Содержание к диссертации
Введение
2 Обзор литературы 7
2.1. Краткая этиопатогенетическая характеристика послеродового эндометрита у коров 7
2.2. Фармакологические средства, неїюлыуемые для лечения коров, больных послеродовым эндометритом 15
2.3. Маточные суппозитории 28
3. Результаты исследований 34
3.1. Материал н методы исследований 34
3.2. Эпизоотические и этнопатогенетическне аспекты при эндометрите коров 39
3.3. Разработка и обоснование рецептуры пенообразующнх маточных свечей 55
3.4. Отработка технологии получения пенообраіуюшнх маточных свечей в лабораторных условиях 60
3.5. Фармакологические свойства пенообразующнх маточных свечей 62
3.6. Токсикологическая оценка пенообразующнх маточных свечей 73
3.7. Производственные испытания пенообразующнх маточных свечей 78
4. Обсуждение и заключение
5. Выводы 93
6. Рекомендации производству 94
Список литературы 96
- Краткая этиопатогенетическая характеристика послеродового эндометрита у коров
- Фармакологические средства, неїюлыуемые для лечения коров, больных послеродовым эндометритом
- Эпизоотические и этнопатогенетическне аспекты при эндометрите коров
- Токсикологическая оценка пенообразующнх маточных свечей
Введение к работе
Одной из причин тормозящих развитие молочного скотоводства являются болезни репродуктивных органов коров, среди которых на первом месте находится послеродовый эндомечрит (Полянцев Н.И., 1972, 1974, 1990; Михайлов Н.Н. и соавт., 1970; Батраков А.Я., 1972; Безбородий В.В., 1979; Нежданов А.Г.І985, 1994), который встречается в хозяйствах среди коров в 50-90 % случаев. (Батраков А.Я., 1973; Валюшкин К.Д., 1973; Червяков Л.Н., Микитась П.М., І 980; Григорьева Т.Е., 1988).
Такое широкое распространение заболевания связано с несколькими факторами, которые условно можно подразделить на предрасполагающие и этиологические.
К предрасполагающим факторам многие исследователи относят снижение защитных сил организма или в результате неудовлетворительного кормления и содержания животных или в результате чрезмерной нагрузки на организм при высокой молочной продуктивности (Бочаров И.А. и соавт., 1952; Логвинов Д.Д., Гонтаренко B.C., 1971; Кононов А.Г., 1976; Батраков А.Я., 1980; Рыжов Б.В., 1988).
К этиологическим факторам ряд исследователей относит условно патогенную и патогенную микрофлору и вирусы (Михайлов Н.Н. и соавт., 1980; Балашов Н.Г., 1972; Гречухин А.Н., 1980; Кремлев ЕЛ. и соавт., 1985; Радченков В.В. и соавт., 1988).
Кроме того, как к предрасполагающим, так и к этиологическим факторам некоторые авторы относят разбалансированность нервно-гормональной регуляции организма коров и, прежде всего, репродуктивных органов (Кононов Г.А., 1967; Давыдов В.У., 1983; Black W.C et al., 1953), а также нарушение сократительной функции миометрия (Чирков В.А., 1975; 1980; Гавриш В.Г., 1988; Гришин И.И. и соавт., 1990). Не случайно, что именно для лечения эндометритов коров предложены и продолжают предлагаться различные лекарственные средства и методы, включающие в себя химиотерапевта ческие, анестезирующие препараты и физические приемы и методы, такие как акупунктура, УВЧ, лазер и др. (Мартынов В.Г., 1966; Студенцов А.П., 1970; Зюбин И.Н. и соавт., 1980; Казеев Г.В. и соавт., 1983; Иноземцев В.ПМ 1995; Родина Ю.А., Давыдов В.У., 1998).
Обилие средств и методов, используемых для лечения коров, больных эндометритами, указывает на то, что среди них нет достаточно эффективных, недорогих и технологичных (удобных в применении).
