Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 9
1.1. Общая характеристика зеараленонотоксикоза животных 9
1.2. Общая характеристика Т-2 токсикоза животных 15
1.3. Смешанные микотоксикозы 23
1.4. Профилактика микотоксикозов 27
2. Материалы и методы исследований 31
3. Результаты собственных исследований 35
3.1. Острая токсичность зеараленона и Т-2 токсина при их раздельном и сочетанном воздействии на крыс
3.2. Острая токсичность зеараленона и Т-2 токсина при их раздельном и сочетанном воздействии на кроликов
3.3. Кумулятивные свойства зеараленона и Т-2 токсина при их сочетанном воздействии
3.4. Эмбриотоксичность и тератогенность зеараленона и Т-2 токсина при их раздельном и сочетанном воздействии
3.5. Токсичность зеараленона и Т-2 токсина при их многократном раздельном и сочетанном воздействии на крыс
3.6. Раздельное и сочетанное воздействие зеараленона и Т-2 токсина на овец
3.6.1. Клинико-гематологические показатели овец при раздельном и сочетанном воздействии зеараленона и Т-2 токсина
3.6.2. Биохимические показатели овец при раздельном и сочетанном воздействии зеараленона и Т-2 токсина
3.6.3. Естественная резистентность овец при раздельном и сочетанном воздействии зеараленона и Т-2 токсина
3.6.4. Патологоанатомические изменения овец подвергавшихся раздельному и сочетанному воздействию зеараленона и Т-2 токсина
3.6.5. Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса овец, получавших раздельно и сочетанно зеараленон и Т-2 токсин
3.7. Адсорбционные свойства энтеросорбентов в отношении зеараленона и Т-2 токсина
3.8. Влияние рациона с сорбентами на течение зеараленона - и Т-2 токсикоза у крыс
3.8.1 Клинико-гематологические показатели крыс при сочетанном mвоздействии зеараленона и Т-2 токсина на фоне применения сорбентов
3.8.2. Биохимические показатели крыс при сочетанном воздействии зеараленона и Т-2 токсина на фоне применении сорбентов
3.8.3. Естественная резистентность крыс при сочетанном воздействии зеараленона и Т-2 токсина на фоне применения сорбентов
3.9. Влияние рациона с добавлением сорбентов на течение зеараленона и Т-2 токсикоза у овец
3.9.1. Ютинико-гематологические показатели овец при сочетанном воздействии зеараленона и Т-2 токсина на фоне применения сорбентов
3.9.2. Биохимические показатели овец, при сочетанном воздействии зеараленона и Т-2 токсина на фоне применения сорбентов
3.9.3. Естественная резистентность овец при сочетанном воздействии зеараленона и Т-2 токсина на фоне применения сорбентов
3.9.4. Патологоанатомические изменения овец, получавших сочетанно зеараленон и Т-2 токсин на фоне применения сорбентов
3.9.5. Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса овец получавших сочетанно зеараленон и Т-2 токсин на фоне применения сорбентов
3.10. Профилактическая эффективность фитосорба и бентонита при сочетанных микотоксикозах в производственных условиях
4. Обсуждение результатов исследований 99
5. Выводы 110
6. Практические предложения 112
7. Список литературы 113
8. Приложения 136
- Общая характеристика Т-2 токсикоза животных
- Острая токсичность зеараленона и Т-2 токсина при их раздельном и сочетанном воздействии на кроликов
- Патологоанатомические изменения овец подвергавшихся раздельному и сочетанному воздействию зеараленона и Т-2 токсина
- Биохимические показатели овец, при сочетанном воздействии зеараленона и Т-2 токсина на фоне применения сорбентов
Введение к работе
1.1. Актуальность темы. Высокие темпы роста населения в мире требуют увеличения производства продукции сельского хозяйства. Особенностью интенсивного животноводства и кормопроизводства является проблема микотоксикозов животных, представляющая собой как экономическую, так и экологическую опасность.
Токсигенные плесневые грибы и продуцируемые ими микотоксины поражая корма, вызывают у сельскохозяйственных животных и птицы комплексные отравления различной степени - от острой до хронической.
