Содержание к диссертации
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 13
1.1. Распространение болезней, связанных с хромотой
и некробактериозом 13
1.2. Экономический ущерб, обусловленный поражениями
конечностей и некробактериозом 19
Методы диагностики некробактериоза 22
Основные методы профилактики и борьбы с некробактериозом сельскохозяйственных животных 32
Неспецифические, ветеринарно-санитарные методы 32
Биологические (специфические) профилактические
препараты и их применение 39
1.5. Препараты и методы, применяемые для
лечения больных некробактериозом животных 50
1.6. Заключение по обзору литературы 67
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 73
Методы исследований и объем работы 73
Результаты исследований 78
2.2.1. Обоснование необходимости совершенствования системы
контроля эпизоотического процесса некробактериоза крупного
рогатого скота в связи с многообразием форм его проявления 78
2.2.2. Совершенствование методов диагностики некробактериоза
сельскохозяйственных животных 83
2.2.2.1. Усовершенствование метода отбора биоматериала из
пораженной конечности для лабораторного исследования 83
2.2.2.2. Сравнительная эффективность индикация Fusobacterium
necrophorum бактериологическим методом и с помощью гнездовой ГЩР 85
2.2.3. Определение роли специфической профилактики в системе
контроля эпизоотического процесса некробактериоза
крупного рогатого скота 88
2.2.3.1. Регламент получения антигена Fusobacterium
necrophorum и постановка реакции агглютинации 88
2.2.3.1.1. Выбор культуры (изолята) в качестве антигена 89
2.2.3.1.2. Методика приготовления антигена F. necrophorum 95
2.2.3.1.3. Техника постановки РА 96
2.2.3.2. Изготовление и апробация вакцины ГОА ИЭВСиДВ 98
Определение иммунизирующей дозы вакцины 98
Испытание вакцины в неблагополучных по некробактериозу хозяйствах 100
Сочетанное применение вакцинации и неспецифических мероприятий при оздоровлении от некробактериоза 111
Одномоментное испытание разных разрабатываемых противонекробактериозных вакцин в однотипных условиях 127
2.2.4. Оздоровление неблагополучных по некробактериозу хозяйств
с разной эпизоотической ситуацией неспецифическими методами 134
2.2.4.1. Естественная резистентность организма крупного
рогатого скота - как условие эффективности неспецифических
методов оздоровления 134
2.2.4.2. Применение неспецифических мероприятий
в неблагополучных хозяйствах 140
2.2.5. Разработка и испытание препаратов для лечения больных
некробактериозом животных 164
2.2.5.1. Новый лекарственный препарат некрогель местного действия 164
2.2.5.1.1 .Состав препарата и доклинические исследования 164
2.2.5.1.2. Изучение острой токсичности некрогеля для белых
мышей при введении в желудок 167
2.2.5.1.3. Изучение острой токсичности некрогеля для белых крыс 169
»
Изучение местно-раздражающего действия некрогеля на лабораторных (кролики, морские свинки) и сельскохозяйственных животных (коровы) с проведением общего анализа крови 169
Определение стерильности некрогеля 173
Изучение аллергизирующего действия некрогеля 173
Определение лечебной эффективности некрогеля в контролируемых производственных опытах 174
Производственное испытание препарата некрогель
в ряде регионов страны 175
2.2.5.1.9. Экономическая эффективность применения некрогеля при
некробактериозе крупного рогатого скота 176
Разработка препарата местного действия в форме присыпки 180
Испытание лечебных препаратов разных фирм-производителей 183
Разработка и испытание инъекционных лечебных препаратов 185
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ 193
ВЫВОДЫ 232
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 235
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 237
ПРИЛОЖЕНИЕ 312
Введение к работе
Некробактериоз - инфекционная болезнь животных, характеризующаяся гнойно-некротическими поражениями тканей нижних частей конечностей, кожи тела и подлежащих тканей, а также слизистых оболочек пищеварительного тракта и внутренних органов.
