Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы 9
1.1. Влияние антгельминтных препаратов и иммуностиму ляторов на иммунологическую реактивность организма животных 9
1.2. Комплексное применение иммуностимулирующих препаратов при паразитозах 14
1.3. Применение ксимедона в медицине и ветеринарии 18
1.4. Патогенное влияние эймерий на организм животных 22
1.5. Лечебно - профилактические мероприятия при эймериозах 26
Глава II. Собственные исследования 34
2.1. Материал и методы 34
2.2. Определение параметров острой токсичности ксимедонгидрохлорида 39
2.3. Определение кумулятивных свойств ксимедонгидрохлорида 43
2.3.1. Влияние ксимедонгидрохлорида на массу тела мышей при длительном поступлении в организм 46
2.4. Местное действие ксимедонгидрохлорида на кожу и слизистую оболочку глаз 47
2.5. Изучение эмбриотоксического действия ксимедонгидрохлорида 49
2.6. Гематологические показатели у кроликов при разных способах введения ксимедонгидрохлорида 57
2.7. Гематологические и иммунологические показатели у белых крыс при одно- и двукратном введении ксимедонгидрохлорида 61
2.8. Гематологические и иммунологические показатели у здоровых крыс в зависимости от дозы ксимедонгидрохлорида 64
2.9. Профилактическая эффективность различных иммуностиму ляторов при эймериозе кроликов 72
2.9.1. Гематологические и иммунологические показатели у кроликов после введения различных иммуностимуляторов 76
3.0. Лечебная эффективность различных препаратов и схем их применения при экспериментальном эймериозе кроликов 88
3.1. Гематологические и иммунологические показатели у зараженных эймериозом кроликов при леченнии их различными препаратами 93
3.2. Производственные испытания профилактической и лечебной эффективности ксимедонгидрохлорида при эймериозе кроликов в агрофирме «Берсутский» Мамадышского района РТ 104
Глава III. Обсуждение результатов 110
Выводы 124
Практические предложения 126
Список литературы 127
Приложения 154
- Комплексное применение иммуностимулирующих препаратов при паразитозах
- Лечебно - профилактические мероприятия при эймериозах
- Определение кумулятивных свойств ксимедонгидрохлорида
- Лечебная эффективность различных препаратов и схем их применения при экспериментальном эймериозе кроликов
Введение к работе
Актуальность проблемы. Важное значение для успешного развития кролиководства, помимо обеспечения хороших условий содержания, кормления и улучшения породности, приобретают ветеринарно - санитарные мероприятия по охране поголовья кроликов от различных болезней, в том числе и от такого опасного инвазионного заболевания, как эймериоз.
Эймериоз среди сельскохозяйственных животных распространен как в зарубежных странах (A. Lineburg, 1987; A.A. Kasim, 1987; Hiepe, 1993), так и в Российской Федерации (Е.Л. Ушакова, В.А. Стрельчик, 2002; О.Е. Мазур, 2003). По данным исследований М.Х. Лутфуллина, Ю.Н. Шиляевой (2003) эймериоз кроликов широко распространен и в зверохозяйствах РТ, с ЭИ от 36,7 до 90% и ИИ от 2,5 до 218 ооцист.
Эймериоз животных является самой распространённой болезнью и причиняет огромный экономический ущерб, который складывается из потерь за счет большой смертности, которая может достигать до 85%. Однако, ущерб от данного заболевания не ограничивается падежом, больные животные отстают в росте и теряют от 12 до 30% своей живой массы. Кроме того, большое количество печени кроликов выбраковывается при ветеринарно-санитарной экспертизе, снижается питательная ценность мяса переболевших животных и большие расходы несут хозяйства на проведение лечебно - профилактических мероприятий.
Химиотерапия в настоящее время действенная и экономически результативная мера борьбы с эймериозом животных и птиц. Для химиопрофилактики и лечения эймериоза кроликов предложен ряд препаратов, обладающих антиэймериозной активностью: химкокцид, нитрофурановые, сульфаниламидные препараты, салиномицин и др. (М.Ш. Акбаев, А.А. Водянов и др., 2000; С.А. Плешаков, СВ. Ларионов и др., 1997; Е.Н. Гришко, 2003). Однако большинство рекомендуемых препаратов и
методов лечения по разным причинам не удовлетворяют современным требованиям практической ветеринарии.