Микотоксины отличаются высокой токсичностью, а многие из них обладают мутагенными, тератогенными, канцерогенными свойствами, а также существенно влияют на иммунный статус млекопитающих и птиц. Контаминируя продукты животноводства и растениеводства (зерновые культуры) микотоксины могут представлять опасность и для здоровья людей. Попадая с продуктами питания, в том числе и с хлебом, в организм человека, микотоксины проявляют мутагенный, канцерогенный, иммунодепрессантный эффекты, вызывают аллергозы, поражения печени и почек, органов воспроизводительной системы. В мире насчитывается более 300 микотоксинов, оказывающих токсическое действие на млекопитающих и птицу, но их количество постоянно растёт (Монастырский О.А., 2006).
В связи с широким распространением в природе особую опасность представляют микотоксины микроскопических грибов из рода Fusarium зеараленон, Т-2 токсин, ДОН и др. (Смирнов A.M. и др., 1999; Кузнецов А.Ф., 2001; Тремасов М.Я., 2002; Кононенко Г.П., Буркин А.А., 2008).
Одним из факторов, увеличивающих опасность загрязнения микотоксинами кормов, является возможное сочетание их с другими микотоксинами (Котик А.Н., 1999; Иванов А.В. и др., 2008). В таких случаях содержание в кормах микотоксинов может быть ниже пределов обнаружения или они обнаруживаются в малых дозах, но такие корма могут являться одной из причин низкой продуктивности и повышенной чувствительности, животных к
инфекционным и другим заболеваниям (Захарова Л.П. и др., 2008). Причём потенциальную опасность сочетанных микотоксикозов сегодня явно недооценивают. Важной проблемой для ветеринарной микотоксикологии является профилактика микотоксикозов животных (Антипов В.А. и др., 2007; Иванов А.В., Тремасов М.Я., Папуниди К.Х. и др., 2008). Это, прежде всего, связано с отсутствием эффективных специфических средств профилактики отравлений животных ядами микроскопических грибов.
В последние годы наиболее эффективными при профилактике микотоксикозов в животноводстве являются сорбенты. Принцип их действия основан на уменьшении доступности микотоксинов для животного организма. Сорбенты удобны в транспортировке и применении в условиях активного животноводства (Комаров А.А., Панин А.Н., 2003).
Таким образом, учитывая вышеизложенные данные, следует отметить, что поиск и разработка эффективных, удобных и доступных средств для профилактики микотоксикозов животных, получения качественных продуктов питания животного происхождения являются актуальной проблемой.
Цель и задачи исследования. Целью наших исследований было изучение токсичности зеараленона и Т-2 токсина, как при раздельном, так и сочетанном поступлении и влияния их на животных, поиск эффективных профилактических средств при отравлении этими микотоксинами.
На решение были поставлены следующие задачи:
Определить параметры острой токсичности, кумулятивные свойства, эмбриотоксическое и тератогенное действие зеараленона и Т-2 токсина при сочетанном их воздействии на животных.
Изучить клинико-гематологические, биохимические, патолого-анатомические показатели и естественную резистентность у животных при сочетанном отравлении их зеараленоном и Т-2 токсином.
Провести отбор и сравнительную оценку энтеросорбентов различных групп в отношении зеараленона и Т-2 токсина.
Изучить эффективность применения фитосорба и бентонита Тарн-Варского месторождения РТ при сочетанном воздействии зеараленона и Т-2 токсина на животных.
Провести производственные испытания отобранных средств для профилактики смешанных микотоксикозов.
Научная новизна. Впервые установлено взаимоусиливающее действие зеараленона и Т-2 токсина при сочетанном воздействии на животных и разработаны профилактические средства.
Определены острая токсичность, кумулятивные, эмбриотоксические и тератогенные свойства, влияние на гематологические, биохимические показатели и естественную резистентность животных при сочетанном * воздействии зеараленона и Т-2 токсина.
Впервые в лабораторных и производственных условиях, обоснована и подтверждена профилактическая эффективность применения фитосорба и бентонита Тарн-Варского месторождения РТ при сочетанном отравлении животных зеараленоном и Т-2 токсином.
Практическая ценность работы. На основании проведённых исследований дана комплексная токсикологическая оценка сочетанного воздействия зеараленона и Т-2 токсина для лабораторных и сельскохозяйственных животных, которую следует учитывать при диагностике смешанных микотоксикозов.
