Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Теоретические и практические аспекты лечения гнойных ран 8
Глава 2. Материалы и методы исследования 26
Глава 3. Комплексная оценка физико-механических, антиоксидантных и антибактериальных свойств нового раневого покрытия ДАЦ-трипсин-мекси до л- диэтон 38
Глава 4. Результаты лечения экспериментальных гнойных ран .. 57
Заключение 104
Выводы 112
Практические рекомендации 114
Список литературы 115
- Теоретические и практические аспекты лечения гнойных ран
- Материалы и методы исследования
- Комплексная оценка физико-механических, антиоксидантных и антибактериальных свойств нового раневого покрытия ДАЦ-трипсин-мекси до л- диэтон
- Результаты лечения экспериментальных гнойных ран
Введение к работе
Актуальность проблемы. Для лечения гнойных ран за последние 10-20 лет предложен увеличивающийся арсенал медикаментозных средств, бесчисленное количество методов и способов (В.К.Гостищев, 1997; В.А.Дербенев, 1990; В.А.Карлов, 1986 и др.). В то же время, не подвергая сомнению саму целесообразность этих методов, способов и средств воздействия на регуляцию воспаления и регенерацию, на борьбу с хирургической инфекцией, необходимо признать, что результаты этих усилий довольно скромны - длительные сроки лечения гнойных ран и число послеоперационных гнойных осложнений колеблется от 5 до 50% после плановых и экстренных оперативных вмешательств (В.К.Гостищев, 1973; В.А.Дербенев, 1990; В.А.Карлов, 1986; P.Tolstikh, 1982 и др.). Для улучшения результатов лечения гнойных ран многие современные исследователи (М.А.Евсеев и соавт., 2001; Ю.В.Стручков и соавт., 2001; Б.С.Брискин и соавт., 2001 и др.) предлагают прежде всего рационально использовать антибиотики с учетом риска развития хирургической инфекции, а также другие антибактериальные средства, исходя из постулата, что борьба с микроорганизмами, вегетирующими на раневой поверхности и тканях раны, патогенетически оправдана и целесообразна (М.И.Кузин и соавт., 1983; А.Б.Ларичев, 1998 и др.). Однако, анализируя сложившуюся ситуацию, приходится признать, что роль микробного фактора в нарушении заживления ран несомненно существует, но её значение до конца не изучено. Об этом свидетельствуют исследования M.D.Levenson et al. (1983), которые убедительно показали, что замедление заживления ран связано как раз с отсутствием микробного фактора и для усиления процесса заживления ран необходимо в рану вводить микроорганизмы, и, в частности, золотистый стафилококк (Levenson M.D., 1983). В этой связи необходимо отметить, что современные исследования о развитии воспаления и его регуляции, тесно связанных с регенерацией, нельзя представить без воздействия на свободнорадикальные реакции (СРР), активные формы кислорода, перекисное окисление липидов (ПОЛ), на инактивацию белков и нуклеиновых кислот (VladimorovY.A., 1986; Weiss J.J., 1994 и др.). В связи с чем для местного лечения гнойных ран стали применять ферменты протеолиза и антиоксиданты по отдельности или в сочетании с антисептиками (Г.П.Толстых, 1995; Ю.В.Климов, 2000 и др.) - ос-токоферолом, каротиноидами, флавоноидами и другими, в подавляющем большинстве являющиеся гидрофобными соединениями, способными к взаимодействию с радикалами, локализованными в основном в гидрофобной зоне мембран и липопротеидов (Г.И.Клебанов и соавт., 2001). Эффективность применения гидрофобного антиоксиданта (диэтона) была продемонстрирована Г.П.Толстых (1995) на примере экспериментальной гнойной раны, которая значительно превосходила действие трипсина и других антиоксидантов, например а-токоферола и флавоноидов, иммобилизованных на поликапроновом полотне (Г.П.Толстых, 1995). Гидрофильные антиоксиданты, лучше назвать ингибиторы СРР и их различных компонентов, в практической медицине стали применяться только в последние годы (Ю.В.Климов, 2000; А.С.Тепляшин, 2000). Гидрофобные и гидрофильные антиоксиданты в сочетании с ферментами протеолиза, до настоящего времени для лечения гнойных ран не применялись.
