Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1.Определение, классификация и патогенез цирроза печени 12
1 2. . Экспериментальная модель цирроза печени, индуцированного четырёххлористым углеродом 18
1.З.Репаративная регенерация печени 26
1 АСтимуляция репаративной регенерации в цирротически измененной печени в эксперименте 31
1.5.Лазеры в медицине 37
1.5.1.Определение, механизм действия, классификация, применение лазера в медицине 37
1.5.2.Течение раневого процесса при воздействии на биологическую ткань излучения лазера 43
Глава 2. Материалы и методы '. 49
Глава 3. Морфологическая характеристика цирроза печени, индуцированного четырёххлористым углеродом, и его естесственного патоморфоза 58
3.1.Морфологическая характеристика цирроза печени, индуцированного четырёххлористым углеродом 59
3.2. Морфологическая характеристика печени животных через 1—2 недели, после окончания затравки 67
3.3.Морфологическая характеристика печени подопытных животных через 3-4 недели, после окончания затравки
четырёххлористым углеродом 71
Глава 4. Морфологическая характеристика печени кольтрольной группы кроликов и динамика изменений в печени, обусловленных воздействием высокоинтенсивного лазерного излучения 81
4.1.Морфологическая характеристика печени контрольной группы кроликов 81
4.2. Динамика морфологических изменений печени, обусловленных воздействием высокоинтенсивного лазерного излучения 85
Глава 5. Патоморфоз индуцированного четырёххлористым углеродом цирроза печени после воздействия высокоинтенсивным лазерным излучением 104
Глава 6. Обсуждение результатов собственного исследования 136
6.1.Морфологическая характеристика цирроза печени, индуцированного четырёххлористым углеродом, и его естественного патоморфоза 136
6.2. Динамика морфологических изменений в печени, обусловленных воздействием высокоинтенсивного диодного лазера 147
6.3..Патоморфоз индуцированного четырёххлористым углеродом цирроза печени через месяц после воздействия
высокоинтенсивным лазерным излучением 151
Заключение 158
Выводы 161
Список литературы
- Экспериментальная модель цирроза печени, индуцированного четырёххлористым углеродом
- Морфологическая характеристика печени животных через 1—2 недели, после окончания затравки
- Динамика морфологических изменений печени, обусловленных воздействием высокоинтенсивного лазерного излучения
- Динамика морфологических изменений в печени, обусловленных воздействием высокоинтенсивного диодного лазера
Введение к работе
Актуальность темы
Сохраняющаяся устойчивая тенденция во всём мире к росту алкогольных поражений печени, нарастающие неблагоприятные экологические сдвиги и'бурная химизация современной жизни, повышение заболеваемости вирусными гепатитами, приводят к увеличению хронических диффузных поражений гепатобилиарной системы, в том числе и циррозов печени (Недогода В.В., 2000). Среди причин приобретённых циррозов печени в настоящее время 30-35% приходится на токсические причины (чаще алкогольные), 15-20% — на инфекционные (чаще вирусные). В 45-55% случаев цирроз печени относят к билиарному, обменно-алиментарному, дисциркуляторному и смешанному (Некрасова Т.Н., 2007). Заболеваемость циррозом печени в настоящее время в России составляет около 20-40 на 100 тысяч населения и непрерывно растёт. Самые частые осложнения цирроза печени - желудочно-кишечные кровотечения, развивающиеся у 45% больных, и печёночная недостаточность, которая выявляется у 67% пациентов. В 2004 году смертность от цирроза печени у российских мужчин увеличилась в 2,3 раза по сравнению с 1991 годом. При анализе основных причин смерти населения г. Москва в 2005г., по данным Мосгорстата установлено, что 5370 человек умерло от болезней органов пищеварения (XI класс МКБ-10), из них 1390 приходится на смерть от цирроза печени, что составляет 13,3 на 100 тыс. населения или 1,1% ко всем умершим жителям г. Москва (Зайратьянц О.В., Ковальский Г.Б., Рыбакова М.Г. и соавт., 2006).