В качестве средств профилактики при сочетанном воздействии зеараленона и Т-2 токсина на организм животных рекомендуется применять фитосорб в количестве 0,5% и бентонит в количестве 1% от рациона.
Результаты исследований использованы при составлении «Рекомендации по борьбе со смешанными микотоксикозами животных в Республике Татарстан» , утвержденной Министерством сельского хозяйства и продовольствия РТ 2007г.
Апробация материалов диссертации. Основные материалы диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на научных сессиях ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по итогам НИР за 2006-2008 г.г.; межрегиональных,
международных научно-практических конференциях и симпозиумах (Казань 2006; 2008; Москва, 2007; Троицк, 2007; Екатеринбург, 2008; Ульяновск, 2008; Санкт-Петербург, 2008).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ, из них 2 - в реферируемых ВАК изданиях.
Основные положения, выносимые на защиту:
токсикологическая оценка зеараленона и Т-2 токсина при сочетанном их воздействии на животных;
клинико-гематологические, биохимические показатели и естественная резистентность животных при сочетанном воздействии зеараленона и Т-2 токсина;
профилактическая эффективность сорбентов фитосорба и бентонита при сочетанном отравлении животных зеараленоном и Т-2 токсином.
Объём и структура работы. Диссертация изложена на 136 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, методов и результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений и списка литературы. Работа иллюстрирована 4 рисунками и содержит 34 таблицы. Список литературы включает 231 литературных источников, в том числе 117 зарубежных авторов.
Общая характеристика Т-2 токсикоза животных
Трихотеценовые микотоксины (ТТМТ) — группа близких по химической структуре соединений сесквитерпенового ряда, которые являются вторичными метаболитами микроскопических грибов рода Fusarium. Первым из ТТМТ, выделенным в чистом виде, был трихотецин, полученный из культуры Trichotecium roseum в 1948 г. В настоящее время известно более 40 представителей микотоксинов этой группы. ТТМТ являются наиболее широко распространенными в мире микотоксинами.
В основе структуры трихотеценовых микотоксинов лежит система сопряженных колец, называемая трихотеканом (Godtfredsen W.O., Grove J.F., 1967) Структура трихотекана Природные трихотецены содержат двойную связь в положении С-9-С-10 и эпоксидную группу при 12 и 13 углеродных атомах (Bamburg J.R. et. al., 1971). По своей химической структуре трихотецены разделяются на 4 группы: А, В, С и D. В группу А входят соединения, содержащие при С-8 атом водорода, гидроксил либо сложноэфирную группу (основной представитель Т-2 токсин). Представители группы В имеют при С-8 кетогруппу (основной представитель ДОН). Группа С включает макроциклические трихотецены (Веррукарины, Роридины). Дополнительный макроцикл образован при С-4 и С-15. Группа D представлена соединениями, содержащими вторую эпоксидную группу при С7-С8 (Кротоцин, Кротокол).
В чистом виде трихотецены представляют собой бесцветные вещества кристаллической природы, оптически активные, нелетучие при обычных условиях. Представители группы А наиболее хорошо растворимы в апротонных растворителях, таких как хлороформ, этилацетат, ацетон. ТТМТ группы В лучше растворяются в более полярных растворителях (спирты, ацетонитрил, вода). На растворимость оказывает влияние степень гидроксилирования молекулы вещества: с увеличением количества гидроксильных групп возрастает растворимость в полярных растворителях (Ueno Y. et. al., 1983). Трихотецены, за исключением некоторых макроциклических соединений, не обладают собственной флуоресценцией и для их обнаружения методом молекулярной-генетической идентификации, тонкослойной хроматографии используют обработку пластин различными реагентами, образующими с ТТМТ окрашенные или флуоресцирующие комплексы (Pohland А.Е. et al., 1986; Липницкий А.В. и др., 2007).