Следует отметить,, что широко используемая антибиотикотераиия с одной стороны дорога, экологически небезопасна для людей и не всегда эффективна из-за постоянной выработки устойчивости у микроорганизмов. Кроме того, антибиотики действуют лишь на патогенную микрофлору, т.е. на один из этиологических факторов заболевания, хотя сама по себе болезнь -полиэтиологична.
В то же время, как подчеркивает В.Д. Соколов (1991? 2002) при любом заболевании наибольшая терапевтическая эффективность достигается при воздействии на основные патологические мишени.
Использование физических методов сдерживается из-за отсутствия надежной и недорогой аппаратуры.
Поэтому разработка эффективного, политропного лекарственного средства для лечения коров, страдающих эндометритом, является актуальной задачей сегодняшней фармакологии.
Цель и задачи исследований Целью работы явилось научное обоснование и разработка комплексного (политропного) препарата, влияющего на большинство мишеней патологического процесса. Для этого необходимо было решить следующие задачи:
1. Определить этиопатогенетические аспекты проявления послеродового эндометрита у коров.
2. Разработать рецептуру политропного лекарственного средства, воздействующего на большинство мишеней патологического процесса при эндометрите коров.
3. Исследовать токсико-биологические свойства разработанного препарата.
4. Испытать препарат в производственных условиях при лечении коров, больных послеродовыми эндометритами.
5. Разработать нормативно-техническую документацию для представления в соответствующие ветеринарные органы. Научная новизна работы. На основании этиопатогенетического анализа определены патологические мишени послеродового эндометрита у коров, разработана рецептура политропного лекарственного средства — «Пенообразующие маточные свечи» для фармакотерапии коров, больных эндометритами. Изучены токсико-биологические свойства препарата и установлена его безвредность для коров.
Практическая ценность. Отработаны дозы и схемы применения «Пенообразующих маточных свечей», изучены их лечебно профилактические свойства при послеродовом эндометрите у коров, разработана нормативная документация, которая представлена в Ветфармсовет.
Апробация работы. Основные материалы диссертаций доложены на XI, XII, XIII и XIV Международных межвузовских научно-практических конференциях "Новые фармакологические средства в ветеринарии" (Санкт-Петербург 1999,2000,2001 и 2002 г.г.).
Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ.
Реализация результатов исследований. Материалы диссертации использованы в хозяйствах Ленинградской и Мурманской областей, Республике Беларусь и учебном процессе ряда сельскохозяйственных и ветеринарных вузов РФ.
Структура и объем диссертации. Диссертация написана и оформлена по общим правилам и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения полученных данных, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения.
Объем работы. Работа изложена на 120 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 4 рисунками и 20 таблицами. Список использованной литературы включает 238 наименований, в т.ч. 56 иностранных авторов.
На защиту выносятся научно-обоснованные рекомендации по применению нового отечественного политропного средства — «Пенообразующие маточные свечи» при послеродовом эндометрите у коров.
Краткая этиопатогенетическая характеристика послеродового эндометрита у коров
Эндометрит - воспаление слизистой оболочки матки, при котором происходят поверхностные и глубокие воспалительные изменения слизистой оболочки матки, сопровождающиеся морфологическими изменениями эндометрия и расстройством функции матки. По характеру воспалительного процесса эндометриты дифференцируются на катаральные, катарально-гнойные, фибринозные, некротические и гангренозные. По характеру течения различают острый, хронический и скрытый эндометриты. Это заболевание является причиной бесплодия и часто наблюдается у коров (Бочаров И.А., 1967).
Многие исследователи подчеркивая полиэтиологическую природу бесплодия (Бочаров И.А., 1967; Студенцов А.П., 1970; Михайлов Н.Н., 1976; Логвинов Д.Д., Гонтаренко B.C., 1971; Кононов ГЛ., Буянов А.А., І973; Валге Л.А. и соавт., 1976; Ильинский Е.В., 1976; Панин A.M., Черкосов В.Г., 1981; Рыжов Б.В., 1992 и др.), отдают «предпочтение» факторам, наиболее сильно, с их точки зрения, влияющих на эту патологию.
