Содержание к диссертации
Введение
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8
1.1. Распространение и причины неспецифических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота и маралов 8
1.2. Эффективность различных питательных сред для индикации микобактерий, трансформация и биохимические методы идентификации 16
1.3. Способы дифференциации парааллергических туберкулиновых реакций от специфических и их экономическая обоснованность 22
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 33
2.1. Материалы и методы исследования 33
3. Результаты исследований 39
3.1. Характеристика эпизоотической ситуации по туберкулезу маралов и крупного рогатого скота в Алтайском крае 39
3.1.1. Распространение туберкулеза крупного рогатого скота и маралов 39
3.1.2. Неспецифические туберкулиновые реакции 44
3.1.3. Роль L-форм микобактерий в туберкулиновых реакциях 49
3.1.4. Роль объектов внешней среды в неспецифической сенсибилизации крупного рогатого скота и маралов к туберкулину 57
3.2. Характеристика микобактерий, изолированных в Алтайском крае 60
3.2.1. Результаты сравнительной оценки специальных питательных сред при изоляции микобактерий из биоматериала и объектов внешней среды 60
3.2.2. Видовой состав микобактерий в Алтайском крае 64
3.2.3. Сравнительная характеристика микобактерий изолированных от маралов и крупного рогатого скота 67
3.3. Разработка схемы дифференциации туберкулиновых реакций 70
3.3.1. Градуированная и внутривенная туберкулиновые пробы 70
3.3.2. Глазная туберкулиновая проба и симультанная проба с КАМ 78
3.3.3. Критерии проявления парааллергических туберкулиновых реакций 81
3.4. Схема дифференциации туберкулиновых реакций и ее экономическая эффективность 85
3.4.1. Система дифференциальной диагностики туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота в скомпрометированных по туберкулезу пунктах
3.4.2. Выяснение эпизоотической ситуации по туберкулезу на мараловодческих фермах 88
3.4.3. Экономическая эффективность схемы дифференциации 90
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ 97
ВЫВОДЫ 114
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 116
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК 117
ПРИЛОЖЕНИЯ 138
- Распространение и причины неспецифических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота и маралов
- Материалы и методы исследования
- Распространение туберкулеза крупного рогатого скота и маралов
Введение к работе
Актуальность темы. В последние десятилетия диагностика туберкулеза во многом затрудняется проявлением парааллергических реакций у крупного рогатого скота, вследствие сенсибилизации их организма главным образом атипичными микобактериями. Отсутствие совершенных и эффективных методов дифференциации туберкулиновых реакций является причиной выбраковки среди скомпрометированного поголовья значительного количества животных, у которых на секции свойственных для туберкулеза изменений не обнаруживают и лабораторными методами диагноз не подтверждается.
Проблема парааллергических туберкулиновых реакций в отечественном животноводстве ежегодно возрастает. Так, в благополучных хозяйствах в 1994 г. выявлено в 2,5, а 2002 г. в 5,3 раза больше реагирующих на туберкулин животных, чем в неблагополучных пунктах (Найманов А.Х., 2002).
В Алтайском крае, несмотря на низкий уровень поражения крупного рогатого скота туберкулезом (в среднем регистрируется по 2-3 неблагополучных пункта), парааллергические туберкулиновые реакции широко распространены и отмечаются в 44 (73,3%) административных районах. При кратности диагностических исследований 2 раза в год выявляется 0,2-6,8% реагирующих на туберкулин животных, что в цифровом выражении составляет 1,3 тыс. в год.
Рядом исследователей проводился поиск методик и схем по выяснению причин туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота в благополучных хозяйствах (Харитонов В.М, 1983; Кассич Ю.Я., Кочмарский В.А., Тихонов П.М., 1985; Донченко А.С. с соавт., 1985, 1987). Разработаны мероприятия по дифференциации парааллергических и специфических туберкулиновых реакций, эффективные не только в эпизоотологическом отношении, но и позволяющие получить высокий экономический эффект (Сысоев В.А., 1985; Донченко А.С, 1988; Борисов В.А. с соавт., 1990; Кассал Б.Ю. с соавт., 1991; Максим-цов О.Л. с соавт., 1991). Однако до настоящего времени нет единой системы мероприятий по выяснению причин парааллергии крупного рогатого скота и
5 маралов к туберкулину, как в регламентированном «Сборнике санитарных и ветеринарных правил» (1996), так и в других, предложенных ветеринарной практике рекомендациях (1987, 2002). В регламентированном «Наставлении по диагностике туберкулеза животных» (2002) недостаточно полно представлены критерии, по которым отбирают реагирующих на ГШД-туберкулин животных для диагностического убоя. В схемах определенную неясность вызывает использование симультанной пробы с КАМ без учета показателей ее производственного испытания. В связи с этим возникает трудность в достоверной оценке эпизоотической ситуации по туберкулезу в стадах крупного рогатого скота.