Возрастание медицинской и социальной значимости хронических заболеваний печени требует новых усилий в разработке вопросов этиологии, патогенеза, иммунологии, диагностики, лечения и профилактики этих заболеваний.
Больные с декомпенсированным. циррозом печени нуждаются в
диетическом, эндоскопическом, а в ряде случаев и хирургическом лече
нии. В настоящее время радикальным хирургическим методом лечения
циррозов печени является ортотопическая аллотрансплантация печени
(Готье СВ., Ермишанцев А.К., Цирюльникова О.М. и соавт., 2005).
Однако её техническая сложность, дефицит донорских органов, высокая
стоимость лечения ограничивают широкое внедрение этой операции в
клиническую практику и стимулируют поиск более доступных методов
лечения. В комплексном лечении цирроза печени альтернативой пере
садке органа рассматривается стимуляция компенсаторно-
приспособительных (адаптивных) реакций. Одни авторы (Саркисов Д.С.,
Пауков B.C., Литвицкий П.Ф., 2002) к этим реакциям относят регенера
цию, гипертрофию и перестройку тканей, другие же (Пальцева Е.М.,
Кузнецова А.В., Иванов А.А., 2007) включают в них атрофию, гипер
трофию, гиперплазию и метаплазию. Причём при коррекции порталь
ной гипертензии и обусловленных ею осложнений при циррозе печени,
в связи с перестройкой сосудистого русла, особое внимание уделяется
стимуляции неоангиогенеза (Reichen J., Lebreec, 2007). К настоящему "'-
времени разработано множество способов стимуляции регенерации пе
чени, которые в основном сводятся к дозированному повреждению или
коррекции нарушенных обменных процессов с помощью физиотерапев
тических или медикаментозных средств (Муслимов С.А., 2000). Суще
ствующие методы, направленные на усиление репаративной. регенера
ции печени, в большинстве случаев дают определённый положительный
эффект, однако, кардинально-не решают проблему регенерации печени
(Найтарлаков М.А.,1999; Цирятьева СБ., 2002). В этом плане привлека
ют внимание возможности использования высокоинтенсивного лазерно
го излучения для управления процессами саногенеза. В последнее деся
тилетие в литературе широко освещались отдельные проявления осо-
7 бенностей альтерации, воспалительно-репаративных и адаптивных реакций при использовании различных видов лазерного излучения как на неизменённые, так и на патологически изменённые органы в эксперименте и клинике (Неворотин А.С., 2000; Головнёва Е.С., Попов Г.К., Астахова Л.В., 2002; Гиниатуллин Р.У. и соавт., 2003; Крочек И.В., Привалов В.А., Лаппа А.В. и соавт., 2004).
В связи с этим актуальным представляется проведение комплексного сравнительного морфологического исследования для получения достоверных данных о естественном патоморфозе индуцированного токсического цирроза печени и изменчивости его при воздействии на орган высокоинтенсивным диодным лазером в импульсном режиме работы.
Цель работы
На экспериментальной модели представить сравнительную морфологическую характеристику повреждения и компенсаторно-приспособительных (адаптивных) процессов при циррозе печени, индуцированном у беспородных кроликов четырёххлористым углеродом, и его патоморфозе после воздействия высокоинтенсивного диодного лазера для решения вопроса о целесообразности применения данного метода реваскуляризации при лечении циррозов и связанной с ними портальной гипертензии.
Задачи работы
1. Представить морфологическую характеристику процессов повреждения, компенсации и приспособления в цирротически изменённой печени при воздействии четырёххлористого углерода и их динамику в течение месяца после окончания затравки;
Изучить динамику морфологических изменений в нормальной печени кроликов после воздействия высокоинтенсивного диодного лазера на орган;
Оценить динамику процессов повреждения и адаптивных реакций при последовательном воздействии на печень четыреххлористым углеродом и высокоинтенсивным диодным лазером;
Сравнить регенеративную способность и неоангиогенез в цир-ротически изменённой печени в эксперименте без и после дополнительного воздействия лазером;
На основании результатов данного исследования решить вопрос о возможности применения высокоинтенсивного лазерного излучения в клинической апробации данного метода реваскуляризации печени в лечении циррозов и связонной с ними портальной гипертензии.