Так, например, Н.Н. Михайлов (1976) констатирует, что при всем многообразии причин, приводящих к нежелательным последствиям в репродуктивной деятельности (функции) самок и самцов животных, их можно подразделить на три основные этиологические группы: I) заразные; 2) незаразные и 3) способствующие.
1. Заразные факторы (по Волоскову П.А., 1965). К этой группе причин относятся заразные болезни, вызываемые как специфическими возбудителями, поражающими, главным образом, репродуктивные органы (бруцеллез, вибриоз,трихомоноз, токсоплазмоз), так и неспецифическими -условно-патогенными микроорганизмами (патогенные серовары кишечной и синегнойноя палочки , стафилококки, стрептококки и др.) которые при попадании в половые пути могут вызвать патологию (вагиниты, цервициты, эндометриты).
2. Незаразные причины (по Бочарову И.А., 1967; Студенцову А.П., 1956 и др.). Эта группа включает врожденные и приобретенные необратимые органические дефекты полового аппарата (инфантилизм, старческая атрофия, склероз и др.), нервно-эндокринные нарушения, физиологическая неполноценность и отрицательные генетические факторы гамет (в спермиях или яйцеклетках), эмбрионального развития, незаразные болезни половых или других органов и систем организма, включая болезни недостаточности и обмена веществ (авитаминозы, макро- и мнкроэлементозы и др.).
Обе эти группы причастны к внутренней функциональной сущности (физиологические отправления) организма и непосредственно вызывают нарушения способности их к воспроизведению потомства.
3. К способствующим бесплодию факторам следует отнести различные погрешности в кормлении, содержании, эксплуатации и осеменении животных. В результате ненормальный условий существования самок и производителей возникают вышеуказанные нарушения.
К сожалению, способствующая группа причин еще во многих хозяйствах является ведущей в этиологии (причинности) бесплодия.
Учитывая, что послеродовые эндометриты, по мнению многих исследователей, могут являться причиной бесплодия, то эти три фактора причинности можно отнести и к данным заболеваниям.
Что же касается непосредственно послеродового эндометрита, то большинство авторов склонны считать, что он чаще всего развивается вследствие внедрения в полость матки патогенной и условно-патогенной микрофлоры, которая и обуславливает воспалительный процесс (Ильинский Е.В., 1971; Волосков П.А., Михайлов Н.Н., 1973; Злобин И.Н., 1988; Иноземцев В.П., 1994; Dawson F.h.M.,1960; Kay R.M., 1978; Bostedt H., 1974; Busch W. Et зі., 1985; Busch W., Wilier S., 1986; Dekruit А., і 982; ParisJey J. ei al., 1986; Basch S., Наше H., 1989).
При этом ряд исследователей считает, что микроорганизмы проявляют свое патогенное действие только на фоне нарушений инволюции матки, которая является показателем расстройства обмена веществ и снижения общей иммунореактивности организма. При нормальной инволюции, попадающие в половые пути микроорганизмы, быстро удаляются из матки вместе с лохиями и развитие эндометрита не наблюдается (Marx D. Огірле J., 1973; Родославов В., 1975).
Нам кажется, что подобное утверждение несколько дискуссионно, поскольку послеродовый эндометрит развивается не только на фоне субинволюции матки (стопроцентной корреляции здесь не наблюдается) и к тому же экспериментально доказано внедрение и размножение микроаген шв, например синегнойной палочки, в матке после введения в нее патогенной культуры. Об этом, например, сообщают В.А. Зудилин, И.Я. Чистяков і Ї976). К тому же субинволюция не всегда приводит к эндометриту (Баженова Н.Б., 2001).
В этом плане, наверное, следует учитывать весь комплекс негативных факторов: плохие условия содержания, несбалансированное кормление, отсутствие моционов, стрессы, иммунодефициты, послеродовые травмы, внесение возбудителя со спермой при искусственном осеменении и т.д., резко снижающие защитные силы организма, при котором и развивается заболевание (Логвинов Д.Д., 1971; Воскобойников В.М. и соавт., 1976; Силантьев КН., 1981; Ветра Я.А., Шафран Р.С., 1982; Шаталов В.Ф., Нехаев Е.Е., 1985; Полянцев Н.И., 1986; Нежданов А.Г., 1987; Schulz X, Mielke Н., 1977; Parisley J. et al., 1986).
