Содержание к диссертации
Введение
1. Общая характеристика работы 5
2. Обзор литературы 9
2.1. Желудочно-кишечные заболевания у молодняка сельскохозяйственных животных 9
2.1.1. Распространение и эпизоотология колибактериоза телят 9
2.1.2. Этиологические факторы и патогенез колибактериоза телят 14
2.1.3. Роль условно-патогенной микрофлоры в развитии колибактериоза 21
2.2. Лечебно-профилактические мероприятия при желудочно-кишечных болезнях телят 25
2.3. Использование антимикробных и химиотерапевтических средств при лечении желудочно-кишечных заболеваний 29
2.3.1. Антибактериальные препараты 29
2.3.2. Цефалоспорииы 45
2.3.3. Сульфаниламидные препараты 47
2.3.4. Фторхинолоны 49
2.3.5. Комбинированные химиотерапевтические средства 50
2.3.6. Заключение по обзору 52
3. Материал, объем и методы исследований 53
4. Результаты собственных исследований 62
4.1. Изучение антимикробной активности тилоколина и оптимального соотношения компонентов в препарате 62
4.1.1. Обоснование состава препарата в опытах in vitro 62
4.1.2. Обоснование состава препарата в опытах in vivo 63
4.1.3. Изучение антимикробной активности препарата тилоколин 67
4.2. Токсичность тилоколина 68
4.2.1. Острая токсичность тилоколина 68
4.2.2. Хроническая токсичность тилоколина в опытах на лабораторных животных 73
4.2.3. Влияние препарата на функциональное состояние желудочно-кишечного тракта 81
4.2.4. Кумулятивные свойства тилоколина 82
4.2.5. Субхроническая токсичность тилоколина в опытах на телятах... 84
4.2.6. Эмбриотоксичность и тератогенность тилоколина 86
4.2.7. Раздражающее действие тилоколина 87
4.2.8. Аллергенные свойства тилоколина 89
4.2.9. Влияние тилоколина на качество мясопродуктов 92
4.3. Фармакокинетика тилоколина и определение сроков выведения ти-лозина и колистина из организма телят 93
4.4. Терапевтическая эффективность тилоколина в производственных условиях 96
4.4.1. Эффективность применения тилоколина при лечении колибактериоза телят 96
5. Обсуждение результатов 99
6. Выводы 104
7. Практические предложения 105
8. Список использованной литературы 106
Приложение 132
- Лечебно-профилактические мероприятия при желудочно-кишечных болезнях телят
- Комбинированные химиотерапевтические средства
- Хроническая токсичность тилоколина в опытах на лабораторных животных
- Фармакокинетика тилоколина и определение сроков выведения ти-лозина и колистина из организма телят
Введение к работе
Актуальность темы. Важным условием в системе мероприятий по обеспечению населения продуктами питания является увеличение производства молока и мяса. Выполнение поставленных задач требует интенсификации отрасли молочного скотоводства. Важнейшей задачей при этом является сохранность молодняка, поскольку уже в первые часы жизни телятам угрожает инфицирование возбудителями многих бактериальных и вирусных болезней (СИ. Плященко с соавт., 1987; В.П. Иноземцев ,1988; К.В. Степанов, 1990; Н.А. Сидоров, В.В. Субботин, 1998; В.И. Терехов, 2000).
В современных условиях массовые желудочно-кишечные болезни новорожденных телят причиняют большой ущерб животноводству, состоящий из высокого уровня падежа телят и расхода средств при лечении больных (В.Ф. Лысов с соавт., 1988; Е.С. Воронин с соавт., 1991; И.И. Фельдман, 1993; И.М. Карпуть, 1997; В.П. Иноземцев, 1998; В.В. Субботин, М.А. Сидоров, 2001; СИ. Джупина, 2002). Согласно литературным данным гибель телят в последние годы составляет 12-25% (Ю.Н. Алехин с соавт., 1995; А.Л. Буланкин, 1996; П.Н. Сисягин с соавт., 1991).
Высокая концентрация поголовья, иммуподифицитное состояние новорожденных телят, несоблюдение основных принципов ветерииарно-сапитарного режима при их выращивании способствует возникновению и развитию в хозяйстве колибактериоза (А.С. Каврук, 1993; Л.И. Ефаиова, 1994,1995; И.В. Сидоров, А.Л. Карандаев, 1995; А.Г. Шахов, СМ. Сулейма-нов, 1995; В.П. Иноземцев, Б.Г. Талер, 1996; Б.Т. Артемов, Л.И. Ефаиова, 1997; Э.А. Светоч с соавт., 1997, 1999; Л.С. Каврук с соавт., 1999).
Таким образом, перед ветеринарной наукой стоит ряд задач по получению здорового приплода с высокой резистентностью и реативностью, путем совершенствования технологических систем на животноводческих комплексах и специализированных фермах. С другой стороны - разработка наиболее эффективных средств и методов профилактики и терапии болезней животных, в частности молодняка (В.И. Касюк, 1990; А.И. Ануфриев с соавт., 1992; П.П. Голышенков, 1993; А.Г. Шахов с соавт., 1995, 2001; Л.И Ефанова, 1997).