Научная новизна работы
Впервые с применением гистологических, морфометрических и электронномикроскопических методов на подопытных беспородных кроликах, у которых цирроз печени был индуцирован четыреххлористым углеродом, проведено комплексное изучение динамики процессов альтерации, компенсации и приспособления после воздействия на печень высокоинтенсивного излучения с использованием диодного лазера.
Показано снижение проявлений белковой и жировой дистрофии в цирротически изменённой печени спустя месяц после лазерного воздействия.
В экспериментальной группе кроликов, где на цирротически изменённую ткань печени воздействовали высокоинтенсивным лазерным излучением, продемонстрировано нарастание таких проявлений репара-тивной регенерации печени как: увеличение в гепатоцитах числа митохондрий с восстановлением крист, нарастание площади дезоксирибо-
9 нуклеопротеидов в ядрах, повышение уровня гликогена в цитоплазме паренхиматозных клеток печени, увеличение числа двуядерных гепа-тоцитов и синусоидальных клеток.
В ходе эксперимента были отмечены снижение воспалительно-клеточной инфильтрации в портальных трактах и септах, увеличение количества новообразованных сосудов и желчных протоков в трактах и септах, которые носили приспособительный характер.
Была зафиксирована частичная инволюция фиброзной ткани, характеризующаяся истончением и укорочением фиброзных септ с уменьшением содержания коллагеновых волокон. При изучении морфологических изменений в печени животных после воздействия на орган высокоинтенсивного лазерного излучения осложнений выявлено не было.
На основании сравнительного анализа полученных результатов при экспериментальном циррозе показано, что регенерация в печени протекает активнее после воздействия высокоинтенсивным диодным лазером в импульсном режиме работы, а процесс неоангиогенеза существенно превалирует за счёт новообразования сосудов преимущественно в зонах лазерного воздействия.
Практическая значимость работы
Результатами проведённого экспериментального исследования показана целесообразность воздействия на цирротически изменённую-печень подопытных кроликов высокоинтенсивного диодного лазера с целью стимуляции регенерации и активации неоангиогенеза. Это позволяет проводить дальнейшее исследование адаптивных реакций при использовании данного метода реваскуляризации в цирротически изменённой печени человека.
Положения, выносимые на защиту
1. Через месяц после окончания четырёхмесячной затравки под
опытных животных четырёххлористым углеродом имеют место частич
ная инволюция фиброзной ткани в цирротически изменённой печени,
признаки репаративной регенерации, неоангиогенез;
При воздействии на изначально неизменённую печень кроликов высокоинтенсивным диодным лазерным излучением в импульсном режиме работы экссудативная фаза воспаления имеет слабо выраженные этапы плазматической экссудации и клеточной инфильтрации. В исходе пролиферативной стадии воспаления заживление происходит путём замещения травмированной зоны васкуляризированной соединительной тканью;
Спустя месяц после последовательного воздействии на печень четырёххлористым углеродом и высокоинтенсивным диодным лазером определяется частичная инволюция фиброзной ткани и признаки репаративной регенерации. Одним из проявлений адаптивных реакций цирротически изменённой печени фигурирует неоангиогенез как в портальных трактах и септах, так и в зоне лазерного повреждения;
Явления репаративной регенерации и неоангиогенез происходят активнее в цирротически изменённой печени после дополнительного воздействия высокоинтенсивным диодным лазером.
Апробация работы
Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на пленарном заседании Челябинского отделения Российского общества патологоанатомов (июнь 2007 г.), на совместном заседании кафедры патологической анатомии и хирургических кафедр Челябинской государственной медицинской академии (октябрь, 2007 г.).