Трихотеценовые микотоксины отличаются высокой химической устойчивостью и термической стабильностью. На них практически не влияют естественные факторы окружающей среды (Львова Л.С., 1985). Процессы обычной кулинарной и технологической обработки пищи также не приводят к разрушению ТТМТ (Wolf-Hall СЕ. et al., 1999). ТТМТ групп А и В с гидроксильными группами более токсичны, чем их аналоги с атомом водорода в том же положении. Это связано с высокой стабильностью эпоксида в структуре токсина, поэтому для раскрытия этого кольца, являющегося основным фактором токсичности, требуются жесткие условия (Тутельян В.А., Кравченко Л.В., 1985).
Среди трихотеценов широкой распространенностью характеризуется Т-2 токсин и дезоксиниваленол (ДОН), а сильно выраженными токсическими свойствами — Т-2 токсин (Хмелевский Б.А. и др., 1985; Котик А.Н., 1999; Кузнецов А.Ф., 2001; Smith Т. et al., 2001)
Следует отметить, что Т-2 токсин вызывает больший интерес ввиду своей чрезвычайно высокой патогенной активности. Основным продуцентом Т-2 токсина и др. трихотеценовых является Fusarium sporotrichioides, F. роае, F. graminearum. Наиболее интенсивное накопление токсинов наблюдается при повышенной влажности и пониженной температуре (4-6 С) как в естественных, так и искусственно созданных условиях (Билай В.И., 1977; Тремасов М.Я. и др., 2000; Mccormick S.P. et al., 2006). Fusarium sporotrichioides отнесён к числу доминантных видов Fusarium в Дальневосточном регионе, Центральной России и Западной Сибири. По данным Кононенко Г.П. и Буркина А.А. (2003), в 1995 -2001 годах по Уральскому и Западно-Сибирскому регионах контаминированность Т-2 токсином составила 36,6 и 37,7%, в Дальневосточном 23,6%, до 22% случаев встречалась сверхнормативная контаминация (Кононенко Г.П., Буркин А.А. 2003; Берестецкий А.О. и др., 2008).
Гриб - продуцент Fusarium sporotrichioides широко распространен в природе, особенно в средней полосе Российской Федерации, где наиболее благоприятные климато-географические условия для его развития. В годы эпифитотии фузариоза колоса в основных зерносеющих регионах России (Северный Кавказ, Центрально - Черноземный район) поражение колоса штаммами Fusarium sporotrichioides достигает 100% (в среднем около 65%) (Монастырский О. А., Коган Ю.Д., 2001). В Центрально-Черноземном, Центральном районах, на Урале при микологическом анализе зернофуража выявляли от 40 до 80% проб, пораженных фузариями (Иващенко В.Г., Назаровская М.А., 1998). F. sporotrichiella - наиболее частый контаминант пищевой продукции и кормов среднего Поволжья. Этот гриб был выделен в 70% случаев из образцов кормов и сельхозпродукции, отобранных в различных районах Республики Татарстан. Около 40% изолятов обладали токсическими свойствами, 14% изолятов продуцировали трихотеценовые микотоксины, абсолютное большинство из которых составляли Т-2 токсин и НТ-2 токсин (Тремасов М.Я. и др., 2000). Имеются данные о высокой частоте (до 40-50%) обнаружения Т-2 токсина в отдельные годы в зерне пшеницы, ячменя и овса в ряде Европейских Стран - Польше, Финляндии (Smith J., Levis С, 1998).
Т-2 токсин относится к первому классу опасности. ЛД5о для Т-2 токсина при пероральном введении составляет: для новорожденных телят 0,6 мг/кг, морских свинок - 2 мг/кг, цыплят - 3-5 мг/кг, крупного рогатого скота - 3 мг/кг, свиней - 4 мг/кг, крыс 2,3-5мг/кг, форели - 6 мг/кг, мышей - 10 мг/кг (Рухляда В.В., 1983).
Характерной картиной отравления Т-2 токсином является клиника АТА -алиментарной токсической алейкии, заболевания, отмечавшегося в СССР в середине XX века, вызываемое потреблением пищи, загрязненной грибом F. sporotrichiella. Это типичный микотоксикоз, характеризующийся очаговостью, сезонностью, связью с потреблением корма, загрязненного микроскопическими грибами (Саркисов А.Х., 1954). Заболевание характеризуется явлениями общего токсикоза (слабость, недомогание), рвотой, диареей, прогрессирующей лейко -гранулоцитопенией и умеренным лимфоцитозом.