Фармакологические средства, неїюлыуемые для лечения коров, больных послеродовым эндометритом
Большое разнообразие лекарственных средств, используемых для терапии больных коров с послеродовыми эндометритами указывает на то, что эта патология чрезвычайно широко распространена среди коров, а также на то, что нет достаточно эффективных лекарственных препаратов.
Весь арсенал лечебных средств, применяемых при послеродовом эндометрите можно условно подразделить на б групп: антисептические средства (препараты йода, серебра, этакридина лактата и др.); химиотерапевтическне препараты (антибиотики, сульфаниламиды, нитрофураны); анестетики (чаще всего растворы новокаина); гормоны (окситоцин, прогестерон и др.); пробиотики (различные симбионтные бактерии) и препараты разных групп. Причем эти лекарственные средства применяют одни, в сочетании друг с другом и в сочетании с некоторыми физическими методами лечения.
Так, например, в свое время для лечения послеродовых эндометритов у коров широко применяли препараты йода, в частности раствор Люголя и йодинол. Обладая достаточно выраженным местным антимикробным действием, препараты йода одновременно проявляют и резорбтивное действие. Йод, являясь основной частью тироксина, обуславливает ассимиляторные фазы белкового обмена веществ, а также усвоение фосфора, кальция, железа, активирует значительное число ферментов (Мозгов И.Е., 1985). Кроме того, йод проявляет противовоспалительное и рассасывающее действие. Накапливаясь в патологически измененных органах, он окисляет ткани, сначала обостряет воспаление и способствует рассасыванию продуктов распада и в дальнейшем регенерацию тканей (Евдокимов ПЛА970).
Раствор Люголя (состав: йод кристаллический, йодистый калий и вода) широко использовали для лечения послеродовых эндометритов и санации половых путей (Arbetter К., 1972; Grunert Е. et а!., 1973; Romaniuk J., 1973; Vogier G., 1973; Kindal H. et al., 1977). Об эффективности различных препаратов, содержащих йод, при лечении послеродовых эндометритов сообщает Ф.И. Осташко (1972), Вяткин А.Н. (1976), А.И. Киселев, Г.М. Андреев (1979), Варганов А.И., Оникунов К.А. (І98І), Я.А. Ветра и соавт. (1982), А.В. Жаров, Ф.Х. Абут (І987), Г.А. Черемисинов, Ю.П. Ткаченко (1991), При лечении послеродовых эндометритов у коров исследовали и использовали ихтиол. Этот препарат с фармакологической точки зрения весьма интересен. Он представляет продукт сухой перегонки битуминозных сланцев, содержащих остатки ископаемых морских животных и рыб. Содержит не менее 10,5 % органически связанной серы. Проявляет антисептическое, противопаразитарное, противовоспалительное, кератопластическое и местно-обезболивающее действие. При нанесении на слизистые оболочки суживает сосуды, уменьшает секрецию и экссудацию и ускоряет регенерацию тканей. Кроме того, после внутривенного введения действует по типу неспецифической терапии - раздражением, в связи с чем развивается ряд рефлекторных реакций, сопровождающихся повышением защитных сил организма, увеличением выделения адреналина, серотонина и вазопрессина, сужением сосудов и капилляров (Червяков Д.К., 1970), Автор подчеркивает, что ихтиол применяется при различных заболеваниях кожи, подкожной клетчатки, мышц, слизистых оболочек, в том числе для лечения метритов и вагинитов.
О достаточно высокой эффективности ихтиола при эндометрите, сообщает К.И. Туркевич (1950), который установил, что лучшие результаты получены при лечении острых эндометритов.
