Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Стимуляция ангиогенеза. современное состояние проблемы и перспективы развития (обзор литературы) 12
1.1. Причины и характеристика послеоперационных осложнений ангиореконструктивных операций 12
1.2. Современные представления о структуре микроциркуляторного русла 16
1.3. Строение и функции эндотелиальных клеток кровеносных сосудов 19
1.4. Области применения культуральных технологий и заместительной клеточной терапии 22
1.5. Механизмы ангиогенеза и ангиогенные факторы роста 33
Глава II. Материалы и методы 44
2.1. Клинико-инструментальные методы исследования 44
2.1.1. Характеристика обследованных больных 44
2.1.2. Инструментальные методы исследования 48
2.1.2.1. Рентгенконтрастная ангиография 49
2.1.2.2. Ультразвуковая допплерография 50
2.1.2.3. Компьютерная томография 51
2.1.3. Характеристика видов реконструктивных операций 52
2.1.3.1. Оперативные вмешательства на аорто-бедренном сегменте 52
2.1.3.2. Оперативные вмешательства на бедренно-подколенном сегменте 55
2.2. Характеристика материалов и методов экспериментального исследования 57
2.2.1. Использование трансформированной культуры эндотелиоцитов человека ECV 304 (in vitro) 57
2.2.2. Получение коллагена I типа из сухожилий крысиных хвостов 58
2.2.3. Получение факторов роста эндотелиальных клеток 60
2.2.4. Получение суспензии эндотелиальных клеток 60
2.2.5. Гистологические методы исследования 62
2.2.6. Гистохимические методы исследования 63
2.2.7. Исследования in vivo 64
2.3. Методы статистической обработки 68
Глава III: Ближайшие результаты реконструктивных операций на аорте и артериях нижних конечностей у ангиохирурги- ческих больных 69
3.1. Ангиореконструктивные операции на аорто-бедренном сегменте 70
3.2. Ангиореконструктивные операции на бедренно- подколенном сегменте 76
Глава IV. Стимуляция ангиогенез а при ишемии тканей с помощью культуры эмбрио нальных эндотелиоцитов 83
4.1. Культивирование эндотелиальных клеток (результаты исследования in vitro) 83
4.2. Моделирование ишемии тканей задней конечности крысы 85
4.3. Наблюдения и результаты исследования in vivo 89
4.3.1. Данные общегистологического исследования 92
4.3.2. Результаты гистохимического исследования 93
Глава V. Стимуляция ангиогенеза при ишемии тканей с помощью ангиогенных факторов роста 96
5.1. Наблюдения in vitro 96
5.2. Исследования in vivo 96
5.2.1. Данные общегистологического исследования 97
5.2.2. Результаты гистохимического исследования 99
5.3. Динамика морфологических изменений 101
Заключение 103
Выводы 107
Практические рекомендации 108
Литература
- Причины и характеристика послеоперационных осложнений ангиореконструктивных операций
- Клинико-инструментальные методы исследования
- Ангиореконструктивные операции на аорто-бедренном сегменте
- Данные общегистологического исследования
Введение к работе
Актуальность проблемы.
Значительная распространенность облитерирующих заболеваний, связанных с атеросклеротическим поражением сосудов, их прогрессирующее течение, нередко приводящее к инвалидизации, в настоящее время диктует настоятельную необходимость дальнейшего совершенствования хирургической помощи при данной патологии.
В последнее время возрос интерес к возможностям ангиоге-неза в лечении облитерирующих заболеваний, основным патогенетическим звеном которых является ишемия тканей. Несмотря на широкое распространение различных видов реконструктивных оперативных вмешательств и прогресс в разработке и создании многочисленных моделей имплантатов не всегда удается добиться адекватной перфузии ишемизированных тканей.
При тяжелой хронической ишемии успешная реконструктивная операция на сосудах является единственным средством сохранения конечности, а нередко и спасения жизни больного. Однако основной причиной неудачных реконструкций остается ранний послеоперационный тромбоз шунтов и протезов. Несмотря на предложенные многочисленные способы профилактики этого грозного осложнения, частота его по данным разных авторов колеблется в пределах от 2,6% до 29,5% (Затевахин И.И. с соавт., 1987; Лебедев Л.В. с соавт., 1990; Кудрявцев Ю.А., 1997; Мазуренко А.А. с соавт., 2000; Бельков Ю.А. с соавт., 2003). Ранний послеоперационный тромбоз не только увеличивает сроки лечения, но и нередко приводит к глубокой инвалидизации пациентов, вплоть до летальных исходов, так как повторные операции по поводу реокклюзий не всегда заканчиваются успехом.
