Содержание к диссертации
Введение
Раздел 1. Обзор литературы
1. 1 Бактериальные и микоплазменные инфекции птиц 8
1.2 Химиотерапия бактериальных инфекций птиц 13
1.3 Антибиотикорезистентность и пути ее преодоления 17
1.1.Комбинированная антибиотикотерапия 22
1.5 Клиндамицин 24
1.6 Спектиномицин 27
Раздел 2, Собственные исследования
2.1. Материалы и методы исследований 31
2.1.1 Изучение чувствительности бактерий к антибиотикам 31
2.1.2. Фармацевтические исследования 33
Определение массовой доли влаги в комплексном препарате 33
Определение растворимости комплексного препарата 33
Определение рН 10 %-го водного раствора препарата 34
Определение подлинности клиндамицина и спектиномицина 34
Определение массовой доли клиндамицина в комплексном препарате 37
Определение массовой доли спектиномицина в комплексном препарате 40
Испытание комплексного препарата на токсичность 43
2.1.3. Изучение стабильности комплексного препарата 44
2.1.4. Фармакотоксикологические исследования 45
Изучение острой токсичности на белых мышах 45
Изучение острой токсичности на птице 46
Изучение субхронической токсичности на белых мышах 46
Изучение субхронической токсичности на птице 48
2.1.5. Фармакокинетические исследования 49
Изучение фармакокинетики комплексного препарата в организме птицы мосле однократного перорального введения
Изучение фармакокинетики комплексного препарата в организме птицы при его постоянном поступлении с водой
2.1.6. Изучение сроков выведения остаточных количеств клиндамицина и спектипомицина из организма птицы
2.1.7. Изучение терапевтической эффективности комплексного препарата в производственных условиях
2.2. Результаты исследований
2.2.1. Чувствительность бактерий к антибиотикам
2.2.2. Фармацевтические исследования
2.2.3. Стабильность комплексного препарата при хранении
2.2.4. Фармакотоксикологические исследования Острая токсичность в опыте на белых мышах Острая токсичность в опыте на птице Субхроническая токсичность в опыте на белых мышах
Субхроническая токсичность в опыте на птице
2.2.5. Фармакокинетические исследования фармакокипетика комплексного препарата в организме цыплят после однократного перорального введения Фармакокипетика комплексного препарата при его постоянном поступлении с водой
2.2.6. Сроки выведения остаточных количеств клиндамицина и спектипомицина из организма птицы
2.2.7. Терапевтическая эффективность комплексного препарата в производственных условиях
Раздел 3. Обсуждение результатов
Выводы
Практические предложения
Литература
- Антибиотикорезистентность и пути ее преодоления
- Определение растворимости комплексного препарата
- Изучение фармакокинетики комплексного препарата в организме птицы мосле однократного перорального введения
- Фармакокинетические исследования фармакокипетика комплексного препарата в организме цыплят после однократного перорального введения Фармакокипетика комплексного препарата при его постоянном поступлении с водой
Введение к работе
Актуальность проблемы
Серьёзной проблемой современного промышленного птицеводства являются бактериальные инфекции птиц. По данным Департамента ветеринарии РФ эта группа заболеваний остается одной из основных причин гибели птицы (141,142).
Наиболее значимый урон птицеводству наносят следующие заболевания: колибактериоз, сальмонеллез, стрептококкоз, стафилококкоз, респираторный микоплазмоз. Экономические потери складываются из снижения яйценоскости и привесов, гибели эмбрионов, цыплят и взрослой птицы (22, 29, 65, 142).
За последние годы достигнуты значительные успехи в борьбе с бактериальной патологией. Так, например, если в 1994 году сохранность птицы в Российской Федерации составляла лишь 91% по взрослой и 84 % по молодняку (63), то 2000 году она повысилась до 98 % (74, 75, 141),
Несмотря на достигнутые успехи, бактериальные инфекции продолжают представлять серьезную угрозу эпизоотическому благополучию отрасли (23, 82, 104).
Колибактериоз и микоплазмоз в Российской Федерации регистрируется повсеместно. С сальмонеллезом и пуллорозом наиболее серьезная ситуация в Краснодарском и Ставропольском краях, Волгоградской, Ростовской, Курской и Липецкой областях. Пастереллез чаще всего отмечали в Курганской, Ростовской, Волгоградской и Астраханской областях.
