Содержание к диссертации
Введение
I. Обзор литературы
1. Краткие сведения о эпидемической и эпизоотической ситуации туберкулёза 10
2. Микобактериозы сельскохозяйственных животных 12
2.1. Аллергия при микобактериозах 15
3. Взаимосвязь микобактериозов человека, животных и птиц 19
4. Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота
4.1. Аллергическая диагностика 25
4.1.1. Проблема неспецифических реакций на туберкулин и методы их дифференциации 27
4.1.2. Применение симультанной туберкулиновой пробы для дифференциальной диагностики туберкулёза крупного рогатого скота 35
4.2. Лабораторная диагностика туберкулеза 42
4.3. Современные методы диагностики и возможность их применения при туберкулёзе крупного рогатого скота 44
II. Собственные исследования
1. Материалы и методы исследований 50
2. Краткая характеристика некоторых особенностей природно-хозяйственных условий Брянской области 54
3. Распространенность микобактериозов крупного рогатого скота в общественных и индивидуальных хозяйствах Стародубского района Брянской области 58
4. Изучение возможности применения симультанной туберкулиновой
пробы с индивидуальным учётом аллергических реакций в индивидуальных хозяйствах 69
5. Сравнительное изучение симультанной туберкулиновой пробы с применением ППД - туберкулина для млекопитающих и ППД - туберкулина для птиц, с симультанной пробой с
применением ППД - туберкулина для млекопитающих и КАМ 83
6. Изучение возможности применения ускоренной симультанной туберкулиновой пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих и КАМ 89
7. Динамика проявления аллергических реакций на симультанную туберкулиновую пробу 100
8. Изучение возможности дифференциации парааллергических реакций одновременным применением внутрикожной и пальпебральной пробы 108
9. Изучение возможности применения внутривенной туберкулиновой пробы для дифференциации аллергических реакций на туберкулин 114
10.Изучение диагностической ценности ПЦР при исследовании крови реагирующих на туберкулин животных, в индивидуальных хозяйствах 123
11.Обсуждение полученных результатов 128
12. Выводы 139
13. Практические предложения 141
14. Список использованной литературы 142
- Микобактериозы сельскохозяйственных животных
- Распространенность микобактериозов крупного рогатого скота в общественных и индивидуальных хозяйствах Стародубского района Брянской области
- Изучение возможности применения ускоренной симультанной туберкулиновой пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих и КАМ
Введение к работе
1. Актуальность темы. Туберкулез крупного рогатого скота наносит значительный экономический ущерб животноводству страны, что связано с широкой распространенностью болезни, необходимостью убоя реагирующих на туберкулин животных в благополучных и неблагополучных по туберкулёзу хозяйствах и населенных пунктах.
На современном этапе борьбы с туберкулёзом животных, основой профилактических и оздоровительных мероприятий была и остаётся диагностика этой болезни. При диагностике туберкулёза крупного рогатого скота основным, массовым и общепринятым методом является внутрикожная проба с применением ППД - туберкулина для млекопитающих. Одной из важных проблем при диагностике туберкулёза внутрикожной туберкулиновой пробой остаётся проблема неспецифических реакций на туберкулин. Актуальность этой проблемы увеличивается из года в год. Так, в благополучных хозяйствах РФ выявляется в 5,3 раза больше реагирующих на туберкулин животных, чем в неблагополучных по туберкулёзу.
Массовые выявления неспецифических реакций на туберкулин приводит к убою большого количества здоровых животных, что увеличивает размеры экономического ущерба и вызывает сомнения в правильности диагностики туберкулёза утверждёнными методами.
Кроме того, туберкулез крупного рогатого скота имеет важное социальное значение, так как возбудитель болезни может передаваться человеку и вызывать заболевание людей и, наоборот, животные могут заразиться от людей.
В последние годы в нашей стране увеличилась заболеваемость людей туберкулезом, резко сократилось поголовье животных в общественном секторе и увеличилось поголовье крупного рогатого скота в частном секторе. Поэтому, всё острее возрастает проблема диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах.
Следует указать, что для индивидуальных хозяйств более характерны бесконтрольные перемещения животных, перевозки кормов и животноводческой продукции, бесконтрольная торговля продуктами животноводства (особенно мясом и молоком), и все эти указанные факторы усложняют проведение комплекса профилактических и оздоровительных мероприятий при туберкулезе.