Одной из причин развития раннего тромбоза является несостоятельность периферического сосудистого русла при резко увеличивающемся притоке крови после операции (Силаев Ю.С. с со-авт., 1990; Иващенко В.В., 1994; Вачев А.И. с соавт., 1997).
Основным принципом ангиореконструкции является восстановление магистрального кровотока, в то время как стимуляция ангиогенеза позволяет воздействовать на уровне микроциркуля-торного русла, увеличивая плотность и общую площадь капиллярной сети, тем самым, способствуя росту компенсаторных возможностей периферического сосудистого русла.
Таким образом, представляется возможным перспектива комплексного использования методов стимуляции ангиогенеза наряду с реконструктивными операциями на сосудах у ангиохирургиче-ских больных. Это побудило нас провести исследование по изучению возможностей стимуляции ангиогенеза в условиях ишемии тканей.
Цель исследования.
Оценить возможность использования культуры эмбриональных эндотелиоцитов и факторов роста для стимуляции ангиогенеза при ишемии тканей.
Задачи исследования.
Оценить ближайшие результаты хирургического лечения больных с облитерирующими заболеваниями артерий нижних конечностей при реконструктивных операциях на магистральных сосудах.
Усовершенствовать и определить наиболее благоприятные условия культивирования эмбриональных эндотелиальных клеток.
Изучить способность факторов роста и эмбриональных эндотелиоцитов стимулировать ангиогенный ответ со стороны сосудистого русла.
Определить возможность культуры эмбриональных эндотелиоцитов при имплантации встраиваться в структуру ткани реципиента.
Изучить морфологические изменения в скелетной мышечной ткани при стимуляции ангиогенеза.
Научная новизна.
Систематизированы результаты исследований по стимуляции ангиогенеза и заместительной клеточной терапии. In vitro изучено поведение эмбриональных эндотелиоцитов в первичной культуре после ферментативного суспензирования сердца эмбриона; модифицирован способ культивирования эндотелиальных клеток на коллагеновой подложке с применением коллагенового геля с концентрацией 2,5 мг/мл. In vivo выявлено стимулирующее влияние ангиогенных факторов роста и культуры эмбриональных эндотелиоцитов на процессы реваскуляризации тканей в условиях ишемии.
Впервые проведена серия экспериментов с применением культуры эмбриональных эндотелиоцитов и установлено, что имплантируемые эндотелиальные клетки успешно встраиваются в структуру мышечной ткани реципиента.
На экспериментальном материале показана возможность и перспективность использования клеточных технологий для стимуляции ангиогенеза в условиях ишемии тканей.
Практическая ценность исследования.
Результаты проведенных экспериментальных исследований демонстрируют стимулирующий эффект факторов роста сосудов и культуры эмбриональных эндотелиоцитов, суспензированных в коллагеновом геле, на активность репаративных процессов в ише-мически поврежденных тканях. Имплантация эмбриональных эн-дотелиальных клеток и введение ангиогенных факторов роста в зону ишемии тканей могут послужить одними из методов в комплексном лечении больных с заболеваниями, сопровождающимися ишемией тканей.
Дальнейшее развитие и внедрение в практику предложенных методов позволят улучшить результаты лечения ангиохирургиче-ских больных.
Положения диссертации, выносимые на защиту.
Необходимость тщательной профилактики тромботических осложнений существенно возрастает при оперативном лечении пациентов с мультифокальными и дистальными видами атеросклеро-тического поражения артериального русла.
Имплантируемые эмбриональные эндотелиоциты, суспензированные в коллагеновом геле (концентрация коллагена 1 мг/мл), встраиваются в структуру ткани реципиента, не образуя гетерогенных участков в мышечной ткани.
Введение ангиогенных факторов роста и имплантация эмбриональных эндотелиоцитов оказывают стимулирующее влияние на процессы ангиогенеза в зоне ишемии тканей.
Ангиогенные факторы роста стимулируют пролифератив-ную активность эндотелиальных клеток.
5. Культивирование первичных культур эмбриональных эндо-телиоцитов способствует увеличению численности клеток и снижению их антигенности.
Реализация результатов работы.