Ключевым моментом в решении проблемы профилактики и борьбы с паразитозами может быть совместное применение препаратов специфического действия с иммуностимуляторами (О.И. Мамыкова, 1990; Э.Х. Даугалиева, В.В. Филиппов, 1994; СЕ. Ремизова, 2005).
Для стимуляции иммуногенеза, повышения естественной резистентности и эффективности дегельминтизации животных исследователями применялись различные биологические активные препараты. Это полисахариды, препараты цинка, лимфокины, биопрепараты, изготовленные из селезенки и тимуса, и другие (Я.Е. Коляков, 1986; В.Г. Морозов, 1990; В.Г. Квачев, А.Ю. Касич, 1991; Г.А. Ноздрин, 1995 и др.).
В последние годы в медицине и ветеринарии хорошо зарекомендовал себя как иммуностимулятор - ксимедон, синтезированный B.C. Резником и Н.Т. Пашкуровым в 1964 году в институте органической и физической химии им. Н.Е. Арбузова. В медицинской и ветеринарной литературе ксимедон оказался эффективным при лечении многих болезней. Имеются так же сведения о влиянии ксимедонгидрохлорида на иммунологическую систему организма животных при инфекционных заболеваниях, а так же оценка безвредности иммуномодулирующей активности этого препарата (Х.Н. Макаев, Е.К. Акимов и др., 2004; Х.Н. Макаев, Н.И. Галиакберова и др., 2006). Однако фармако-токсикологические свойства этого препарата изучены недостаточно, а сведения о применении ксимедона и ксимедонгидрохлорида для лечения и профилактики эймериозов животных отсутствуют.
Цель и задачи исследований. Цель исследований - провести фармако-токсикологическую оценку ксимедонгидрохлорида и изучить его лечебно-профилактическую эффективность при эймериозе кроликов.
Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
1. Определить параметры острой и субхронической токсичности
ксимедонгидрохлорида;
2. Изучить местное действие на кожу и слизистые оболочки, а так же
отдаленные последствия действия ксимедонгидрохлорида;
3. Изучить гематологические и иммунологические показатели у
лабораторных животных в зависимости от дозы, кратности и способа
введения ксимедонгидрохлорида;
5. Исследовать профилактическую эффективность ксимедонгидро
хлорида при экспериментальном эймериозе кроликов;
6. Определить влияние ксимедонгидрохлорида на эндогенное
развитие эймерий.
Научная новизна. Определены параметры токсичности
ксимедонгидрохлорида. Доказано отсутствие в рекомендуемых дозах раздражающего действия на кожу и слизистые оболочки.
Установлены доза, кратность и способ применения ксимедонгидрохлорида, вызывающие повышение уровня содержания эритроцитов, гемоглобина, Т- и В-лимфоцитов в крови у здоровых лабораторных животных.
Впервые установлено, что введение ксимедонгидрохлорида кроликам профилактирует их от заражения эймериозом. Введение этого препарата совместно с фуразолидоном по разработанной схеме подавляет процесс шизогонии и гаметогонии, освобождает организм хозяина от простейших и тем самым предотвращает заражение внешней среды ооцистами эймерий. Практическая ценность.
Автором на основании проведенных исследований изучен и предложен препарат ксимедонгидрохлорид, не обладающий токсичностью, раздражающим действием на кожу и слизистые оболочки, не оказывающий
отрицательного воздействия на функции репродуктивной системы самцов. Установлено, что введение ксимедонгидрохлорида кроликам профилактирует их от заражения эймериозом. Применение этого препарата совместно с фуразолидоном по разработанной схеме оказывает лечебное действие.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Токсикологическая оценка ксимедонгидрохлорида;
2. Влияние ксимедонгидрохлорида на гематологические и
иммунологические показатели у лабораторных животных в зависимости от
дозы, кратности и способа введения препарата;
3. Лечебно - профилактическая эффективность ксимедонгидро
хлорида при эимериозе кроликов.
