Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы 8
2.1 Желудочно-кишечные болезни новорожденных животных с диа-рейным синдромом 8
2.2 Лечение и профилактика желудочно-кишечных болезней новорожденных животных с диарейным синдромом . 20
3. Материалы и методы исследования. 39
4. Результаты исследований. 43
4.1 Получение, состав и физико-химические свойства 43
4.2 Определение антимикробной активности 51
4.3 Фармако-токсикологическая оценка препарата АИРОБЕНТ 52
4.3.1 Изучение острой токсичности и определение класса токсичности 52
4.3.2 Кожно-резорбтивная и аллергенная характеристика препарата ...53
4.3.3 Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия 54
4.3.4 Изучение кумулятивных и отдаленных последствий 60
4.3.5 Оценка экологической безопасности АЙРОБЕНТА 64
4.4 Использование препарата АИРОБЕНТ 66
4.4.1 Эффективность препарата для лечения диарейного синдрома телят 66
4.4.2 Эффективность препарата для лечения диарейного синдрома собак . 70
4.4.3. Эффективность препарата для профилактики диарейного син дрома телят 74
4.4.4. Эффективность препарата для профилактики диарейного син дрома щенят 75
5. Заключение 77
6. Выводы 83
7. Практические предложения 85
8. Список литературы 86
- Лечение и профилактика желудочно-кишечных болезней новорожденных животных с диарейным синдромом
- Фармако-токсикологическая оценка препарата АИРОБЕНТ
- Кожно-резорбтивная и аллергенная характеристика препарата
- Эффективность препарата для лечения диарейного синдрома собак
Введение к работе
Желудочно-кишечные болезни молодняка крупного рогатого скота и непродуктивных животных являются одними их самых распространенных среди незаразной патологии в неонатальном и постанатальном онтогенезе.
Основными причинами возникновения желудочно-кишечных заболеваний телят в классическом понимании принято считать грубое нарушение технологии производства: низкий уровень организации работ по комплектованию и ремонту маточного поголовья, воспроизводству стада и выращиванию молодняка; нарушение условий содержания и неполноценное кормление (Анохин Б.М., 1996; Шахов А.П., Сулейманов СМ., 1998; Самохин В.Т., 2000).
Вместе с тем, в возникновении данной патологии (как в прочем и других) не последнюю роль играет состояние экосистемы села, наличие;постоянных источников загрязнения объектов животноводства, нарушение эво-люционно сложившегося равновесия между организмом и окружающей средой, достигшей экстремальных уровней.(Аргунов М.Н., 1998, 2000; Бузлома B.C., 2000).
На первом этапе при желудочно-кишечных болезнях отсутствует патогенная микрофлора и патогенез болезней протекает без осложнений.
Обычно желудочно-кишечные заболевания (среди них диспепсии и гастроэнтериты) телят носят в хозяйствах массовый характер с 80-100% охватом поголовья и летальность может достигать 40-75% (Карпуть И.М., 1984; Кузнецов Н.И., 1998).
Желудочно-кишечные заболевания молодняка наносят огромный экономический ущерб, за счет падежа молодняка, низкой энергии роста переболевших животных, затрат на проведение лечебных мероприятий, а при достижении заболевшими животными зрелого возраста - снижения продуктивности, а также ослабление резистентности и повышения восприимчивости к другим болезням (Шабунин СВ., 1998; Костына М.А., 2000). Лечение массовых желудочно-кишечных заболеваний сводится, в основном, к применению антибиотиков, сульфаниламидов и препаратов нитрофуранового ряда. Арсенал этих препаратов не всегда эффективен, поскольку штаммы микроорганизмов, вызывающих энзоотию, разнообразны и подвержены изменчивости. Очевидно, что противомикробные препараты абсолютно неэффективны в тех случаях, когда желудочно-кишечные заболевания телят вызваны токсинами, попавшими в полость желудочно-кишечного тракта с молозивом или выделенными в результате глистной инвазии. Кроме того, использование таких лекарственных средств антимикробного действия имеет ряд негативных последствий: загрязняют получаемую продукцию и окружающую среду остаточными количествами, снижают качество продукции (Антипов В.А., 2000).
