Введение к работе
Актуальность темы. Хронический гепатит С является глобальной проблемой здравоохранения во всем мире. Распространенность хронического вирусного гепатита С в мире составляет около 3%, что составляет примерно 170 млн. человек (Горбаков В.В., 2000; Манне М., 2001; Alter MJ.,SeeffL.B., 2000; SaadenS.,2001).B США вирусом гепатита С инфицированы 3,9 млн. человек, и наличие хронического гепатита С становится лидирующим показанием для трансплантации печени (Alter MJ. etal., 1999; Alter M.J.jSeeffL.B., 2000; ZeinN.N., 2000). Больных хроническими формами заболевания и носителей вируса в России насчитывается не менее 2 млн. человек и это лишь видимая часть «айсберга», так как не учитываются безжелтушные формы, которые при вирусном гепатите С составляют 75 -80% (Шахгильдян Д.И., 2001; Ивашкин В.Т., Комаров Ф.И., 2002).
Несмотря на сравнительно короткую историю изучения вируса гепатита С, открытого в 1989 году, современные высокотехнологичные методы исследования хронической HCV-иифекции позволили определить особенности этого заболевания: чрезвычайно высокую частоту изменчивости, модулирующее влияние вируса на иммунную систему, многообразие внепеченочных проявлений хронической HCV-инфекции. Это обеспечивает «ускользание» вируса от иммунной системы, персистироваиие вируса в организме и развитие хронической формы гепатита С с неспецифичным клиническим течением (Игнатова Т.М., Серов В.В., 2001; Бушуева Н.В. и др., 2003; Zein N.N., 2000; Lauer G.M., Walker B.D., 2001).
Особую настороженность в связи с малосимптомностью хронической HCV-иифекции вызывает развитие цирроза печени в 17 -46% случаев и гепатоцелл юл яркой карциномы в 4 --19% случаев, выявляющихся через несколько лет после инфицирования вирусом гепатита С, что чаще всего обусловлено действием дополнительных кофакторов (Игнатова Т.М., 2002; Хазанов А.И., 2002; Booth J.C.L., 1998; SeefTL.B. et al., 2001; Harris H.E. et al., 2002).
Отсутствие формирования устойчивого протективного иммунитета, разнообразие проявлений хронической HCV-инфекции, низкая эффективность иитерфероиотерапии связаны с недостаточной изученностью патогенетических основ заболевания. Несмотря иа большое число работ, посвященных изучению механизмов патогенеза хронического гепатита С, исследований, посвященных пато-
морфологическим особенностям развития хронического гепатита С и связи полученных результатов с клинико-лабораторными показателями активности инфекционного процесса, достагочно мало (Непомнящих Г.И., 1998;. Толоконская Н.П., 1999; Montalto G. et al, 1997; Puoti С. et al, 1997; Mathurin P. et al., 1998; Puoti С et al, 1999; Andriulli A. et al., 2001; Deshpande V. et ah, 2001).
Таким образом, проблема хронической HCV-иифекции актуальна как в теоретическом, так и в практическом отношении в связи со сложностью механизмов патогенеза, неспецифическим течением, неоднозначностью взаимосвязи клинических, биохимических, мо-лекулярно-биологических и патоморфологических особенностей хронического гепатита С.
Цель работы - с помощью комплексного патоморфологичес-кого, иммуногистохимического анализа и полимеразной цепной реакции изучить особенности структурных изменений печени при хронической HCV-инфекции в зависимости от степени активности инфекционного процесса и репликации вируса гепатита С в различных биологических субстратах.
Задачи исследования:
-
Провести комплекс исследований хронической HCV-инфекции, включающих анализ клинических данных, биохимическое исследование функции печени, иммуноферментный анализ маркеров вирусных гепатитов в зависимости от степени активности инфекционного процесса.
-
Исследовать особенности патоморфологических изменений и иммуногистохимической реакции в биоптатах печени при хронической HCV-иифекции.
-
Изучить репликацию вируса гепатита С в различных биологических субстратах и уровень вирусной нагрузки в сыворотке крови при хронической HCV-инфекции.
-
Оценить взаимосвязь репликации вируса гепатита С в различных биологических субстратах и степени активности инфекционного процесса по биоптатам печени.
Научная новизна. Впервые проведен комплексный патомор-фологический анализ структурных изменений печени при хроническом гепатите С, включающий световую микроскопию парафиновых и полутонких срезов, ультраструктурный анализ и иммуно-гистохимическое исследование биоптатов печени, что позволило определить патоморфологические признаки, косвенно указываю-
щие на этиологию заболевания и активность инфекционного процесса. В комплексе с клиническими и лабораторными данными это может служить основой для получения наиболее верного клинического диагноза и выработки терапевтической тактики.
Впервые осуществлено детальное исследование влияния репликации вируса гепатита С в различных биологических субстратах (сыворотка крови, мононуклеары периферической крови, нативная ткань печени, моча и слюна) на развитие структурных изменений печени при хронической HCV-инфекции. Установлена преобладающая роль РНК вируса гепатита С в ткани печени в клинической картине заболевания, его лабораторных характеристиках, а также специфических структурных проявлениях хронического гепатита С в печени.
Теоретическая н практическая значимость. Проведенное исследование имеет существенное значение для понимания пато-морфогенеза хронического гепатита С и особенностей антивирусной защиты гепатоцитов в процессе взаимодействия вируса с клеткой. На основании полученных данных получено подтверждение цитоплазматического действия РНК-содержащего вируса гепатита С в виде накопления мелковезикуляриых липидных включений в цитоплазме и признаков клеточно-инволютивной дистрофии, сочетающихся со специфической иммунодетекцией ИЗЗ-антигена вируса гепатита С в виде в нитонлазматических включений данного эпитопа в гепатоцнтах.
Важное практическое значение имеют результаты сравнительного анализа данных комплексного патоморфологического исследования и репликации вируса гепатита С в различных биологических субстратах, лишь часть из которых (сыворотка крови и мононуклеары периферической крови) широко используются в клинической практике, В целом, полученные результаты свидетельствуют о важности комплексного исследования клинических, лабораторных, молекулярио-биологических и патоморфологических данных для качественной диагностики и определения необходимости терапии при хроническом гепатите С.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены на научно-практической конференции «Новые методы диагностики, лечения заболеваний и управления в медицине» (Новосибирск, 2001, 2002), на IV молодежной научной конференции Сибирского отделения РАМН «Фундаментальные и прикладные проблемы совре-
менной медицины» (Новосибирск, 2002), на ХШ научно-практической конференции врачей «Актуальные вопросы современной медицины» (Новосибирск, 2003), на V молодежной научной конференции Сибирского отделения РАМН «Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины» (Новосибирск, 2004), Ученом совете ГУ НИИ региональной патологии и патоморфоло-гии Сибирского отделения РАМН (Новосибирск, 2006).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 научных работ, из них в рецензируемых журналах по списку ВАК - 3.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 150 страницах компьютерного текста; состоит из введения, обзора литературы - 1 глава, характеристики клинических наблюдений и методов исследования- 1 глава, результатов собственных исследований - 3 главы, обсуждения - 1 глава, выводов и списка литературы (250 работ). Текст иллюстрирован 7 таблицами, 20 рисунками (микрофото- и электронограммами).
