Содержание к диссертации
Стр.
ВВЕДЕНИЕ 4
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Систематика эшерихий 8
Роль эшерихий в патологии животных 10
Биологические свойства эшерихий 25
Морфология 25
Культуральные свойства 26
Ферментативные свойства 27
Патогенность и вирулентность Зі
Токсичность 33
Антигенная структура 35
Методы изготовления агглютинирующих 0-коли
сывороток 44
Методы приготовления О-антигенов 45
Продуценты сывороток 46
Схемы гипериммунизации 47
Получение, обработка и хранение сывороток 47
Адсорбция сывороток 48
Получение поливалентных сывороток 49
Контроль агглютинирующих 0-коли сывороток 50
Заключение 51
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА ПЕРВАЯ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 52
ГЛАВА ВТОРАЯ ПОДБОР И СЕЛЕКЦИЯ ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ
ШТАММОВ ЭШЕРИХИЙ 68
Морфология эшерихий 69
Культуральные свойства 70
Подбор питательных сред 72
Ферментативные свойства 76
Антигенные свойства 80
Хранение производственных штаммов 84
Заключение 85
Стр.
ГЛАВА ТРЕТЬЯ ИЗГОТОВЛЕНИЕ АГГЛШШИРУЩИХ О-КОЛИ
СЫВОРОТОК 88
Разработка методов приготовления антигенов 88
Оценка схем гипериммунизации кроликов .. 91
Получение поливалентной сыворотки 96
Получение агглютинирующих 0-коли сывороток отвовец. 99
Методы получения крови и обработка сывороток 106
Заключение 108
ГЛАВА ЧЕТВЕРТАЯ СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ КОНТРОЛЯ
Агглгаширщих 0-КОЛИ СЫВОРОТОК III
Контроль активности сывороток, полученных от
кроликов 112
Антигенное родство производственных штаммов и т л
специфичность агглютинирующих Онколи сывороток 118
Контроль активности поливалентных сывороток, тлл
полученных от кроликов ............. і 128
Контроль активности сывороток, полученных от овец.. 132
Контроль специфичности агглютинирующих сывороток,
полученных от овец 135
Определение срока годности агглютинирующих
сывороток 138
Заключение ..... 142
ГЛАВА ПЯТАЯ ИЗЫСКАНИЕ ПУТЕЙ ПОВЫШЕНИЯ СПЕЦИФИЧНОСТИ
АГГЛЮТИНИРУЩИХ 0-КОЛИ СЫВОРОТОК 144
Влияние разведения на специфичность агглютинирую
щих 0-коли сывороток 144
Применение реакции иммуноадсорбции для повыше
ния специфичности О-коли сывороток 150
ОЦСЭДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ- . ......і... 159
ВЫВОДЫ ......... 173
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 176
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 177
ПРИЛОЖЕНИЕ
Введение к работе
Основные направления экономического и социального развития Советского Союза на I98I-I985 гг. и до 1990 года определены ХХУІ съездом КПСС и сосредоточены на решении ключевых народнохозяйственных вопросов. Они предусматривают тесную интеграцию науки с производством, повышение требований к качеству выполняемых работ и качеству продукции.
Постановление Пленума Щ КПСС и Совета Министров СССР от 24 мая 1982 года обязывает "... осуществлять систему ветеринар-» но-профилактических мероприятий, позволяющих снизить заболевания и падеж скота и птицы...36. Основным условием этого, является необходимость глубокого изучения биологии возбудителей инфекционных болезней, в том числе и эшерихиоза.
Осуществление процесса специализации и концентрации производства с применением прогрессивной технологии, обусловливают высокую плотность размещения животных, сопровождаются ограничением движения, интенсивной эксплуатацией продуктивных животных, большой функциональной нагрузкой и ведут к ослаблению естественной резистентности организма, проявлению различных болезней, вызываемых условно-патогенными микробами, практически не проявляющих своего патогенного действия в обычных условиях. К числу таких болезней относится и коли-бактериоз (эшерихиоз).
Потери молодняка сельскохозяйственных животных от желудочно-кишечных болезней, среди которых эшерихиоз занимает одно из первых мест, наносят значительный материальный ущерб народному хозяйству (А.Г.Малявин 1968-1974, Г.А.Грошева 1971, О.А.Полякова 1974-1976, M.Decum et ai. 1975, s.Nivas et ai. 1977, Э.Н.Бутаев
* Продовольственная программа СССР на период до 1990 года и меры по ее реализации.
5 1978 и др.), что делает необходимым расширение исследований по совершенствованию методов диагностики, лечению и специфической профилактики колибактериоза.