Внедрение результатов исследований.
Материалы диссертации вошли в методические рекомендации: «Диагностика, лечение и профилактика эймериоза кроликов», одобренные методической комиссией, а также Ученым Советом ФГОУ ВПО КГАВМ 28 февраля 2007 года.
Получен патент на изобретение № 2322235 «Способ профилактики и лечения эймериоза животных и птиц» (Зарегистрирован 20 апреля 2008 г., срок действия патента истекает 23 июня 2026 г.).
На основании проведенных исследований составлено временное наставление по применению ксимедонгидрохлорида при эимериозе кроликов, которое утверждено в установленном порядке главным управлением ветеринарии КМ РТ 17.10.07.
Апробация работы. Основные результаты исследований доложены и обсуждены на: третьей международной конференции, посвященной современному состоянию и перспективам развития ветеринарных биопрепаратов (Алма-Ата, 2006); итоговой научной конференции Казанского научного центра Российской академии наук (Казань, 2006);
всероссийской научно-практической конференции (Казань, 2006); всероссийской научно-практической конференции по актуальным проблемам агропромышленного комплекса (Казань, 2007); международной научно-практической конференции, посвященной 135-летию академии (Казань, 2008); на расширенном заседании профессорско-преподавательского состава кафедр: паразитологии и радиобиологии, эпизоотологии, патологической анатомии и гистологии, общей и частной хирургии, фармакологии и токсикологии (Казань, 2008).
Публикация. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе три в рецензированных ВАК РФ издании.
Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 154 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 7 диаграммами, 24 таблицами. Включает ведение, обзор литературы, результаты собственных исследований, заключение, выводы, практические предложения и приложение. Список литературы включает 234 источника (в том числе 35 иностранных авторов).
Комплексное применение иммуностимулирующих препаратов при паразитозах
Иммуномодулирующими средствами являются препараты химической или биологической природы, способные модулировать (угнетать или стимулировать) реакции иммунитета в результате воздействия на иммунокомпетентные клетки, на процессы их миграции или на взаимодействие таких клеток или их продуктов (Ю.Ф. Петров, 1984, 1987, 1988, 1991; Р.В.; В.М. Земсков, А.А. Барсуков, 1981; Э.Х. Даугалиева, В.В. Филиппов, 1991; Р.Т. Маннапова, 1997, 1998; Е.М. Cartner, 1981; О.О. Barriga, 1984; E.K.Bardana, 1985).
Одним из ключевых моментов в решении проблемы профилактики и борьбы с гельминтозами может быть использование иммуностимуляторов совместно с антгельминтными препаратами, многие из которых сами вызывают угнетение клеточного иммунитета в течение 2-3 недель после их применения (О.И. Мамыкова, 1990).
При сочетанном применении некоторых иммуноактивных средств и эфферентной терапии удается получить новое качество иммуномодуляции или нивелировать побочные эффекты одного из компонентов (Э.Х. Даугалиева, В.В. Филиппов, 1994).
Комбинированная терапия гельминтозов имеет цель ослабить или предупредить возникновение побочных эффектов антгельминтного препарата, повысить иммунные потенциалы, улучшить реактивность организма под влиянием дополнительных иммуноактивных средств (О.И. Мамыкова, 2001).
В настоящее время ведется активный поиск средств, сочетающих в себе высокую антгельминтную эффективность с иммуностимулирующим эффектом. Это направление является приоритетным в современной паразитарной иммунологии (Н.С. Беспалова, 2003). По данным С.А. Шемяковой (2003) сочетание активных средств, стимулирующих защитные реакции организма, с антгельминтиками повышает успех лечения гельминтозов. Однако одних только специфических средств явно недостаточно.
И.А. Гаджиева (1986) применяла иммуностимулятор мебикар после дегельминтизации нилвермом, что усиливало резистентность организма овец и обуславливало устойчивость к реинвазии в течение 15-20 дней.
В.Я. Линник, Г.В. Безнос (1986) считают, что эффективность комплексного лечения животных с применением мебендазола и вольтарена (биостимулятор) при описторхозе способствует повышению показателей естественной резистентности и повышает антгельминтную эффективность мебендазола.