Данное обстоятельство ведет к необходимости использования в практике животноводства фармакологических средств, обладающих комплексным действием, высокой эффективностью и безопасных для здоровья животных, человека и окружающей среды.
В плане этого, перспективным является АИРОБЕНТ, отвечающий всем этим требованиям. Это явилось причиной более детального и глубокого его изучения с целью использования в ветеринарной практике.
Исследования по диссертационной работе проводились в рамках плана НИР по заданию 0,4 «Разработать общую теорию патологии животных и на ее основе создать экологически чистую систему их ветеринарной защиты» РАСХН в 1996-2003гг. № час. per. 01.7.90001255; 01.9.90001257 и кафедры фармакологии, токсикологии и паразитологии ФВМ Воронежского ГАУ им К. Д. Глинки.
1.2. Цель и задачи исследования
Основная цель - разработать экологически безопасный препарат комплексного действия и изучить эффективность для лечения желудочно кишечных заболеваний животных и диарейным синдромом. Для этого были решены следующие задачи:
а) разработана технология получения препарата;
б) изучены физико-химические свойства препарата;
в) дана фармако-токсилогическая характеристика и оценка экологической безопасности;
г) изучена лечебно-профилактическая эффективность АЙРОБЕНТА при желудочно-кишечных заболеваниях новорожденных телят и щенят с диарейным синдромом.
1.3. Научная новизна
Впервые создан отечественный экологически безопасный препарат с использованием сырья животного происхождения. Определена оптимальная технология получения препарата, изучены физико-химические и фармако-токсикологические свойства. Разработаны показания к применению и оптимальная доза, изучена эффективность его при желудочно-кишечных болезнях телят незаразной этиологии. Полученные результаты исследования расширяют и дополняют представление о желудочно-кишечных заболеваниях новорожденных телят и щенят. Получен патент на изобретение.
1.4. Практическая значимость
Для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний с диарейным синдромом рекомендован новый экологически безвредный отечественный препарат АИРОБЕНТ. Результаты исследований по теме диссертации использованы при разработке - «Методические основы оценки клини-ко-морфологических показателей крови домашних», одобрено УМО 13.05 2003г №ОВ -609, допущено Министерством сельского хозяйства в качестве учебного пособия для студентов ВУЗов по специальности 310800 - Ветеринария.
Разработан проект наставлений по применению препарата и технические условия.
1.5. Апробация материалов
Результаты исследований по теме диссертации доложены на: международной конференции « Медико-биологические проблемы экологической безопасности агропромышленного комплекса», Сергиев Посад 2003г: первой региональной конференции практикующих ветеринарных врачей "Болезни мелких домашних животных". Воронеж, 2003г.; научной и учебно-методической конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов Воронежского ГАУ им. К.Д. Глинки. Воронеж, 2004г.
1.6. Публикация
По теме диссертации опубликованы научных статей.
1.7. Основные положения, выносимые на защиту
Определение оптимальной технологии производства препарата.
Физико-химические и фармако-токсикологические свойства.
О лечебно-профилактической эффективности АЙРОБЕНТА при желудочно-кишечных заболеваниях с диарейным синдромом новорожденных телят и щенят.
Лечение и профилактика желудочно-кишечных болезней новорожденных животных с диарейным синдромом
Изучение патогенеза является узловым моментом в раскрытии сущности болезни. Знание патогенеза представляет не только теоретический интерес, но имеет и большое практическое значение, что можно показать хотя бы на нескольких примерах. Установление большой роли в патогенезе токсической диспепсии телят нарушений водно-солевого обмена побудило к разработке и применению к клинической практике различных методов борьбы с этим ведущим патогенетическим фактором болезни.