Следует отметить, что во многом не разрешены аспекты использования пороговых доз туберкулина (10; 5; 2,5; 1 тыс. М.Е.) в хозяйствах (фермах), где выделяют реагирующий на туберкулин крупный рогатый скот, у которого при патологоанатомическом и бактериологическом исследовании туберкулез не подтверждается. Недостаточно изучена возможность изоляции L-форм мико-бактерий из биоматериала от маралов и крупного рогатого скота, а также роль объектов внешней среды в неспецифической сенсибилизации этих видов животных к туберкулину. Отсутствует сравнительная характеристика микобакте-рий, изолированных от маралов и крупного рогатого скота, и не обсуждался вопрос о последовательности применения внутривенной и глазной туберкулиновых проб с целью дифференциальной диагностики туберкулиновых реакций.
От эффективности использования той или иной питательной среды в процессе культивирования зависят сроки индикации микобактерий и качество диагностики туберкулеза. В настоящее время имеются различные варианты сред, как себя зарекомендовавшие (Финн-2, Левенштейна-Йенсена), так и новые (ФАСТ-ЗЛ). В доступной нам литературе нет данных, об изучении в сравнительном аспекте вышеупомянутых сред при изоляции микобактерий из материала маралов и объектов внешней среды.
Из изложенного следует, что проблема дифференциации парааллергиче-ских и специфических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота в
регионе не решена еще полностью, что и явилось основанием для наших исследований. Кроме этого представлялось важным провести сравнительную оценку различных питательных сред и микобактерий изолированных от маралов и крупного рогатого скота.
Цель исследований — изучить в сравнительном аспекте микобактерий туберкулеза крупного рогатого скота и маралов с разработкой схемы дифференциации туберкулиновых реакций.
На разрешение этой цели были поставлены следующие задачи:
Изучить эпизоотическую ситуацию по туберкулезу маралов и крупного рогатого скота в Алтайском крае.
Выявить и сравнить видовой состав микобактерий маралов и крупного рогатого скота.
Определить этиологию неспецифических реакций с разработкой схемы их дифференциации.
Научная новизна. Определена эпизоотическая ситуация по туберкулезу крупного рогатого скота и маралов в Алтайском крае. Выделены и изучены в сравнительном аспекте микобактерий маралов и крупного рогатого скота. Исследованы объекты внешней среды и определена их роль в неспецифической сенсибилизации маралов к туберкулину. Впервые проведена сравнительная оценка информативности специальных питательных сред (Левенштейна-Йенсена, Финн-2, ФАСТ-ЗЛ) при изоляции микобактерий из биоматериала маралов и объектов внешней среды. В экспериментальных и производственных условиях апробирована и внедрена эффективная схема дифференциальной диагностики туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота и пантовых оленей (маралов), дана ее экономическая эффективность.
Практическая значимость. На основании полученных результатов исследований разработаны и внедрены рекомендации «Дифференциация аллергических реакций в скомпрометированных по туберкулезу пунктах» (2004) утвержденные ученым советом ВНИИПО (протокол № 7 от 26 декабря 2004 г.) и на-
учно-техническим советом управления ветеринарии администрации Алтайско-
го края (протокол № 2 от 18 марта 2005 г.). По материалам проведенных иссле
дований получена приоритетная справка на патент № 2004120531 от 5 июля
2004 года.
Апробация работы. Результаты исследований доложены, обсуждены и
одобрены на научно-практической конференции «Проблемы инновационного
развития АПК Алтайского края в переходных условиях» (г. Барнаул, 2002); ре
гиональной научной конференции, посвященной 60-летию АГАУ «Актуальные
вопросы ветеринарной медицины и их решение в современных условиях»
(г. Барнаул, 2003); научно-практической конференции молодых ученых «Во
просы пантового оленеводства и болезней сельскохозяйственных животных» (г.
« Барнаул, 2003); региональной научной студенческой конференции «Достиже-
ния и перспективы студенческой науки в АПК» (г. Барнаул, 2003); Междуна-
# родной научно-практической конференции молодых ученых СО РАСХН «Но
вейшие направления развития аграрной науки в работах молодых ученых» (Но
восибирская область, п. Краснообск, 2004), а также на ученых советах ВНИИ
пантового оленеводства (2001-2004).