Борьба с бактериальной патологией включает в себя комплекс ветеринар-но-санитарных мероприятий, среди которых важным элементом является использование химиотерапевтических препаратов. Однако, в связи с развитием антибиотикорезистентности к используемым препаратам остро стоит проблема поиска новых путей предупреждения формирования устойчивости и воздействия на резистентных микроорганизмов (3, 25, 27, 31, 56).
развитие у микроорганизмов устойчивости является основным фактором, ограничивающим эффективность антимикробных препаратов и стимулирующим разработку новых соединений, а также поиск комбинаций антибиотиков, обладающих взаимоусиливающим антимикробным действием (8, 15, 20, 39, 103).
Одним из антибиотиков, обладающих высокой активностью в отношении микоплазм, стафилококков и стрептококков является линкомициы, представляющий собой продукт жизнедеятельности гриба Streptomyces Uncolnensis (сем. Streptomycetaceae) (56, 86, 169, 179, 196). Препарат известен давно и хорошо зарекомендовал себя для борьбы с грамположительной микрофлорой. Путем химической модификации линкомицина был получен другой антибиотик - клин-дамицин. Особенностью его строения является замена одной из гидроксильных групп молекулы линкомицина на анион хлора, Данное изменение привело к значительному усилению антимикробных свойств клиндамицина и расширению спектра его антибактериального действия (145, 146, 180 ,183, 209).
В Российской Федерации для ветеринарных целей клиндамицин не применялся. Отсутствие перекрестной резистентности с другими антибиотиками (включая линкомициы), а также высокая антибактериальная активность позволила нам выбрать клиндамицин в качестве одного из действующих веществ комплексного препарата для лечения бактериальных инфекций птиц.
Заболевания сельскохозяйственных птиц редко протекают в виде моноинфекции, а чаще в сочетании друг с другом. Так, микоплазмоз может осложняться колибактериозом, сальмонеллезом и наоборот (2, 10, 57, 58, 64). Для борьбы с такими ассоциациями недостаточно применения одного препарата, требуются комплексы антибиотиков, одновременно действующих на большинство возбудителей (11, 22, 49, 92, 94).
Обладая высокой активностью в отношении грамположительной микрофлоры и аназробов, клиндамицин не действует на грамотрицательные бакте-рии. Поэтому для расширения спектра антибактериального действия комплексного препарата мы ввели в его состав спектиномицин - антибиотик подавляю-
ишй развитие эшерихий и сальмонелл (174, [85, 188, 189), а также по нашим данным усиливающий антимикробные свойства клиндамицина.
Разработанный нами комплексный препарат на основе клиндамицина и с пектином и цина обладает широким спектром антибактериального действия и высокой активностью в отношении этиологически значимых в промышленном птицеводстве бактерий.
Цели и задачи исследования:
Изучить антимикробную активность клиндамицина и спектиномицина, а также их комбинации.
Разработать требования к качеству комплексного препарата и методы его контроля.
Изучить стабильность комплексного препарата в процессе хранения.
Изучить острую токсичность комплексного препарата на лабораторных животных и птице.
Изучить субхроническую токсичность комплексного препарата на лабораторных животных и птице.
Изучить фармакокинетику клиндамицина и спектиномицина в организме птиц после применения комплексного препарата.
Определигь сроки выведения остаточных количеств клиндамицина и спектиномицина из организма птиц после применения комплексного препарата.
Изучить терапевтическую эффективность комплексного препарата в производственных условиях.
Научная новизна.
Экспериментально обоснован состав комплексного антибактериального препарата на основе клиндамицина и спектиномицина.
Установлены параметры острой и субхронической токсичности комплексного препарата для лабораторных животных и птиц.
Изучена фармакокинетика и определены оптимальные дозы комплексного препарата, обеспечивающие эффективные антибактериальные концентрации клиндамицина и спектиномицина в организме птиц.
#
Определены сроки выведения остаточных количеств действующих веществ из организма птиц, а также изучена терапевтическая эффективность комплексного препарата в производственных условиях.
Практическая ценность работы.
Разработан и изучен новый комплексный антибактериальный препарат для лечения бактериальных инфекций птиц.
Разработаны методы контроля качества комплексного препарата.
Определены сроки возможного убоя птиц на мясо после курсового применения комплексного препарата.