Результаты исследований доложены на: межвузовских студенческих конференциях "Актуальные вопросы грудной и сердечно-сосудистой хирургии" (СПб, 2001, 2003); итоговых конференциях ВНОКиС академии (2001, 2002); VIII-м Всероссийском съезде сердечно-сосудистых хирургов (Москва, 2002).
По материалам исследований опубликовано 14 печатных работ, зарегистрировано 3 рационализаторских предложения (№№7812/8, 7813/8, 7814/8).
Объем и структура диссертации.
Диссертация изложена на 128 страницах машинописного текста, состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, включающего 89 отечественных и 78 иностранных источников. Работа иллюстрирована 10 таблицами и 26 рисунками.
Причины и характеристика послеоперационных осложнений ангиореконструктивных операций
Количество больных с облитерирующими заболеваниями артерий нижних конечностей с каждым годом увеличивается. Обеспечение эффективного лечения данной категории больных является одной из первоочередных как медицинских, так и социальных задач, поскольку при заболеваниях сосудов отмечается большой процент инвалидности и длительная нетрудоспособность.
Несмотря на прогресс ангиологии, достижения современной анестезиологии и реаниматологии, восстановительные операции на аорто-бедренном сегменте остаются вмешательствами с повышенным риском для жизни больного и, нередко, приводят к неблагоприятным исходам (Вавилов В.Н., 1990; Бельков Ю.А. с соавт., 2003; Pilla.T.J. et al., 1984; Okadome К. et al., 1989). Основной причиной неудачных ангиореконструкций являются послеоперационные осложнения, которые отмечаются по данным разных авторов у 5,6-60% больных (Князев М.Д. с соавт., 1980; Вилянский М.П. с соавт., 1990; Гринев К.М. с соавт., 1997; Дуданов И.П. с соавт., 1998; Мазуренко А.А. с соавт., 2000; Хлебов В.Ф., 2003; Jourdana H.L. et al., 1984), что свидетельствует о необходимости поиска новых подходов в лечении больных с патологией сосудистой системы.
J. Vollmar (1982) предлагает различать общие, или неспецифические, и местные, специфические осложнения, как раннего (до года), так и отдаленного послеоперационного периода. Специфическими осложнениями позднего послеоперационного периода (в сроки от 1 года до 15 лет) являются: тромбозы, ложные аневризмы анастомозов, инфекция сосудистых протезов. Отдаленные резуль 13 таты реконструктивных операций на сосудах зависят от следующих основных критериев: характера восстановления кровотока в нижних конечностях, проводимого консервативного лечения, наличия или отсутствия специфических послеоперационных осложнений, курения, сахарного диабета (Золотавий А.А., 1975; Шалимов А.А. с соавт., 1987; Балас П. с соавт., 1990; Хэпп В. с соавт., 1996). Основной причиной поздних тромбозов сосудистых протезов, бесспорно, является дальнейшее прогрессировать атеросклеротиче-ского процесса, приводящее к поражению дистального сосудистого русла (Золотавий А.А., 1975; Затевахин И.И. с соавт., 1987; Дан В.Н. с соавт., 1997; Бельков Ю.А. с соавт., 2003).
Специфическими осложнениями раннего послеоперационного периода в реконструктивной ангиохирургии считают тромбоз, кровотечение и нагноение в зонах реконструированного сосуда или протеза. Они встречаются по данным разных авторов в 8,9-44,2% случаев (Гамбарин Б.Л. с соавт., 1986; Щеглов В.И. с соавт., 1987; Вилянский М.П. с соавт., 1990; Хэпп В. с соавт., 1996; Хлебов В.Ф., 2003).
Крайне важным и актуальным является опасность развития инфекционных осложнений при протезировании сосудов. Наиболее часто они встречаются после операций в паховых областях. Этому способствуют затруднения с дезинфекцией кожи в этой области, мацерация кожи, особенно у пациентов с ожирением, предшествовавшая ангиография, пересечение лимфатических сосудов и ряд других причин. Положение может приобретать фатальный характер, если в гнойный процесс вовлекается искусственный кровеносный сосуд. При этом раннее инфицирование, как правило, бывает тотальным и требует удаления всего протеза. При частичном инфицировании достаточно ограничиться резекцией протеза или бранши вне зоны инфицирования, что значительно сокращает объ 14 ём восстановительного этапа операции (Макаров Н.А., 1990; Орехова Л.А. с соавт., 1996; Леменев В.Л. с соавт., 1997).