Е.П. Чарыева (1988) проводила оценку стимулирования репаративных процессов при фасциолезе животных после применения антгельминтиков. В качестве средства патогенетической терапии автор применяла поливитаминный препарат витакал, который с. наибольшим эффектом стимулировал восстановительные процессы в организме при одновременном введении его с антгельминтиками.
А.Р. Смирнов, Б.О. Колесниченко (1996) рекомендуют применять при токсокарозе собак параллельно с антгельминтиком фенокуром биостимулятор биолан. Эти авторы отмечают, что в данном случае у больных животных быстрее идет восстановление мембранного пищеварения в тонком отделе кишечника, повышается активность всех ферментов, увеличивается количество гемоглобина и эритроцитов. Хорошие результаты получил В.В. Саушкин (2001) при введении мышам и ягнятам авертина в комплексе с риботаном при стронгилятозах и стронгилоидозах. О.И. Мамыкова (2001) для лечения трематодозов рекомендует применять иммуностимулятор полиоксидоний 20 мг/кг внутримышечно с интервалом 6 суток. Последнюю инъекцию полиоксидония следует провести с одновременным введением политрема в дозе 200 мг/кг.
Э.Х. Даугалиева, К.Г. Курочкина (2003) экспериментально доказали, что комбинации комплексного препарата на основе нилверма и иммуностимулятора при стронгилятозах животных значительно активизируют иммунную систему животных, а так же повышают эффективность антгельминтика, пролонгируют и смягчают его действие.
По данным Е.Н. Гришко (2003) при комплексном лечении эймериоза иммуностимулятором эракондом с фуразолидоном и левомицетином у телят существенно увеличилось содержание эритроцитов, гемоглобина, выравнивалась лейкограмма, существенно возрастало содержание общего белка, выравнивалась протеинограмма, снижалась активность ферментов переаминирования (АсАТ и АлАТ), снижалось содержание креатинина. Значительно, с высоким уровнем, увеличилось содержание гликогена.
СЕ. Ремизова (2005) опытным путем установила, что дегельминтизация не полностью восстанавливает естественные защитные механизмы организма, а на фоне пробиотикотерапии значительно усиливает естественную резистентность птиц. Иммуностимуляция прополисом на фоне дегельминтизации и пробиотикотерапии способствует полному восстановлению естественной резистентности птиц.
М.Х. Бештоев, К.Г. Курочкина (2005) для дегельминтизации овец и крупного рогатого скота при спонтанном дикроцелиозе испытали 2 схемы применения иммуностимулятора риботана и ангельминтика антитрема. Более эффективной оказалась схема лечения, при которой сначала давали риботан, а затем дегельминтизировали животных антитремом. Введение одного риботана было не эффективным.
Существующие в настоящее время проблемы, связанные с применением иммуномодуляторов, определяются осложнениями токсического и аллергического характера, а так же противоположным действием на иммунную систему. Необходимо дальнейшее изучение условий их правильного применения, так как полностью безопасных препаратов с избирательным механизмом действия практически не существует (J.D. Baqqot, Мс. Q.A. Keilar, 1994).