Другой, немаловажной особенностью, затрудняющей диагностику микобактериозов в индивидуальных хозяйствах, является совместное содержание и тесный контакт разных видов животных и птиц.
В связи с указанными особенностями, в последние годы увеличивается количество жалоб владельцев животных на необоснованный убой реагирующих животных, заводятся судебные дела между владельцами животных и ветеринарными специалистами.
Мероприятия по профилактике и борьбе с туберкулёзом проводятся в соответствии с Законом РФ «О ветеринарии», Санитарных правил СП 31.093-96 и Ветеринарных правил ВП 13.3.1325-96, утвержденных Госкомсанэпиднадзором РФ 31.05.96 г. и Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства РФ от 18.06.96 г., «Наставлением по диагностике туберкулёза животных», утверждённых Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства РФ от 18. 11.2002 г.
К сожалению, в этих нормативных документах очень мало рекомендаций по диагностике туберкулёза крупного рогатого скота в частном секторе. Поэтому, в практических условиях, диагностические мероприятия по профилактике и оздоровлению от туберкулеза в личных подворьях граждан проводятся как и в общественном секторе.
Известно, что диагностика туберкулеза крупного рогатого скота в общественном секторе имеет свои специфические особенности. Главной особенностью является тот факт, что в общественном секторе диагноз на туберкулез ставится по группе животных, т.е. по стаду. Так, в соответствии с
утверждёнными нормативными документами при постановке диагноза на туберкулез, из числа реагирующих на туберкулин животных проводят диагностический убой нескольких, наиболее характерно реагирующих на туберкулин животных, с последующим патологоанатомическим и лабораторным исследованиями на туберкулез.
Симультанная туберкулиновая проба с применением туберкулина для млекопитающих и комплексного аллергена из атипичных микобактерий (КАМ), которая широко применяется в ветеринарной практике для дифференциации аллергических реакций на туберкулин, также является групповой и даёт возможность ориентироваться в ситуации по туберкулезу только по стаду или группе (не менее 6 голов) исследуемых животных.
Известно, что в индивидуальных хозяйствах, у хозяина одна-две коровы, а для постановки диагноза на туберкулёз необходимо провести убой реагирующих животных, и дальнейшие патологоанатомические и лабораторные исследования на туберкулёз.
В общественных хозяйствах, при убое одного или нескольких реагирующих животных сохраняется остальное поголовье животных, а в частном секторе, при убое одной коровы убивают и последнюю корову.
Поэтому, учитывая сложную эпидемическую и эпизоотическую ситуацию по туберкулёзу в нашей стране, недостаточную эффективность методов диагностики туберкулёза животных, совершенствование методов диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах является весьма актуальным.
2. Цель исследований. Совершенствование методов диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных и общественных хозяйствах. Предложить специальный, дополнительный комплекс методов диагностики туберкулёза в индивидуальных хозяйствах РФ.
3. Основные задачи исследований:
Изучить распространённость микобактериозов крупного рогатого скота в общественных и индивидуальных хозяйствах Стародубского района Брянской области.
Определить видовой состав микобактерий, выделенных от убитых с диагностической целью животных и объектов внешней среды .
Провести сравнительное изучение диагностической ценности симультанной туберкулиновой пробы с ГШД - туберкулином для млекопитающих и КАМ и симультанной туберкулиновой пробы с ППД -туберкулином для млекопитающих и ППД - туберкулином для птиц.
Изучить возможность применения ускоренной симультанной туберкулиновой пробы с ППД- туберкулином для млекопитающих и КАМ, в целях дифференциации аллергических реакций на туберкулин.
Изучить возможность применения индивидуального учёта проявления аллергических реакций при симультанном методе введения туберкул инов.
Изучить диагностическую ценность одновременного применения внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб с целью дифференциации аллергических реакций на туберкулин.
Оценить эффективность внутривенной туберкулиновой пробы при дифференциации аллергических реакций на туберкулин.
Разработать дополнительный комплекс методов диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах РФ.
4. Научная новизна. Представлен анализ проявления микобактериозов в
общественных и индивидуальных хозяйствах Стародубского района Брянской
области.
Установлена диагностическая ценность симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ и симультанной
8 туберкулиновой пробы с ППД -туберкулином для млекопитающих и ППД -туберкулином для птиц.