Публикация результатов исследований. Основные положения диссерта
ции отражены в 8 научных работах. Научные исследования, изложенные в дис
сертации, являются составной частью научных проблем Всероссийского науч
но-исследовательского института пантового оленеводства, тема № 02.01.02.
Выносятся на защиту:
1. Характеристика эпизоотической ситуации по туберкулезу маралов и крупно-
го рогатого скота в Алтайском крае.
Данные по видовому составу микобактерий в Алтайском крае.
Система ветеринарных мероприятий по дифференциальной диагностике ту-
беркулиновых реакций у крупного рогатого скота и маралов.
*
Распространение и причины неспецифических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота и маралов
Многочисленные исследования свидетельствуют о широком распространении неспецифических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота в Российской Федерации, странах СНГ и за рубежом. По данным А.Х. Найманова (2002) проблема парааллергических реакций с каждым годом возрастает. Так, в благополучных хозяйствах в 1994 г. выявлено в 2,5 раза, а в 2002 г. в 5,3 раза больше реагирующих животных, чем в неблагополучных пунктах. Удельная доля выделенных культур атипичных микобактерий возросла с 15% в 1994 до 74,1 % в 1997 году. При этом в 40% стад выделяют животных, сенсибилизиро ванных атипичными микобактериями (Кассич Ю.Я. и др., 1998).
В странах СНГ парааллергические туберкулиновые реакции проявляются в 0,9-6,6% случаев. Наиболее частой причиной, вызывающей сенсибилизацию крупного рогатого скота к туберкулину, являются атипичные и птичьего вида микобактерий (Ушаков В.Т. с соавт., 1980; Харитонов В.М., 1983; Юдин Г.А., 1990). Остальная доля неспецефических туберкулиновых реакций приходится на быстрорастущих сапрофитов, паразитарные инвазии, гнойно-некротические процессы (Энгишев Д.К., 1988; Айганов А.Р., 1990). А.С. Донченко, В.Н. Дон-ченко (1976) сообщают, что у некоторых реагирующих животных не удаетс выяснить этиологический фактор, обуславливающий повышенную чувстви тельность к аллергену.
А.В. Гуркин и др. (1977), И.Н. Захаров (1990) приводят данные об интенсивности неспецифической сенсибилизации крупного рогатого скота к туберкулину в Российской Федерации, которая варьирует в отдельных хозяйствах страны от 1,3 (Челябинская область) до 40,3% (Ростовская область). При этом парааллергические реакции, вызванные факторами микобактериальной этиологии, выявляются во всех областях страны. Д.Д. Новак (1975), Л.В. Погуляева (1990) сообщают о неспецифических туберкулиновых реакциях, обусловленных микозами (Воронежская и Липецкая область), а также гельминтозами (Челябинская область). Туберкулиновые реакции, вызванные факторами неустановленной этиологии, отмечаются в Ленинградской, Куйбышевской областях и Алтайском крае (Суворов Е.А., 1968; Сысоев В.А., 1985).
Парааллергические туберкулиновые реакции у крупного рогатого скота в Западной Сибири имеют широкое распространение. Исследования, проведенные А.С. Донченко с соавт. (1985) в хозяйствах Новосибирской, Кемеровской областях и Алтайском крае, показали, что удельный вес ферм, где проявляются эти реакции, составляет до 60% по отношению к числу неблагополучных по туберкулезу. На этих фермах ежегодно реагирует на туберкулин от 0,4 до 7% коров (3,4% в среднем) и до 4,5% молодняка крупного рогатого скота.
Парааллергия крупного рогатого скота к туберкулину имеет глобальный характер и устойчивую тенденцию к распространению во всех странах мира. При этом литературные данные свидетельствуют, о различной степени интенсивности, сенсибилизации стад крупного рогатого скота к туберкулину. Так, на Европейском континенте выявляется 0,2-74% реагирующих на туберкулин животных (Shlisser Т., 1977). На Американском этот показатель составляет 10-50% (Kanter J. et. al., 1978), эти реакции отмечаются также в Африке (Fostad F., 1977).
Уровень парааллергических реакций наиболее высок в Германии, Франции и Венгрии и составляет 2,7-74% (Saurat Р., 1975; Saifelder F. et. al., 1983). Удельный вес этих реакций в Англии, Словакии, Болгарии варьирует в пределах 0,2-2,7% (P. Saurat, 1975).
