Содержание к диссертации
Введение
1.Обзор литературы 10
1.1. Этиология микоплазмоза телят 10
1.2. Методы индикации и идентификации микоплазм 16
1.2.1. Индикация и идентификация микоплазм на питательных средах 21
1.2.2. Серологические методы диагностики микоплазмоза 26
1.3. Чувствительность микоплазм к химиопрепаратам 33
1.3.1. Способы и методы лечения животных при микоплазмозе и ассоциативных формах его проявления 35
1.4. Заключение 39
2. Собственные исследования 41
2.1. Материалы и методы 41
2.2. Изучение эпизоотической ситуации по микоплазмозу молодняка крупного рогатого скота и ассоциативным формам его проявления в хозяйствах Омской области 43
2.3. Диагностика микоплазмоза телят 48
2.3.1. Микробиологические методы диагностики 48
2.3.1.1. Индикация и идентификация микоплазм на питательных средах 48
2.3.2. Основные биологические свойства микоплазм 51
2.3.2.1. Морфологические свойства з
2.3.2.2. Биохимические свойства. 51
2.3.2.3. Патогенные свойства 55
2.4. Серологические методы диагностики микоплазмоза 57
2.4.1. Получение микоплазмозных антигенов
и диагностических сывороток для РНИФ 57
2.4.1.1. Изучение специфичности и активности сывороток и антигенов в РНИФ 61
2.4.2. Получение эритроцитарного диагностикума для РИГА 62
2.4.3. Сравнительная оценка диагностической ценности микробиологического и серологических (РНИФ, РНГА) методов диагностики в производственных уловиях 66
2.5. Изыскание средств и методов лечения телят при микоплазмоз ассоциированной инфекции 81
2.5.1. Определение чувствительности полевых культур микоплазм к антибактериальным препаратам in vitro 81
2.5.2. Изучение различных схем лечения и лабораторных методов контроля их эффективности 84
2.5.3. Экономическое обоснование схем лечения 99
3. Обсуждение результатов 103
Выводы 108
Практические предложения по
Список литературы
- Методы индикации и идентификации микоплазм
- Чувствительность микоплазм к химиопрепаратам
- Микробиологические методы диагностики
- Определение чувствительности полевых культур микоплазм к антибактериальным препаратам in vitro
Введение к работе
Актуальность темы. Респираторные болезни телят, в последние годы, по заключению многих отечественных и зарубежных учёных, стали одним из главных препятствий на пути развития промышленного скотоводства. В органах дыхания телят и других животных обнаруживают значительное количество различных по видовому составу мико плазм, а также многокомпонентные системы (вирусы, бактерии), конечный эффект взаимодействия с которыми организма животного ещё не раскрыт (П.М. Митрофанов, К.М. Хакимова, Х.З. Гаффаров, 1978; L.J. Kusiluka, В. Ojeniyi, N.F. Friis, 2000; В.Г. Ощепков, М.Н. Шадрина, Н.Н. Шкиль, 2000, 2001; А.П. Красиков, Н.В. Рудаков, Н.Н. Николаева, 2001; Н.Н. Новикова, 2002; О.А. Сунцова, 2004; В.Э. Малошевич, СБ. Лыско, Н.Ф. Хатько, 2005; О.В. Вологодская, 2006).
Микоплазмоз крупного рогатого скота характеризуется у коров и нетелей развитием маститов, эндометритов, вульвовагинитов, сальпингитов, абортами, рождением слаборазвитых, зачастую недоношенных, нежизнеспособных телят, бесплодием. У быков он проявляется в виде орхитов и эпидидимитов, а у телят - кератоконъюнктивитами, ринитами, пневмониями и артритами.
Данная инфекционная болезнь наносит хозяйствам значительный экономический ущерб. Поэтому проблема микоплазмоза на сегодня весьма актуальна.
Одной из причин низкого выхода и гибели телят в хозяйствах Омской области является широкое распространение среди маточного поголовья коров урогенитального микоплазмоза в ассоциации с другими инфекциями (А.П. Красиков, О.В. Вологодская, 2004 - 2006; В.Э. Малошевич, 2005).