Впервые показана необходимость применения симультанной туберкулиновой пробы, с индивидуальным учётом реакций на разные аллергены, для дифференциации специфических и неспецифических реакций на туберкулин в индивидуальных хозяйствах.
Впервые показана возможность применения ускоренной симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ с индивидуальным учётом аллергических реакций на разные аллергены.
Определена диагностическая ценность комплексного применения внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб для дифференциации специфических и неспецифических реакций на туберкулин.
Впервые представлен специальный, дополнительный комплекс методов для диагностики туберкулёза в индивидуальных хозяйствах РФ.
5. Практическая ценность.
Результаты исследований по применению симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и ППД -туберкулином для птиц с индивидуальным учётом реакций, комплексное-применение внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб включены в «Наставление по диагностике туберкулёза животных», утверждённых Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства РФ 18.11.2002г.
Предлагается дополнительный, специальный комплекс методов диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах, где предусмотрено: применение симультанной туберкулиновой пробы и ускоренной симультанной туберкулиновой пробы, с индивидуальным учётом реакций на разные аллегены; комплексное применение внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб; применение внутривенной туберкулиновой пробы.
9 Материалы диссертационной работы по применению дополнительного, специального комплекса методов диагностики туберкулёза для индивидуальных хозяйств оформлены в виде дополнений и изменений к «Наставлению по диагностике туберкулёза животных» от 18.1 L2002 г.
6. Основные положения выносимые на защиту.
Материалы по сравнительному изучению диагностической ценности симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ и симультанной туберкулиновой пробы с ППД -туберкулином для млекопитающих и ППД - туберкулином для птиц при диагностике туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах.
Результаты исследований по применению ускоренной симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ для дифференциации аллергических реакций на туберкулин.
Результаты исследований по применению симультанной туберкулиновой пробы на крупном рогатом скоте общественных и индивидуальных хозяйств, с индивидуальным учётом проявления аллергических реакций.
Результаты применения внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб для дифференциации аллергических реакций на туберкулин.
Применение специального, дополнительного комплекса методов диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах РФ.
7. Апробация работы. Основные положения диссертационной работы
доложены на:
Международной научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики и профилактики туберкулёза животных», Москва, 2003 г.;
Межлабораторном совещании сотрудников ВИЭВ, Москва, 2005 г.
Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 3 научные работы.
Объём и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 166 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений и списка использованной литературы.
Список использованной литературы включает 254 наименования, из них 90 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 24 таблицами.
Микобактериозы сельскохозяйственных животных
Среди инфекционных заболеваний животных туберкулёз занимает особое положение. Несмотря на определённые достижения мировой науки и практики в изучении и ликвидации этого заболевания, туберкулёз и в настоящее время имеет распространение в некоторых зонах страны, наносит значительный экономический ущерб и имеет эпидемиологическое значение. Успех борьбы с туберкулёзом животных определяется уровнем изученности болезни, наличием эффективных методов и средств диагностики, а также экономическими возможностями хозяйств, материальным обеспечением и организацией профилактических и оздоровительных мероприятий.
В настоящее время проблема микобактериозов человека и животных является весьма актуальной, что связано с изучением эпизоотологического и эпидемиологического значения каждого вида микобактерий. Так, выделены виды микобактерий, вызывающие туберкулёз у человека (М. africanum, 1969), а некоторые виды атипичных микобактерий (М. kansasii, М. scrofulaceum, М. fortuitum и др.) обусловливают микобактериозы у людей, туберкулёзоподобные изменения у свиней, сенсибилизацию крупного рогатого скота к туберкулину для млекопитающих.