В связи с чем нами была поставлена цель - улучшить результаты лечения гнойных ран с помощью применения новых раневых покрытий с антиоксидантной и протеолитической и активностью.
Для реализации данной цели необходимо было решить следующие задачи:
1. Разработать раневые покрытия с антиоксидантным и протеолитическим действием с использованием методов макромолекулярного моделирования и изучить их физические, санитарно-гигиенические свойства и провести токсикологические испытания.
2. Изучить в эксперименте in vitro антиоксидантную активность мексидола и диэтона, входящих в состав раневых покрытий.
3. Изучить в эксперименте влияние новых раневых покрытий с антиоксидантной активностью в отдельности и в сочетании с протеолитической активностью на течение раневого процесса.
4. Дать сравнительную оценку эффективности воздействия раневых покрытий с антиоксидантной и протеолитической активностью на течение раневого процесса и скорость заживления ран по данным планиметрических, цитологических, гистологических и гистохимических исследований.
5. Научно аргументировать и дать рекомендации о целесообразности применения новых раневых покрытий с антиоксидантной и протеолитической активностью для лечения гнойных ран мягких тканей.
Научная новизна
Впервые было создано новое раневое покрытие на основе трипсина, иммобилизованного на диальдегидцеллюлозе, мексидола и диэтона для лечения гнойных экспериментальных ран (подана заявка №20001988/14 (090696) на изобретение, получено решение о признании материалов заявки изобретением и выдаче патента) и по экспериментальным данным была обоснована и подтверждена эффективность использования раневых покрытий с антиоксидантной и протеолитической активностью для профилактики нарушений заживления гнойных ран (патент RU 2203684 CI).
Впервые была доказана возможность совместной иммобилизации ферментов протеолиза с другими классами биологически активных веществ, применение которых эффективно воздействует на воспалительный процесс в гнойных экспериментальных ранах.
Доказано, что соиммобилизация протеолитического фермента трипсина с лекарственными средствами, обладающими антиоксидантной активностью, приводит к взаимному усилению специфического действия каждого из компонентов, причём совместный лечебный эффект этого сочетания выше, чем сумма эффектов каждого лекарственного средства при их раздельном применении.
Впервые доказано, что раневые покрытия с антиоксидантной и протеолитической активностью не обладают токсическим и гемолитическим эффектом.
Впервые изучено влияние нового раневого покрытия на клинические штаммы микроорганизмов, неспорообразующие анаэробы и микробные ассоциации, полученные от больных с гнойными ранами. На основании физических, морфологических, микробиологических и патофизиологических исследований дана оценка лечебной эффективности нового раневого покрытия с трипсином, мексидолом и диэтоном в сравнении с трипсин-диэтоном, трипсином, трипсин-мексидолом и доказана перспективность его использования для лечения гнойных ран.
Практическая значимость работы
Разработан новый метод лечения гнойных экспериментальных ран с использованием текстильных материалов, трипсина и антиоксидантов (мексидола и диэтона).
Новые изделия разрешены Минздравом России к медицинскому применению и серийному выпуску, получены регистрационные удостоверения и сертификаты соответствия.
Апробация работы
Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на научно-практической конференции «Проблемы неотложной помощи в клинической практике» (2001), выставке «Скорая помощь-2002», на VI Всероссийской конференции с международным участием «Раны и раневая инфекция», Москва 2003, на семинаре инновационных научно-технических проектов «Биотехнология-2003».
Структура и объём диссертации
Диссертация изложена на 134 страницах машинописного текста и состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Имеет 14 таблиц и 44 рисунка. Указатель литературы включает 173 работы, в том числе 129 отечественных и 44 зарубежных авторов.