Ю.М. Серебряков (1992); B.C. Авдеенко, ВТ. Гавриш (1996), используя общестимулирующие свойства ихтиола, применили его для лечения послеродовых эндометритов у коров. Авторы назначали 7 % стерильный раствор ихтиола на 40 % растворе глюкозы внутримышечно по специальной схеме (возрастающе-понижающие дозы) и получили хорошие результаты. Лечебный эффект авторы объясняют тем, что препарат способствовал восстановлению сократительной функции матки и повышению резистентности организма.
Высокий лечебно-профилактический эффект при послеродовом эндометрите получил В.А. Агафонович (1994) при сочетаемом назначении препарата серебра (колларгол), маточного средства СНАГШ и глюкокортикостероидов путем внутриаортальных инъекций.
Д.Н. Левкивский (1990) применил для лечения послеродового эндометрита внутриматочное введение антисептического раствора (предложен еще в 1941 году). Смесь готовили на дистиллированной воде в следующем составе: натрий гидрокарбонат - 40,0; натрий сульфат -40,0; 5%-спиртовый раствор йода - 200 мл.; 10 % раствор аммиака (нашатырный спирт) - 40 мл.; гексаметилентетрамин - 50,0; глицерин - 200 мл.; вода дистиллированная - до 1000 мл. Раствор вводили внутриматочно по 500 мл 1 раз в день, чередуя его с антибиотиками, до заметного улучшения общего состояния и прекращения выделения из матки экссудата. Через 10-15 мин. после введения раствора, подкожно инъецировали по 2 — 3 мл 0,5 %-ного раствора прозерина. Кроме этого в первый день лечения всем коровам делали новокаиновую блокаду тазового нервного сплетения. В то же время, по сообщению И.С. Нагорного и Х.И. Юсеф (1976), раствор Люголя, перманганата калия, фурацилина, фуразолидона, йодоформа, ксероформа, экзутер, эмбригол, мыла, эмульсия креолина, 2 % раствор натрия бикарбоната, 5 % раствор натрия сульфата, перекись водорода оказывают раздражающее действие на муцины секретов половых органов и отрицательно влияют на организм коров. Являясь дополнительными раздражителями слизистой оболочки матки, они моїут задерживать восстановление воспроизводительной способности животных.
Нам кажется, что это заявление авторов весьма категорично и носит дискуссионный характер. Тем более что раздражающее действие изученных средств во многом зависит от концентрации растворов. К тому же известно, что раздражение слабой силы оказывает позитивное, тонизирующее влияние на ткани. Тем не менее, возможность отрицательного влияния перечисленных авторами средств существует и ее следует учитывать при лечении не только послеродовых, но и других патологий.
Наиболее часто при лечении послеродового эндометрита в практике использовались и используются химиотерапевтические средсгва такие как, антибиотики, сульфаниламиды, нитрофураны, хиноксалины, а в последнее время и фторхинолоны. При этом многие исследователи придерживаются основного принципа химиотерапии - изучение чувствительности патогенной микрофлоры к применяемым препаратам.
Эпизоотические и этнопатогенетическне аспекты при эндометрите коров
Как показали наблюдения в 5 хозяйствах, 3 районов области при клиническом исследовании 547 коров послеродовой эндометрит встречается во всех обследованных хозяйствах. Среди других патологий акушерско-гинекологического плана на долю эндометрита приходится 63,6 %, на втором месте по частоте случаев - субинволюция матки - 51,5 % (таб. 1, рис. 1).
Данные таблицы 1 показывают, что в разных хозяйствах и стадах коров выделяется разный процент больных. Например, наибольшее количество послеродовых эндометритов мы регистрировали на фермах с наиболее высокой молочной продуктивностью и наименьшее количество на фермах с низкой молочной продуктивностью коров, при этом у высокопродуктивных животных эндометритом заболевало до 97,3 % обследованных животных, тогда как у коров с низкой молочной продуктивностью этот показа гель составлял 31,5 %, т.е. был ниже почти в 3 раза. Эта закономерность была присуща и всем другим патологиям.