В связи с этим, актуальным является проведение массовых обследований молодняка крупного рогатого скота с применением экспресс-методов диагностики на микоплазмоз и его ассоциации с другими инфекционными болезнями. Это позволит своевременно профилактировать распространение микоплазмоза, выявлять сопутствующие инфекции и лечить телят. Все это послужило основанием для проведения данных исследований.
Цель работы. Усовершенствовать методы диагностики при мико-плазмоз-ассоциированной инфекции и разработать методы лечения телят. Задачи исследований:
- установить ассоциативные формы проявления микоплазмоза у молодняка крупного рогатого скота и степень их распространения в хозяйствах Омской области;
изучить культуральные, морфологические, биохимические и патогенные свойства выделенных от телят микоплазм;
разработать и испытать в производственных условиях экспресс- методы диагностики и эффективные схемы лечения телят при микоплазмоз-ассоциированной инфекции, дать им экономическое обоснование.
Научная новизна. Выявлена широкая распространенность в хозяйствах Омской области микоплазмоз-ассоциированной инфекции телят. Изучены основные свойства микоплазм, выделенных от молодняка крупного рогатого скота. Усовершенствованы экспресс-методы диагностики микоплазмоза: микробиологический - с помощью специальных питательных сред и серологические - для выявления микоплазм и их антигенов в биоматериале и антител в сыворотке крови и бронхоальвеолярных смывах в РНИФ и РИГА.
Получена приоритетная справка № 200 711 5734 /13 (017092) от 25.04.07 на способ получения эритроцитарного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) при микоплазмозе крупного рогатого скота.
Разработаны научно-обоснованные рациональные схемы лечения телят разных возрастных групп при ассоциативном микоплазмозе и лабораторные методы контроля их эффективности.
Теоретическая и практическая значимость работы. Материалы диссертации вносят определенный вклад в развитие науки микоплазмоло-гии и в изучение микропаразитоценозов респираторной системы телят, дополняя концепцию о полиэтиологической роли микроорганизмов, участвующих в инфекционном процессе ассоциативного характера. Результаты исследований являются основой для дальнейшего более глубокого изучения микропаразитоценозов других экологических ниш и систем организма животных.
Использование эффективных рациональных схем лечения телят при микоплазмоз-ассоциированной инфекции и экспресс-методов диагностики, которые отражены в методических рекомендациях «Комплексная система мер борьбы и профилактики с ассоциативными инфекционными болезнями животных» и «Диагностика и лечение при микоплазмоз-ассоциированной инфекции телят», ускорит сроки выявления больных животных, повысит сохранность телят, позволит контролировать эпизоотическую обстановку по данной инфекции.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Омск, 2005, СО РАСХН ВНИИБТЖ), научной конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов ИВМ ФГОУ ВПО ОмГАУ, 2006 г. «Научные и практические проблемы ветеринарной медицины, животноводства и перспективы их решения» (Омск, 2006), Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины продуктивных и непродуктивных животных» (Омск, 2006, СО РАСХН ВНИИБТЖ), Международной научной конференции «Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных» (Ульяновск УГСХА, 2006г), Международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях» (Краснодар, 2006), Межрегиональ-
ной научно-практической конференции «Патология сельскохозяйственных животных и пути её профилактики» (Омск, 2007, СО РАСХН ВНИИБТЖ), Международной научно-практической конференции, посвященной 45-летию Северо-Казхстанского НИИ животноводства и ветеринарии «Состояние и перспективы аграрной науки Казахстана и Западной Сибири» (Бишкуль, 2007).
Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 130 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 31 таблицей и 15 рисунками. Список литературы включает 164 источника, в том числе 50 зарубежных авторов.
Методы индикации и идентификации микоплазм
Различия между методами индикации и идентификации микоплазм состоят в их применении в медицине или в ветеринарии и в видо 17 вой характеристике животных (крупный рогатый скот, мелкий рогатый скот, свиньи), а также от формы проявления болезни (конъюнктиваль-ная, суставная, легочная, урогенитальная). В зависимости от этого следуют принципиальные отличия во взятии биоматериала и первичной его обработки с целью выделения микоплазм, а также сопутствующей микрофлоры, являющейся ассоциирующей в течение всего инфекционного процесса. Микробиологические и иммунологические подходы в диагностическом плане остаются, неизменны, к ним относятся метод индикации микоплазм на жидких и плотных питательных средах, а также дальнейшая типизация в серологических или иммунологических тестах, ДНК-диагностика.