Теоретические и практические аспекты лечения гнойных ран
В лечении гнойных ран, несмотря на многовековую историю, существует много спорных и до конца не решенных вопросов. Большое количество методов и способов лечения, громадный и все увеличивающийся арсенал медикаментозных средств воздействия на регуляцию воспаления и регенерацию не решают проблему заживления ран. Более того, результаты их лечения до настоящего времени остаются неудовлетворительными с точки зрения современных требований к теории и практике заживления ран (24 Конгресс Международного общества хирургов, 28-32 Всесоюзные съезды хирургов, 1-2 Всесоюзные Конференции по ранам и раневой инфекции, 1998, 1999; первый Белорусский Международный Конгресс, 1996, Международный хирургический Конгресс в Тель-Авиве, 1994, 1996, 1998, 2000 гг.).
Такое пристальное внимание к проблеме лечения гнойных заболеваний объясняется широким их распространением, диагностируемых почти у трети всех хирургических больных (В.И.Стручков, 1982, 1985; В.А.Стручков и соавт., 1983, 1984; В.А.Дербенев, 1990; Э.В.Луцевич и соавт., 1989 и др.), большим количеством послеоперационных гнойных осложнений - от 5 до 50% после плановых и экстренных оперативных вмешательств (В.А.Карлов, 1986; Б.М.Костюченок и соавт., 1981, 1985, 1986; Ю.Г.Шапошников и соавт., 1988; Ehzenkranz et al., 1981; Grundamann R. Et al., 1981; Tolstykh P. et al., 1982). Такое большое количество гнойных заболеваний объясняется отчасти изменением иммунобиологической реактивности человека в результате массовых прививок, различных лекарственных препаратов и, в частности, антибиотиков (В.Н.Гончаренко, 1997). В связи с этим, во всех странах мира отмечаются значительные изменения в структуре возбудителей гнойной инфекции (М.П.Толстых, 1999). На первое место вышли стафилококки и различные грамм-отрицательные бактерии из семейства Enterobacteriaceal и ряда Pseudomonae (Э.А.Петросян, 1991; И.И.Затевахин, 1988; Berridge D.C., 1988) и ассоциации бактериальных патогенов, приводящих к более длительному и тяжелому течению раневого процесса (М.И.Кузин и соавт., 1981, 1983). Вот почему все усилия врачей направлены в первую очередь на борьбу с хирургической инфекцией путем широкого применения, как уже упоминалось выше, антибиотиков (В.К.Гостищев, 1997; В.М.Буянов и соавт., 1992; Aylitt G.A.J, et al., Brandberg et al., 1991, Culver D.Y. et al., 1991; Classen D.C. et al., 1992; Lidwell O.M. et al., 1983; Ledger W.J. et al., 1975; Meijer W.S. et al., 1993; Piatt R. Et al., 1990 и др.) в зависимости от клинической ситуации, факторов риска и фармакологической обстановки (И.В.Ахмедов, 1999; А.М.Светухин и соавт., 1996; Folsom D.L. et al., 1995 и др.). Однако, эта борьба с микробной агрессией не всегда была успешной. Более того, имеются сообщения, что число нарушений заживления ран под влиянием антибиотиков увеличивается (С.М.Кузнецова и соавт., 1984, 1994; А.А.Шалимов и соавт., 1981; Л.В.Большаков, 1992; А.М.Дронова и соавт., 1994; Г.Н.Цыбуляк, 1995; Т.А.Васина и соавт., 1996; Nord С. et al., 1984). К счастью эти сообщения единичны (М.П. Толстых, 1999). Тем не менее этот факт требует научной аргументации. Суть данного феномена заключается по нашему мнению в следующем: регуляция воспаления и регенерации сопровождается активацией свободнорадикальных реакций (ССР), перекисного окисления липидов (ПОЛ), инактивацией белков и нуклеиновых кислот (Vladimirov Y.A.,1986; Г.И.Клебанов и соавт., 1999). Уровень этих реакций определяется многими факторами, в том числе и степенью продукции активных форм кислорода (Ю.В.Климов, 2000; Weiss J.J., 1994) и уровнем активности сбалансированной системы эндогенной антиоксидантной защиты (П.И.Толстых и соавт., 1998; Davies К.J., 1995). Антибиотики, как известно, не оказывают прямого влияния на эти процессы и поэтому не могут служить методом патогенетической терапии гнойно-воспалительных заболеваний (А.С.Тепляшин, 2000; Ю.В.Климов, 2000 и др.). События, связанные с СРР в процессе заживления ран и "свободнорадикальными болезнями" нашли в иностранной литературе довольно полное отражение (Shukia F. Et al., 1997; Pakton T.P. et al., 1995; Hallberg C.K. et al., 1995; Toczolowski J. et al., 1992; Niwa Y., 1989; Senel O. et al., 1997; Salim A.S., 1990; Arisawa S. et al., 1996; Tissot M. et al., 1990; Gorturk et al., 1995; Foschi D. et al., 1988; Weinstein G.S. et al., 1989 и др.).