Разработаны нормативно-техническая документация на препарат(проект технических условий на опытную партию, временное наставление по применению комплексного препарата при бактериальных инфекциях птиц).
Основные положения диссертации, выносимые на защиту.
Экспериментальное обоснование состава комплексного препарата.
Результаты изучения острой и субхронической токсичности комплексного препарата на лабораторных животных и птице.
Результаты изучения фармакокинетики комплексного препарата и определения сроков выведения остаточных количеств клиндамицина и спектиноми-цина комплексного препарата из организма птицы.
Результаты изучения терапевтической эффективности комплексного препарата при колибактериозе цыплят-бройлеров.
Антибиотикорезистентность и пути ее преодоления
Эффективность антибиотикотерапии в основном зависит от чувствительности возбудителя болезни к применяемому препарату. В то же время микроорганизмы могут приобретать резистентность (устойчивость) практически к любому веществу, обладающему антимикробным действием (25, 36, 56).
Под резистентностью микроорганизмов принято понимать отсутствие или лее утрату (временную или постоянную) первоначальной чувствительности к действию антимикробных средств (27, 31, 44).
Степень развития устойчивости зависит от свойства препарата и вида возбудителя. Различают два типа развития резистентности: 1) «стрептомициновый», при котором быстро нарастает устойчивость уже после однократного контакта с антибиотиком (характерен для стрептомицина, эритромицина, оле-андомицина, новобиоцина и др.); 2) «пенициллиновый», при котором наблюдается медленное, ступенеобразное развитие устойчивости. К этой группе принадлежит большинство используемых в клинике антибиотиков: пенициллин, левомицетин, бацитрацин, полимиксин, циклосерин, противогрибные антибиотики. Постепенно, ступенеобразно нарастает резистентность к тетрациклинам, канамицину, неомицину, мономицину, цефалоспорину (5, 88).
В свою очередь, устойчивость у разных видов микроорганизмов к одним и тем же препаратам развивается с различной скоростью. Быстрее всего, как в эксперименте, так и на практике, резистентными становятся стафилококки, ши-геллы и эширихии (25, 27, 31, 35, 66).
В настоящее время природа лекарственной устойчивости рассматривается в генетическом аспекте, а механизм ее проявления — на биохимическом уровне.
Устойчивость микроорганизмов на биохимическом уровне обеспечивают следующие факторы.
1. Модификация фермента-мишени в клетке таким образом, что он ста новится нечувствительным к ингибитору, но при этом сохраняет способность осуществлять свою нормальную физиологическую функцию.
Большая часть мишеней для антибиотиков в микробных клетках представляет собой ферменты и чаще всего ингибиторы взаимодействуют с их активным центром. В этих случаях выражена конкуренция между ингибитором и нормальным субстратом. И для того чтобы смогло проявиться действие ингибитора на рост клетки, сродство ингибитора к активному центру должно быть значительно выше, чем сродство субстрата. Типичным примером препаратов такого действия являются сульфаниламиды. Большая часть сульфаниламидов имеет большее сродство к синтетазе тетрагидроптероиновоЙ кислоты, чем нормальный субстрат — о-аминобензойная кислота. В присутствии одинаковых количеств этих двух веществ в клетке нарушается биосинтез фолиевой кислоты, что приводит к её гибели. Микроорганизм приобретает устойчивость путем мутации гена синтетазы, что приводит к образованию модифицированного фермента, имеющего меньшее сродство к сульфаниламиду, чем к п -аминобензойной кислоте (199).
2. Предотвращение доступа ингибитора к мишени. Этот тип устойчиво сти часто неточно определяют как «обеспечение барьера проницаемости в от ношении антибиотика». Например, бактерии, устойчивые к тетрациклину, ут рачивают способность накапливать антибиотик в клетке, оставаясь проницае мыми для него. Устойчивые микроорганизмы также хорошо поглощают тетра циклин, как и чувствительные штаммы, но они быстро выводят его наружу, по этому внутриклеточные концентрации никогда не достигают ингибиторных знамений (108, 149,216).
3. Устойчивость за счет инактивации. Многие группы бактерий вырабатывают ферменты, специфически инактивирующие антибиотики, Такие ферменты действуют двумя главными способами: они либо разрушают антибиотик, расщепляя одну или несколько ковалентных связей в его молекуле, либо химически замещают ключевые функциональные группы, делая антибиотик неактивным. Классический пример - фермент пенициллиназа, разрушающий пенициллин (224, 251, 219, 236).