Острая токсичность зеараленона и Т-2 токсина при их раздельном и сочетанном воздействии на кроликов
Для определения токсичности зеараленона и Т-2 токсина при сочетанном их воздействии использовали взрослых половозрелых кроликов живой массой 3,0-3,4 кг. Для этого были проведены 3 серии опытов. В первой и второй серии кролики получали зеараленон и Т-2 токсин раздельно. В третьей серии опытов подвергались сочетанному воздействию зеараленона и Т-2 токсина. Токсины задавали внутрижелудочно при помощи резинового зонда. Контрольная группа получала растворители в аналогичном объёме.
Острая токсичность при введении зеараленона Кролики, получавшие зеараленон, были разделены на 6 групп по 6 животных в каждой. Зеараленон задавали в 5%-ном водно-спиртовом растворе в дозах от 2,0 до 7,0 г/кг. После введения кроликам зеараленона в дозе 2,0 г/кг, видимых клинических признаков отравления не наблюдали. Клиническая картина интоксикации кроликов зеараленонам начинала проявляться при дозе 3,0 г/кг и была сходна с признаками интоксикации у крыс при затравке в дозе 7 г/кг. Отмечались возбуждение, саливация и нарушение координации движения. При введении дозы 4 г/кг к перечисленным признакам добавились тремор и парез задних конечностей. Гибель животных наступала через 6-7 ч с момента получения токсина. У кроликов, получивших дозу 7 г/кг, клинические признаки интоксикации наступили через 3 ч, к которым добавились паралич задних конечностей и судорожные сокращения скелетной мускулатуры. Смерть всех животных наступила приблизительно через 4,5 ч с момента введения токсина.
Патологоанатомическая картина павших кроликов была сходна с таковой у крыс при острой интоксикации зеараленоном и характеризовалась дегенеративными изменениями в печени и почках, катаральным воспалением слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта.
Острая токсичность при введении Т-2 токсина Кролики, получавшие Т-2 токсин, были разделены на 6 групп по 6 животных в каждой. Т-2 токсин задавали в 5%-ном водно-спиртовом растворе в дозах от 0,43 до 0,62 мг/кг. При введении кроликам токсина в дозе 0,43 мг/кг клинические признаки отравления характеризовались слабым угнетением, отказом от корма и воды. Состояние животных нормализовалось через 18 ч. Характерные признаки отравления стали проявляться у кроликов при введении Т-2 токсина в дозе 0,51 мг/кг и были схожими с таковыми у крыс, получивших токсин в дозе 2,8 мг/кг. Гибель всех кроликов отмечалась в группе, получавшей Т-2 токсин в дозе 0,62 мг/кг. Патологоанатомическая картина павших животных была схожей с таковой у крыс, получавших Т-2 токсин в смертельной дозе, и характеризовалась изменениями в сердце, лёгких и печени.
Острая токсичность при сочетанном введении зеараленона и Т-2 токсина Кролики, получавшие сочетанно воздействие зераленон и Т-2 токсин, были также разделены на 6 групп по 6 животных в каждой. Зеараленон и Т-2 токсин задавали в 5%-ном водно-спиртовом растворе в дозах от 0,22, 0,21 г/кг и до 0,32, 0,31 мг/кг соответственно. Результаты определения среднесмертельной дозы зеараленона и Т-2 токсина при их сочетанном воздействии на кроликов представлены в таблице 7. После введения кроликам зеараленона и Т-2 токсина в дозах 0,22 г/кг и 0,21 мг/кг, соответственно отмечались лишь незначительные признаки отравления, которые характеризовались слабостью и сонливостью. При введении кроликам зеараленона и Т-2 токсина в дозах 0,24 г/кг и 0,23 мг/кг соответственно, клинические признаки проявлялись через 4-5 ч и характеризовались нарушением координации движений, отказом от корма и воды.