Так, например, применение одного из средств патогенетической терапии - внутрибрюшинного введения лекарственных растворов при лечении больных токсической диспепсией телят - дает высокий лечебный эффект, который, по данным И.Г.Шарабрина, В.А.Черкасова, М.Х.Шайхаманова, А.И.Коковина, составляет 95,6%. Высокий лечебный эффект при токсической диспепсии дает также парентеральное применение растворов по прописи А.М.Колесова, П.А.Волоскова, Н.Н.Михайлова и др. (Шайхаманов М.Х., 1974; Шайхаманов М.Х., 1974; Шайхаманов М.Х., 1982; шаравин И.Г. и др., 1974).
Не менее важное значение имело установление того факта, что в патогенезе болезни большое значение имеет токсикоз, вызываемый в значительной степени пищевыми и бактериальными токсинами, поступающими из желудочно-кишечного тракта, где в большом количестве размножается условно-патогенная (токсикогенная) микрофлора, применение антибиотиков, и, особенно тех, к которым чувствительная эта условно-патогенная (токсикогенная) кишечная микрофлора, в комплексной схеме лечения обеспечивает высокую эффективность лечебных мероприятий при токсической диспепсии новорожденных телят ( Аликаев В.А., Митюшин В.В., 1983; Ананьев Ю.Н., 1983; Анохин Б.М.% 1977).
Немаловажное значение имеет и применение средств, способствующих размножению в желудочно-кишечном тракте полезной микрофлоры (молочнокислые микробы, энтерококки), соотношение которых в «микробном пейзаже» при диспепсии изменяется в сторону из уменьшения. Поэтому в практике широко применяются такие средства, как ПАБК, АБК и т.д. Положительное влияние указанных средств объясняется тем, что в патогенезе диспепсии большое значение имеет развитие дисбактериоза в желудочно-кишечном тракте. Дисбактериоз проявляется, во-первых, в изменении соотношения микробных групп в сторону увеличения: условно-патогенной микрофлоры (кишечная палочка, протей и др.) при одновременном уменьшении молочнокислой микрофлоры и, во-вторых, в размножении указанной условно-патогенной микрофлоры в передних отделах желудочно-кишечного тракта, где у здоровых телят она встречается в небольших количествах.
Поэтому диарея (диспепсия) телят связана с нарушениями в кишечной флоре (дисбактериозом), обусловленными, по их мнению, восновном нерациональным, кормлением, пишут, что применение антибиотиков и химиоп-репаратов должно проводиться исходя из необходимости і корригирования кишечной микрофлоры, а не из воздействия на какого-либо специфического возбудителя, как это имеет место при парафите (Гушул В.А. и др., 1986; Джамбулатов М.М., 1985; Шишков В.П.., 1981; Mellor RJ3 et. аК, 1992).
К.К.Геллемонд с сотрудниками приводит следующую схему развития гнилостной диареи (диспепсии) телят.
Молозиво коровы-матери содержит специфические иммунтела на ток-сикогенную грамотрицательную микробную ассоциацию. Однако, если эти защитные, антитела будут разрушены под воздействием трипсина: и і других ферментов сычужного сока, в этом случае теленок также окажется беззащитным в иммунологическом отношении. По данным Р.А.Циона, В.А.Аликаева и др., иммунтела могут разрушаться трипсином в силу того, что коровы, в прошлом переболевшие маститом, не способны с молозивом выделять;ингибитор трипсина - антитрипсис. - Это приводит к тому, что иммунтела молозива разрушаются трипсином и новорожденный теленок остается беззащитным против воздействия микробной ассоциации и ее токсинов, тяжело заболевает и, если не оказать своевременной помощи, погибает.
Советскими авторами установлена большая роль макроорганизма и его реактивности при любом заболевании вообще и при диспепсических расстройствах в частности. Считают, что микробные ассоциации кишечной микрофлоры в сочетании-с неблагоприятными факторами, снижающими резистентность организм новорожденного, играют большую роль в развитии и течении диспепсии. С другой стороны, как у же отмечалось, снижение резистентности организма; новорожденных телят вследствие неполноценного (физиологически необоснованного) кормления коров-матерей приводит к тому, что телята рождаются с пониженной резистентностью, плохо адаптируются к новым условиям, внешней: среды. При таких условиях диспепсия может охватывать очень большое поголовье телят и- причинять значительный экономический ущерб хозяйствам.