Такие ученые, как В.Д. Тимаков, Г .Я. Каган (1973) в своих многочисленных работах отмечали, что изучение микоплазм и L-форм бактерий необходимо проводить комплексно, не отрывая друг от друга. В 1976 г. Э.А. Шегидевич предложил новую схему исследования патологического материала на наличие микоплазм, суть, которой заключается в том, что а) при выделение необходимо отказаться от употребления ингибиторов - пенициллина и уксуснокислого таллия. Для очистки исследуемых объектов от бактериальных контаминантов целесообразно использовать физические методы - фильтрацию и центрифугирование, которые в прошлом с успехом применяли исследователи, изучавшие перепневмонию крупного рогатого скота, плевропневмонию коз, агалак-тию овец и коз и т.д.; б) при выделение микоплазм необходимо проводить полный бактериологический анализ исследуемого объекта, используя для этого набор питательных сред различных прописей.
Данная методика была принята за основу многими исследователями, занимавшимися изучением микоплазмоза сельскохозяйственных животных. Вместе с тем П.М. Митрофанов (1982) рекомендует добавлять к питательным средам пенициллин в дозе 1000 ЕД/мл и ацетат таллия (в конечной концентрации 1:2000), для подавления бактериальной флоры при первичном посеве биоматериала, а для исключения роста L-форм бактерий проводить 3-5 последовательных пассажей выделенных культур с 5-дневными интервалами на сывороточных питательных средах без ингибиторов для восстановления исходных форм бактерий.
Другие ученые (С.Н. Борхениус, О.А. Чернова, 1989) предлагают методы для обнаружения и идентификации микоплазм с использованием клеточных культур, в следующей последовательности: посев на специальные среды, электронная микроскопия, люминесцентная микроскопия в сочетании с окраской ДНК, обычная световая микроскопия с авторадиографией, введение Б-метилпуриндезоксирибозида (БМПДР) непосредственно в культуральную среду, иммунологические с использованием нефракционированных антисывороток, поли- и моноклональных антител, гибридизационные с использованием РНК и ДНК - зондов.
Иностранные ученые С. Gil-Juarez, В.A. Calderon, J. Montero, А. Yanez, L. Cedillo (1996) индикацию микоплазм осуществляли культу-ральным методом, а видовую идентификацию проводили с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Т. Schaeverbeke, Н. Renaudin (1997) также производили систематическое детектирование микоплазм с помощью культурального метода и ПЦР, при этом в каждой исследуемой пробе проводили также и титрацию возбудителя в патологическом материале.
Вместе с тем Т.А. Гасанова (2001) считает, что хронические заболевания, обусловленные многокомпанентными паразитоценозами, включающими представителей разных таксономических групп (бактерий, вирусы, грибы, простейшие), нужно диагностировать не только с помощью качественных и количественных характеристик микроорганизмов, но также наряду с ними необходимо применение функциональных критериев для описания микроэкологического статуса. Не культивируемые и персистентные формы микроорганизмов, очевидно, не могут быть этиологически значимой, лидирующей микрофлорой, определяющей клинические проявления и тяжесть инфекционного процесса вслед-ствии низкого уровня метаболизма и, следовательно, вирулентности. Таким образом, если микроорганизм и его антиген определяется с помощью иммунофлюоресценции (ИФ), иммуноферментного анализа (ИФА), полимеразной цепной реакции (ПЦР), ДНК-гибридизации, но не изолируются в культуре клеток или изолируются в персистентной форме, то он вряд ли может быть этиологически значимым компонентом. У микроорганизма - «лидера» должен быть высокий уровень метаболизма и вирулентности. Поэтому для диагностики паразитоценоза при хронических воспалительных процессах необходимо использовать лабораторные тесты двух уровней: тесты первого уровня (скринигирующие) для качественной характеристики паразитоценозов и тесты второго уровня (культуральные) для их количественной и функциональной характеристики. К тестам первого уровня относятся: микроскопия мазков с окраской по Граму и Романовскому-Гимзе для общего представления о пара-зитоценозе; индикация возбудителей методами прямой и непрямой РИФ, ИФА или ПЦР, ДНК-зондов; серологическое исследование методом ИФА и ИФ. Тестами второго уровня, позволяющими определить уровень метаболизма патогенных микроорганизмов, являются классические культуральные, либо быстрые культуральные методы с типирова-нием возбудителя с помощью моноклональных антител (МАТ) или по-ликлональных антител (ПАТ).