По мнению М.И. Лыткина и соавт. (1976) наиболее простой и отвечающей запросам практики является следующая классификация местной раневой инфекции, возникающей после аллопластики кровеносных сосудов:
I. Поверхностная раневая инфекция: а) ранняя; б) поздняя. II. Глубокая раневая инфекция: 1. а) ранняя; б) поздняя.
2. а) с вовлечением функционирующего сосудистого трансплантата; б) с вовлечением нефункционирующего сосудистого трансплантата.
Под поверхностной раневой инфекцией понимается нагноение операционной раны в пределах подкожной жировой клетчатки без вовлечения в процесс эксплантата или оперированной артерии. Этот вид нагноения чаще локализуется в области пахового сгиба и проявляется скоплением серозной жидкости в подкожной клетчатке, образованием лимфатической фистулы, краевого некроза кожи. Глубокая раневая инфекция развивается, когда процесс распространяется в зону сосудистого трансплантата. В случае вовлечения зон анастомозов, рано или поздно возникает опасное, а иногда и смертельное кровотечение. Если же нагноение распространяется лишь на ствол, то опасность кровотечения значительно меньше. Нагноение оперированных сосудов у 37-54% больных приводит к аррозивному кровотечению. Оно может вызвать тромбоз оперированного сосуда с последующим развитием сепсиса и его осложнений (Лыткин М.И. с соавт., 1976; Леменев В.Л. с соавт., 1988).
Клинико-инструментальные методы исследования
Для решения поставленных задач исследования проанализированы результаты хирургического лечения 558 больных с облите-рирующими поражениями аорты и ее ветвей. Все пациенты проходили лечение в клинике сердечно-сосудистой хирургии им. П.А. Куприянова ВМедА им. С.М.Кирова.
Все пациенты были разделены на 2 группы (табл. 1): I группу составили больные, которым выполнялись реконструктивные операции на аорто-бедренном сегменте, а во II группу вошли пациенты с преимущественным поражением бедренно-подколенного сегмента (производились ангиореконструкции на бедренно-подколенном сегменте).
Обе группы мало отличались по возрасту пациентов: от 49 до 78 лет в I группе и от 46 до 71 года во II группе. В обеих группах отмечена также единая тенденция увеличения количества больных в возрасте от 55 до 70 лет, что объяснимо основной патологией - облитерирующим атеросклерозом. Кроме того, 75% наиболее тяжелой категории пациентов находились в пожилом возрасте - от 68 до 78 лет. Подавляющее большинство (96%) обследованных пациентов составили лица мужского пола.
При анализе результатов лечения обращали внимание на следующие показатели: длительность госпитализации, и какая она по счету (по основному заболеванию), предварительный диагноз при поступлении, сопутствующие заболевания, окончательный диагноз, наличие и, характер осложнений основного заболевания на момент госпитализации или анамнестически. Учитывали уровень поражения кровеносных сосудов, оценивали тактику оперативного лечения и наличие осложнений в послеоперационном периоде.
Диагноз у обследованных больных был установлен и подтвержден по результатам клинического и лабораторно-инструментальных исследований (жалобы, анамнез заболевания и анамнез жизни, физикальные методы обследования, биохимические показатели крови, ангиография, ультразвуковая допплерогра-фия).
В первые годы заболевания у большинства больных перемежающаяся хромота возникала лишь после 500-700 метров ходьбы, и только у 36 пациентов заболевание проявилось остро или подо-стро и быстро привело к тяжелой ишемии нижних конечностей. Для оценки степени ишемии использовалась классификация R.Fontaine (1972) в модификации А.В.Покровского (1979). Показанием к оперативному лечению облитерирующего атеросклероза артерий нижних конечностей является ишемия конечностей Н-Б степени и более. Поэтому в нашем исследовании больных с I и Н-А степенью ишемии не было (табл. 2).
Из таблицы следует, что большая часть больных имела тяжелую ишемию нижних конечностей (в I группе-68,2% и во II груп-пе-61,8%). 103 чел. (25,3%) из I группы и 28 чел. (18,4%) из II группы поступили в клинику с трофическими язвами или с начинающейся гангреной нижних конечностей. У 174 пациентов (42,9%) I группы и 66 пациентов (43,4%) II группы имели место постоянные или ночные боли без выраженных деструктивных изменений в конечностях. Боли в нижних конечностях только при физической нагрузке (перемежающаяся хромота интенсивностью менее 200, но более 20 метров) отмечали 129 чел. (31,8%) I группы и 58 чел. (38,2%) II группы.