Важным элементом в изучении сенсибилизации крупного рогатого скота к туберкулину является рассмотрение этиологических факторов, обуславливающих это явление. I. Nassal (1974), Т. Schlisser (1977), J. Kanter, I. Roswurn (1978), F. Saifelder et al. (1983) сообщают о том, что в странах мира природа неспецифических аллергических реакций в 53% случаев вызвана микобактериями птичьего вида, в 30% - атипичными микобактериями. В США и Болгарии пара-аллергия животных к туберкулину проявляется за счет возбудителя паратубер-кулеза, сапрофитных микобактерий и паразитарной инвазии.
Единичные случаи парааллергии к туберкулину отмечены у маралов в Республике Казахстан и в Алтайском крае, вследствие сенсибилизации организма животных атипичными микобактериями, а также в результате паразитарной инвазии, травм ребер и гнойно-некротических процессов (Федосеев B.C. с соавт., 1985; ЛуницынВ.Г., 1996).
Материалы и методы исследования
Работа выполнена в 2001-2005 гг. во Всероссийском научно-исследовательском институте пантового оленеводства, на кафедре эпизоотологии и ВСЭ ИВМ АГАУ, в 11 благополучных, на период обследования, фермах крупного рогатого скота (колхозе им. «Кирова», колхозе «Страна советов», колхозе «Путь к коммунизму», ГУЛ «БОСС», ОАО «Рубцовское», СПК «Победа», СПК «Новочемровский», СПК «Приозерный», ООО «Раздольненское», ООО «Новороссийское», МУЛ «Яровое»), неблагополучном по туберкулезу пункте (совхозе «Термиртаусский»), а также на 12 мараловодческих фермах Алтайского края (ОПХ «Солоновское», ОПХ «Новоталицкое», ЗАО «Сибирь», ЗАО «Алтус», ЗАО «Гея», АОЗТ «Сосновское», ООО «Траст», ООО «Меркен-тайл», СПК «Озерский», СПК «Инской», СПК «Тумановский», СПК «Медве-девский»).
Распространение туберкулеза и неспецифических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота и маралов изучали, используя методы аллергических, клинических, патологоанатомических и лабораторных исследований, а также отчетные данные Алтайской краевой ветеринарной станции по борьбе с заразными болезнями животных. При этом выясняли степень распространения болезни и парааллергических реакций, источники и пути передачи инфекции, факторы, способствующие заражению животных и распространению заболевания.
Внутрикожной туберкулиновой пробой исследовано 8510 голов крупного рогатого скота, из них 624 молодняка; 3750 голов маралов, из них 2361 рогач, 1251 маралуха, 138 сайков и саюшек.
Критерии проявления туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота (болезненность, местная температура, консистенция, величина утолщения кожной складки, длительность сохранения в часах) изучили на 223 животных и с целью выяснения их специфичности диагностическому убою подвергли 25 реагирующих на ППД-туберкулин для млекопитающих животных.
Глазной туберкулиновой пробой согласно «Наставлению по диагностике туберкулеза животных» (2002) исследовано 97 реагирующих на туберкулин животных.
В соответствии с «Наставлением по проведению симультанной аллергической пробы с применением туберкулина и комплексного аллергена из атипичных микобактерий (КАМ) при диагностике туберкулеза животных» (1986-2002 гг.) и согласно санитарным и ветеринарным правилам СП 3.1.093-96 «Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных» (1996) в целях первичной постановки диагноза исследовано 14 стад (5295 коров). При этом в 6 (42,8%) фермах - на 2002 животных, симультанная проба проведена по фону атипичных микобактерий с известными видовыми, культурально-морфологическими и биохимическими характеристиками, а в остальном проценте случаев (57,2) по сенсибилизирующему фону, обусловленному быстрорастущими сапрофитами IV группы по Раньону.
Градуированной туберкулиновой пробой в дозах 10 тыс. М.Е. исследовали 2862 животных, 5 тыс. М.Е. - 528, 2,5 тыс. М.Е. - 160 и 1 тыс. М.Е. - 1951 животное. Аллерген вводили внутрикожно, в область средней трети шеи, с правой стороны, в объеме 0,2 мл, в отдаленных друг от друга точках на расстоянии 10 см в убывающих дозах 10; 5; 2,5; 1 тыс. М.Е. Учет реакции проводили через 72 часа. При этом, как и в действующем наставлении реагирующими считались животные с величиной утолщения кожной складки на 3 мм и более. Различные концентрации туберкулина готовили по следующей методике: для приготовления дозы в 5 тыс. М.Е. шприцом из флакона извлекали 10 мл туберкулина и добавляли 10 мл растворителя (0,85% стерильный раствор NaCl); для 2,5 тыс. М.Е. - удаляли из флакона 15 мл туберкулина и добавляли 15мл растворителя и соответственно дозы 1 тыс. М.Е. - убирали из флакона 18 мл туберкулина и помещали 18 мл растворителя.