Согласно этим сообщениям, субстратом для СРР перекисного окисления липидов (ПОЛ) являются ненасыщенные жирные кислоты (НЖК), входящие в состав фосфолипидов клеточных мембран и липопротеидов плазмы крови (Г.И.Клебанов и соавт., 2000). Окисление НЖК называется перекисным, потому что основным стабильным первичным продуктом этого процесса являются ROOH (Ю.А.Владимиров и соавт., 1972; Г.И.Клебанов и соавт., 2000). В результате происходит разрушение молекул фосфолипидов, так называемая перекисная деградация, что в свою очередь ведет к повреждению клеточных мембран, увеличению ионной проницаемости и нарушению их барьерной функции, падению трансмембранных потенциалов, усилению синтеза АТФ в митохондриях и, в конце концов, к гибели клеток (Ю.А.Владимиров и соавт., 1972; А.Н.Климов, 1987; М.В.Шубин и соавт., 1975 и др.).
Анализируя вышеизложенное, естественно возникает вопрос, чем же можно приостановить или направить по другому направлению СРР, приводящие к развитию "радикального" повреждения клеток. В природе эта агрессия останавливается за счет постоянного функционирования согласованной системы биоокислителей и хелаторов ионов металлов переменной валентности — биоантиокислителей, способных тормозить или устранять СРР органических веществ молекулярным кислородом (П.И. Толстых и соавт., 2001).
Материалы и методы исследования
Все экспериментальные исследования были разделены на 2 группы:
1. Исследования физико-химических, антибактериальных и антиоксидантных свойств нового раневого покрытия с трипсином, мексидолом и диэтоном in vitro.
2. Исследования эффективности нового раневого покрытия с трипсином, мексидолом и диэтоном in vivo.
Исследования in vivo выполнены на 100 крысах-самцах массой 203 ± 19г. В зависимости от применяемого перевязочного материала все крысы были распределены на 5 групп: 3 основных и 2 контрольных. В первой основной группе (п=20) покрытие гнойной раны производилось диальдегидцеллюлозой с трипсином, мексидолом, диэтоном, во второй - диальдегидцеллюлозой-трипсином, мексидолом в третьей - диальдегидцеллюлозой-диэтоном, в четвёртой (1 контрольная группа) - диальдегидцеллюлозой-трипсином и в пятой (2 контрольная группа) - диальдегидцеллюлозой.
Распределение животных по группам в зависимости от применяемых раневых покрытий представлено в таблице 3. Таблица 3. Распределение животных по группам в зависимости от применяемых раневых покрытий Исследуемые перевязочные материалы Группы животных Количество крыс в каждой группе основные Диальдегидцеллюлоза-трипсин-мексидол-диэтон 1 20 ДАЦ-трипсин-мексидол 2 20 Диальдегидцеллюлоза-трипсин-диэтон 3 20 контрольные Диальдегидцеллюлоза-трипсин 4 20 Диальдегидцеллюлоза 5 20
Новое раневое покрытие диальдегидцеллюлоза-трипсин-мексидол-диэтон было создано совместно с канд. мед. наук Е.О. Медушевой и защищено патентом РФ в 2003 г. Для этой цели были использованы разные режимы иммобилизации. Учитывая нерастворимость в воде диэтона, обработка данным антиоксидантом целлюлозного носителя проводилась в растворе диметилсульфоксида. Последующая иммобилизация трипсина проводилась из водного раствора. Материал был разделён на две части, раствор для иммобилизации использовался повторно. Результаты анализа показали предпочтительность использования первичного раствора для иммобилизации. Протеолитическая активность (ПА) равнялась 0,31 ПЕ/г и 0,22 ПЕ/г соответственно.