Интересно и другое наблюдение. У всех коров, больных эндометритом, как правило, предварительно наблюдали задержание последа, гоїла как другие патологии, в частности родильный парез и персистентое желтое тело, встречались не у всех животных, больных эндометритом. Что касается субинволюции матки, то она также регистрировалась не у всех коров, больных эндометритами, как и эндометрит при субинволюции матки. Однако, более чем у 50 % больных животных наблюдались обе эти патологии, причем либо субинволюция матки предшествовала эндометриту, либо наоборот, эндометрит предшествовал субинволюции матки.
Исследования показали, что чаще регистрировался острый катаральный и несколько реже гнойно-катаральный эндометрит (в 95,7 % случаев), тогда как на долю хронического эндометрита приходилось менее 5 % больных животных. Из таблицы 2 видно, что некоторые иммуво-биохимические показатели крови клинически здоровых (незаболевших) коров изменялись в различные сроки исследования, в период отела. Так например, сразу после отела статистически достоверно в крови коров увеличивалось содержание лейкохщтой с 8,7 до. 11,4 (10 9/п, р 0,05) и гдкшгад с 3,5 до 5,9 ммапъ/л (р 0,05). Одновременно с этим прослеживалась тенденция увеличения БлС (р 0,05) и повышалась активность лизоцима с 15,5 до 21,7 % (р 0,05). Содержание Т- и В-лимфоцитов практически не изменялось.
Увеличение количества лейкоцитов и повышение активности БАС и лизоцима сразу после родов можно объяснить стрессовой ситуацией, поскольку роды сами по себе являются сильным стресс-фактором.
Несколько другая картина изменения иммуно-биохимических показателей крови наблюдалась у коров, заболевших эндометритом. Бели сразу после отела эти изменения были аналогичны таковым клинически здоровых животных, а именно, достоверно увеличилось количество лейкоцитов, глюкозы и повышалась активность лизоцима, то на 7 - 10 дни после отела, когда появились клинические признаки эндометрита, эти показатели не уменьшались, как это имело место в первой группе коров, а такие как БАС и активность лизоцима даже увеличивались.
Кроме того, уже перед самым отелом у коров этой группы наблюдалась тенденция уменьшения содержания Т- и В-лимфоцитов и на 7 - 10 день она была достоверно ниже для Т-лимфоцитов (Р 0,05).
В следующем опыте, проведенном на 10 коровах, попытались установить закономерность проявления эндометрита у коров, в зависимости от снижения перед родами коров пяти показателей, информативных для иммунологического статуса организма : общий белок, активность лизоцима, БАС, Т- и В-лимфоциты (табл. 3).
Из таблицы 3 видно, что у животных с более высоким содержанием в крови общего белка, наблюдались более высокие показатели других иммунологических тестов. Одновременно с этим установили, что большее количество больных эндометритами приходилось как раз на коров, у которых регистрировались пониженные показатели изучаемых тестов. Однако имелись и исключения. Так, одна корова с наиболее высокими показателями иммунологической защиты организма, заболела эндометритом. В тоже время, одно животное, с самыми низкими показателями иммунологической защиты (по Т- и В-лимфоцитам) наоборот не заболело.
Проведенные исследования показали, что на возникновение и проявление эндометрита у коров влияют такие предрасполагающие факторы, как высокая продуктивность животных и снижение иммунологических факторов защиты организма.
Данные литературы, указывающие на то, что в развитии воспаления слизистой оболочки матки большое значение имеет микробный фактор, побудили нас провести микробиологические исследования выделений из матки при клинической картине эндометрита. Видовой состав, выделенной микрофлоры (табл. 4) показывает, что он был не одинаковым у одних и тех же животных, в зависимости от сроков исследования (в первые дни заболевания и в период его развития, с появлением гнойного экссудата). Так, например, в первые дни заболевания выделяли, в основном, кишечную палочку и белый стафилококк (54 и 34 %) и единичные колонии золотистого стафилококка, диплококков и неидентифицированной микрофлоры. На 4 - 5 день заболевания изолировали кишечную палочку - 31 %; белый стафилококк - 24 %; золотистый стафилококк - 27 %; протей - 3 %; синегнойная палочка — 5 %; диплококки - 7 % и неидентифицированная микрофлора - 3 %. Наиболее частые ассоциации : кишечная палочка + стафилококки; кишечная палочка + стафилококки + синегнойная палочка + протей. Диплококки выделяли в ассоциации со стафилококками. Выделение монокультур практически не наблюдали, за исключение кишечной палочки (в начале заболевания) и синегнойная палочка (в период развития заболевания, всего в 2 — 3 % случаев).