11 Внедрение результатов диссертационной работы
Результаты данного исследования используются в педагогическом процессе на кафедрах патологической анатомии и факультетской хирургии Челябинской государственной медицинской академии.
Высокоинтенсивный диодный лазер в импульсном режиме работы и мощностью 18 Вт применяется в клинической апробации метода рева-скуляризации печени с целью лечения циррозов печени человека и связанной с ними портальной гипертензией.
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 6 работ, в том числе 1 — в центральном журнале.
Объём и структура диссертации
Работа состоит из оглавления, списка сокращений, введения, 4 глав собственных исследований, обсуждения результатов, заключения, выводов, списка литературы и приложения. Материал изложен на 182 станицах машинописного текста, иллюстрирован 112 рисунками (в том числе: 7 макрофотографиями, 67 микрофотографиями, 17 электроно-граммами, 15 диаграммами, 6 графиками) и 2 таблицами. При написании обзора литературы использовано 156 источников (128 отечественных и 28 зарубежных публикаций).
Экспериментальная модель цирроза печени, индуцированного четырёххлористым углеродом
Большинство исследований, по изучению патогенеза диффузных заболеваний печени проведено на эксперементальной модели поражения, вызываемого интоксикацией тетрахлорметаном (Рубецкой Л.С., Короткина Р.Н., Ремезов Р.Н., 1962; Саркисов Д.С., Ремезов П.И.,1960; Фишер А., 1961; Саркисов Д.С., Рубецкой Л.С., 1965; Stenger R.J., 1966; Ariosto F. et al.,1989; Hall P. M. et al., 1994). Повреждение печени CCL4 обусловлено токсическим метаболитом, который действует на цитохром Р-450 — зависимую монооксидазу, расположенную в гладкой эндоплаз-матической сети перивенулярных гепатоцитов (Ш.Шерлок, Дж. Дули, 1999). Эта методика используется у крыс, мышей и кроликов. Возможно несколько способов введения препарата: внутрижелудочный, интрапе-ритонеальный, ингаляционный, подкожный и внутримышечный. Чтобы морфологические изменения были более выраженными его целесообразно сочетать с фенобарбиталом, растворённым в питьевой воде из расчёта 0,3 г/л, который назначается за неделю до CCL4 (Abraldes J.G., 2006). Через 12-15 недель после начала эксперимента в 30-60«% случаев у крыс формируется микронодулярный цирроз печени с портальной гипертензией (Kauschke S.G., 1999; Yoshida Т., 1999), портокавальным шунтированием и гипердинамической циркуляцией (Vorobioff J., 2000), через 16 недель появляются признаки варикозного расширения вен пищевода (Nishida R. ,1998), а к 20-ой недели развивается асцит. Установ 19 лено, что у животных, в результате хронического отравления, чаще всего развивается картина постнекротического, монолобулярного (мелкоузлового) цирроза, который по мере развития может перейти в мульти-лобулярный (крупноузловой). (Саркисов Д.С., Рубецкой Л.С., 1965; Проскурякова И.С. и соавт., 1971; Верин В.К., 1977; Кляритская И.Л., 1982; Ariosto F. et al.,1989; Cho K.J., Jang J.J.,1993; Hall P.M. et al., .1994;). Воспроизведённые таким образом склеротические изменения. паренхимы печени животных, всилу того, что напоминают, так называемый, ан-нулярный цирроз печени человека, выражающийся в равномерном поражении органа, адекватно отражают цирротические изменения печени у человека (Саркисов Д.С., Рубецкой Л.С, 1965; Брейслер и соавт., 1969; Верин В.К., 1970; Солопаев Б.П., 1980; Скобелева Т.В.,1994;. Cameron G.R., Karunaratne W.A.E., 1936; Zimmerman И.J., 1978; Smejkalova J. Et all, 1985;KohnoetaL, 1991).