При дозах зеараленона и Т-2 токсина 0,3 г/кг и 0,29 мг/кг соответственно отмечали: резкое возбуждение животных, которое быстро сменялось угнетением, учащённое и тяжёлое дыхание. По мере развития клинической картины у кроликов наблюдали мышечную слабость, парез, преимущественно, задних конечностей. Затем возникали парезы и передних конечностей. В этот период у них регистрировали одышку и гибель в стадии судорог. Восстановление выживших животных происходило в течение 2-2,5 сут. Гибель всех животных в группе при дозах зеараленона и Т-2 токсина 0,32 г/кг и 0,31 мг/кг, соответственно происходила с вышеперечисленными признаками отравления.
При патологоанатомическом вскрытии павших животных наблюдали следующую картину: полости сердца кровенаполнены, печень тёмно-вишнёвого цвета, увеличена в объёме, слизистые оболочки желудочно-кишечного тракта усеяны многочисленными кровоизлияниями. Отёк и кровоизлияния головного мозга.
Установлено, что при введении зеараленона и Т-2 токсина в течение 4 дней в дозах 0,14-0,56 и 0,13-0,52 мг/кг соответственно клинических признаков интоксикации не наблюдали. На 5 сут эксперимента, когда суммарная доза токсинов достигла 0,77 и 0,72 мг/кг соответственно, появилось угнетение, шерсть стала взъерошенной, животные начали отказываться от корма, отмечалась диарея. Гибель крыс началась на 8 сут с момента введения токсинов, когда суммарные дозы зеараленона и Т-2 токсина достигли 1,4 и 1,28 мг/кг соответственно. Клинические признаки выживших животных характеризовались сильным угнетением, нарушениями координации движений, парезом задних конечностей, отмечались изменения со стороны нервной системы, тремор мышц. По мере дальнейшего поступления токсинов признаки интоксикации животных усиливались, и к 11 сут с момента введения ядов погибло 50% животных. Таким образом, при многократном введении зеараленона и Т-2 токсина, дозы, вызывающие гибель 50% крыс от общего числа животных, составили 2,34 и 2,15 мг/кг соответственно.
Патологоанатомические изменения овец подвергавшихся раздельному и сочетанному воздействию зеараленона и Т-2 токсина
В конце эксперимента провели убой животных из каждой группы для патологоанатомических исследований. При проведении патологоанатомического исследования овец, получавших раздельно зеараленон, видимых отклонений от нормы не наблюдалось. Шерсть гладкая, блестящая. Кожа без видимых изменений. В подкожной клетчатке имелись жировые отложения. Мышцы на разрезе красного цвета, сочные, эластичные. Сердце округлой формы. Миокард на разрезе без изменений; Легкие бледно-розового цвета, плотной консистенции.; края заострённые. Селезенка не увеличена, вишнево-красного цвета, края . острые. Печень темно-вишнёвого цвета, упругая, плотной консистенции, в объёме не увеличена: Желудок умеренно наполнен кормом, слизистая бледного цвета; Почки красно-бурого цвета, капсула снимается легко;, граница коркового и мозгового слоев: хорошо выражена; Мочевой пузырьумеренно наполнен прозрачной;мочой соломенного цвета. Слизистая бледно-розовая.
У овец, получавших только Т-2 токсин, наблюдалось истощение, шёрстный покров был взъерошен. В ;. подкожной у - клетчатке жировые отложения отсутствовали:-Мышцы красного цвета, сочные, эластичные. Сердце округлой формы, в полостях несвернувшаясяїкровь темно-вишневого цвета. Миокард сероватого цвета, дряблый. Легкие розовые; с .участками тёмно-вишнёвого цвета-у основания; плотной консистенции. Селезенка не-увеличена, вишнево-красного цвета, края острые. Печень темно-красного цвета,.дряблая (разрывается: в руках). Желудок умеренно наполнен кормом, слизистая бледного цвета. Почки красно-бурого цвета, капсула снимается легко, граница коркового и? мозгового слоев хорошо выражена. Мочевой пузырь умеренно наполнен прозрачной мочой соломенного цвета. Слизистая бледно-розовая. Головной мозг отёчный, плотной консистенции, сосуды кровенаполнены.