Важными направлениями современной химиотерапии бактериальных инфекций является предотвращение или замедление развития резистентности микроорганизмов, а также борьба с уже сформировавшейся лекарственно устойчивой микрофлорой.
Выходом из создавшегося положения является рациональное использование надежных и безопасных с токсикологической точки зрения, антибактериальных средств, и в первую очередь комплексных антимикробных средств с минимальным влиянием на микрофлору кишечника (В.Т. Самохин, 1987; М.И. Немчепко, 1988; В.Ф. Лысов, 1988; А.Г. Шахов с соавт., 1995; М.А. Костына с соавт., 1997; В.Д. Соколов, 1997).
Комплексные антимикробные средства, содержат в своем составе несколько антибактериальных веществ различной фармакологической природы и, соответственно, обладающих различными избирательными антибиотическими свойствами. Терапевтическая широта таких препаратов достигается мпогокомпонентностью, а выраженная антимикробная активность - сиперги-ческим или аддитивным эффектом (СМ. Кузнецов, 1983; В.П. Шуклин, 1997; СВ. Шабунин, 1999, W. Bolanowska, Т. Gessner, 1978).
Разработка пролонгированных форм антибактериальных препаратов предпочтительнее, чем нативных, так как длительное удержание рабочих концентраций антибиотиков в крови, тканях и органах сокращает количество инъекций за курс лечения, тем самым, обеспечивая предупреждение или уменьшение развития токсического или побочного действия препаратов (СМ. Кузнецов, 1983; СМ. Навашин, 1982; П.П. Достоевский, 1986).
При этом особое внимание должно быть обращено на то, что входящие в состав комплексного препарата ингредиенты не должны взаимодействовать друг с другом в разработанной лекарственной форме и сохранять стабильность в период всего срока хранения препарата. Цель и задачи исследований. Разработать оптимальный состав нового комплексного антибактериального препарата тилоколин, провести его фар-мако-токсикологическую оценку и разработать показания по его применению.
Для достижения общей цели решали следующие основные задачи:
Экспериментально обосновать состав и разработать лекарственную форму нового комплексного антибактериального препарата тилоколин;
Изучить антимикробную активность тилоколина в опытах in vitro и in vivo;
Провести токсикометрическую оценку препарата (острая, хроническая, субхроническая токсичность, раздражающее, аллергизирующее действие, кумулятивные свойства);
Изучить фармакокинетику и определить остаточные количества компонентов тилоколина в организме телят;
Изучить терапевтическую эффективность тилоколина при лечении колибактериоза телят;
Разработать показания к применению тилоколина при терапии колибактериоза телят.
Научная новизна. Впервые на основе изучения антимикробной активности в опытах in vitro и in vivo и фармакокинетических параметров экспериментально обоснован состав и разработан новый комплексный пролонгированный антибактериальный препарат тилоколин на основе колистина и ти-лозина. Изучены его фармакотоксикологические свойства, определены параметры токсичности препарата, а так же установлено отсутствие возможных отдаленных последствий после его применения. Изучена эффективность применения тилоколина при терапии желудочно-кишечных болезнях телят бактериальной этиологии. Получена приоритетная справка на изобретение «Препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных» №2008127112 от 03.07.2008 г. Практическая значимость работы. Результаты проведенных исследований послужили основанием для разработки нового комплексного антибактериального препарата для лечения желудочно-кишечных заболеваний телят, технологии его промышленного производства и контроля качества, которые в соответствии с широкими производственными испытаниями вошли в нормативно-техническую документацию на препарат (Инструкция по применению тилоколина и технические условия по изготовлению и контролю опытной партии тилоколина за номером ТУ 9337-028-00482909-09), согласованные с Главным государственным ветеринарным инспектором по Воронежской области.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на научно-практической конференции фармакологов РФ, посвященной 85-летию со дня рождения цроф. Рабиновича М.И. (Троицк, 2007), международной научно-производственной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения проф. Спирюхова И.А. (Пенза, 2007), международной научно-практической конференции, посвященной 65-летию Ульяновской ГСХА (Ульяновск, 2008), международной научно-практической конференции, посвященной 125-летию ветеринарии Курской области (Курск, 2008), международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях» (Воронеж, 2008).
Публикации. Основные научные результаты, включенные в диссертацию, опубликованы в 7 печатных работах, в том числе 1 статья в журнале «Ветеринария и кормление», рекомендованном ВАК Минобразования РФ.
Основные положения, выносимые на защиту: научное обоснование состава нового комплексного антибактериального препарата на основе тилозина и колистина;
результаты изучения острой и хронической токсичности тилоколина в опытах на лабораторных животных и телятах; результаты изучения фармакокинетики тилозина и колистина и определения сроков выведения остаточных количеств антибиотиков из организма телят после применения препарата;
результаты определения терапевтической эффективности тилоколина при колибактериозе телят;
практические предложения по применению комплексного антибактериального препарата на основе тилозина и колистина.