Многие авторы указывают, что под влиянием гепатотропного яда прежде всего возникают дистрофические и некротические процессы в гепатоцитах, вслед за которыми происходит замещение погибшей! паренхимы грубоволокнистой соединительной тканью (Саркисов Д.С, Рубецкой Л.С., 1965; Проскурякова И.С. и соавт., 1971; Верин В.К., 1970). Некоторые авторы отмечают, что для CCL4 характерно центролобуляр-ное поражение гепатоцитов (Cameron G.R., Karunaratne W.E., 1936; Zimmerman H.J., 1978), с преимущественным поражением так называемых «светлых» клеток, которым присуща дезинтоксикационная функция (Бекетова Т.ІЇЇ, СекамоваСМ., 1975, 1982; Бекетова Т.П., 1982). Естественное развитие некротических локусов во многом определяется; функциями макрофагов (Маянский Н., 1981; Фрейдлин И.С., 1984; Jones R.A., Summerfield J.A., 1982; Hamazaki К. Et al., 1994), в том числе звёздчатых ретикулоэндотелиоцитов (ЗРЭ). Установлено, что токсический эффект четырёххлористого углерода, как мембранотропного яда, детерминирован с его биотрансформацией ферментами микросом гепатоцитов и сопряжён с активацией пери-кисного окисления липидов (Владимиров Ю.А., Арчаков А.Н., 1972; Блюгер А.Ф., Майоре А.Я., 1978; Новиков К.Н., 1985; Brattin W.L et al.,1985; James I.L. et al., 1986; Poll G., 1993). Перекисная деградация мембранных фосфолипидов гепатоцитов сопровождается изменениями структуры липидной матрицы мембран и нарушением обмена веществ внутри клетки (Блюгер А.Ф., Майоре А.Я., 1978; Губский Ю.И., 1984). С помощью гистохимических методов выявлено, что при циррозе в гепа-тоцитах значительно уменьшается количество рибонуклеопротеидов и гликогена, снижается в клетках активность кислой фосфотазы, сукци-натдегидрогеназы, цитохромоксидазы и АТФ-азы и усиливается активность щелочной фосфатазы (Журавлёва М.В., Рубецкой Л.С.,1970; Проскурякова И.С. и соавт., 1971). В гепатоцитах, содержащих капли жира, понижалась активность липазы и неспецифических эстераз. М.В.Кудрявцевой и соавт (1994) с помощью цитофлуориметрии было выявлено накопление гликогена в гепатоцитах, сопровождающееся снижением активности ферментов, расщепляющих его.
По мнению Ю.А. Владимирова и А.Н. Арчакова (1972). В.Н. Бай-матова (1991, 1993, 1997) при поражении печени CCL4 происходит нарушение структуры и функции гранулярного эндоплазматического ре-тикулума. При этом снижается уровень синтеза транспортных белков, что приводит к накоплению в гепатоцитах триглицеридов, микроскопически обнаруживающихся в виде мелких и крупных липидных включений в цитоплазме клеток (Серов В.В., Пауков B.C., 1975; Блюгер А.Ф. и соавт., 1989).
Морфологическая характеристика печени животных через 1—2 недели, после окончания затравки
Расширения просветов желчных протоков не определялось. Количество новообразованных мелких желчных протоков в портальных трактах достигало 4-х. Протоки были выстланы однорядным кубическим эпителием. ШИК-положительный материал в виде малиновой полоски располагался на апикальном крае цитоплазмы эпителиоцитов желчных протоков. В портальных трактах и септах имелось до 9-й новообразованных сосудов. Просвет центральных вен был расширен, стенка утолщена за счёт повышенного количества коллагеновых пучков. В синусоидах регистрировались ретикулярные пучки различной ширины (рис. 22).
Синусоиды кое-где были расширены, в просветах имели место одиночные нейтрофилы. Каппиляризация синусоидов: широкие ретикулярные пучки расположены вблизи портального тракта (указано белой стрелкой), тоненькие ретикулярные волокна локализуются в синусоидах центральной части узла-регенерата цирротически изменённой печени (показано голубой стрелкой). Импрегнация серебром по Гомори. х200.