Лечебно - профилактические мероприятия при эймериозах
В настоящее время химиотерапия - самая действенная и экономически результативная мера борьбы с эймериозом кроликов. Сейчас известно более 1000 химических веществ, обладающих антиэймериозной активностью (А.А. Авякян, 1978; А.Е. Хованских, Ю.П. Илюшечкин и др., 1990; U. Diirr, G. Lammler, 1970; L.R. McDougald, G.F. Mafhis et al., 1990). Для химиопрофилактики кокцидиозов животных и птиц предложен целый ряд препаратов. Н.П. Орлов (1940, 1956), СВ. Леонтюк (1953, 1959), С.К. Мосина, Н.И. Григорьева (1981) отмечали высокую эффективность йодистых препаратов при кокцидиозе. А.Д. Тимченко (1950) рекомендует при кокцидиозе синтомицин в дозе 0,01-0,02 г/кг веса кролика. Высокую эффективность при эймериозе кроликов показали фуразолидон, сульфадимезин, норсульфазол в сочетании с фталазолом, зоаленом, левомицетином отмечает Н.М. Лапшин (1968, 1969, 1980). В.Г. Несмашная (1969) успешно лечила больных кроликов фуразолидоном, применяя его ежедневно в течение 7 дней в дозе 30 мг/кг веса животного. Также хороший результат автор получила, применяя в течение 7 дней 0,5%-ный раствор коллоидной серы вместо воды. И.Ц. Дондуков (1969) больным кокцидиозом кроликам скармливал с увлажнённым кормом один раз в сутки сульфадиметоксин в первый день 0,2 г/кг, последующие 4 дня - 0,1 г/кг. После 5-дневного перерыва курс лечения повторялся. Н.А. Колабский, Б. Л. Дубовой и др. (1973) применяли сульфахлорпиразин при печёночной форме кокцидиоза в течение 10 дней с кормом в дозе 50 мг/кг, что способствовало 100% -ному сохранению животных. А назначение препарата в дозе 1 г на 3 л воды в течение 10 дней при спонтанном кокцидиозе приводило к выздоровлению 88 - 100% кроликов. Г.Н. Бречко (1974) в производственных опытах установила, что наиболее выраженным кокцидиостатическим действием обладают зоален в дозе 0,0125% к корму, сульфадимезин в дозе 10-30 г на 1000 цыплят, фуразолидон в дозе 2-4 г на 1000 цыплят. А.Ф. Манжос (1974, 1975) рекомендует кроликам сульфаперидазин в дозе 100 мг/кг в сочетании с мономицином в дозе 25000 ЕД/кг или норсульфазол в дозе 400 мг/кг с мономицином в течение двух 5-дневных курсов с интервалом в 3 дня. К.И. Абуладзе, Н.В. Демидов и др. (1975, 1990), П.Д. Бакшеев, Е.П. Наймитенко (1980) рекомендуют при кокцидиозе кроликов добавлять препараты в корм следующим образом: в первый день на 100 кг корма 380 г сульфадиметоксина, а в последующие 4 дня - 160 г, дважды с интервалом 5 дней; норсульфазол в дозе 480 г совместно с фталазолом в дозе 60 г на 100 кг корма таким же курсом. Неплохой результат дал химкокцид в дозе 0,03 г/кг с кормом 2-5 дневными курсами с перерывом 3 дня.
В.Я. Пономаренко (1975), А.Н. Пономаренко, М.В. Карташов и др. (1976), А.Н. Пономаренко (1980, 1981) считают наиболее эффективным методом борьбы с кокцидиозом кроликов химиопрофилактику, основу которой составляет скармливание лекарственных препаратов кроликам в течение 10 дней в первые 25 - 30 дней их жизни. Наилучший эффект по мнению авторов, был получен от введения в комбикорм сульфадиметоксина в дозе 1,0 г, в сочетании с тетрациклина гидрохлоридом или левомицетином в дозах по 0,2 г, витаминами А - 7000 ИЕ, ДЗ-2000 ИЕ, В1-3 мг, В12-0,01 мг, солями микроэлементов: хлорида кобальта, медисульфата, цинка сульфата, марганца сульфата и калия йодида в дозах соответственно по 7 мг, 4 мг, 4 мг, 15 мг и 0,2 мг. По данным А.Ф. Манжос, К.Н. Лапшина (1979) сульфаперидазин в сочетании с мономицином резко снижает выделение кокцидий у кроликов. В.Н. Чернуха, А.Д. Логвинов (1979) считают эффективным для лечения кроликов от кокцидиоза фуразолидон и кокцидиовит. Н.М. Лапшин (1980) установил, что наиболее эффективными препаратами при кокцидиозе кроликов является сульфапиридозин в дозе 0,4 мг/кг живой массы в сочетании с моно или неомицином по 0,1-0,2 мг/кг массы тела и норсульфазол в дозе 0,4 мг/кг живой массы с названными антибиотиками. По данным А.