В настоящее время уже стало ясно, что лекарственная устойчивость бактерий определяется прежде всего природой комплекса детерминантов, включенного в геном микробной клетки (и определяющего поведение популяции в целом): в него могут входить как хромосомные гены, так и внехромосомные детерминанты (плазмиды), т. е. гены, определяющие устойчивость к антибиотикам, либо являются частью бактериальной хромосомы, либо расположены на внехромосомных элементах бактерий — плазмидах. Хромосомы и плазмиды представляют собой репликоны, т. е. самореплицирующиеся генетические единицы, способные к независимому существованию в бактериальной клетке. По мере того как клетка растет и делится, эти элементы реплицируются, пока ко времени деления клетки не образуются две копии каждого репликона, которые могут распределяться в дочерние клетки (13, 26, 67).
Распределение генов, определяющих различные типы устойчивости к антибиотикам, между хромосомами и плазмидами до некоторой степени отражает лежащие в основе устойчивости биохимические механизмы. Например, мутации, обеспечивающие устойчивость к сульфаниламидам у пневмококков, имеют хромосомную локализацию, поскольку они модифицируют активный центр синтетазы тетрагидроптероиновои кислоты и, следовательно, расположены в структурном гене на хромосоме. Но наиболее часто детерминанты устойчивости расположены на внехромосомных элементах. Локализация гена устойчивости в хромосоме или плазмиде обычно мало влияет на проявление признака как такового и, следовательно, на устойчивость клетки. Однако, как отмечают большинство исследователей, внехромосомная локализация генов устойчивости встречается чаще и имеет большое значение особенно в передаче этих генов, так как плазмиды хорошо приспособлены к облегченному переносу: во-первых, они представляют собой репликоны, поэтому способны обеспечивать собственное сохранение и выражение в «чужой» протоплазме; во-вторых, имеют подходящий размер для переноса из клетки в клетку (25, 32, 67, 83).
Известно, что генетический перенос между клетками бактерий происходит в результате трех процессов: трансдукции, конъюгации и трансформации. В . первом случае ДНК переходит от клетки к клетке с помощью бактериофага, иг рающего роль переносчика, во втором две клетки спариваются и ДНК переходит в одном направлении. При трансформации «раздетая» ДНК переходит из клетки в клетку через окружающую среду (69, 122).
Определение растворимости комплексного препарата
Подлинность клиндамицнна гидрохлорида и спектиномицина сульфата устанавливали методом тонкослойной хроматографии на пластинах с силикаге-лем. Метод основан на разделении препарата на составляющие компоненты в тонком слое сорбента под воздействием системы растворителей путем восходящей хроматографии с последующим проявлением пятен и их идентификацией по соответствующим стандартам клиндамицнна и спектиномицина.
Аппаратура, материалы, реактивы. - Весы лабораторные общего назначения, по ГОСТ 24104-88, 2 класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г; - Сушильный шкаф с естественной циркуляцией воздуха и автоматическим регулированием температуры; - Камера для хроматографирования; - Электовентилятор настольный типа «Луч» или аналогичный, оснащенный элементом для подогрева направленного воздушного потока; - Пластинки для тонкослойной хроматографии фирмы "Merck"-HPTLC-Alutolien Kiezelgel 60 (Германия) или любые другие аналогичной марки; - Пульверизатор стеклянный; - Капилляр на 5 мкл, откалиброванный по 1 мкл, или микрошприц; - Аммиак водный, 25%, по ГОСТ 3760-79; - Кислота уксусная, ледяная, х.ч., по ГОСТ 61-75; - Кислота серная (d=l ,84), х.ч., по ГОСТ 4204-77; - Железо хлорное шестиводное, ч.д.а., по ГОСТ 4147-74; - Ацетон, по ГОСТ 2603-79; - Спирт этиловый ректификованный, по ГОСТ 18300-87; - Н-бутанол (спирт н-бутиловый), по ГОСТ 6006-78; - Вода дистиллированная, по ГОСТ 6709-72 или ГФ X, с.73; - Пипетка 6-1/2/-10, 8-2-0,1 и 8-2-0,2, по ГОСТ 29169-92; - Цилиндр 1/3/-10,100, по ГОСТ 1770-74; - Воронка делительная ВД 2-250, по ГОСТ 25336-82; - Пробирка П-2-25-14/23 ХС, по ГОСТ 25336-82; - Бумага фильтровальная, по ГОСТ 12026-76; - Колба мерная 1/2/-25,50,100,1000-2, по ГОСТ 1770-74; - Стандартный образец клиндамицина гидрохлорида. - Стандартный образец спектиномицина сульфата.