Д. Bergey (1974) было описано более 30 видов микобактерий. К ним относятся микобактерий, вызывающие патологический процесс у животных и людей, а также ряд потенциально патогенных видов. Каждый вид имеет комплекс культуральных, биологических, биохимических и иммунологических особенностей, позволяющих дифференцировать их друг от друга. Однако применяемые тесты не всегда позволяют с точностью идентифицировать каждый вид. Патогенными видами для крупного рогатого скота являются М. bovis и М. paratuberculosis. М. bovis вызывает туберкулёз, а М. paratuberculosis -паратуберкулёз (паратуберкулёзный энтерит). Что касается патогенности других видов микобактерий для крупного рогатого скота, то мнения исследователей, в основном, едины. Они обуславливают сенсибилизацию животных к туберкулину и не вызывают как правило, патологоанатомических изменений. Большинство исследователей считают, что возбудитель туберкулеза обладает патогенностью преимущественно для определенного вида животных. Так, возбудитель туберкулеза бычьего вида в основном патогенен для крупного рогатого скота, возбудитель туберкулеза птичьего вида для птиц, возбудитель туберкулёза человеческого вида - для человека. Однако, как показывает анализ литературных источников, те или иные виды микобактерий выделяли из организма различных видов животных, но патогенность их была для них неодинакова. Так, микобактерий туберкулеза бычьего вида, кроме крупного рогатого скота, патогенны для свиней, коз, овец, лошадей, верблюдов, собак, кошек, маралов, кроликов, морских свинок и др. животных, а также человека. Микобактерий туберкулёза человеческого вида, кроме человека, патогенны для свиней, собак, кошек, обезьян. Микобактерий птичьего вида, кроме птиц, патогенны для кроликов и свиней. Некоторые виды животных устойчивы, а другие - чувствительны и двум или ко всем трём видам микобактерий туберкулеза, что зависит от естественной резистентности и реактивности животных и человека.
Распространенность микобактериозов крупного рогатого скота в общественных и индивидуальных хозяйствах Стародубского района Брянской области
В Стародубском районе Брянской области имеется 28 колхозов и 10 совхозов. Основное направление хозяйств — мясо-молочное животноводство.
На 01.01.2002 г. в Стародубском районе имелось 27374 голов крупного рогатого скота. В общественных хозяйствах числится 21715 голов крупного рогатого скота, 5651 свиней, 1325 лошадей, 1746 мелкого рогатого скота. В 1054 индивидуальных хозяйствах частного сектора числится 5121 крупного рогатого скота, 9160 свиней, 1157 лошадей, 985 мелкого рогатого скота.
Стародубский район благополучен по туберкулёзу крупного рогатого скота общественного пользования. В индивидуальных хозяйствах частного сектора ежегодно выделяются реагирующие на туберкулин животные и выявляются единичные случаи заболевания туберкулёзом крупного рогатого скота.
В районе регистрируется туберкулёз людей. В населённых пунктах, где было установлено заболевание туберкулёзом людей, наиболее часто выявляются реагирующие на туберкулин животные и в единичных случаях подтверждается наличие туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах.
В общественных хозяйствах, где установлено заболевание туберкулёзом людей, при плановых аллергических исследованиях на туберкулёз крупного рогатого скота, выявляются реагирующие на туберкулин животные. При диагностическом убое реагирующих животных и лабораторном исследовании патматериала от убитых животных наличие ч туберкулёза не подтверждается, но выделяются атипичные микобактерии III и IV группы по классификации Раньона.
Исследования крупного рогатого скота индивидуальных хозяйств Стародубского района мы проводили в населённых пунктах, где по данным СЭС было установлено наибольшее количество заболевших туберкулёзом людей.
Исследования на туберкулёз крупного рогатого скота проводили методом внутрикожной туберкулиновой пробы. Реагирующих на туберкулин животных сдавали на убой.
Исследования провели в индивидуальных хозяйствах 6 населённых пунктов, где проживают семьи с больными туберкулёзом членами семей и где установлено наибольшее распространение туберкулёза людей, д. Олейниково, д. Красный посёлок, д. Зап. Халеевичи, д. Даревичи, д. Ломаковка, посёлок Десятуха.
В 6 населённых пунктах,- мы провели исследование 1316 голов v крупного рогатого скота индивидуальных хозяйств. Результаты проведённых исследований представлены в таблице 2.
Из таблицы 2 видно, что в 6 населённых пунктах, при исследовании 1316 голов крупного рогатого скота, выявлено 12 (0,9%) реагирующих на туберкулин коров. Причём, все реагирующие на туберкулин коровы выявлены в индивидуальных хозяйствах семей больных туберкулёзом людей. Из них, в д. Олейниково, при исследовании в 233 индивидуальных хозяйствах 273 голов крупного рогатого скота, выявлено 2 (0,7 %) реагирующих коров, в одной семье. В д. Красный посёлок, при исследовании в 167 индивидуальных хозяйствах 220 голов крупного рогатого скота, выявлено 4 (1,8 %) реагирующих коров, в трёх семьях.