Болезнь имела широкое распространение в 70-80-е годы прошлого века во всех республиках бывшего Советского Союза. С середины 90-х годов, с распадом СССР и образованием на его основе независимых суверенных государств, по данным официальной государственной ветеринарной отчетности, во многих областях Российской Федерации наметилась тенденция к снижению числа неблагополучных пунктов по некробактериозу и заболевших животных. Практически не поступает биоматериал для диагностики болезни в ветеринарные лаборатории. Однако результаты эпизоотологических исследований указывают на значительное распространение болезни на территории Сибирского региона, Республики Татарстан, Европейской части страны, и в независимых сопредельных государствах (А.А. Самоловов, 1993; Д.А. Хузин, Г.Х Камалов, 1995; В.В. Максимович, Э.И. Веремей, 1999; Х.Н. Макаев и др., 2000; В.Н. Кисленко с соавт., 2001; В.А. Молоканов, В.М. Щеглов, М.Т. Байкенов, 2001; В.И. Тетеричев и др., 2001; Т.Е. Какоулин, Л.Н. Головкова, 2002).
Так, по данным О.И. Соломаха, Л.В. Кириллова (2001), в Российской Федерации ежегодно болеют некробактериозом около 7% крупного и 16% -мелкого рогатого скота. По распространенности болезнь занимает третье место после лейкоза и туберкулеза. А. Сидорчук, А. Воронец (2001) указывают, что за последние 20-25 лет заболеваемость крупного рогатого скота некробактериозом вышла в структуре инфекционной патологии на одно из первых мест.
Болезнь наносит неблагополучным хозяйствам большой экономический ущерб. По сообщениям Ю.Д. Караваева с соавт. (1998, 1999,
2003,2004) в процессе переболевания коровы теряли 30-40% массы тела и до одной тонны молока. В оленеводстве из заболевших за год 50-70 тыс. голов 30-35 % животных погибали.
Основным способом лабораторной диагностики некробактериоза крупного и мелкого рогатого скота является бактериологическое исследование: микроскопия мазка, посев на питательные среды, биопроба на лабораторных животных. Эти методы диагностики направлены в основном на выделение F. necrophorum без учета его вирулентности. Традиционно по этому признаку у микроба различали три основных {А, В и С) и один промежуточный биотип (АВ). Биотип А считается наиболее вирулентным, его чаще выделяют из абсцессов печени крупного рогатого скота и называют F. necrophorum subsp. necrophorum. Биотип В считается менее вирулентным, его выделяют из содержимого рубца и называют F. necrophorum subsp. fundiliforme. Промежуточный биотип АВ в основном находят в ранах конечностей крупного рогатого скота и овец, а также в поражениях, первично вызванных биотипами А и В. Биотип С в настоящее время признан апатогенным и выделен в специальный вид F. pseudonecrophorum. Его можно выявить из содержимого рубца, абсцессов и фекалий (АХ. Hodgson et al., 1993; L.A. Nicholson et al., 1994; D.L. Emery, 1985; T. Shinjo, K. Hiraiwa, S. Miazato, 1990).
При некробактериозе, особенно его кожной форме, наряду с основным возбудителем в больших количествах присутствует сопутствующая микрофлора: стафилококки, стрептококки, микрококки, кишечная палочка и другие микроорганизмы, препятствующие получению чистой культуру и своевременно и правильно поставить диагноз. В целом на постановку диагноза затрачивается 8-Ю суток, а в случае значительного обсеменения биологических образцов вульгарной микрофлорой, это время увеличивается на 6-Ю дней.
В настоящее время наиболее чувствительными и специфичными признаны способы диагностики инфекционных болезней, основанные на
7 выявлении генома возбудителя в биологическом материале с помощью полимеразной цепной реакции, позволяющей сократить сроки диагностических исследований до 1-2 дней и обнаружить возбудитель при очень низких его концентрациях.
В России, в начале 90-х годов начались усиленные исследования многочисленных групп авторов по изысканию биологических препаратов, в частности вакцин разного типа, для профилактики некробактериоза животных. По данным А. Сидорчук, А. Воронец (2001), вакцины нековак и нековак-стимул в течение одного-двух лет резко снижают количество больных в неблагополучном стаде (с 30-50 % до 1-5%), а в ряде случаев удается добиться полной ликвидации заболевания. Как указывают авторы, для повышения эффективности вакцинации, необходимо сочетать применение препарата с другими ветеринарно-санитарными мероприятиями.
По сообщению О.И. Соломаха, Л.В. Кириллова (2001), среди животных, привитых инактивированной формолвакциной, заболело 0,3% особей, при заболеваемости до вакцинации и в контроле, равной 15-30%.
Ю.Д. Караваев с соавт. (2004) на основании своих исследований показали, что инактивированная эмульсин-вакцина предохраняет от заболевания около 98 % привитых животных и обладает терапевтическим эффектом. Наилучший эффект достигался в тех хозяйствах, где было сбалансированное кормление, вовремя проводилась обрезка копытец у животных.