Морфологическая характеристика печени подопытных животных через 3-4 недели, после окончания затравки черырёххлористым углеродом
При гистологическом исследовании печени 7-й подопытных кроликов, забитых на 3 - 4-ой неделе после прекращения введения четырёх-хлористого углерода, сохранялась картина нарушения архитектоники органа за счёт формирования полых и неполных порто-портальных и порто-центральных фиброзных септ с наличием небольшого количества паренхиматозных узелков (рис. 23). В узлах-регенератах имеющиеся печёночные балки были образованы 2-я или 3-я рядами гепатоцитов, в некоторых узелках регистрировались центральные вены или портальные тракты. Рис. 23. Тонкие соединительнотканные септы (а), окружают узел-регенерат (б). Окраска пикрофуксином по Ван Гизону. х 80.
В цитоплазме небольшого количества гепатоцитов на светоопти-ческом уровне исследования были расположены крупные гиалиноподоб-ные включения. Встречались одиночные гепатоциты со слабоэозино-фильной перинуклеарной зернистостью в цитоплазме и с чёткими клеточными контурами, а также имели место очень небольшое количество гепатоцитов, в чьей цитоплазме определялись крупные вакуоли, за счёт которых ядро смещалось на периферию клетки. Описанные крупные вакуоли при дополнительной окраске срезов Суданом III имели красный цвет. ШИК-положительный материал был расположен в виде мелких малиновых гранул в перинуклеарных отделах цитоплазмы гепатоцитов (рис. 24), расположенных в II и III зонах печёночных ацинусов. В срезах, обработанных амилазой, эта зернистость не визуализировалась. Процент гепатоцитов, содержащих ШИК-положительный материал в своей цитоплазме не превышал 60,4±2,68.
В ядрах гепатоцитов при исследовании микропрепаратов на свето-оптическом уровне определялась маргинация хроматина, визуализировалось от 1-го до 4-х ядрышек (рис. 25). Среднее количество ядрышек в данной экспериментальной подгруппе составило 1,9±0,056.
Ядро гепатоцита с маргинацией хроматина, с наличием 1-го ядрышка (показано стрелкой). Окраска гематоксилином и эозином. 400.
При дополнительной окраске срезов по Фёльгену в ядрах регистрировались красно-фиолетовые гранулы (рис. 26), площадь которых ме-нялась в пределах от 0 до 66,14 мкм . Средняя площадь гранул составила 5,9±0,027 мкм2. Интенсивность окрашивания гранул была различная и колебалась от 0 до 100%. В среднем в ядрах гепатоцитов кроликов данной подгруппы красно-фиолетовые гранулы имели интенсивность равную 79,04±0,018%. Площадь неокрашенных участков составляла от 1,26 до 115,6 мкм2, в среднем - 97,7±0,044 мкм2. ы В ядрах гепатоцитов определяются мелкие красно-фиолетовые гранулы (указано стрелкой). Окраска по Фёльгену. х 1000.
В ядре гепатоцита определяется 1 нуклеола, в которой регистрируются мелкие аргентаффинные гранулы (указано красной стрелкой). В ядре другого гепатоцита имеется несколько экстрануклеолярных аргентаффинных гранулы (указано зелёной стрелкой). Окраска по Кро керу. х 400.
При проведении реакции с азотнокислым серебром (рис. 27) было отмечено, что интрануклеолярные аргентаффинные гранулы имели небольшие размеры, количество их колебалось от 1 -го до 9-й, и в среднем по данной подгруппе составляло 3,1±0,011. Экстрануклеолярные аргентаффинные гранул также имели небольшую величину, были хаотично распределены по кариоплазме, количество их изменялось в пределах от 0 до 10-и. Среднее количество экстрануклеолярных аргентаффинных гранул - 3,03±0,007. Общее количество аргетнтаффинных гранул в ядре в гепатоцитах подопытных животных варьировало от 1-го до 13-й, среднее количество было 6,13±0,048.