Р. Джаббарова (1980) наиболее активным кокцидиостатическим действием обладает гидролизат хромированной кожевенной стружки при скармливании птице из расчета 5% к объему корма. Т.Х. Рахимов, СБ. Садыкова (1981, 1986) считают эффективным лечебным средствам при эймериозе стенорол в дозе 1 г/кг корма. Г.Н. Ахаев, А.А. Рахматуллин и др. (1982) цыплятам со дня рождения в течение 30 суток давали фармкокцид и кокцидин, чередуя их через каждые 5 дней. ЭИ составила 97%. В.Ф. Новинская, Ю.М. Давыдов и др. (1983), В.Ф. Абрамова и М.В. Караре (1983), Н.А. Колабский (1983), И.Х. Иргашев, Б.Д. Кабулов и др. (1988) считают, что эффективным препаратам при эймериозе кроликов является химкокцид в дозе 300 мг/кг. В.Ф. Абрамова и Л.Л. Райлян (1991) испытали при эймериозе кроликов химкокцид - 7 и сульгин. Хороший эффект был получен при применении химкокцида - 7 в дозе 0,03 г/кг. Г.М. Гадеева, Д.В. Васильева (1992), Ф.М. Шакурова, М.Д. Корнишина и др. (1994) отмечают снижение инвазированности кроликов эймериозом при применении ЭХАР. С.А. Плешаков, СВ. Ларионов (1997) занимались изучением терапевтической эффективности нитрофурановых препаратов (фуракрилина и фуразонала) при кишечной форме экспериментального эймериоза. В результате проведённых исследований было установлено, что наиболее выраженным эймериостатическим действием обладает фуракрилин в дозе 30 мг/кг массы тела (ИЭ - 98,8%), в меньшей степени на ооцисты эймерий влияет фуразонал в дозе 15 мг/кг массы тела (ИЭ - 95,6%).
В дальнейшем С.А. Плешаков (1997, 1999) на основе фуракрилина и фуразонала с применением витаминов А, Д3, Е, комплексонатов меди, цинка, марганца и кобальта, серы коллоидной создал высокоэффективные комплексные препараты «Фуравикол» и «Виткофан».
А.И. Ятусевич, Т.В. Медведская (1998) при эймериозе кроликов давали премикс С в дозах 17 мг/кг (1 мг АДВ), 34 мг/кг (2 мг АДВ) и 51 мг/кг (3 мг АДВ) соответственно. На 5-й день произошло резкое снижение, на 9-й полное освобождение от ооцист эймерий. Оптимальной дозой является 34 мг/кг массы животного.
Определение кумулятивных свойств ксимедонгидрохлорида
Под кумуляцией принято понимать усиление действия яда при повторном его воздействии. Определение кумулятивного эффекта необходимо для правильного выбора коэффициента запаса, поскольку процессы кумуляции лежат в основе хронического отравления.
Выявление эффекта кумуляции при внутрижелудочном введении проводили по методу "субхронической токсичности на 28 мышах обоего пола с живой массой 18 - 22 г. В процессе опыта регистрировали явления токсикоза и гибель животных от применяемых доз препаратов. В конце опыта для количественной оценки кумулятивного эффекта вычисляли коэффициент кумуляции по формуле: К (кумуляции) = ЛД5о суммарная / ЛД5о однократная Исследуемое вещество в виде водной суспензии вводили мышам внутрижелудочно при помощи зонда в течение тридцати дней; первоначальная ежедневная доза была 1075 мг/кг, что составляет 1/10 часть от однократной ЛД5о при внутреннем введении. Контрольным животным вводили такое же количество дистиллированной воды. Затем каждые последующие 4 суток дозу препарата увеличивали в 1,5 раза. На протяжении всего опыта вели наблюдение за животными. Учитывали общее состояние как опытных, так и контрольных животных: потребление корма, состояние волосяного покрова, состояние слизистых, изменения массы тела. Схема опыта приведена в таблице 3.
После введения исследуемого вещества мыши проявляли беспокойство, пытались зарыться в подстилку, что, по - видимому, является следствием раздражающего действия ксимедонгидрохлорида на слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта. Признаки токсического отравления стали проявляться на восьмые сутки после первоначального введения препарата, когда вводимая доза была 1612,5 мг/кг, а суммарная доза - 10750 мг/кг. В последующие дни мыши были угнетены, шерсть взъерошена, аппетит снижен, повышенная жажда, цианоз слизистых оболочек, диарея.