Чувствительность микоплазм к химиопрепаратам
Принадлежность выделенных культур к микоплазмам определяли по основным биохимическим свойствам: разложение глюкозы, аргинина, мочевины, культивируя их на жидких и плотных элективных диагностических питательных средах. Определяя видовую идентификацию микоплазм по ключу Gourlay and Howard (1979), изучали протеолитиче-скую активность, редукцию тетразоля, потребность в холестерине, диги-тонинчувствительность и рост при 22С.
Протеолитическая активность характеризуется способностью разжижать или свертывать сыворотку крови, желатин, гидролизовать казеин.
Проводя реакцию с разжижением сгустка сыворотки, питательную среду, состоящую из 16 мл сердечного экстракта, автоклавированного при 121 С в течение 20 минут, 60 мл сыворотки крови лошади, 1,6 мл 25%-ного дрожжевого экстракта, 2,4 мл стерильной воды, разливали в пробирки по 2 мл. Пробирки высушивали под вакуумом 20-30 минут, после чего в наклоненном положении, подогревали текучим паром, в течение 45 минут. В эту среду вносили различные разведения исследуемой культуры и контрольного штамма. Пробирки инкубировали в течение 14-20 суток, просматривая их каждые 2 дня. Углубление и просветление поверхности агара, образование в нем отверстий, полостей, небольшого количества жидкости, подтверждало протеолитическую активность выделенных микоплазм.
Наблюдая за гидролизом казеина, 8 г порошка снятого молока растворяли в 90 мл воды (рН 7,6). Автоклавировали при 121 С в течение 15 минут. Расплавляли 2 г очищенного агара (оксоид) в 120 мл воды, доводя рН до 7,6 и автоклавировали при 121 С в течение 15 минут. В асептических условиях смешивали два раствора и разливали в пробирки по 2 мл. Расплавляя молочный агар на водяной бане, наносили несколько капель на колонии исследуемой культуры на агаре. Инкубировали в течение 2-х недель при 37 С. Учет вели каждые 2 дня. Положительную реакцию считали при просветлении молочного агара над колониями микоплазм.
При эксперименте с разжижением желатина, питательную среду, состоящую из 2,5 г сердечного экстракта (Дифко), 12 г желатина (Дифко) и 100 мл воды, разливали по пробиркам по 3 и 7 мл, автоклавировали при 121 С, в течение 10 минут. Перед охлаждением в каждую пробирку добавляли 1 мл стерильной сыворотки крови лошади и 0,25 мл 25%-ного дрожжевого экстракта. Агаровый блок с культурами микоплазм переносили в пробирку со средой. Эту пробирку, пробирку с контрольным штаммом и пробирку с питательной средой, незасеянной культурами микоплазм, помещали в термостат при 37 С на 30 суток. Ре 53 акцию учитывали 2 раза в неделю, предварительно охлаждая пробирки до 4 С, в течение часа.
Определяя способность микоплазм редуцировать тетразоль, добавляли к 72 - часовым культурам, выделенным на жидких средах, 0,5%-й водный раствор тетразоля, после 7-10 дней инкубации их в термостате при 37 С, положительной считали реакцию при окрашивании среды в красный цвет, которую наблюдали на средах с посевами микоплазм.