При вскрытии овец, получавших сочетано зеараленон и Т-2 токсин, наблюдали следующие изменения: в подкожной, клетчатке имелись незначительные жировые отложения. Мышцы красного цвета, сочные, эластичные: Сердце округлой формы, в полостях несвернувшаяся кровь темно-вишневого цвета: Миокард светло-красного цвета, дрябловатый. Селезенка не увеличена, вишнево-красного цвета, края острые, дряблая. Печень темно-красного цвета, упругая, в размерах не увеличена. Желудок умеренно наполнен кормом, слизистая бледного цвета. Тонкий отдел кишечника наполнен газами, слизистая светло-красного цвета, покрыта слизью. Мезентеральные лимфоузлы средней величины, на разрезе сочные, тёмно-серого цвета. Почки неравномерно окрашены, капсула снимается легко, граница коркового и мозгового слоев выражена нечётко. Мочевой пузырь умеренно наполнен прозрачной мочой соломенного цвета. Слизистая бледно-розовая. Головной мозг отёчный, плотной консистенции, сосуды кровенаполнены.
В конце эксперимента провели убой животных из каждой группы для ветеринарно-санитарной экспертизы мяса. Оценка мяса овец проводилась на 2 и 10 сут хранения после убоя. Мясо хранили в холодильнике при температуре от 0 до +4 С, с оптимальной влажностью 85-90%. Проводили органолептические, бактериоскопические и физико-химические исследования.
Результаты органолептических исследований, проведённых через 24 ч с момента убоя, показали, что мясо подопытных овец было хорошо обескровленным, имело специфический запах, свойственный этому виду животных. При варке бульон был прозрачным и имел приятный запах. Бактериоскопическими исследованиями установлено, что при микроскопии мазков-отпечатков с поверхности мышц и внутренних органов на 2 сут хранения в поле зрения были видны единичные кокки и палочковидные бактерии.
Таким образом, мясо овец после воздействия токсикантами, через 24 ч с момента убоя, по органолептическим и бактериоскопическим показателям не отличалось от мяса здоровых животных. При органолептическом исследовании мяса овец опытных групп, через 10 сут после убоя, установлено: мышцы недостаточно упругой консистенции, на разрезе слегка влажные, розового цвета, запах с поверхности и в глубине разреза специфический, свойственный этому виду животных. При варке бульон был мутноватый, с хлопьями. В мазках-отпечатках из мышц видна значительная обсеменённость кокками и палочковидными бактериями.
Результаты исследований физико-химических показателей мяса овец, после многократного воздействия зеараленона и Т-2 токсина, представлены в таблице 21. Из данных таблицы видно, что физико-химические показатели мяса, полученного от подопытных овец, на 2 сут исследования имели отличия от аналогичных показателей мяса контрольных животных, но не выходили за пределы значений, допускаемых ГОСТом для свежего мяса.
На 10 сут хранения в мясе подопытных овец наблюдались первые признаки порчи, особенно в группе животных, получавших совместно оба токсиканта. Так, рН мяса овец, получавших зеараленон, был выше контроля на 0,39 ед (р 0,01), Т-2 токсин - на 0,51 (р 0,01), оба микотоксина - на 0,58 (р 0,001). При постановке реакции с сернокислой медью бульон из мяса овец, получавших раздельно зеараленон и Т-2 токсин, был прозрачным; при совместном введении токсикантов в бульоне наблюдалось помутнение. Реакция на пероксидазу в контрольной группе была положительная, в пробах опытных групп - отрицательной. При проведении формольной реакции в мясе овец, получавших токсины, наблюдались хлопья. Вытяжка при определении аммиака и солей аммония с реактивом Несслера в контроле и группах овец, получавших токсиканты раздельно, окрашивалась в зеленовато-жёлтый цвет, при совместном получении токсикантов - в интенсивно-жёлтый. Количество аминоаммиачного азота в мясе овец, получавших зеараленон, было выше контроля на 122,1%, Т-2 токсин - на 169,3% (р 0,001), оба токсиканта - на 316,8% (р 0,001). По количеству ЛЖК мясо овец, получавших зеараленон, было выше контроля на 58,6% (р 0,001), Т-2 токсин - на 77,0 (р 0,001), оба токсиканта - на 93,4% (р 0,001).