Подводя итоги по роли микробной ассоциации грамотрицательной микрофлоры пищеварительного тракта в развитии диспепсии, можно полагать, что этот причинный фактор является необычным и не укладывается в общепринятые понятия. Заболевание в силу своих особенностей без оговорок не может быть полностью отнесено к специфическим инфекциям, так как здесь нет специфического возбудителя. В-развитии заболевания большую роль играют алиментарные факторы. Кроме того, для воспроизведения токсической диспепсии необходимо ввести в пищеварительный тракт новорожденного теленка десятки; и сотни миллиардов бактериальных клеток микробной ассоциации из различных грамотрицательных токсикогенных микробов. Если возраст телят старше двух суток и если они получали молозиво матери, то введение такого материала, как и нативного, от больных телят в дозах, в десятки и сотни.раз больше указанных,.не приводит к клиническому проявлению заболевания.
Фармако-токсикологическая оценка препарата АИРОБЕНТ
Все новые лекарственные средства, препараты и кормовые добавки быть не только высокоэффективными, но и безвредными для.животных и человека. В связи с этим проведено изучение токсикологических свойств и дана оценка экологической безопасности АЙРОБЕНТА. Исследования, выполнены в соответствии с требованиями ВОЗ, Минздрава, Ветеринарно-фармакологического совета департамента России.
Остаточные количества ядовитых веществ определяли химическими методами в сериях лабораторных, исследований. Массовая доля содержания в АЙРОБЕНТЕ составила вес. %: фтора, мышьяка, свинец, ртути и кадмия не обнаружено.
Токсикометрическую оценку АЙРОБЕНТА проводили в остром опыте на лабораторных животных (белые крысы, белые мыши). В опыт были взяты по 25 голов белых мышей с массой тела 18-25 г и белых крыс с массой тела 150-200 г. формировали в группы по принципу парных аналогов. За животными вели наблюдение, учитывали клинические симптомы интоксикации. В течение 14 дней после затравки учитывали количество павших и выживших животных. Препарат АЙРОБЕНТ вводили грызунам внутрижелудочно в виде водной взвеси в различных дозировках с интервалом между дозами 1000 мг/кг массы тела начиная с 1000 мг/кг. Внутрижелудочно были введены следующие дозы: 1000-8000 мг/кг.
Вначале у грызунов после введения препарата, независимо от дозы, наблюдали легкое угнетение, заторможенность в движениях, взъерошен-ность шерстного покрова, цианоз слизистых оболочек. Эти признаки через 30-50 минут после затравки нами не регистрировались.
По истечении 14 дней не были зарегистрированы гибели грызунов. С учетом этого, согласно общепринятой классификации химических веществ ( Медведь Л.И., 1964 г. АЙРОБЕНТ является малотоксичным и относится к 4 классу по токсичности.
Кожно-резорбтивная и аллергенная характеристика препарата
Аллергенные свойства препарата АЙРОБЕНТ изучали на кроликах методом коньюктивальных проб и на морских свинках путем накожных аппликаций. Трем кроликам под верхнее веко правого глаза вносили по одной капле 1,5,10% водного раствора АЙРОБЕНТ. Для контроля в левый глаз этим же животным вносили по одной капле физраствора. Учет проводили через 5 минут, 24 и 48 часов. При этом учитывали состояние слизистой оболочки глаза и век, наличие инъекции сосудов,.секрецию слезы. В течение всего периода наблюдения- у животных изменений со стороны глаз не наблюдали.
Провокационные кожные пробы проводили на морских свинках методом эпикутанных аппликаций. Перед началом аппликаций проводили сенсибилизацию животных путем многократного нанесения на кожу АЙРОБЕНТ. Ежедневно на выстриженный участок кожи трем морским свинкам наносили водный раствор препарата в разведениях 1:1; 1:10 и 1:100. На 14 день (время инкубационного периода) на свежевыстриженный участок кожи наносили разрешающую АЙРОБЕНТ А а также препарат в разведении..