Тем не менее, в основе мер борьбы и профилактики некробактериоза остаются все еще общие ветеринарно-санитарные меры, основанные на особенностях эпизоотического процесса некробактериоза.
За последние 10-15 лет для лечения больных некробактериозом животных было предложено и апробировано значительное количество неспецифических лечебных средств местного и общего действия. Препараты общего действия (левотетрасульфин, некрофар и др.) обладают раздражающим действием на организм животных, содержанием в своем
8 составе большого количества антибиотиков, что исключает возможность
использования молочной и мясной продукции в пищу в течение 7-10 дней
после их применения. После длительного их использования возможно
привыкание возбудителя некробактериоза к антибиотикам. Большинство
лечебных препаратов, применяемых местно при некробактериозе, обладают
или антимикробным, или только дегидратирующим действием. Поэтому
разработка эффективных комплексных препаратов и поиск оптимальных
схем лечения крупного рогатого скота при указанной болезни имеют
большое значение для сохранения поголовья.
Таким образом, очевидна необходимость совершенствования системы контроля эпизоотического процесса некробактериоза крупного рогатого скота на основе различных средств и методов диагностики, специфической и неспецифической профилактики и терапии.
Цель и задачи исследований
Цель исследований: - усовершенствовать систему контроля эпизоотического процесса некробактериоза крупного рогатого скота, в том числе на основе новых препаратов для лечения больных животных, и обосновать ее эффективность в практических условиях.
Задачи исследований:
1. Обосновать необходимость совершенствования системы контроля
эпизоотического процесса некробактериоза в связи с многообразием форм
его проявления.
2. Усовершенствовать методы диагностики некробактериоза
сельскохозяйственных животных.
3. Определить роль специфической профилактики в системе контроля
эпизоотического процесса некробактериоза крупного рогатого скота.
4. Обосновать неспецифические методы оздоровления в
неблагополучных по некробактериозу хозяйствах с разной эпизоотической
ситуацией.
9 5. Разработать и испытать препараты для лечения больных
некробактериозом животных.
Научная новизна работы.
Некробактериоз животных следует рассматривать не как местное поражение тканей дистальных отделов конечностей, а как системное заболевание, ведущими силами, влияющими на инфекционный и эпизоотический процессы, выступают условия кормления и содержания. Исходя из этого положения, обоснованы разработанные лечебные и профилактические мероприятия.
Установлено, что больные некробактериозом животные имеют пониженную естественную резистентность организма, особенно по лизоцимной и бактерицидной активностям, по сравнению со здоровыми, как при стойловом, так и пастбищном содержании.
Разработан и практически обоснован новый метод отбора биоматериала из пораженной конечности для лабораторной диагностики некробактериоза, повышающий ее эффективность на 33,3%.
Впервые показано, что диагностическое исследование биологических образцов из пораженных конечностей на некробактериоз бактериологическим методом и полимеразной цепной реакцией имеет тождественное значение, и ПНР с гнездовыми праймерами для выявления F. necrophorum subsp. necrophorum может быть использована в качестве экспресс-метода для диагностики кожной формы некробактериоза.
Биологическими исследованиями обосновано определение штамма Fusobacterium necrophorum ИВ В-845.
Разработаны методики приготовления антигена из штамма Fusobacterium necrophorum ИВ В-845 и постановки реакции агглютинации для выявления титра антител.
Разработана и апробирована вакцина ГОА ИЭВСиДВ, не уступающая
по эффективности другим известным вакцинам. Установлено, что у
иммунизированных животных заболеваемость некробактериозом была
10 достоверно ниже по сравнению с невакцинированными. Показано, что применение только одного метода вакцинации для профилактики и ликвидации некробактериоза животных в неблагополучном хозяйстве не обеспечивает полную защиту животных от данной болезни. Коэффициент снижения интенсивности проявления эпизоотического процесса после применения вакцин составил от 41,1 до 59,78 %.
Теоретически и практически обосновано, что меры борьбы с некробактериозом крупного рогатого скота должны базироваться на комплексном проведении организационно-хозяйственных, ветеринарно-санитарных и лечебно-профилактических мероприятий, воздействующих на все звенья эпизоотического процесса - восприимчивое животное, возбудителя инфекции и факторы передачи.
Разработан и предложен для ветеринарной практики комплексный, безвредный лечебный препарат для местного применения - некрогель (патент РФ № 2204997, 2003 г.), обладающий антимикробным действием в отношении микроорганизмов, участвующих в инфекционном гнойно-некротическом процессе при некробактериозе животных.