При определении потребности микоплазм в холестерине, бульонную культуру центрифугировали при 20 тыс. об. в течение 20 мин. Осадок отмывали фосфатным буфером 2 раза. Взвесь осадка использовали для засева пробирок с питательной средой без холестерина, в соотношении 1:10 и для чашек с мясопептонным агаром в количестве 0,1 мл. После инкубационного периода (3-5 суток), из пробирок и чашек Петри с засеянными культурами, производили пассирование 4-5 раз. Микоплаз-мы, выделенные у телят, погибали в течение 1-2 пассажей.
Проводя определение чувствительности микоплазм к дигитонину,75 мг дигитонина взвешивали и вносили в 5 мл этанола, помещенного в плотно закрывающиеся пробирки. Смесь подогревали на водяной бане до полного растворения дигитонина. Диски стерильной фильтровальной бумаги, диаметром 6 мм, помещали в стерильные чашки Петри так, чтобы они не соприкасались. На каждый диск наносили 0,025 мл раствора дигитонина, высушивали в течение 8 часов при температуре 37 С и хранили при 4 С.
Исследуемую культуру добавляли таким образом, чтобы получить разведение, содержащее 105 КОЕ/мл. Наносили 0,2 мл разбавленной культуры на поверхность твердой среды, в виде протекающей капли. Засеянные чашки высушивают в течение 10 минут, затем на центр полосы протекающей капли накладывали диски, содержащие дигитонин. Куль 54 тивировали при температуре 37 С, измеряя зону ингибиции роста (мм) от края диска до края зоны ингибиции. Наблюдали рост культур мико-плазм на расстоянии 2-15 мм от края диска.
Также проводили наблюдения за образованием пленки и пятен. Для чего в 90 мл агаровой суспензии (Дифко), содержащей сердечный экстракт, после охлаждения ее до 50 С, добавляли 20 мл стерильной сыворотки крови лошади, 13,6 мл яичного желтка, разбавленного 1:1 стерильным физиологическим раствором, 10 мл 25% раствора дрожжевого экстракта, 1,2 мл 0,2% раствора дезоксирибонуклеиновой кислоты, 1,0 мл 1% раствора ацетата таллия и 0,25 мл раствора пенициллина, содержащего 20 тыс. ЕД/мл. Затем среду разливали по чашкам Петри и высевали исследуемые и контрольные культуры. Инкубировали их при 37 С в течение 14 суток, ежедневно просматривая под микроскопом. В течение этого периода не наблюдали образования плёнки и пятен, а наоборот среда вокруг колоний микоплазм была прозрачной.
Микоплазмы М. arginini и Ureaplasma sp., выделенные из проб от телят с клиническими признаками в хозяйствах Омской области, были аналогичны ранее выделенным от коров родильно-профилакторного периода, что свидетельствует о передаче возбудителей от коров-матерей телятам. Дополнительно был выделен вид М. bovirhinis (табл. 4).
Микробиологические методы диагностики
С тремя микоплазмозными сыворотками диагностикум реагировал на четыре креста до разведения 1:320, со смешанной против трех видов микоплазм сывороткой - на три креста до разведения 1:640. С отрицательной сывороткой во всех разведениях и буферным физиологическим раствором реакция была отрицательной (табл. 9).
При изучении специфичности микоплазмозного эритроцитарного диагностикума (МЭД) в РИГА установлено, что оптимальным разведением антигена для сенсибилизации формалинизированных эритроцитов является 1:10, при котором отсутствовали перекрестные реакции с хла-мидиозной, эшерихиозной и против инфекционного ринотрахеита сыворотками, тогда как при разведении антигена 1:5 РНГА с данными сыворотками была положительной. С гомологичными микоплазмозными сыворотками с титром 1:20 отмечалась реакция на четыре креста при разведении антигена 1:10, на три креста при разведении 1:20, на два креста при разведении 1:40 и отсутствие реакции с микоплазмозными сыворотками при использовании МЭД разведенного 1:80. (табл. 10).
Таким образом, полученный эритроцитарный диагностикум можно использовать для диагностики микоплазмоза телят, принимая за диагностический титр в РНГА разведение испытуемой сыворотки 1:20.