Токсикологическая оценка пенообразующнх маточных свечей
Токсикологическая оценка лекарственных средств для выявления возможных побочных эффектов каждого нового лечебного препарата не менее важна, чем выяснение его эффективности и предусматривается при создании любого лекарственного вещества. В этой связи в серии опытов определили острую, в том числе возможное раздражающее и аллергизирующее действие ПМС подострую и хроническую токсичность препарата.
Местное раздражающее действие ПМС изучили на белых крысах и кроликах, которым субстанцию ПМС и раствор ПМС наносили на выбритый участок кожи и кончик хвоста. Контрольным животным проводили аппликацию изотоническим раствором натрия хлорида.
Установили, что при аппликации белым крысам и кроликам, как ПМС, так и изотонического раствора натрия хлорида, при макроскопической оценке никаких признаков раздражения и воспаления не обнаружено, что говорит об отсутствии раздражающего действия препаратов.
Определение возможного аллергизирующего действия ПМС провели существующим методом, используемым для этой цели на 10 морских свинках. Для этого шесть животных сенсибилизировали субстанцией ПМС в дозе 0,1 мг/кг, который вводили внутрибрюшно три дня подряд, делали пятидневный перерыв и вновь проводили инъекции препарата. Через 14 дней после первого введения препарата его вводили в той же дозе внутривенно шести подопытным и четырем контрольным морским свинкам. За животными наблюдали в течение 21 дня. Результаты опыта показали, что никаких видимых изменений в поведении животных не отмечали, как в течение первого часа, так и в последующем. Аллергизирующие свойства препарата обычно проявляются в первый час и в зависимости от силы аллергена клинически проявляются учащением сердцебиения, дыхания, одышкой, вплоть до летального исхода. Подобных отклонений в состоянии всех 10-ти морских свинок не наблюдалось. На основании этого можно заключить, что субстанция ПМС не обладает аллергизирующими свойствами.
Определение острой токсичности субстанции ПМС (рецептура № І), в частности ЛД 50 и ЛДюо проводили методом Кербера, однако нам не удалось установить эти показатели, поскольку максимально вводимые разовые дозы препарата белым крысам от 5 до 10 мл 50 % субстанции не вызывали гибели лабораторных животных. Теоретические расчеты ЛД so показывают, что для крыс она составила более 20000 мг/кг. Это говорит об очень низкой токсичности препарата, если учесть тот факт, что по токсической классификации препараты, у которых ЛД so превышает 1000 мг/кг относятся к малотоксичным соединениям. Вторую серию этих опытов провели с субстанцией ПМС (рецепт № 2) Эта субстанция не вызвала гибели белых крыс в дозах 2,5; 5,0 и 7,5 мл/крысу (50% субстанция). При дозе 9,5 мл (максимально возможное количество введения) из 5-ти крыс пала одна, а у двух наблюдались признаки отравления (угнетенное состояние, отказ от корма, шаткая походка, сильная жажда, диарея). И хотя ЛД $о также не удалось установить, в дальнейших исследованиях стали использовать субстанцию ПМС (рецепт № 1). В подостром опыте субстанцию ПМС задавали на протяжении 30 дней подряд в дозах 2,5; 5 и 10 раз превышающих предполагаемую оптимальную, т.е. 1,0; 2,5; 5t0 и 10 мг/кг. Указанные дозы высчитаны теоретически по диоксидину из расчета 1 мг/кг препарата для коровы. Учитывали прирост живой массы, рост и развитие внутренних органов, гематологические и некоторые иммуно-биохимические показатели (табл. 15).