Биохимические показатели овец, при сочетанном воздействии зеараленона и Т-2 токсина на фоне применения сорбентов
В ходе эксперимента провели определение содержания общего белка и его фракций. Результаты опыта приводятся в таблице 28. Полученные данные указывают на то, что в ходе эксперимента количество общего белка в крови подопытных овец постоянно снижалось. Однако во второй группе эти изменения были более существенными. Так, снижение концентрации общего белка к 10 сут составило 12,1%о, к 20 сут - 28,4%, к 30 сут - 28% (р 0,05). В третьей группе общий белок к 10 сут снизился лишь на 4,3%, к 20 сут - на 8,5%, к 30 дню — на 14,3%.
Отмечалось снижение процентного содержания альбуминов у опытных овец. Во второй группе данная фракция белка к 10 сут снизилась на 16,3; к 20 сут на 29,0 (р 0,05); к 30 сут - на 41,2% (р 0,01). В третьей группе - на 8,5%, 13,4%(р 0,01) и 21% (р 0,05) соответственно срокам. Процентное содержание Р-глобулинов увеличивалось в обеих группах овец. Во второй группе повышение составило к 10 сут 54,5% (р 0,05), к 20 дню 94,3% (р 0,01), к 30 сут - в 1,4 раза (р 0,001); в третьей группе оно составило на те же сроки исследования - 27,1, 16,2 (р 0,05) и 79,0% (р 0,01). Процентное содержание у-глобулинов во второй группе постоянно уменьшалось, и к 30 сут эксперимента снизилось на 32,6% (р 0,05); в третьей группе - на 18,0%). Изучение биохимических показателей крови овец при многократном сочетанном введении зеараленона и Т-2 токсина на фоне применения сорбентов представлены в таблице 29. Из данных таблицы 29 видно, что активность щелочной фосфатазы у всех групп овец постоянно повышалось по сравнению с контрольной группой: во второй группе к 10 сут на 34,5%, к 20 сут - на 50,6% (р 0,05) и к 30 дню - на 80,2% (р 0,01); в третьей к 10 сут - на 8,6%, к 20 дню - на 24,0 и к 30 сут - на 53,2% (р 0,05).
Активность АЛТ во второй группе повышалась по сравнению с контролем к 10 сут на 24,6%, к 20 сут - на 35,1 (р 0,05) и к 30 сут - на 39,4% (р 0,01). В третьей группе данный показатель к 10 сут незначительно отличался от исходных значений, к 20 дню увеличился на 11,7 и к 30 сут - на 30,8% (р 0,05). Активность ACT во второй группе увеличивалась к 10 сут на 16,5%, к 20 сут - на 25,8 (р 0,05) и к 30 дню - на 39,4% (р 0,01). В третьей группе увеличение составило на эти сроки 5,8; 11,7, и 22,4% (р 0,05). Уровень общего билирубина к 10 сут незначительно увеличивался в обеих группах по сравнению с контролем. К 20 и к 30 сут повышение составило во второй группе 37,5% (р 0,05) и 58,0% (р 0,01); в третьей группе - 12,5 и 25,8% (Р 0,05). Содержание азота мочевины во второй группе уменьшилось по сравнению с показателями контрольных овец к 10 сут на 23,2% (р 0,05), к 20 сут - на 39,1% (р 0,01) и к 30 дню - на 52,0% (р 0,01). В третьей группе, где задавались в качестве профилактического средства сорбенты, уменьшение показателей наблюдалось к 20 сут - на 21,2% и к 30 дню - на 30,2%. Концентрация триглицеридов увеличилась во второй группе к 10 сут на 20,0; к 20 сут - на 34,1% и к 30 дню - на 49,6% (р 0,05). В третьей группе увеличение данного показателя наблюдалось к 20 сут на 15,8% и к 30 сут - на 28,1% (р 0,05). Показатели естественной резистентности у овец при многократном сочетанном воздействии зеараленона и Т-2 токсина на фоне использования сорбентов представлены в таблице 30.
По данным таблицы, к 10 сут отмечалось понижение фагоцитарной активности. Во второй группе, где задавались токсины без сорбентов, снижение составило 13,1%; в третьей группе данный показатель незначительно отличался от контроля. Фагоцитарное число во второй группе снизилось по сравнению с контрольной группой на 17,1%, в третьей - на 8,2%. Значительное уменьшение фагоцитарного индекса наблюдалось во второй группе-на 4,1%.