Чувствительность микробиологического метода диагностики, изучали в сравнении серологическими методами (РНИФ, РНГА) с применением полученных нами сывороток и антигенов. Материалами для исследований являлись патологический материал от погибших, вынужденно убитых телят и абортированных плодов, бронхоальвеолярные смывы, сыворотка крови, внутрисуставная жидкость от телят из восемнадцати хозяйств Омской области.
В патологическом материале от погибших и вынужденно убитых телят и абортированных плодов из ЗАО «им. Кирова» были выявлены: глюкозоферментирующие микоплазмы на питательных средах в 33% случаев, а в РНИФ в 88% проб; аргининферментирующие микоплазмы выделили на средах из 88% проб, в РНИФ из 77% и соответственно; уреаплазмы на питательных средах не выделились, тогда, как в РНИФ их антигены зарегистрировали в 77% пробах (табл. 11).
В патологическом материале ЗАО им. «Розы Люксембург» глюкозоферментирующие микоплазмы на питательных средах были выделены из 15%) органов, тогда как в РНИФ из 35% проб; присутствие аргинин-ферментирующих микоплазм в 90% проб и уреаплазм в 100%) подтвердилось как микробиологическим, так и серологическим методами.
В ЗАО «Сосновское» глюкозоферментирующие микоплазмы на питательных средах, также как и в РНИФ были выделены из 67% проб; аргининферментирующие микоплазмы выделили на средах в 33% проб, а в РНИФ в 67%; уреаплазмы на питательных средах выделялись в 83% случаев, тогда как в РНИФ их антигены не обнаруживались.
Для сравнения чувствительности РНИФ и бактериологического метода исследовали бронхоальвеолярную слизь от телят из пяти хозяйств ЗАО «им. Кирова», СПК «Новороссийский», ООО «Русский хлеб», СПК «Украинский», СПК «Некрасовский». Глюкозоферментирующие мико-плазмы на питательных средах выявляли в пределах от 30 до 40%, в РНИФ 20-40%. Количество выделенных на питательных средах М. arginini 30-90%, в РНИФ 20-80%.
Уреаплазмы были выделены на питательных средах в 20-60% пробах исследуемого материала, а в РНИФ несколько меньше в 10-50% случаев (табл. 12).
Для сравнения чувствительности РНИФ с сывороткой крови и мик-робиологческого метода исследовали биоматериал из СПК «Некрасовский», ООО «Русский хлеб».
В бронхоальвеолярной слизи от телят СПК «Некрасовский», на питательных средах отмечали рост М. bovirhinis и М. arginini в 30%) случаев, уреаплазм в 20%, в сыворотке крови от этих же животных были выявлены антитела к М. bovirhinis и М. arginini также в 30% случаев, а уреаплазм в 10%. У телят из ООО «Русский хлеб» на питательных средах было выделено глюкозоферментирующих микоплазм 40%, аргинин-ферментирующих 70% и уреаплазм 60%, а в РНИФ - 35%, 85% и 30% соответственно (табл. 13).
Определение чувствительности полевых культур микоплазм к антибактериальным препаратам in vitro
Микоплазмоз - типичная хроническая инфекция с присущей ей длительной персистенцией возбудителя в организме хозяина, обладающей механизмами, направленными на ускользание от защитных систем (прочное прикрепление к стенки клетки; сходство структуры и биохимического состава мембран с мембранами эукариотических клеток; присутствие в их мембране антигенов, перекрестно реагирующих с антигенами клетки хозяина; наличие структур и субстанций, препятствующих фагоцитозу или подавляющих его). К разрушающему воздействию микоплазм относят способность сохранять жизнеспособность в фагоцитах и оказывать повреждающее действие на макрофаги, что приводит к нарушению их функции и снижению резистентности организма. При этом в процессе репликации они используют из клеток макроорганизма аминокислоты, жирные кислоты - предшественники макро-малекул, в том числе и ДНК. Образующиеся продукты обмена (аммоний, кислые продукты, пероксидаза, блокирующие метаболиты) нарушают нормальную функцию клеток макроорганизма. Кроме того, мико-плазмы, преодолевая тканевый барьер, проникают в кровяное русло, в результате чего блокируют систему мононуклеарных фагоцитов. Вступают в синергические отношения с вирусной и бактериальной, условно-патогенной микрофлорой, создают условия для ее активного роста и развития. Поэтому, принимая во внимание и учитывая патогенез болезни, следует своевременно диагностировать больных животных с помощью современных методов, выявляя при этом главную этиологическую роль воздействия микроорганизма на макроорганизм хозяина.