Данные таблицы 19 показывают, что увеличение дозы субстанции ПМС в 2,5 и 5 раз по сравнению с предполагаемой оптимальной практически не влияло на гематологические показатели и содержание глюкозы в крови белых крыс при месячном назначении препарата. В то же время при дозе препарата 10 мг/кг проявлялась некоторая тенденция снижения содержания гемоглобина (р 0,05) и увеличения лейкоцитов в крови белых крыс, по сравнению с животными, получавшими оптимальную дозу и контрольными животными. Однако эти различия оказались статистически достоверными только для гемоглобина.
В следующем опыте изучили возможное эмбриотропное действие ПМС. Эти исследования были необходимы потому, что препарат предназначен для внутриматочного введения, т.е. непосредственно в репродуктивные органы.
Возможное эмбриотропное (тератогенное и эмбриотоксическое) действие препарата определяли согласно существующих методов исследования, изложенных в «Рекомендациях по определению токсических свойств препаратов» (1988). Препарат вводили 7 дней подряд с первого дня беременности в оптимальной и двойной дозах. Исследования проводили на 74 опытных и 67 контрольных 21-дневных плодах белых крыс.
Установили, что общая эмбриональная гибель плодов подопытных крыс на 21-й день внутриутробного развития составила 14,7. Идентичный показатель отражал и предямплантационнуго гибель плодов, так как постимплантационная смертность не установлена. Для сравнения в контрольной группе общая эмбриональная смертность составила 14,21 %; она включает предимплантационную - 13,82 % и постимплантационную -0,39 %. Следовательно, общая эмбриональная смертность в подопытной и контрольной группе крыс была практически одинаковой. Это говорит о том, что ПМС не обладает эмбряотоксическям действием.
Тератогенное действие ПМС на развитие органов головы, грудной, брюшной и тазовой полостей исследовали на 190 серийных микросрезах подопытных плодов и 130 срезах, приготовленных из плодов контрольной группы после их продолжительной фиксации в растворе Буэна. Патологические изменения органов при увеличении (МБС-10) до 56-ти раз как в контрольной, так и в подопытной группах животных не обнаружено.
Затем выяснили закономерности развития костей периферического скелета плодов подопытной и контрольной групп. В этих целях было изготовлено 397 тотальных препаратов оссифицированных участков грудных и тазовых правых и левых конечностей. В результате морфом етрии установили, что развитие периферического скелета плодов подопытной и контрольной групп протекало с одинаковой протяженность и аналогичной интенсивностью для одноименных костей правой и левой конечности, а существующая незначительная разница между морфометрическими величинами, отражающими этот процесс, была статистически недостоверной и не выходила за пределы (р 0,05).
Таким образом, субстанция ПМС, введенная беременным белым крысам на протяжении 7 дней, не проявляла эмбриотоксического и тератогенного, а в целом и эмбриотропного действия. Таким образом, токсикологические исследования показали, что ГТМС в оптимальной дозе и увеличенная в 2,5 ; 5 и 7,5 раз при тридцатидневном пероральном введении не оказывает побочного действия. Препарат не обладает раздражающим, аллергизирующим и эмбриотропньгм действием. Поэтому дальнейшее изучение ПМС провели в условиях производства, предварительно испытав препарат на безвредность для коров на ограниченном поголовье.
В этих целях ПМС сравнивали с экзутером. Трем коровам ввели по 3 суппозитория ПМС, а трем другим - 3 суппозитория экзутер. Через один час после вяутриматочного введения свечей состояние животных первой группы (ПМС) не отличалось от контрольных коров, которым не вводили никакие препараты. В то же время у одной коровы второй группы (экзутер) уже через 45 - 50 мин были замечены признаки отравления, проявившиеся беспокойством, обильным слюнотечением, повышенной перистальтикой и диареей, что, по всей вероятности, связано с холиномиметическими веществами, входящими в состав экзутера, а возможно действием и других компонентов. Не случайно в рекомендациях по применению экзутера коровам при заболеваниях матки указывается, что не рекомендуется вводить в полость матки одновременно более 4-х таблеток.