Первая мышь пала через 10 дней с начала опыта, получив суммарную дозу 13,2 г/кг. При осмотре павшей мыши установлено: труп истощен, задняя часть тела испачкана жидкими каловыми массами, кожные покровы и слизистые цианотичны. При вскрытии в брюшной полости полнокровие брыжеечных сосудов, печень темная, вздутие желудочно - кишечного тракта на всем протяжении. В печени, почках, грудной и брюшной полостях обнаружены сгустки крови, в легких очаги сероватого цвета. При вскрытии черепной коробки обнаружили на головном мозге точечные кровоизлияния, сосуды инфильтрированы.
Последняя мышь пала на 30 день, получив суммарную дозу 175,1 г/кг. При вскрытии отмечено гиперемия слизистой тонкого и толстого отделов кишечника, печень кровенаполнена, кровоизлияния на эпикарде и селезенке, а так же мелкие одиночные кровоизлияния на брыжейке. Желудочки сердца и предсердия наполнены не свернувшейся кровыо, в грудной полости находился кровянистый экссудат.
Ход вычисления ЛД5о при многократном пероральном введении ксимедонгидрохлорида и коэффициента кумуляции приведены в таблице 4.
Таким образом, установлено, что коэффициент кумуляции при внутрижелудочном введении, определенный как отношение суммарной ЛД5о при повторном введении к ЛД50 при однократном введении, равен 8,3. Согласно гигиенической классификации Медведя Л.И. (1986) ксимедонгидрохлорид при пероральном введении относится к веществам со слабовыраженной кумуляцией (коэффициент 8,3). Динамику изменения массы тела мышей изучали при определении кумулятивных свойств изучаемого препарата. Ксимедонгидрохлорид мыши получали внутриже луд очно в течение 30 дней по схеме опыта по определению кумулятивных свойств. Из таблицы видно, что у белых мышей получавших раствор ксимедонгидрохлорида наблюдается значительное понижение массы тела по отношению к контролю.
Если к началу опыта масса опытных и контрольных животных существенно не отличалась, то на 5 сутки у опытных она уменьшилась на 0,19 г (0,92%), при этом мыши получили ксимедонгидрохлорид в дозе 0,43 г/кг. На 25 сутки потеря в весе составила 2,02 г (9,7%) от исходного веса, при этом мыши получили суммарную дозу 89,4 г/кг. Масса контрольной группы на 25 сутки в среднем увеличилась на 2,01 г (9,04%) от исходной.
Лечебная эффективность различных препаратов и схем их применения при экспериментальном эймериозе кроликов
Влияние ксимедонгидрохлорида и некоторых других препаратов на эндогенное развитие эймерий изучали в условиях вивария кафедры паразитологии и инвазионных болезней на 30 кроликах (аналоги по полу и массе) свободных от кишечных простейших и гельминтов. Животные были разделены на 6 групп (по 5 голов в каждой). Кроликов инвазировали смешанной культурой спорулированных ооцист эймерий (Eimeria stiedae, Е. magna, Е. perforans, Е. media, Е. intestinalis и др.). Каждому животному перорально вводили ооцисты эймерий в расчете 20 тысяч на кг веса.
Кролики в течение опыта находились в одинаковых условиях содержания, предотвращающих спонтанное заражение. Кормление животных осуществлялось в соответствии с зоотехническими нормами. В опыте использовали различные препараты и схемы их применения. Животным 1 группы вводили ксимедонгидрохлорид в дозе 30 мг/кг массы тела внутрь двукратно с интервалом в 7 дней. Кроликам 2 группы назначали препараты по следующей схеме: 1 день - ксимедонгидрохорид 30мг/кг + фуразолидон 20мг/кг; 2-5 дни - фуразолидон 20мг/кг; 6 день - интервал; 7 день - ксимедонгидрохорид 30мг/кг; 8 день - интервал; 9-13 дни - фуразолидон 20мг/кг. Животные третьей группы получали ксимедон в дозе 30 мг/кг внутрь двукратно с интервалом в 7 дней. Кроликам четвертой группы давали одновременно ксимедон и фуразолидон по схеме, описанной для второй группы. Кролики 5-ой группы получали только фуразолидон (20 мг/кг) двумя пятидневными курсами с интервалом в три дня. Животные 6-ой группы служили контролем и обработку их против эймериоза не проводили.