1) Приготовление растворителя и камеры для хроматографирования: В качестве растворителя использовали смесь бутилового и этилового спиртов с водным (25%) аммиаком в объемном соотношении 6;2:4 соответственно.
Стеклянную хроматографическую камеру заполняли на высоту 5-8 мм системой растворителей, герметично закрывали и выдерживали не менее 30 минут для насыщения парами растворителя.
2) Приготовление раствора для проявления хроматограммы; Растворяли 0,0975-0,1025 г шестиводного хлорного железа в 1,0 мл ледя ной уксусной кислоты в мерной колбе объемом 50 мл и доводили до метки концентрированной серной кислотой. Полученный раствор после охлаждения смешивали с ацетоном (или этиловым спиртом) в объемном соотношении 1:50 в темном флаконе. Этот раствор использовали сразу же после приготовления (храниться не может).
3) Проведение испытания: Навеску 2 г исследуемого образца препарата, взвешенного с точностью до 0,0002 г, переносили в мерную колбу объемом 100 мл и доводили до метки дистиллированной водой при постоянном взбалтывании (опытный раствор).
Навеску стандартного образца клиндамицина гидрохлорида (20-25 мг), взвешенную с погрешностью не более 0,0002 г, растворяли в дистиллированной воде до концентрации 1000 мкг в 1 мл, учитывая исходную активность стандартного образца (стандартный раствор 1).
Навеску стандартного образца спектиномицина сульфата (20-25 мг), взвешенную с погрешностью не более 0,0002 г, растворяли в дистиллированной воде до концентрации 2000 мкг в 1 мл, учитывая исходную активность стандартного образца (стандартный раствор 2).
По 20 мкл стандартных растворов 1 и 2 (20 мкг), и 20 мкл опытного раствора наносили на линию старта хроматографической пластинки в точки, отстоящие одна от другой на 2 см.
Пластинку с нанесенными пробами высушивали на воздухе в течение 15 мин, а затем помещали в камеру и хроматографировали восходящим методом в течение 2 часов. Когда фронт растворителя поднимался на 15-16 см, пластинку вынимали из камеры, и сушили на воздухе в течение 10 минут. Высушенную пластинку с предосторожностью (серная кислота!) равномерно опрыскивали из пульверизатора проявляющим раствором, подсушивали на воздухе, а затем прогревали 10 минут в сушильном шкафу при 110 С до проявления пятен.
Основные пятна, полученные при хроматографировании опытного раствора препарата, должны находиться на уровне основных пятен, полученных при хроматографировании растворов стандартных образцов. Примерный Rf клиндамицина = 0,37, а спектиномицина = 0,13.
Изучение фармакокинетики комплексного препарата в организме птицы мосле однократного перорального введения
Опыт проводили на 50 цыплятах массой 400-450 г. Перед опытом птицу выдерживали в течение 10 дней в спокойной обстановке для снятия стресса, адаптации к условиям содержания и кормления. Препарат вводили однократно перорально в зоб перед утренним кормлением в дозе 150 мг/кг. Через 0,5; 1; 3; 6; 9; 12; 15; 18; 21 и 24 часа подвергали убою по 5 цыплят, от которых брали образцы сыворотки крови, скелетной и сердечной мускулатуры, печени, почек, легких, содержимого тонкого и толсто-го отделов кишечника.
Полученные пробы исследовали на содержание в них клиндамицина и спектиномицина. Для получения экстрактов из органов их измельчали ножницами, добавляли фосфатный буферный раствор №4 (ГФ, изд.ХІ, том 2) (соотношение 1:0,5), стерильный кварцевый песок и растирали в ступке пестиком. Содержимое тонкого и толстого кишечников перед центрифугированием смешивали с буфером в соотношении 1:0,5. Полученную смесь центрифугировали при 5000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость переносили в чистые пробирки.