Соиммобилизация трипсина и мексидола проводилась параллельно из водного раствора. Протеолитическая активность перевязочного материала с трипсином и мексидолом составила 0,55 ПЕ/г и 0,54 ПЕ/г (повторное использование раствора для иммобилизации).
Оценка протеолитической активности проводилась по ФС 42-3008-99 на "дальцекс-трипсин", согласно которой активность иммобилизованного трипсина должна быть не менее 0,1 ПЕ/г материала. Как видно из приведённых данных, протеолитическая активность полученных материалов значительно превышает ферментативную активность трипсина в монопрепарате, то есть в подобранной нами композиции трипсин-мексидол-диэтон отмечается синергизм фермента протеолиза (трипсин) и антиоксидантов мексидол и диэтон.
По всей видимости, можно предположить, что на протеолитическую активность в монопрепарате оказывал отрицательное влияние диметилсульфоксид и, следовательно, использование в данной биосистеме антиоксидантов мексидол и диэтон в сочетании с протеолитиком трипсином более целесообразно. Проведённые исследования in vitro позволяют надеяться на благоприятный прогноз при экспериментальном изучении полученных материалов.
Эксперименты выполнены в соответствии с приказом №755 МЗ СССР от 12.08.77. Модель гнойной раны воспроизводилась в условиях общего лекарственного наркоза (Sol. Ketamini hydrochloridi 0,05% - 0,4ml + Sol. Relanii 0,2ml). В помещении поддерживалась постоянная температура 20С. Режим содержания и питания животных был одинаков во всех группах.
Плоскостную кожно-мышечную рану получали по методике Николаева А.В. (1979) в модификации М.П. Толстых (1999). Суть метода состоял в следующем: предварительно сбривали в межлопаточной области шерсть, обрабатывали спиртовым раствором йода кожу, а затем, иссекали кожно-фасциальный лоскут в виде квадрата 2x2см (400мм ). Дно раны раздавливали зажимом Кохера. Для предупреждения контракции раны к краям её подшивали пластмассовую рамку с полиэтиленовым "капюшоном" для удержания перевязочного материала и предупреждения высыхания раневой поверхности. Затем рану инфицировали 1мл суточной взвеси культуры Staphylococcus aureu о и Pseudomonas aeruginosa 1мл взвеси -10е КОЕ. Через 48 часов развивалась картина гнойного воспаления. С этого времени начинали местное лечение ран животных. Лечебные салфетки адаптировались на раневую поверхность на 1-2 дня. В среднем на одно животное использовали 3-4 апликации салфеток. Орошение салфеток производилось физиологическим раствором. Крыс забивали декапитацией на 3, 7, 14, и 21 сутки. Планиметрические исследования выполняли на 15, 20, 25 сутки. Для определения площади раны контуры раны обводили на стерильном стекле, прижатом к поверхности раны, а затем переносили на миллиметровую бумагу. Относительное уменьшение раневой поверхности в основной группе по отношению к контрольным- исследовалось по методике, предложенной Л.П. Поповой (1942). (Si) где Si - площадь раны в контрольной группе, S2 - площадь раны в основной группе животных, лечение которых осуществлялось новым раневым покрытием ДАЦ-трипсин-мексидол-диэтон. Скорость заживления экспериментальных гнойных ран исследовалась по формуле: где tj - время полного заживления ран в 2-5 контрольных группах, (О t2 - время полного заживления в основной группе. Данное исследование проводилось совместно с докт. мед. наук М.П. Толстых и канд. мед. наук Е.О. Медушевой.