При электронномикроскопическом изучении печени кроликов в ядре регистрировались расширенные ядерные поры, через которые транспортировались субъединицы рибосом (рис. 28).
Динамика морфологических изменений печени, обусловленных воздействием высокоинтенсивного лазерного излучения
Для изучения морфологической картины изменений в печени, обусловленных воздействием высокоинтенсивного лазерного излучения нами использовались 10 подопытных разнополых беспородных кроликов. Масса тела животных в данной экспериментальной группе колебалась в пределах от 3,5 до 4,6 кг, средний вес кроликов составил 4,1±0,0042 кг. В ходе эксперимента вес кроликов существенно не изменялся. Животных выводили из эксперимента на 1-е сутки с момента лазерного воздействия (1 кролик), на 7-е сутки — 1 кролик, на 14 день - 1 кролик, на 21-е сутки после повреждения (1 кролик), через 30 дней после оперативного вмешательства нами было исследовано 6 кроликов. Средний размер печени кроликов данной экспериментальной группы не превышал 10 х 8 х 3,3 см. Масса печени кроликов колебалась 45,9 до 65 гр, в среднее значение массы печени подопытных животных соответствовало 59,8 ±0,0034гр. При вскрытиш брюшной полости капсула печени кролика, забитого через 3-й часа после лазерного воздействия, была блестящая Печень имела гладкую поверхность коричневого цвета, заостренный передний край, при пальпации - эластическую консистенцию. Зоны лазерного повреждения имели вид отверстий диаметром 0,05 см с белесоватыми плотными краями шириной 0, 1см. Ткань печени на разрезе была красно-коричневого цвета. Зоны лазерного повреждения? имели вид ходов глубиной до 1см с; визуализируемым просветом, шириной не более 0,1 см, краяимели эластическую консистенцию, серо-красный цвет.
При морфологическом: исследовании ткани печени зона; дефекта была выполнена эритроцитами; полиморфно-ядерными лейкоцитами и небольшим количеством фибрина. На границе с печёночной тканью регистрировалось скопление жёлто-коричневого пигмента. Вокруг дефекта имела место дискомплексация печёночных балок; гепатоциты были вытянутой; формы, мелкие, с гиперхромными ядрами округлой, или овальной, формы, цитоплазма равномерно окрашивалась красителями; просвет синусоидов был резко , расширен. В цитоплазме гепатоцитов и внеклеточно были обнаружены мелкие буро-коричневые гранулы. При дополнительной окраске срезов по методу Ван Гизона, гранулы были пикрофуксин-негативные, при окраске реактивом Шиффа - ШИК-нега-тивные, а при выполнении реакции Перлса большинство включений давали положительнуюфеакцию. ШИК-позитивные мелкие гранулы регистрировались в цитоплазме не всех гепатоцитов, располагались, преимущественно на периферии клеток.
Привскрытии брюшной полости кролика, забитого через неделю после лазерного воздействия на печень, определялись нитевидные белесоватые спайки между париетальным и висцеральным листками брюшины, преимущественно расположенные в надпечёночном пространстве. Передневерхняя поверхность печени была красно-коричневого цвета. Капсула печени имела серо-белые, гладкие, немного втянутые утолщения звёздчатой формы, диаметром не более 0,1 см, соответствующие участкам предыдущего лазерного повреждения. Передний край печени был заострённый. При пальпации печень имела эластическую консистенцию. На разрезе ткань печени была красно-коричневого цвета, регистрировались белесоватые, плотные, мелкие очажки диаметром до 0,1 см и тяжи длинной не более 0,4 см, шириной - до 0,05 см.
При морфологическом исследовании печени кролика в зоне лазерного повреждения (рис. 41) определялись разрастание соединительной ткани богатой фибробластами, лимфоцитами, нейтрофильными гранулоцитами, макрофагами, цитоплазма последних содержала чёрный пигмент. В центре этого участка регистрировались однородные, мало клеточные, эозинофильные массы, которые при дополнительной окраске по Ван Ги-зону окрашивались в кирпичный цвет.