Содержание компонентов препарата в экстрактах из органов и сыворотке крови определяли микробиологическим методом с построением стандартной кривой (см. 2.1.2). При высокой концентрации антибиотиков в экстрактах их разводили фосфатным буферным №4 (ГФ, изд.ХІ, том 2). Кратность разведения определяли для каждого экстракта индивидуально в зависимости от органа и срока взятия пробы. Диапазон кратности разведений колебался в пределах от I до 75. Для окончательной оценки содержания вещества использовали максимально возможную степень разведения, которая еще дает видимые зоны задержки роста тест-культуры диаметром 16-18 мм.
Антибиотики могут связываться с белками, содержащихся в экстрактах, что занижает значение их концентрации. Для определения степени экстракции препаратов мы поставили модельный опыт.
В 1 мл всех типов экстрактов органов и тканей, полученных от контрольных птиц, внесли по 50 мкл фосфатного буферного раствора №4 (ГФ, изд.XI, том 2) содержащего клиндамицин в концентрации 6 мкг/мл. Аналогично приготовили 1 мл контрольного раствора, где вместо экстрактов использовали тот же самый буфер. Содержание клиндамицина в полученных смесях определили микробиологическим методом (методика см. выше). Разделив значение концентрации клиндамицина полученную при исследовании контрольного раствора на концентрацию полученную в каждом из экстрактов установили степень экстракции клиндамицина из соответствующего органа. Этот коэффициент использовали как поправку для окончательной точной оценки содержания антибиотика в органах.
При определении поправочного коэффициента спектиномицина в 1 мл экстрактов вносили по 50 мкл фосфатного буферного раствора №4 (ГФ, изд.XI, том 2) содержащего спектиномицин в концентрации 5000 мкг/мл. Остальные этапы исследований аналогичны опыту с клиндамицином.
На основании полученных данных судили о закономерностях всасывания, распределения и выделения комплексного препарата при однократном перо-ральном введении в организм птицы. Изучение фармакокинетики препарата в организме птицы при его постоянном поступлении с водой В опыте использовали 25 цыплят массой 400-500 г. Перед опытом птицу выдерживали в течение 10 дней в спокойной обстановке для снятия стресса, адаптации к условиям содержания и кормления.
В течение 5 дней в качестве источника питья все цыплята получали только воду, содержащую препарат в количестве 5 г/л. Начиная с первого дня, ежедневно, через 3 часа после кормления, подвергали убою по 5 цыплят. В образцах сыворотки крови, скелетной и сердечной мускулатуры, печени, почек, легких, содержимого тонкого и толстого отделов кишечника определяли содержание клиндамицина и спектиномицина вышеописанными микробиологическими методами.
На основании полученных данных судили о закономерностях всасывания, распределения и выделения комплексного препарата в организме птицы при его р постоянном поступлении с питьевой водой.
Определение сроков выведения клиндамицина и спектиномицина из организма цыплят проводили на 25 цыплятах массой 400-500 г, которым в течение 5 суток ежедневно давали питьевую воду с растворенным в ней препаратом ф в концентрации 5 г/л. Через 1, 2, 3, 4 и 5 суток после окончания применения препарата подвергали убою по 5 цыплят. В пробах сыворотки крови, скелетной и сердечной мускулатуры, печени, почек, легких, определяли содержание клиндамицина и спектиномицина теми же способами, что и при исследовании фармакокинетики.
На основании полученных данных определяли «сроки выдержки» птиц с момента окончания лечения их комплексным препаратом до убоя для использования мясо в пищу человеку.
Фармакокинетические исследования фармакокипетика комплексного препарата в организме цыплят после однократного перорального введения Фармакокипетика комплексного препарата при его постоянном поступлении с водой
Результаты по изучению фармакокинетики клиндамицина и спектиноми-цина после однократного перорального введения комплексного препарата в дозе 150 мг/кг массы тела отражены в таблицах 31, 32 и диаграммах 2 - 4,
Клиндамицин очень быстро всасывается в тонком кишечнике и распределяется в большинство тканей и жидкостей организма. Уже через тридцать минут после перорального введения комплексного препарата в дозе 150 мг/кг концентрация клиндамицина в печени, почках и сыворотке крови достигает уровня 5 мкг/г, в легких, скелетной и сердечной мускулатуре - 2 мкг/г. Максимальные количества приходятся на интервал от одного до трех часов после введения. В нашем опыте содержание клиндамицина в печени на третий час достигало 8,61; почках 5,98; сыворотке крови 5,65 мкг/г. Аналогичные показатели для легких, скелетной и сердечной мускулатуры были в 2-3 раза ниже и составляли 2Л4; 2,64 и 2,96 мкг/г, соответственно.