Акт^лыюсть^темыд Эшерихии являются возбудителями колибактериоза сельскохозяйственных животных, холероподобных заболеваний и септицемии новорожденных детей, цистита, пиэлонефрита, менингита, пищевых токсикоинфекций у животных и человека (И.В. Голубева,1957-1977; А.Г.Малявин,1963-1974; Э.М.Новгородская, 1964; E.Fischer et ai., 1975; н.мооп et ai., 1976; Б.С.Киселева, 1977; Ф.С.Флуер, М.В.Бондаренко,1978 и др.). Они относятся к семейству Enterobacteraceae И ПОДраздеЛЯЮТСЯ ПО антигенной
структуре на серологические гругаш и серовары (серотипы) (Ф.Кауфман, 1959; w.Ewing et ai., 1977 и др.).
Широкое распространение колибактериоза сельскохозяйственных животных и человека, множественность типов возбудителя делают необходимым постоянное изучение его этиологической структуры. В этой связи особое значение приобретает серологический метод идентификации эшерихии, который позволяет, при минимальной затрате времени и средств, определить серогрупповую принадлежность возбудителя инфекции, распознать источник возбудителя и оценить эпизоотическую ситуацию.
Идентификацию эшерихии проводят в реакции агглютинации с агглютинирующими 0-коли сыворотками, получением которых в лабораторных условиях занимались в медицинской практике И.В.Голубева с соавт. (1965), И.Н.Улиско (1973), v/.Ewing , i.Ewing (1977) в ветеринарии -А.Г.Малявин (1968), Н.П.Чистов (1973), Э.Б.Соловьев (1976).
Однако для удовлетворения потребности ветеринарных лабораторий было необходимо разработать технологию промышленного из-
готовления агглютинирующих 0-коли сывороток.
Ш5Ь_и_задачи-исследований. Целью наших исследований служило изыскание методов промышленного изготовления и контроля агглютинирующих 0-коли сывороток.
Для достижения этой цели в работе поставлены следующие задачи:
изучить по данным литературы, этиологическую структуру эшерихиоза сельскохозяйственных животных на серогрупповом уровне;
селекционировать производственные штаммы эшерихий, для изготовления агглютинирующих 0-коли сывороток;
разработать технологию промышленного изготовления набора сывороток к эшерихиям, наиболее часто поражающим сельскохозяйственных животных;
изучить степень антигенного родства производственных штаммов эшерихий и специфичность изготовляемых к ним сывороток;
изыскать пути повышения специфичности 0-коли сывороток;
изучить возможность использования овец в качестве продуцентов 0-коли сывороток;
разработать способы контроля и применения агглютинирующих 0-коли сывороток к эшерихиям, наиболее часто поражающим сельскохозяйственных животных.
Научная, новизна. Изучена степень антигенного родства производственных штаммов эшерихий 48 серологических групп и специфичность 0-коли сывороток к эшерихиям 30 серогрупп. Показана возможность получения в производственных условиях монорецепторных 0-коли сывороток методом иммуноадсорбции к эшерихиям серогрупп 04, 018, 078, 0101. Разработаны методы контроля активности и специфичности 0-коли сывороток 30 серогрупп. Определен возможный срок хранения нативных 0-коли сывороток.
Практическая^значимрсть Впервые в стране создан набор агглютинирующих 0-коли сывороток для ветеринарных целей, к эше-рихиям 30 серогрупп, широко применяемый в лабораториях и научно-исследовательских институтах страны. Утверждена нормативно-техническая документация, включающая Инструкцию по изготовлению и контролю агглютинирующих 0-коли сывороток (утверждена 13 августа 1980 г.).
Технические условия ТУ 46-21-779-80 "Сыворотки 0-коли агглютинирующие" (утверждены 18 августа 1980 г.).
Наставление по применению агглютинирующих 0-коли сывороток. (Утверждено 16 июня 1980 г.).
Апробация результатов.
Основные положения диссертации доложены:
На Координационном Совете Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени государственного научно-контрольного института ветпрепаратов МСХ СССР (1977, 1979, 1982);
Методической комиссии по бактериальным препаратам ВГНКЙ ветпрепаратов МСХ СССР (1979);
На Ученом совете ВГНКЙ ветпрепаратов МСХ СССР (1980);
Опубликованы в трех статьях и нормативно-технической документации по изготовлению, контролю и применению препарата.
На защиту^выносятся:,
Результаты разработки методов промышленного изготовления и контроля агглютинирующих 0-коли сывороток.