Внутривенной туберкулиновой пробой исследовали 24 коровы из благополучных по туберкулезу хозяйств и 97 животных из неблагополучного по туберкулезу пункта непосредственно после проведения читки реакции на внутри-кожное введение туберкулина. Пробу проводили по следующей методике: у животных измеряли исходную температуру тела утром и вечером, затем в яремную вену вводили туберкулин в дозе 3-5 мл в зависимости от массы тела. Измерение температуры тела проводили в различные интервалы в течение 24-48 ч.
Распространение туберкулеза крупного рогатого скота и маралов
Алтайский край в последние десятилетия является зоной относительно стойкого стационарного благополучия по туберкулезу крупного рогатого скота. При этом из 700 (среднестатистические данные по краю) хозяйств различной формы собственности туберкулез крупного рогатого скота выявляют только в 1 -2 фермах (до 0,2%). Очень низкий процент неблагополучных пунктов свидетельствует о своевременности проводимых профилактических противотуберкулезных мероприятий.
При анализе 5 неблагополучных пунктов, которые были зарегистрированы на территории края в период 1996-2004 гг. установлен высокий количественный показатель больных туберкулезом животных в таких, как «Страна советов», «Заря», «Осколковский» - 15; 18,2 и 37,5%. Незначительный уровень (до 3,3%) реагирующих животных выявлен в индивидуальном секторе с. Уржум и ОАО «Рубцовский». Оздоровительные мероприятия во всех указанных категориях хозяйств, проводились путем тотальной замены скомпрометированного по туберкулезу поголовья.
Вместе с тем на фоне единичных случаев проявления туберкулеза крупного рогатого скота, все острее становится проблема парааллергических туберкулиновых реакций. Парааллергические (неспецифические, параспецифиче-ские, псевдоаллергические) реакции у крупного рогатого скота отмечены в 44 (73,3%) районах края, с ежегодным среднестатистическим выявлением 1326 реагирующих животных. По краю с 1996 по 2001 гг. выявлено 7953 реагирующих животных, в том числе по годам: 1996 - 1681 (21,2%), 1997 - 1643 (20,7%), 1998 - 995 (12,5%), 1999 - 1286 (16,2%), 2000 - 1245 (15,6%), 2001 - ПОЗ (13,9%).
Результаты комплексных исследований эпизоотической ситуации в районах края показывают неодинаковую территориальную приуроченность пара-аллергических реакций у крупного рогатого скота (табл. 1). Так, в Рубцовском, Славгородском, Локтевском, Баевском, Табунском, Панкрушихинском, Шипу-новском, Бурлинском районах, расположенных в степной зоне Алтайского края, удельный вес неспецифической сенсибилизации к туберкулину составляет 41,1%, с ежегодным среднестатистическим выделением 653 реагирующих на туберкулин животных. Эти районы граничат или территориально близки к Республике Казахстан (зона повышенного риска по туберкулезу крупного рогатого скота), поэтому высокий сенсибилизирующий фон сильно затрудняет оценку эпизоотической ситуации в степной зоне.
В предгорной зоне Алтайского края случаи выделения реагирующих на туберкулин животных явление редкое. В остальных 36 административных единицах, в период с 1996 по 2001 гг. выделено 4557 (57,2%) реагирующих на туберкулин животных, что незначительно выше по сравнению с районами, относящимися к степной зоне.
В мараловодческих хозяйствах Алтайского края складывается напряженная эпизоотическая ситуация по туберкулезу. На 2002 г. в нашем регионе зарегистрировано 9 неблагополучных пунктов, расположенных в Алтайском, Чарышском, Солонешенском и Усть-Пристанском районах. При этом за семь лет было выявлено больных туберкулезом маралов соответственно: 1996 г. -2,4%; 1997 - 4,2%; 1998 - 2,5%; 1999 - 1,08%; 2000 - 2,4%; 2001-0,16 %; 2002 - 11,1%. Процентный показатель пораженности животных этой хронической инфекцией, за указанный промежуток времени, вырос в 4,6 раза. Число марало-ферм, где установлен туберкулез, возросло с 30% (1996 г.) до 56% (2003 г.).