При анализе инструментальных и лабораторных методов исследований обращали внимание не только на заболевания сосудистой системы, но и учитывали сопутствующую патологию (табл.3).
Ангиореконструктивные операции на аорто-бедренном сегменте
Пациентам I группы (406 чел.) при ангиореконструкции аорто-бедренного сегмента применяли в основном шунтирующие операции: АББШ, АгББШ, АБШ и лишь при высокой окклюзии аорты - ее протезирование (АББП-2,2%). Для пластики кровеносных со судов у данной группы пациентов чаще использовали имплантаты фирмы «Север» - в 74,5% (302 чел.) случаев. Политетрафторэти леновые (ПТФЭ) протезы имплантировали: фирмы «Гортекс» - в 8,9% случаев (36 чел.) и «Экофлон» - в 11,5% (47 чел.). Искусст венные сосуды «Васкутек» применяли у 5,1% (21 чел.) больных I группы.
При оценке ближайших исходов, которую проводили непосредственно в стационаре и на этапе послеоперационного амбулаторного наблюдения, пользовались следующими критериями:
- хороший результат - значительное уменьшение или исчезновение ишемической симптоматики (купирование болей покоя, заживление трофических язв или ран после некрэктомий, увеличение дистанции безболевой ходьбы, исчезновение патологической зябкости) — компенсация кровообращения;
- удовлетворительный результат — субкомпенсация кровообращения: сохранение конечности при критической ишемии, значительное уменьшение болей покоя (отказ от сильнодействующих и наркотических анальгетиков), тенденция к заживлению язв, выполнение ампутации на сегмент ниже традиционного при данной локализации поражения;
- неудовлетворительный результат — отсутствие какого-либо эффекта от вмешательства, прогрессирование ишемии, тяжелые местные осложнения, ампутация конечности.
При хорошем результате оперативного вмешательства восстановление регионарного кровообращения в конечности с нормализацией микроциркуляторного русла не только устраняло явления ишемии, но и возвращало больных к активной трудовой деятельности. На рис.8 представлен функционирующий аорто-бедренный бифуркационный сосудистый протез. Просвет искусственного сосуда четко контрастируется, что свидетельствует о сохранении кровопроводящих свойств протеза.
Серьезным специфическим осложнением операций на аорто-бедренном сегменте у 7,8 — 15,3% больных являются тромбозы артерий и протезов. В наших наблюдениях ранний тромбоз наблюдался у 35 (8,7%) больных. Изучение причин этого осложнения показало, что ими являются технические погрешности, недооценка дистального сосудистого русла или неустойчивость гемодинамики.
Тяжелым осложнением ближайшего послеоперационного периода являются кровотечения. В исследуемой группе кровотечения отмечены у 14 (3,5%) больных. Причиной развития кровотечения являются передозировка антикоагулянтов, развитие синдрома дис-семинированного внутрисосудистого свертывания крови и глубокая раневая инфекция в области анастомоза.
Частота олигурии при вмешательствах на аорте колеблется в пределах 10 - 40% по данным М.Д.Князева с соавт. (1980). В наших наблюдениях частота олигурии составила 15,1% (62 чел.). Снижение функции почек во время операции и последующее про-грессирование почечной недостаточности в послеоперационном периоде могут быть обусловлены многими факторами: гиповоле-мией, длительной интраоперационной гипотонией, пережатием аорты и массивным переливанием крови. Эти осложнения нередко становятся непосредственной причиной смерти больных. Тщательный контроль за временем пережатия аорты и диурезом во время операции обязателен во избежании тяжелых нарушений функции почек. Важную роль в профилактике почечной недостаточности играет совершенствование техники операций, сокращение их продолжительности и времени пережатия аорты.
Наиболее опасными в сосудистой хирургии являются инфек-ционно-септические осложнения, которые встречаются по данным различных авторов от 1,5% до 30% (Сазонов А.Б., 1988; Соловьев И.А., 2001). Они несут не только угрозу потери конечности, но и предопределяют высокую летальность, особенно при вовлечении в инфекционный процесс имплантатов (до 75%), а при сепсисе - до 100%. Развитию этих осложнений способствует, как правило, использование аллогенных материалов, значительная длительность операции, ослабленное состояние больного, сахарный диабет, гематомы. В исследуемой группе больных частота поверхностной раневой инфекции составила 6,5% (26 чел.), глубокая раневая инфекция наблюдалась в 2 случаях (0,5%).