Комплексная оценка физико-механических, антиоксидантных и антибактериальных свойств нового раневого покрытия ДАЦ-трипсин-мекси до л- диэтон
Нами произведены комплексные исследования гигроскопических свойств нового раневого покрытия, обладающего протеолитической, антиоксидантной и антибактериальной активностью-ДАЦ-трипсин-мексидол-диэтон. При этом проводили сравнительный анализ с медицинской марлей. В новом раневом покрытии ДАЦ-трипсин-мексидол-диэтон степень окисления медицинской марли составила 2%, содержание трипсина - 0,07 мг, мексидола - 1,8-2,2мг, диэтона - 30 мг на 1см . Результаты исследования сравнивали с показателями для исходной марли, не окисленной и не содержащей биологически активных веществ. Водопоглощение ДАЦ-трипсин-мексидол-диэтона составляло 57,1 ±2,0 % против 67,0±5,0 % медицинской марли. ДАЦ-трипсина 68,0±5,0 %; ДАЦ диэтона - 66,0±5,9 %; ДАЦ-мексидола - 66,±5,8 %. Различие между основной группой и 3 контрольной (медицинской марлей) статистически достоверно (р 0,05). Таблица 4. Сравнительная характеристика гигиенических свойств раневых покрытий с антиоксидантной активностью Исследуемые материалы Водопоглощение в % Капиллярность в мм ДАЦ-трипсин-мексидол-диэтон 57,1±2,0 112,4±1,4 ДАЦ-мексидол 66,1±5,8 95,0±2,0 ДАЦ-диэтон 66,0±5,9 94,0±2,2 ДАЦ-трипсин (контроль 1) 68,0±5,0 96,0±1,8 Диальдегидцеллюлоза (контроль 2) 68,0±2,0 95,0±1,6 Мед марля (контроль 3) 67,0±3,8 94,0±2,0
Улучшение показателей водопоглощения в новом раневом покрытии было связано с введением в него белка трипсина и водорастворимого антиоксиданта мексидола (см. таблицу 4).
Воздухопроницаемость ДАЦ-трипсин-мексидол-диэтона по сравнению с медицинской марлей снижалась с 2170±50 дм3/м2»с до 1995+53 дм3/м2 с. Жёсткость при изгибе в ДАЦ-трипсин-мексидол-диэтоне (320±52 мкн/см2 по длине и 415±48 мкн/см по ширине).
Таким образом, иммобилизация трипсина и антиоксидантов на марле практически не изменяют механических характеристик ДАЦ-трипсин-мексидол-диэтона, а гигроскопические свойства улучшаются. Аналогичные результаты были получены М.П. Толстых (1999) при изучении гигиенических и механических свойств ДАЦ-трипсина, ДАЦ-трипсина-серебра и медицинской марли (М.П. Толстых, 1999).
Нами проведена комплексная оценка антибактериальных свойств биологически активных раневых покрытий (ДАЦ-трипсина, ДАЦ-мексидола, ДАЦ-трипсин-мексидола, ДАЦ-трипсин-диэтона, ДАЦ-трипсин-мексидол-диэтона) in vitro. Антибактериальную активность in vitro оценивали по действию нативных и иммобилизованных трипсина и антиоксидантов (диэтона и мексидола) на музейные и клинические штаммы тест-культур. При исследовании антибактериальных свойств на музейных тест-штаммах Staphylococcus aureus-209, Escherichia coli-125, Clostridium perfringer-235 оказалось, что содержащие мексидол раневые покрытия ДАЦ-трипсин-мексидол, а также ДАЦ-триписин-мексидол-диэтон подавляют данные штаммы микробов на 50-75%. В то же время ДАЦ-трипсин, ДАЦ-диэтон и ДАЦ-трипсин-диэтон не оказывают на эти микроорганизмы заметного воздействия. Результаты исследования антибактериального эффекта различных раневых покрытий представлены в таблице 5.
В первой серии экспериментов антиоксидантные свойства изучали с помощью модельной системы на основе суспензии многослойных липосом, сформированных в трис-HCl буфере, инициацию перекисного окисления липидов в которых осуществляли раствором сернокислого железа, а детектирование индукции СРР — методом активированной производным кумарина С-525 хемилюминесценции.
Хорошо известно, что введение в систему структурированных липидов (мембраны, липопротеиды) ионов двухвалентного железа вызывает развитие характерной кинетики хемилюминесценции, в которой можно выделить несколько стадий: быстрая вспышка, латентный период и медленное свечение.