Разработаны и испытаны два инъекционных препарата тетрацин, некросептин и препарат для местного применения - фузоцид.
Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты проведенных исследований вносят существенный теоретический и практический вклад в совершенствование системы контроля эпизоотического процесса некробактериоза и будут полезными в учебном процессе ВУЗов и при дальнейшем изучении проблемы некробактериоза. Результаты исследований по разработке мер борьбы и профилактики некробактериоза животных вошли в "Правила по профилактике и ликвидации некробактериоза животных", N ВП 13.4.1313-00 от 11.07. 2000 г., утвержденные Департаментом Ветеринарии Минсельхозпрода России.
Предложены для лечебных целей препараты местного и системного
действия.
Разработанные методические рекомендации по изготовлению антигена Fusobacterium necrophorum и постановке реакции агглютинации для определения титров агглютининов при иммунизации могут использоваться работниками научно-исследовательских учреждений при проведении дальнейших исследований по проблеме некробактериоза.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на заседаниях Ученого Совета ГНУ ИЭВСиДВ (1990-2006 гг.) научно-практической Российско-Монгольской конференции по проблемам развития АПК Монголии (Новосибирск, 1998), Международной научно-практической конференции "Проблемы патологии, санитарии и бесплодия в животноводстве", посвящ. 100-летию со дня рожд. Х.С. Горегляда и М.К. Юсковца (Минск, 1998), VI научно-практической конференции "Развитие агропромышленного комплекса в зонах рискованного земледелия" (Новокузнецк, 1999), Международной научно-практической конференции "Проблемы стабилизации и развития сельскохозяйственного производства Сибири, Монголии и Казахстана в XXI веке" (Новосибирск, 1999), Научно-практической конференции "Внедрение ресурсосберегающих технологий в сельскохозяйственном производстве" (Новокузнецк, 2000), Международной научно-практической конференции "Проблемы стабилизации и развития сельского хозяйства Казахстана, Сибири и Монголии" (Новосибирск, 2000), Международной научно-практической конференции "Проблемы ветеринарной науки и практики в современных условиях", посвященной 10-летию независимости Республики Казахстан (Алматы, 2001), Научно-практической конференции "Болезни сельскохозяйственных животных вирусной и других этиологии и меры борьбы с ними" (Иркутск, 2001), 5-й международной научно-практической конференции "Научное обеспечение АПК Сибири, Монголии, Казахстана, Беларуси и Башкортостана (Абакан, 2002), VII международной научно-производственной конференции "Проблемы с/х производства на современном этапе и пути их решения" (Белгород, 2003), Международной научно-практической конференции
12 "Актуальные проблемы болезней животных в современных условиях" (Душанбе, 2003), Международной научной конференции "Современные проблемы эпизоотологии" (Новосибирск, 2004), Сибирской международной научно-практической конференции "Актуальные вопросы ветеринарной медицины" (Новосибирск, 2004), Сибирском Международном ветеринарном конгрессе "Актуальные вопросы ветеринарной медицины" (Новосибирск, 2005), Международном съезде терапевтов, диагностов "Актуальные проблемы патологии животных" (Барнаул, 2005), Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летнему Юбилею Каз НИВИ "Современное состояние и актуальные проблемы развития ветеринарной науки и практики, посвященной 100-летию института" (Алматы, 2005).
Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены на межлабораторном совещании сотрудников ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (2006).
Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 48 научных работ, в том числе 11 статей в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК Минобразования РФ («Ветеринария», «Аграрная наука», «Достижения науки и техники АПК», «Молочное и мясное скотоводство», «Сибирский вестник сельскохозяйственной науки»). Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 325 страницах, содержит 52 таблицы, 6 рисунков, и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы и практические предложения, список использованной литературы, приложения. Список использованной литературы включает 658 источников, в том числе 180 зарубежных авторов.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Обоснование необходимости совершенствования системы контроля эпизоотического процесса некробактериоза крупного рогатого скота.
2. Данные по усовершенствованному методу диагностики
некробактериоза сельскохозяйственных животных.
Результаты исследований по изучению роли специфической профилактики в системе контроля эпизоотического процесса некробактериоза крупного рогатого.
Данные по оздоровлению неблагополучных по некробактериозу хозяйств с разной эпизоотической ситуацией неспецифическими методами.
5. Результаты разработки и испытания препаратов для лечения больных
некробактериозом животных.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
