропитанную раневым отделяемым, соблюдая стерильность, помещали в пробирку, содержащую 1,0 мл стерильного физиологического раствора. Смыв с тампона в разведениях в 1:100 и 1:1000 (по 0,1 мл) засевали на плотную питательную среду Brain Heart Infusion Agar (Himedia) без добавок. Чашки с посевами выдерживали в термостат при температуре 37С в течение 48 часов, после чего проводили подсчёт проросших колоний микроорганизмов.
Количественно фактическую бактериальную обсеменённость (с учётом разведений и объёма высеваемого смыва) оценивали числом колониеобразующих единиц в 1,0 миллилитре смыва – КОЕ/мл.
Статистическую обработку параметрических данных проводили с помощью парного критерия Стьюдента к логарифмированным значениям КОЕ/мл, с последующей поправкой Холма-Бонферрони.
Колонии разных морфологических типов исследовали с помощью световой микроскопии мазков, окрашеннвх по Граму. Идентификацию микроорганизмов, отсутствовавших в изначальной смеси бактерий, используемых для получения модели инфицированной раны, проводили, используя времяпролетную масс-спектрометрию с матрично-активированной лазерной десорбцией/ионизацией на приборе Vitek MS (bioMerieux). С целью изучения реактивного влияния ФДТ и отдельных из изучаемых фотосенсибилизаторов (в частности комплекса «фотодитазин плюроник с наночастицами золота) на раневую микрофлору материал для посевов отбирали перед засветкой до аппликации фотосенсибилизатора и сразу после засветки. А в группе IV, где использован комплекс «фотодитазин-плюроник с наночастицами золота», посевы отбирали перед аппликацией, через 15 минут экспозиции комплекса на ране (для выявления антибактериальной активности самого комплекса) и сразу после засветки. Исследования проводили на кафедре микробиологии РГМУ им.Н.И.Пирогова.
Статистические результаты клинических наблюдений
Лечение гнойных ран мягких тканей является одним из наиболее важных и востребованных направлений практической хирургии. В связи с недостаточной эффективностью и длительностью сроков лечения большинства традиционных методов возникает острая необходимость разработки новых более эффективных методов лечения данной патоологии. В настоящее время В России, так же как и во всём мире интенсивно развивается новая технология - фотодинамическая терапия. Данная методика может применятся во множестве различных областей медицины. ФДТ с фотосенсибилизаторами первого поколения доказала свое положительное воздействие на течение раневого процесса -это проявляется в выраженном антибактериальном действии, ускорении очищения ран от гнойно некротического детрита, стимуляции репаративного процесса. Однако фотосенсибилизаторы (ФС) первого поколения имеют ряд существенных недостатков. Это привело к появлению фотосенсибилизаторов второго поколения, самыми перспективными из которых являются фотосенсибилизаторы на основании солей хлорина Е6. ФС второго поколения лишены большинства минусов первого поколения, но не смотря на значительный прогресс одной из серьёзных проблем ФДТ при лечении различных заболеваний остаётся повышение селективности накопления фотосенсибилизаторов в пораженных органах и снижение терапевтической дозы вводимых препаратов. Для решения данной проблемы разрабатываются новые программы проведения ФДТ , а так же разрабатываются новые комплексы на основе фотосенсибилизаторов второго поколения. В этой связи перспективным способом применения ФДТ может оказаться использование фотосенсибилизатора в виде комплексов с низкотоксичными амфифильными полимерами, плюрониками, или наночастицами. В связи с чем, была сформулирована цель исследования: Улучшить результаты лечения больных с гнойными ранами мягких тканей, путем использования местной фотодинамической терапии с фотосенсибилизаторами хлоринового ряда фотодитазином комплексированным с различными полимерами. Для решения поставленных задач были проведены экспериментальные исследования. Эксперимент был разделен на два этапа: in vitro и in vivo.
Задачей первой части эксперимента было подобрать наиболее подходящие для проведения модернизации водного раствора фотодитазина стандартно применяемого при проведении ФДТ гнойных ран мягких тканей. По итогам эксперимента in vitro было доказано, что наиболее перспективными для дальнейшего исследования являются комплексы: комплекс фотодитазин с плюроником F127; комплекс фотодитазин -хитозан; комплекс фотодитазин , плюроник F127, КМЦ и наночастицами золота. Так же в ходе первой части эксперимента были определены оптимальные концентрации фотосенсибилизаторов, позволяющих достичь максимальной эффективности ФДТ . Вторая часть эксперимента проводилась in vivo. Экспериментальные исследования на моделях гнойных, ран у крыс выполнены на 105 беспородных крысах-самцах в возрасте 2,5-3 месяца со средней массой тела 250 ± 20 г). Экспериментальные исследования выполнены в соответствии с принципами Европейской конвенции (Страсбург, 1986) и Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации о гуманном обращении с животными (2000), требования приказа №267 МЗ РФ от 19.06.2003 «Правила по обращению, содержанию, обезболиванию и умерщвлению экспериментальных животных». Все животные содержались в одинаковых условиях виварного режима, прошли карантинный отбор и были разделены на две серии опытов.
В первой серии опытов изучали антимикробную эффективность местного использования метода ФДТ с комплексом фотодитазин - плюроник F127; комплекс фотодитазин - хитозан; фотодитазин - плюроник F127, КМЦ и наночастицы золота по сравнению с традиционным лечением и применением стандартной ФДТ с фотодитазином. В данной части эксперимента было использованы крысы n=30 которые в свою очередь были разделены на пять групп в зависимости от варианта производимого лечения. в каждой группе было по 6 крыс. При лечении экспериментальных гнойных ран у крыс исследуемыми методами придерживались следующей тактики. Гнойные раны животных промывали растворами антисептиков и затем накладывали салфетку, смоченную раствором фотосенсибилизатора, исходя из экспериментальной группы (в контрольной группе смоченным в растворе хлоргексидина). Через 60 минут производили засветку раневой поверхности у водного раствора фотодитазина, для других препаратов время экспозиции, было выбрано с учетом проведенного лабораторного эксперимента на молекуле триптофана и составляло 45 минут. Повторную процедуру нанесения препаратов и засветки производили на третьи сутки с момента первой обработки раны ФДТ ран.
В данной серии опытов изучали микробную обсемененность раны в динамике, до и после воздействия ФДТ на рану. Для оценки использовался микробиологический метод оценки. Во втором этапе эксперимента производили оценку влияния ФДТ на скорость заживления экспериментальных гнойных ран.
Все крысы (n=75) были так же разбиты на четыре опытные и одну контрольную группы. В каждой группе было по 15 крыс. Для лечения экспериментальных гнойных ран применялась методика описанная в первой серии опыта. Макроскопическую оценку течения раневого процесса у экспериментальных животных производили с учетом продолжительности и выраженности воспалительных явлений в области раны (отек, гиперемия, инфильтрация окружающих тканей, количество и характер гнойного отделяемого, сроки появления грануляции состояние дна и стенок раны, эпителизации, , сроки отторжения струпа и полного заживления). В данной серии опытов мы использовали метод клинических наблюдений за раневым процессом, планиметрический, , морфологический и гистологический.
![Комплексное лечение огнестрельных ран мягких тканей перевязочными средствами на основе микрокапсулированной формы \Na-токоферола и фотодинамической терапии [Электронный ресурс]](/i/i/4326/192694.png "Комплексное лечение огнестрельных ран мягких тканей перевязочными средствами на основе микрокапсулированной формы \Na-токоферола и фотодинамической терапии [Электронный ресурс] Магомедов Магомед Алиевич")
