Введение к работе
Актуальности теми. Всемерное увеличение к улучшение качества продуктов кивотноводства и значительной степени зависит от благополучия хозяйств по хроническим инфекциям. Одной пз важнейших задач ветеринарной науки является разработка методов профилактики и ликвидации такого опасного заболевания, как туберкулез сельскохозяйственных яивотннх, напосяп.его оолъиой социальный и экономический ущербі Успех борьбы с туберкулезом во многом зависит от правильной и своевременной диагностики. В комплексе диагностических мероприятии решшэгцее значение имеет бактериологические исследования биологического материала от убитнх с диогчо- стичеекой целью животных - выделение и последующая ндентифпсация возбудителя,
В основе метода выделения лежит способность шкобактерий размножаться на специальных'питательных средах. Наибольшее признание б ветеринарной.практике получили плотине яичные питательные ородн Левенштейна-Йенсена, Гельборга, Финн-2. Основным недостатком этих и других используемых в ветеринарных лабораториях питательных оред является длительные сроки культивирования и, как правило, очень скудный рост. Это побуждает ученых продолжать исследования по соверяенствованию и создании новых питательных сред.
Так, Б.Г. Матьник, Н.В. Плоскирев, Б.Ы. Розенблат / 1S?0 / изготовили сухой аспарагино-гляцпновнй бульон, в котором дня стимуляции роста использовали сернокислый цинк. Э.Р. -Зинн /І973/ предложил безаспарапшовую среду, обладагачую хорошей высевае-мостью. Т.Е. Коронеллл, Н.П. лэдеева /1РС-6/ провели испытание агаровой среды, в которой единственным источнпгсем углерода являлся жидкий парафин. По сообщения авторов обильный рост мкко-бактерий удалось получить па 5-й день. А.Д. Ляпунова с соавт. /1S84/ провела исследования по сравнении различных питательных сред и пришли к выгоду, что для получения более оптимального результата при виділений М. бовис кэ биологического материала целесообразно' сочетать 2-3 среды разпых но составу.
Поиск, более элективных питательных сред, ПОЗВОЛЯЮЩИХ значительно ускорить выделение мяксбактериЯ туберкулеза пз биологического материала, предполагает и принципиально новый
подход для их идентификации, так как изменяется главный таксономический признак - их медленный рост.
Оптимальным решением этой задачи мокет быть изыскание ыо-поклочалъннх антител к разным видач микобактерий и о их помощью проведение идентификации иммунофермонтанм методом. Литературные данные подтверждают преимущества этого метода /T.^o.niC,J992^ 5.ЛІ.'&еЬагііге,Я,.ьеуагпіп,Щ?.кЛаизт, М.А.Сафин, 1905; М.А.Владимирский, 1S8? /. Высокая чувствительность 'Ш позволяет разрабатывать методики обнаружения туберкулезных антигенов в секротах животных, в Апологическом материале и во внешней среде.
Б последнее десятилетие с помощью гибридошой технологии получены антитела к разнообразным антигенам бактериального п вирусною происхождения. В сравнении "о поликлональными антителами они обладает высокой специфичностью и, кроме того, их получают без каких-либо белковых примесей, в почти чистом виде. Линии гибридомннх клеток практически бессмертны и их можно попользовать для получения антител бесконечно .длительное время /A.W.Kenaei^r.J.^Wc.KeSrt.^ 1981 /. Попытки получения монокло-налышх антител против антигенов микробактерий туберкулеза предпринимались как в нашей стране,'так и за рубежом /T.^an\etjJ3S4j ^.H.KotL,i^4;C^.Shou,iS%^V. Gu.-zuzqj,49V6J Б.Л.Ирин, Е.Я.Смирнова, 1S87 /, однако практического применения в диагностике туберкулеза они пока не нашли.
Цвль к задачи исследований. Целью исследований является разработка ускоренных методов выделения и идентификации микобактерий туберкулеза бычьего вида из биологического наторкала крупного рогатого скота.
Для выполнения были поставлены следующие задачи:
-
Газработать питательную среду, Позволяющую ускорить выделение микобактерий из биологических материалов больных туберкулезом животных.
-
Разработать методику идентификаций микобактерий туберкулеза бычьего вида на основе моноклональны^ антител t реакции твердофазного иммуноферМентноГо анализа.
Научная ..ковизйа. Впервые разработана плотная питательная среда, позволяющая сократить срок выделения микобактерий туберкулёза бычьего1 вчда на биологических материалов крупного
рогатого скота до 19 - 20 дней. Впервые разработана методжа идентификации возбудителя туберкулеза на основе чо'токлональных антител в реакции л-я'уноферггентного анализа.
Практическая ценность. Сокращение сроков исследования биологического материала от подозреваемых в заражении туберкулезом животных позволяет более оперативно организовать противотуберкулезные мероприятия при виявленій туберкулеза я предотвратить необоснованный убой здорових нивотннх в случае исключения диагноза на туберкулез.
Использование моноклсналышх антител для идентификации возбудителя туберкулеза значительно сникает стоимость лабораторных исследований, так как в большинстве случаев отпадает необходимость в постановке биологических проб на животных.
Результаты исследований включены во-"Временное наставление по применению набора для идентификации микобактернй бычьего вида методом ичмуноферментпого анализа", утвержденное Департаментом ветеринарии МСХП РФ 20.05,94г.
х^псобадия г-аботн. Материалы диссертационной работы долокз-Ші на научной конференции преподавателе!! ОГВИ /19С8/, па конференции молодых ученыг'ВНШБТК / 1990 /, межтабораторпом соводапии ЕНИКБТЕ / 1995 /.
Публикации. . По материалам диссертации опубликовано пять печатных работ, получено'два авторских свидетельства на изобретение я подана заявка на получение патента.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 113 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, заключение, вы-водеіі практические предложения и список литературы. Работа? иллюстрирована 13 таблицами, 15 рисунками. Список используемой литературы включает 148 источников, й т.ч. 21 иностранцах.
На защиту... вшюоится:
-
Питательная среда для ускоренного выращивания чпкобактзркй туберкулеза пз биологических материалов крупного рогатого скота.
-
Методика идентификация микобактерий туберкулеза на основе Моноклональних антител в ичмунсфермеитнои анализе.