Ранее в работах Ю.А. Владимирова было показано, что интенсивность быстрой вспышки ХЛ (И) при определённых условиях пропорциональна концентрации т.н. предсуществующих гидроперекисей (ROOH), которые образовались в системе по ряду причин до введения Fe2+. Длительность латентного периода (t) зависит от времени достижения т.н. "критической" концентрации ионов двухвалентного железа в системе, которое в свою очередь определяется вкладом веществ, влияющих на окисление и/или элиминацию (хелатирование) Fe . Интенсивность (Я) или светосумма медленного свечения определяется скоростью СРР, протекающих в гидрофобной фазе мембран или липопротеидов, и способностью ингибиторов к перехвату липидных радикалов.
Добавление мексидола, либо диэтона к суспензии фосфолипидных липосом показало, что все исследуемые вещества ингибировали амплитуду медленной вспышки ХЛ. Мерой эффективности ингибирования окисления является концентрация при которой амплитуда ХЛ уменьшается на 50% (С5о%). С5о% составила для мексидола 2 мМ, диэтона 180 мкМ. При этом их влияние на величину латентного периода ХЛ различалось- мексидол уменьшал, диэтон увеличивал, а комплекс меди не изменял величину латентного периода ХЛ. Это говорит о том, что мексидол и фторурацил способны к элиминации (хелатированию) Fe . Увеличение латентного периода ХЛ в присутствии диэтона говорит о том, что данное вещество не только уменьшает окисление, но также задерживает его во времени.
Другой модельной системой для исследования антиоксидантных свойств мы использовали водную гомогенную систему на основе АБАП, предложенную в 1987 г. Wayner D.D.M. и соавт.. Принцип действия этой системы состоит в том, что в водной среде при 37 С АБАП претерпевает термоиндуцированную деградацию с образованием пероксильных радикалов (RO 2), которые могут взаимодействовать с различными перехватчиками, предпочтительно водорастворимыми: люминолом, фикоэритрином, эмульсией линолевой кислоты и др. Если в качестве такого перехватчика RO 2 использовать люминол, то уровень термоиндуцированной продукции пероксильных радикалов АБАП можно зарегистрировать с помощью измерения ХЛ, что и было сделано в данной работе.
Результаты лечения экспериментальных гнойных ран
Результаты лечения экспериментальных животных с гнойными ранами новыми перевязочными материалами с антиоксидантной и антиоксидантно-протеолитической активностью (ДАЦ-трипсин + диэтон + мексидол) представлены в таблице 13, из которой видно, что скорость заживления ран зависит не только от носителя, на котором иммобилизован антиоксидант, но и от его происхождения. Это хорошо демонстрируется на примере диальдегидцеллюлозы (ДАЦ). Применение ДАЦ замедляло очищение от гнойных и некротических масс и заживление ран в среднем на одни сутки по сравнению с группой, в которой раны покрывались ДАЦ - трипсином. Однако полное заживление ран в этих группах наступало гораздо быстрее, чем в первой контрольной группе, заживление в которой происходило спонтанно (р 0,05). Независимо от химических природных перевязочных материалов (раневых покрытий) во всех группах животных раны до лечения характеризовались выраженной воспалительной реакцией, наличием гнойно-некротических масс в области дна ран, края и окружающие их ткани были отечны. На третьи сутки лечения ДАЦ-трипсином + диэтоном + мексидолом воспалительные явления были выражены слабее, чем в группах животных, где применялись только ДАЦ-трипсин, ДАЦ-диэтон или ДАЦ-мексидол.
Средние сроки очищения ран от гнойных и некротических масс у этих животных в зависимости от применяемого раневого покрытия соответствовали при ДАЦ-трипсин + диэтон +мексидол - 3,2±0,5, ДАЦ-трипсином - 8,0±0,7, ДАЦ- диэтоном - 8,1 ±0,6, ДАЦ-мексидол - 7,3±0,5, ДАЦ- 14,0±0,5. Процесс ускорения очищения ран от гнойно-некротических масс по отношению к группе нелеченых животных соответственно равнялся: ДАЦ-трипсин - 42,9%, ДАЦ-трипсин + диэтон + мексидол - 77,1%, ДАЦ-диэтон - 42,1%, ДАЦ-мексидол - 47,9%.