В течение всего периода опыта за морскими свинками вели наблюдение, проводили измерение температуры тела, толщины кожной складки на месте нанесения, определяли температуру на месте введения препарата. Изменений в клиническом статусе животных и на месте аппликаций АЙРОБЕНТ не выявлено. На основании этого ответную реакцию оценивали отрицательно.
Кожно-резорбтивное действие АЙРОБЕНТА изучали на белых крысах методом погружения хвоста. 10 голов фиксировали в специальном станке так, чтобы хвосты животных были помещены на 2/3 длины пробирки с 50% водным взвесью АЙРОБЕНТА. Учет реакции проводили через 4часапоналичию местных изменений на хвосте, смертельных исходов, степени выраженности интоксикации и изменений массы тела животных. В данном случае у опытных белых крыс не было изменений кожи хвоста, случаев гибели и признаков интоксикации. Исходя из этого, мы пришли к выводу, что исследуемый препарат АЙРОБЕНТ не обладает кожно-резорбтивйым действием.
Эмбриотоксическое действие АЙРОБЕНТА изучалиі на беременных белых крысах с массой тела 200-220 г. В опыт были взяты 40 голов, из которых 20 Толов беременных белых крыс в период имплантации (5 день беременности) и 20 голов в период органогенеза (17 день беременности). 10 животным из каждой группы, вводили однократно в желудок препарат АЙРОБЕНТ 5 мг/кг живой массы, оставшиеся по 10 голов из каждой группы служили контролем. На 20 день провели убой животных по 5 голов из каждой группы и учитывали раннюю и позднюю резорбцию плода, общую плодовитость, количество желтых тел беременности, живых и мертвых эмбрионов. В результате не было выявлено различий между животными опытных и контрольных групп.
От оставшихся 25 самок было получено потомство, за развитием которого вели наблюдение: проводили взвешивание, замеры длины тела, хвоста, ступней; ушей, учитывали сроки отлипания ушей, прорезания глаз, обрастание шерстным покровом, подвижность и активность высасывания молока матери в течение первых дней жизни.
Изучали влияние на постнатальное развитие.. В этой серии опытов опытные крысы получали препарате 1 по 21 день беременности. Вторая группа служила контролем. За 1-2 дня до родов самок рассаживали по одной в клетке. Регистрировали день родов и число крысят в помете. Новорожденных крысят распределяли по 7-8 на самку, для более равномерного вскармливания. О полноценности вскармливания судили визуально, по наполнению желудка крысят молоком: до появления шерсти он хорошо виден через брюшную стенку. В 30-ти дневном возрасте отделяли от матери и рассаживали самцов и самок отдельно,
О постнатальном- развитии потомства судили по массе, показателям физического развития, а также по некоторым поведенческим реакциям крысят. Животных взвешивали один раз в неделю, начиная с однонедельного и до 2,5-месячного возраста. На основании полученных данных вычисляли константу роста, характеризующую прирост массы за единицу времени; Показателями общего развития явились: время открытия ушей, глаз, обрастания шерстью. В определенные возрастные периоды исследовали поведенческие реакции животных с помощью описанных ниже методов.
Начиная с 3-недельного до 2,5-месячного возраста, один раз в неделю определяли спонтанную двигательную активность крысят. С этой целью был использован. актометр, предложенный Раевским К. С. и Тимофеевым В. А. (2000 г.). Принцип измерения двигательной активности основан на определении числа переходов животного в клетке с одной пластины на другую. Эта горизонтальные перемещения регистрируются автоматически.
На 20,30,40 и 60 день жизни изучали ориентировочную реакцию по методике "залезания на сетку" (КпіегКшер, 1999). Время наблюдения - 2 минуты. Кроме этого, на 10 день жизни, когда глаза крысят еще закрыты, определяли способность животных удерживаться в сетке в течение двух минут.
