Введение к работе
j І.
І.І. Актуальность темы. Успех борьбы с туберкулезом животных определяется многими условиями, среди которых наиболее веяным является тшателыюе проведение комплексных мероприятий, направленных, главным образом, на выявление и удаление из оздоравли-ваешх стад больных аивотных, так как они являются основным юточником возбудителя болезни.
Для этой цели в качестве основного метода диагностики ту-5еркулеза применяют аллергический метод - туберкулиновую пробу. В нашей стране для диагностики туберкулеза'у илекопитавщнх [спользуюг туберкулин очищенный (ППД) для млекопитающих.
Известно, что качество туберкулина в большой степени вли-іет на эффективность аллергической диагностика туберкулеза у явотних. Технология получения ШД-Туберкулина представляет со-ой слозннй многостадийных процесс, каждый этап которого требует зиения тех или иных проблем. Разработка очищенного (ППД) тубер-улшш решила проблему активности препарата (seibert, 1932, 934, 1955) и в настоящее время, в связи с широким распростране-аем сенсибилизации шшотеых атипичными шшобактердями, главным эказателем качества туберкулина стала его видовая специфичность, зторая монет зависеть от сеойств производственных штаммов воз-дателя туберкулеза (Б.А. Дянда-Геллер, IS65; Р.Н.Родионова, 565, 1973; Ciortea et ей., 1971).
В соответствии с "Инструкцией по изготовлению и контролю гберкулина очищенного (ППД) для млекопитающих" ВГНКИ ветпрепа-ітов каждые 4-5 лет пассирует культуру производственного штамма ізбудителя туберкулеза через организм крупного рогатого скота высылает ее на биопредприятие для изготовления туберкулина, і биопредприятии культуру поддергивают путем последовательных
пересевов наздые 3 месяца на картофельной среде Павловского и адаптирувт к синтетической питательной среде (шдифацированной среде Сотона).
Для изготовления препарата используют культуры на синтети ческой питательной среде до четырнадцатой генерации. Если учитывать период адаптации культуры к этой среде, в процессе кото рой проводят 5-7 последовательных пересевов, количество генера пий достигает более 20. Наблюдения за производственными посевами на бибфабрпке показали, что через 12-14 госледовательных пересевов культуры на синтетической среде появляются признаки диссоциации в виде увлажненности, рыхлости пленки, образования тятей, помутнения среды, что указывает на изменение свойств культуры. Эти изменения могут отразиться на качестве туберкулина, на его видовой специфичности.
Научного обоснования возшшюсти длительного шддераания культуры возбудителя туберкулеза без риска вызвать изменения ее свойств в литературе нет.
При изготовлении коммерческих серий очищенного туберкулш на Курской биофабрике культуру возбудителя туберкулеза выращивают на синтетической питательной среде с ь-аспарагиноы, который закупается в зарубежных странах. Это создает значительные трудности экономического характера для производства и в целом для страны.
1.2. Цель и задачи исследования. Основной целью настоящеі исследования является оптимизация системы подготовки производственного штамма возбудителя туберкулеза бычьего вида для изг< товления туберкулина.
Для достижения поставленной цели были определены следушие основные задачи:
-
Изучить влияние количества пересевов на синтетической питательной среде на морфологические, культуральные, ферментативные свойства культуры, па ее вирулентпость, сенсибилизирующие свойства и антигенную специфичность.
-
Определить зависимость накопления баниасси, накопления белка, белкового состава культуральной жидкости от количества пересевов микобаптерий туберкулеза на синтетической питательной среда.
-
Изучить влияние количества пересевов культур возбудителя туберкулеза на синтетической питательной среда на активность и видовую специфичность изготавливаемого из них туберкулина.
-
Отработать методику быстрой адаптации культуры к синтетической питательной среде.
-
Подобрать среду высушивания для шкобактерий туберкулеза, обеспечивающую наибольшую сохранность кнвых клеток в процессе хранения:
отработать методику получения гомогенной взвеси я определения в ней количества клеток;
определить выживаемость культуры при храпении в лисфили-зированнои виде.
6. Проверить эффективность использования дпофплизированной
культуры, адаптированной к синтетической питательной среде, в
в производстве при изготовлении туберкулина.
7. Изготовить эталонную серию возбудителя туберкулеза бычь
его вида птамма й 8 в лнофилнзированноы виде для изготовления
туберкулина.
' 8. Определить возможность использования аспарагина отечественного производства для изготовления туберкулина.
1.3. Научная новизна. Впервые изучено влияние многократных
последовательных пересевов производственных штаммов возбудителя
туберкулеза бычьего вида па йантетической питательной среде на
отдельные свойства культур и йа качество изготавливаемого из них
туберкулина. Установлено, что юличёотво пересевов не влияет на
активность наготавливаемого туберкулина» во с увеличением этого
количества снижается видовая специфичность препарата.
Установлено стабилизирующее действие паро$ос$ата натрия и Твина-80 на взвесь клеток микобактерий туберкулеза, а также относительная стабильность взвеси в дистиллированной воде.
1.4. Практическая значимость. Разработана и внедрена в про
изводство оптимальная система подготовки производственных штам
мов возбудителя туберкулеза бычьего вида для изготовления тубер
кулина, обеопечивапцая стандартность используемой культуры. Спо
соб подготовки культуры признан рационализаторским предлокением.
Разработан способ стабилизации взвеси шкобактерий туберкулеза, что может быть использовано в научных исследованиях и в практической деятельности лабораторий.
Установлена пригодность применения L-аспарагнна отечест-. венного производства.для приготовления туберкулина.
Результаты исследований вошли в изменения и дополнения к "Инструкции по изготовлена» и контролю туберкулина очищенного (ППД) для млекопитающих", утвержденные Главным управлением ветеринарии Госагропрома СССР 2.10.87 г., а такхе в проект новой "Инструкции го изготовлению к юнтролю туберкулина очищенного (ППД) для млекопитающих".;Проект рассмотрен и одобрен на научно-техническом Совете Государственной. Курской био$абрики 14.II.89 г.
1.5. Апробация работа. Материалы диссертационной работы
доложены и получили положительную оценку:
на УІ, УП и X конференциях молодых ученых ВТЕКИ ветпрепаратов (1985, 1986. 1988);
на конференции молодых учених ЕНИМТИШ (1985);
на меялаборагорном совещании научных сотрудников ЕГНКИ ветпрепаратов (1990).
-
Публикации. По материалам диссертации опубликовада 2 научные работы.
-
Объем работа,. Диссертация изложена на 158 странндях машношсного текста и включает: введение, обзор литературу, собственнытз исследования, обсуждение полученных результатов, выеодн, практические предложения, список литературы Л ПрИЛ025» яле. Работа иллюстрирован 21 таблицей и 14 рисунками. Список использованной литература включает 293 источника, из них 114 яа етсстращшх языках.
Похожие диссертации на Оптимизация системы подготовки производственных штаммов возбудителя туберкулеза при изготовлении очищенного туберкулина для млекопитающих