Сроки полного заживления ран, в зависимости от применяемого раневого покрытия, были следующие: ДАЦ-трипсин - 24,3+1,2, ДАЦ-диэтон - 25,2±1,6, ДАЦ-мексидол - 23,5±1,3, ДАЦ-трипсин-мексидол-диэтон - 18,1 ±1,2 суток. Процесс ускорения заживления ран по отношению к группе нелеченых животных соответственно равнялся: ДАЦ-трипсин - 19,5%, ДАЦ-диэтон -16,6%, ДАЦ-мексидол - 22,2%, ДАЦ-трипсин-мексидол-диэтон - 40,1% (результаты лечения экспериментальных гнойных ран представлены в таблице 13).
Таким образом, из всех изучаемых перевязочных материалов ДАЦ-диэтон по эффективности воздействия на течение заживления ран превосходит нативный диэтон, а ДАЦ-трипсин + диэтон + мексидол - каждый перевязочный препарат в отдельности (ДАЦ-трипсин, ДАЦ-диэтон и ДАЦ-мексидол).
Что касается сроков заживления ран у экспериментальных не леченных животных и животных, у которых раны покрывались только ДАЦ, то они почти в 2-2,5 раза превышали аналогичные показатели у животных, леченных перевязочными материалами с антиоксидантной активностью.
Проведённые планиметрические исследования на 15, 20 и 25 сутки лечения позволили объективно оценить динамику заживления ран. Результаты планиметрических исследований представлены в таблице 14, из которой видно, что на 15 сутки наблюдения площадь ран в первой основной группе животных (ДАЦ-трипсин-мексидол-диэтон) уменьшалась в 9,2 раза по отношению к площади нанесённой раны, что составляло 43,5±5,1мм . Во второй основной группе животных (ДАЦ-мексидол) на 15 сутки наблюдения площадь раны уменьшилась в 7,1 раза, что составило 56,3+0,1мм . В третьей опытной группе животных, где лечение проводилось раневым покрытием (ДАЦ-диэтон), площадь раны на 15 сутки лечения сократилась в 6,6 раза, что составило 60,2+ 0,5мм. В 2 контрольной группе (диальдегидцеллюлоза) — площадь ран уменьшилась в 1,3 раза и составляла 302,6±23,1 мм . Во 1 контрольной группе животных (ДАЦ-трипсин) площадь ран уменьшалась в 4,3 раза, и составляла 93,86±10,9мм2.
К 20 суткам в двух основных группах животных, в которых применялись раневые покрытия ДАЦ-трипсин-мексидол-диэтон и ДАЦ-трипсин-мексидол, раны зажили, в то время как во всех контрольных группах имелись раневые дефекты. В третьей основной группе, где использовалось для лечения раневое покрытие ДАЦ-диэтон, площадь раны сократилась в 13,7 раза до 29,2+7,2мм2, в 1 контрольной группе площадь гнойной раны уменьшилась в 10 раз и составила 40,1±10,2мм2. Во 2 контрольной группе животных площадь раневого дефекта сократилась в 2,1 раза (190,1 ±19,5 мм ).
К 25 дню наблюдения гнойные раны животных, для лечения которых был применён ДАЦ-трипсин, зажили. И только в 2 контрольной группе на 25 сутки наблюдения имелся раневой дефект площадью 90,1 ±16,5 мм . Раны у животных этой контрольной группы (диальдегидцеллюлоза) зажили лишь на 29,1 ±1,6 день. Между экспериментальной и каждой из контрольных групп животных отмечена статистически достоверная разница по наблюдаемому признаку -площадь раны (р 0,05).
Применение иммобилизованных антиоксидантов на перевязочных материалах в сочетании с трипсином для лечения гнойных ран у животных приводит к гладкому течению раневого процесса, купированию воспалительных явлений окружающих рану тканей, сокращению сроков очищения и заживления ран, что позволяет рекомендовать их к широкому внедрению в клиническую практику.