Микоплазмоз-ассоциированая инфекция телят на сегодняшний день остаётся актуальной проблемой для животноводства. По результатам эпизоотолгического обследовния хозяйств Омской области нами установлено, что микоплазмоз телят имеет широкое распространение. Из 17 обследованных хозяйств с высоким уровнем гибели телят, микоплазмоз отсутствовал только в четырёх хозяйствах, при этом в виде моноинфекции данная болезнь не регистрировалась.
Микоплазмы М. arginini и Ureaplasma sp., обнаруженные у телят в хозяйствах Омской области, были аналогичны таковым, выделенным аспиранткой кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней ИВМ ОмГАУ, О.В. Вологодской (2006), от коров родильно-профилакторного периода, что свидетельствует о передачи возбудителей от коров матерей телятам. Дополнительно у телят был зарегистрирован вид М. Bovirhinis. Изолированные микоплазмы обладали высой патогенностью и 100%-ную летальностью. При этом степень инфицированности органов белых мышей М. bovirhinis составила 96%, М. arginini - 92%, Ureaplasma sp. - 100%.
Микоплазмоз у телят характеризуется развитием пневмоний, ринитов, кератоконъюнктивитов, артритов, а при вовлечении в инфекционный процесс эшерихий и сальмонелл - заболеваниями желудочно-кишечного тракта, что приносит хозяйствам значительный экономический ущерб. Поэтому основной задачей для ветеринарных специалистов является своевременное выявление и лечение больных животных.
Для индикации и идентификации микоплазм используют микробиологический метод индикации микоплазм на жидких и плотных питательных средах с последующей световой и электронной микроскопией (О.А. Чернова, 1989; А.П. Красиков, Н.Н. Новикова, А.П. Красиков, Н.В. Рудаков, О.А. Сунцова 2003).
Нами показано, что жидкие и плотные элективные питательные среды, разработанные совместно с НИИПОИ Роспотребнадзора и апробированные при микоплазмозе плотоядных, птиц, коров и нетелей ро-дильно-профилакторного периода (Н.Н. Новикова, 2002; О.А. Сунцова, 2003; О.В. Вологодская, 2006) также можно использовать для индика 105 ции и идентификации микоплазм, выделенных из бронхоальвеолярных смывов у телят.
По имеющимся данным специальной литературы видно, что серологические и иммунологические методы исследований остаются на первом месте в диагностике инфекционных болезней, в том числе ми-коплазмоза (И.Л. Куликова, Т.А. Феоктистова, 1989).
Способность микоплазм к длительному персистированию в инфицированном организме, никак не проявляя своего присутствия в нем, требует высоко чувствительных и специфичных методов для своевременной постановки диагноза. Современные подходы к исследованию проблемы позволяют наиболее точно и в короткие сроки не только выделить возбудитель, и отдифференцировать его от других видов микроорганизмов, используя видоспецифичные сыворотки в реакциях агглютинации: реакция агрегат-гемагглютинации, реакция непрямой ге-магглютинации или пассивной гемагглютинации; реакциях иммуноф-люоресценции: прямой и непрямой методы; реакциях с участием моно-клональных антител, поликлональных антител; твердофазный иммуно-ферментный анализ. Методы радиоиммуноло-ической, хемиолюминес-центной и ДІЖ - диагностики: ДНК-гибридизации, полимеразная цепная реакция нашли свое широкое применение в работах зарубежных авторов для видовой типизации возбудителей различных родов инфекционных болезней. По данным отечественной литературы такие исследования проводят только в крупных городах России, в основном для научных целей, поэтому они являются недоступными для проведения массовых диагностических исследований в производственных условиях на базе районных, городских лабораторий.