Ежедневно проводили клинический осмотр. Пробы фекалий для исследования брали до заражения и введения препаратов и через 10, 30, 45 и 60 день после лечения. Интенсивность инвазии оценивали путем овоскопических исследований фекалий. Данные о терапевтической эффективности различных препаратов при эймериозе кроликов представлены в таблице 19. Из таблицы видно, что до лечения все кролики (100%) были заражены эймериозом. Количество ооцист в поле зрения микроскопа колебалось от 138+1,0 до 203+2,6 экземпляров. Через 10 дней после введения препаратов интенсивность инвазии снизилась у кроликов всех опытных групп, а у контрольных животных отмечали незначительное увеличение ооцист. Интенсэффективность (ИЭ) использованных препаратов и схем лечения была разная. В 1 и 3 группах, где применяли только иммуностимуляторы ксимедонгидрохлорид и ксимедон, ИЭ равнялась 17,9% и 21,2% соответственно. Во 2 группе при одновременном введении ксимедонгидрохлорида и фуразолидона ИЭ составила 66,3%, в четвертой группе ксимедон + фуразолидон - 70,5%. В 5 группе, где применяли только фуразолидон, ИЭ составила в этот период 50,6%, при интенсивности инвазии 76,2+2,4.
Следовательно, наиболее высокой кокцидио статической эффективностью на 10 день лечения обладали препараты ксимедонгидрохлорид и ксимедон при совместном их применении с фуразолидоном. На 30 сутки после введения препаратов количество ооцист также снижалось во всех опытных группах, а ИЭ повысилась. В этот период ИЭ в первой группе составила 56,1%, а ИИ - 61,2+1,32, во второй - ЭИ равнялась 91,4%, при ИИ 4+0,7. То есть при одновременном введении ксимедонгидрохлорида и фуразолидона эффективность лечения увеличилась на 35,3%. У животных третьей группы ЭИ составила 57,8%, в четвертой -92,5%, а ИИ - 67,5+2,61 и 4,0+1,07 ооцист соответственно. В пятой группе, где животным задавали только фуразолидон, эффективность лечения была несколько выше, чем в первой и третьей, но на 30,8% и 31,9% ниже, чем во второй и четвертой группах.
На 45-ые сутки после введения препаратов, у опытных кроликов всех групп, кроме второй и четвертой, ИИ начала повышаться и составила в первой группе - 72,0+1,03, в третьей - 78,0+1,08, в пятой - 40,2+3,1 соответственно, против 61,2+1,32, 67,5+2,61 и 30,0+1,64 по сравнению с 30 днем лечения. Во второй и четвертой группах в эти периоды в пробах фекалии у животных ооцисты не были выявлены. Интенсэффективность и экстенсэффективность лечения в этих группах составила 100%.
На 60-ые сутки также отмечали увеличение количества ооцист в фекалиях кроликов в первой, третьей и пятой группах, во второй и четвертой - животные были свободные от ооцист. У кроликов контрольной группы, где животные препараты не получали, интенсивность инвазии колебалась от 192,0+1,1 до 257,0+3,5 ооцист. У них проявлялись клинические признаки, характерные для кокцидиоза (исхудание, понос, анемия, интоксикация), а у 3-х животных из 5 отмечали паралич конечностей. Таким образом, исследования показали, что ксимедонгидрохлорид и ксимедон при двукратном с интервалом в 7 дней алиментарном применении показывают слабую (максимум 57,8%) кокцидиостатическую эффективность в течение 30 дней. При совместном введении этих препаратов с кокцидиостатиком фуразолидоном, эффективность увеличивается до 100%), а продолжительность лечебного действия до 60 дней (срок наблюдения), в то время как эффективность фуразолидона на 30 день лечения составила только 60,6%, а на 45-ый и 60-ый день положительный эффект отсутствовал.