С течением времени концентрации постепенной снижаются до минимально терапевтических к 18-21 часу. В это время содержание клиндамицина во всех органах уравниваются и находятся в пределах 0,3-1,3 мкг/г. Дольше всего препарат удерживается в сыворотке крови и печени. Даже спустя 24 часа после введения, в указанных органах, мы регистрировали количества 0,32-0,34 мкг/г.
Закономерности распределения клиндамицина в кишечнике обусловлены его высокой резорбтивностью. Через полчаса после введения содержание в тонком отделе регистрируется на уровне 54,83 мкг/мл, а уже к первому часу падает до 18,02 мкг/мл. Далее оно продолжает постепенно снижаться и к 21 часу опускается до 1,12 мкг/мл. Ко вторым суткам остаются лишь следовые количества антибиотика.
Начало поступления клиндамицина в толстый отдел приходится на 3 час. В это время определяется количество - 1,39 мкг/мл. Максимальный уровень приходится на 15 час после введения - 41,78 мкг/мл. Затем препарат начинает I выводиться с калом и содержание его постепенно снижается. К 24 часам мы ре гистрировали концентрацию 19,56 мкг/мл.
Согласно многочисленным исследованиям (170, 189, 192) спектиномицин очень плохо всасывается в кишечнике, в кровь и внутренние органы поступает лишь 5-7% от общего количества. Поэтому мы не смогли обнаружить его во внутренних органах и изучали фармакокинетику спектиномицина только в же 0 лудочно-кишечном тракте. Содержание спектиномицина в тонком отделе кишечника в первые три дцать минут после введения комплексного препарата в дозе 150 мг/кг опреде ляется на уровне 914,2 мкг/мл. Затем, в связи с переходом препарата в толстый кишечник, концентрации антибиотика постепенно снижаются: к 6 часу - 368,4 мкг/мл, к 12-му - 149,3 мкг/мл. Спустя 21 час регистрируются 62,3 мкг/мл, а ко вторым суткам лишь следы препарата. В толстом кишечнике спектиномицин появляется к 3-му часу после вве дения препарата. Концентрация его в это время - 654,2 мкг/мл и к 24 часу сни ф жаются до 112,1 мкг/мл.
Для изучения фармакокинетики при таком способе введения препарат растворяли в воде в количестве 5 г/л. В течение 5 дней подряд птицы получали эту воду в качестве единственного источника питья, Уровни содержания действующих веществ в организме цыплят по дням внесены и таблицы 33, 34 и отображены на диаграммах 5-7. На графике хорошо видно, что такой способ применения препарата позволяет быстро создать терапевтические концентрации антибиотика в организме птицы и поддерживать их на протяжении всего курса лечения.
В печени, почках и сыворотке крови концентрация клиндамицина находилась на уровне 4-7 мкг/г, в легких, скелетной и сердечной мускулатуре 2-3 мкт г, что повторяет закономерности распределения препарата при однократном оральном введении.
Содержание клиндамицина в тонком отделе кишечника - 9,4-18,9 мкг/мл, толстом 17,6-26,1 мкг/мл, а спектиномицина 304,3-405,4 мкг/мл и 236,7-416,8 мкг/мл, соответственно.
Результаты определения сроков выведения остаточных количеств клиндамицина из организма цыплят после пятидневного введения комплексного препарата представлены в таблице 35,
На следующий день после отмены комплексного препарата во всех органах еще сохраняются терапевтические концентрации клиндамицина, которые шичик льно снижаются спустя 2 суток. К третьим суткам клиндамицин регистрируется лишь в печени, почках и сыворотке крови. Время полного выведения препарата приходится на четвертые сутки, в это время клиндамицин не обнаруживается нив одном и:з органов. Спекпшомицин но внутренних органах не регистрируется, из-за его плохой всасываемости в желудочно-кишечном тракте.