Эффективность препарата для лечения диарейного синдрома собак
В опыт были взяты щенки возраста от 3-х беспородных сук по 6 голов в каждом помете. Признаки диарейного синдрома регистрировали в первые 6-8 часов после хождения практически у щенков всех трех пометов. Собачек в каждом помете разделили на две группы по 3 головы в каждой. Для лечения диарейного синдрома 3 щенкам с каждого помета вводили внутрь препарат в дозе 0,5 г на 1 кг массы тела (опытные), оставшиеся собачки подвергались лечению (контрольные). За собачками вели наблюдения в течение 14 дней, при этом учитывали: общее состояние организма., подвижность, активность высасывания молока, наличие диарейного синдрома и интенсивность роста массы тела. Однократное введение внутрь препарата привело к выздоровлению на 2 сутки 8 щенков из 9, и одного щенка на 5 сутки. В тоже время в контрольной группе на 2 сутки выздоровел 1 щенок, на 5 и 14 сутки — по 3 головы, пало 2 головы на 6 день опыта. Щенков за период наблюдения взвешивали на 5 и 14 дни жизни. Результаты приведены в таблице № 20. Валовой прирост массы тела за 10 дней составил соответственно у щенков опытной группы - 390г., т.е. интенсивность роста массы тела был выше у щенков, обработанных препаратом АИРОБЕНТ, достоверно -(р 0,05) на 210г. В оценке клинико-физиологического состояния организма животного важное значение придается гематологическим показателям, связь которых с рядом болезней и качеством корма, а также усвояемость питательных веществ, общеизвестна. Результаты проведенных исследований показаны в таблице № 21. Количество эритроцитов под влиянием препарата достоверно возрастало на 43%, гемоглобина- на 48%. Расчеты показали, что содержание гемоглобина в одном эритроците было наименьшим у щенков контрольной группы (20,7 пг), что согласуется с данными других исследователей (Архипов А.А., 1999). Показатели белкового обмена представлены в таблице № 22. На 14 день у щенков в сыворотке крови достоверно увеличился под влиянием препарата общий белок (р 0,05), альбумины (р 0,01). На этом фоне суммарное содержание глобулинов в сыворотке крови щенков снижалось за счет фракции альфа- и бета- глобулинов, тогда как содержание гамма- глобулинов, напротив, несколько возрастало. Снижение относительного содержания было достоверно только по отношению альфа-глобулинов и составило 18,7 % (р 0,05).
Концентрация бета- глобулинов в сыворотке крови снижалось с аналогичной закономерностью в таких же пределах, что и фракция альфа - глобулинов и составляло 18,9 %. Профилактическую эффективность препарата АИРОБЕНТ изучали на 2-х группах телят по 10 голов в каждой в первые сутки после рождения. Телята обеих групп были клинически здоровыми и признаки диарейного синдрома у них отсутствовали. Первой группе животных ввели внутрь 0,3 г на 1 кг массы тела, вторую группу телят не обрабатывали препаратом. За животными вели наблюдение в течении 14 дней, при этом учитывали общее состояние, наличие признаков диарейного синдрома, тяжести течения болезни и гибели. Результаты представлены в таблице № 23. Из таблицы очевидно высокая профилактическая эффективность заболеваний телят которым применяли АИРОБЕНТ. Динамика прироста массы тела представлена в таблице №24. Среднесуточный прирост массы тела опытных животных на 5 и 14 сутки выше в несколько раз, чем у контрольных, что является следствием применения препарата, а у контрольных соответственно - заболевания. Характерно, что к 14 дню данный показатель у телят опытной группы увеличивается, а у телят контрольной группы наоборот снижается. В эксперименте были взяты щенки в первые сутки после рождения, 2 группы по 6 голов от 2-х беспородных собак.-самок, которые были клинически здоровы. Первой группе щенков вводили внутрь препарат АИРОБЕНТ в дозе 0,3 г на 1 кг массы тела, вторая группа не получала препарат и служила контролем. В течении 14 дней за ними вели наблюдение: учитывали общее состояние, появление признаков диарейного синдрома, учет падежа.