Общие осложнения реконструктивных операций, отягощая течение послеоперационного периода, нередко являются причиной летального исхода. В наших исследованиях у 4 (0,9%) пациентов отмечали острый инфаркт миокарда, у 9 (2,3%) острое нарушение мозгового кровообращения, у 34 (8,4%) пневмония.
По данным литературы общая послеоперационная летальность при реконструктивных операциях на аорто-бедренном сегменте до настоящего времени остается высокой и составляет 3,4 — 16,1%. В наших исследованиях общая послеоперационная летальность составила 3,9% (Ібчел.).
Данные общегистологического исследования
Для оценки микроскопических изменений в тканях производили гистологическое исследование мышечной ткани. На 14-е сутки после последнего введения препарата животных выводили из опыта и выполняли препаровку прооперированной конечности крысы с взятием мышечной ткани в месте введения препарата.
Микрофотография: мышечная ткань после введения смеси ангиогенных факторов роста - 14-е сутки после инъекции. Окр. гематоксилин - эозин. Ув. х200; (стрелки - капилляры).
На полученных микропрепаратах не обнаружено признаков воспаления в месте инъекции ангиогенных факторов роста. Капилляры располагаются вдоль мышечных волокон, ядра капиллярных эндотелиоцитов визуализируются как тяжи ядер, расположенные по длине капилляров. Определяется перестройка микроциркуля-торного русла, характеризующаяся увеличением плотности сосудистого русла и ростом диаметра существующих микрососудов (рис.22). Наблюдаемая картина во многом схожа с таковой при изучении микропрепаратов животных I группы (введение эмбриональных эндотелиоцитов), однако изменения более диффузны и равномерны.
При анализе микропрепаратов контрольной группы не наблюдали микрососудов, в которых определялись эритроциты, что, свидетельствует о небольшом диаметре существующих капилляров. Отмечаются дистрофические изменения в мышечной ткани. Значительно меньшая плотность расположения ядерных тяжей указывает на слаборазвитую капиллярную сеть (рис.23).
Микрофотография: мышечная ткань животных III группы (контроль). Окр. гематоксилин - эозин. Ув. х200; (стрелки - ядерные тяжи капиллярных эндотелиоцитов). . Результаты гистохимического исследования.
Для оценки количественных показателей проводили гистохимическую реакцию по выявлению мест активности щелочной фос-фатазы. Так как данный фермент обнаруживается в цитоплазме эн-дотелиальных клеток, то по выпадению черного нерастворимого осадка удается определить локализацию в мышечной ткани эндо-телиоцитов. Что позволяет судить не только о развитии микроцир-куляторного русла, но и производить подсчет плотности капилляров на единицу площади ткани.
Подсчет количества капилляров на единицу площади ткани производили под микроскопом с помощью окулярной сетки. Плотность капиллярной сети у животных II группы составила 729±27 капилляров/ед. пл. (р 0,05). В то время как у животных контрольной группы этот показатель равен 376±14 капилляров/ед. пл. (р 0,05).
На рис. 24 показано выпадение черного осадка соответственно местам активности щелочной фосфатазы на поперечном и на продольном мышечном срезе.
Суммируя приведенные выше экспериментальные данные, можно заключить, что стимуляция ангиогенеза при ишемии тканей как с помощью имплантации культур эмбриональных эндотелио-цитов, так и посредством введения в зону ишемии ангиогенных факторов роста способствует развитию микроциркуляторного русла в тканях при их ишемическом повреждении.
Проведенный анализ полученных микропрепаратов показал значительное увеличение плотности капиллярной сети в мышечной ткани животных I и II групп по сравнению с контрольной группой. Капиллярная плотность крыс I и II групп составила соответственно 756±28 капилляров/ед. пл. и 729±27 капилляров/ед. пл. В то время как у животных контрольной группы этот показатель составил 376±14 капилляров/ед. пл. (рис. 25).
С целью определения динамики изменений микроциркуляторного русла гистохимическое исследование опытных образцов мышечной ткани производили на 14-е и 28-е сутки после имплантации суспензии эмбриональных эндотелиальных клеток (I группа) и введения смеси, ангиогенных ростовых факторов (II группа). Обнаруженные небольшие количественные вариации являются статистическими незначимыми (р 0,05). Это позволяет предположить, что вновь образованные микрососуды и коллатерали не регрессируют, так как их постоянно поддерживает непрерывный кровоток (рис. 26).