Изучение возможности применения ускоренной симультанной туберкулиновой пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих и КАМ
Литературные данные и проведённые нами исследования показывают, что в благополучных по туберкулёзу хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями, лучшие результаты исследований даёт симультанная туберкулиновая проба с применением ППД - туберкулина для млекопитающих и КАМ. Однако, симультанная туберкулиновая проба имеет свои определённые недостатки.
Так, по данным многих авторов применение симультаннойЧ туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ, v позволяет дифференцировать аллергические реакции по степени проявления аллергических реакций на тот или иной аллерген только в 25-77% случаях. Кроме того, в соответствии наставления по применению этой пробы, симультанная проба с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ является групповой и даёт возможность ориентироваться в ситуации по туберкулёзу лишь в целом по стаду или группе (не менее шести голов) исследуемых животных.
В соответствии \/этого наставления, проведение симультанной туберкулиновой пробы допускается через 30 дней,, после последней туберкулинизации животных. В соответствии Санитарных и Ветеринарных правил/от 18.06.96 г. всех реагирующих на туберкулин животных необходимо в течении 14 дней сдать на убой или изолировать их в отдельном помещении,/ для проведения комплекса диагностических исследований, в целях установления диагноза на туберкулёз. В практических условиях, всех реагирующих животных сдают на убой (в случаях, если это единицы животных) или реагирующее животные остаются в общем стаде на неопределённое время, и только в редких случаях реагирующих животных изолируют от остального поголовья животных в отдельном помещении. Следует отметить, что в любом случае указанные решения или экономически не выгодны или опасны в эпизоотическом плане.
Учитывая, что при диагностике туберкулёза нет ни одного идеального метода диагностики, мы считаем, что с учётом специфических особенностей следует совершенствовать известные методы и на их основе, подбором разных методов диагностики предлагать комплекс методов диагностики туберкулёза в благополучных и неблагополучных хозяйствах, а также специальный комплекс методов исследований для индивидуальных хозяйств.
Считаем, что главная и неоспоримая польза симультанной пробы в том, что при её применении резко сокращается количество реагирующих на туберкулин коров, многие реакции превалируют на КАМ или переходят на t КАМ, то есть, в конечном итоге, как бы «сужается поиск» животных для диагностического убоя. Так, при применении симультанной туберкулиновой пробы диагностическому убою подлежат животные реагирующие с большей интенсивностью реакции на ППД — туберкулин для млекопитающих, а при отсутствии таковых - реагирующие в равной степени на туберкулин и КАМ.
Предлагаемая нами методика применения симультанной туберкулиновой пробы исходит из запросов практических ветеринарных специалистов. Известно, что в соответствии с утверждёнными нормативными документами, при применении симультанной туберкулиновой пробы крупному рогатому скоту ППД - туберкулин для млекопитающих и КАМ вводят внутрикожно, в область средней трети шеи, строго симметрично, справа и слева. Проведение симультанной пробы допускается не ранее чем через 30 днейг после последней туберкулинизации У животных. (30-дневный интервал предусмотрен из-за возможной J сенсибилизации кожи в месте введения аллергенов).
То есть, в практических условиях, ветеринарные специалисты проводят внутрикожную туберкулинизацию на одной стороне средней трети шеи животных ППД — туберкулином для млекопитающих, затем при выявлении реагирующих на туберкулин животных, через 30 дней переисследуют этих реагировавших животных симультанной туберкулиновой пробой. Или, в некоторых случаях, исследуют всё стадо симультанной туберкулиновой пробой. Однако, несмотря на применение безыгольных иньекторов БИ-7, исследование большого поголовья крупного / рогатого скота симультанной туберкулиновой пробой, является трудоёмкой и сложной работой.
Суть предлагаемой нами методики применения симультанной туберкулиновой пробы заключается в следующем. Первоначально исследуют всех животных внутрикожной туберкулиновой пробой (на одной стороне средней трети шеи). После учёта реакции, т.е. через 72 часа после введения туберкулина, всем реагирующим на туберкулин животным на другой стороне шеиу вводят внутрикожно ППД — туберкулин для / млекопитающих и КАМ в обычных дозах, на растоянии друг от друга 10-15 см.