Динамика морфологических изменений в печени, обусловленных воздействием высокоинтенсивного диодного лазера
При макроскопическом и гистологическом исследовании печени кроликов основной группы, выведенных из эксперимента на 3-4-ой неделе после воздействия высокоинтенсивным диодным лазером, выявлены признаки, характерные для микронодулярного цирроза, общие морфологические проявления которого были схожи с цирротическими изменениями печени подопытных животных 1-ой и 2-ой групп сравнения. Однако при полуколичественном и количественном анализе степени выраженности репаративнои регенерации, склеротических проявлений и неоангиогенеза были обнаружены различия.
В зонах лазерного воздействия поля альтерации в результате последующей воспалительной реакции преобразовались в клеточно-волокнистую соединительную ткань, содержащую сосуды микроцирку-ляторного русла (67,5%) и мелкие вены (32.5%). Существенных различий в морфогенезе лазерных каналов в печени основной и 3-ей групп сравнения выявлено не было.
Через месяц после воздействия лазером на цирротически изменённую печень кроликов основной экспериментальной группы вне зон повреждения среднее количество гепатоцитов, содержащих в своей цитоплазме гликоген, увеличилось в 5, 7 раза по сравненияю с печенью подопытных животных 1-ой экспериментальной группы и было больше, чем в печени кроликов 2-ой группы сравнения (рис. 105).
При изучении патоморфоза индуцированного цирроза печени через месяц после дополнительного лазерного воздействия нами была зарегистрирована достоверно (р 0,05) большая площадь ДНП в ядрах гепатоцитов основной группы кроликов, чем в ядрах паренхиматозных клеток печени животных 1-ой группы сравнения (рис. 106). Данный факт является отражением повышения уровня активности синтетических прцессов в печени через месяц после стимуляции регенерации лазером.
Выявленный при электронной микроскопии в ядрах некоторых гепатоцитов конденсированный хроматин может быть проявлением готовности клеток к распределению и переносу генетического материала в дочерние клетки, то есть имеет место явная готовность гепатоцитов к митотической активности. Нами было отмечено увеличение количества митохондрий в цитоплазме гепатоцитов и восстановление их крист в печени кроликов основной эксперименитальной группы через месяц после окончания затравки и дополнительнго воздействия лазером.
В ходе нашего исследования количество интра- и экстрануклео-лярных аргентаффинных гранул достоверно (р=0,0001) увеличивалось в цирротически изменённой печени по сравнению с печенью котрольной группы кроликов (рис. 107). При этом наибольшее количество аргентаффинных гранул определялось в печени кроликов 1-ой группы сравнения. Принимая во внимание результаты исследований многих авторов (Н.Т. Райхлин, И.А. Букаева, Н.А. Пробатова,.Е.А. Смирнова, 2006), которые утверждают об аргентаффинных белках областей ядрышковых орагни-заторов как о маркёрах скорости клеточной пролиферации, можно судить об увеличении пролиферативной активности гепатоцитов в цирротически изменённой печени. Однако выраженное увеличение количе- -ства белков ассоциированных с областями ядрышковых орагнизаторов регистрируется в злокачественных опухолях (И.А. Букаева, Е.А. Смирнова, А.И. Павловская, М.А. Маканан, И.Г. Ольховская, Н.Т. Райхлин, 2001; Н.Т. Райхлин, И.А. Букаева, А.А. Баронин, Н.А. Пробатова, Е.А. Смирнова, М.И. Бронштейн, 2003). В нашем же эксперименте количество аргентаффинных гранул уменьшилось в гепатоцитах цирротически изменённой печени спустя месяц после окончания затравки: Таким образом, можно предположить, что выбранный нами метод лазерной стимуляции регенераторных процессов не приведёт к последующей злокачественной трансфоромации в печени.