Внедрение результатов исследований. Результаты исследований внедрены в ООО "Новая деревня" Липецкого района Липецкой области и СПК "Староникольское" Хохольского района Воронежской области.
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 132 страницах и включает: введение, обзор литературы, материал, объем и методы исследований, результаты собственных исследований, их обсуждение, выводы, предложения, список литературы и .приложения. Диссертационная работа проиллюстрирована 34 таблицами и 6 рисунками. Список литературы вклю-" чает 306 источников, в том числе 88 на иностранных языках.
Лечебно-профилактические мероприятия при желудочно-кишечных болезнях телят
Лечебные мероприятия при диареях новорожденных телят должны быть комплексными и основываться на рациональном использовании различных фармакологических средств и диетическом питании с одновременной нормализацией условий содержания (М.Х. Шайхаманов с соавт., 1994; А.И. Беспалов, 1995; В.А. Бурмистров, 1997; Е.С. Воронин, 1999). При этом основными направлениями должны быть: подавление энтеропатогенной и ток-сигенной микрофлоры, ликвидация обезвоживания и ацидоза, нормализация функциональной активности желудочно-кишечного тракта (Д.Р. Лоуренс, 1991; П.А. Шкиль, 1995, 1997; В.И. Терехов, 1998, 2000; Н.И. Полянцев, 1995; Ю.Б. Белоусов с соавт., 1997; 1998; М.Д. Нил, 1999; Д.А. Девришов, 2000; Г.Н. Кузьмин, 2006).
Из традиционно применяемых при диареях симптоматических средств, наибольшее распространение имеют препараты, обладающие вяжущими свойствами. Они вызывают коагуляцию белков с образованием плотного альбумината, в результате чего понижается чувствительность рецепторных образований, сужение сосудов, ограничение секреции, снижение проницаемости, то есть наблюдается местный противовоспалительный эффект (М.А. Клюева, 1993; СВ. Яковлев, 1997; В.Д. Соколов, 1997; СВ. Яковлев с соавт, 1998; Л. Ланс с соавт., 2000). В ветеринарии для этих целей используют различные лекарственные травы или продукты их переработки. При диареях у телят с успехом применяют настои и отвары подорожника, корня конского щавеля, алтея, корневища аира, девясила и лапчатки, лист эвкалипта, травы зверобоя, тысячелистника, мяты, кору дуба, ромашки (Т.М. Абдыраманов, 1989; П.П. Голышенков с соавт., 1992; Б.М. Авакаянц с соавт., 1992, 1995; В.Г. Беликов, 1993; С.С. Абрамов с соавт., 1995). Активными веществами данных растений, помимо танидов, являются флавойды, слизи, гликозиды, сахара, витамины, кислоты, фитонциды, что обуславливает широкие фармакологические свойства. У больных телят улучшается общее состояние, улучшался аппетит, секреторная функция пищеварительной системы, что способствует быстрому выздоровлению и предотвращает развитие тяжелой формы патологического процесса (А.Ф. Пилуй, Л.В. Лаппо, 1986).
Из других вяжущих средств, широко используемых при диареях у новорожденных телят, следует выделить нитрат висмута основной, ксероформ, танин (Ю.Ф. Крылов, 1999; И.Б. Михайлов, 2001; М.Д. Машковский, 1998, 2007). Эти фармокологические средства являются составными компонентами таких известных препаратов как эндофарм, терапеутан - Т, кссролен, таналь-бин (В.Т. Самохин, 1987; В.Г. Зароза, 1991; В.Д. Соколов с соавт., 1997; И.Б. Михайлов, 1999).
К средствам, защищающие слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта, относятся адсорбенты, которые связывают токсины и сорбируют микроорганизмы, предупреждая их контакт с энтероцитами. Из этой группы наибольшее распространение при лечении телят получили: белая глина (каолин), лигнин, зоосорб, энтеросорбент из торфа ЭСТ-1 (Т.М. Лбдыраманов, 1989; 58, Л.П. Левицкий с соавт., 1995; Ы.А. Шкиль, М.Л. Рачковская, 1995; А.Н. Панов, О.П. Панина, 1997). Обоснованием для широкого применения адсорбентов является их дешевизна, биодоступность, безвредность, отсутствие иммунодспрсссирующего и аллергизирующего действия.
Для нормализации функциональной активности желудочно-кишечного тракта используют ферментные препараты животного (натуральный желудочный сок, абомин, энтерофар, гастромукол) и микробиологического (лизо-цим ГЗХ, пепсинорм, колитин ТЮХ и др.) происхождения (С.С Абрамов с соавт., 1990; В.Д. Тонков, B.C. Дуранов, 1990; К.Д. Асалханов, В.Ф. Булатова, 1995).
По мнению В.И. Терехова (2000), наиболее перспективными препаратами считаются те, у которых в качестве действующего вещества были использованы ткань тонкого отдела кишечника (полиэнтеред), а так же ткани селезенки и брыжейки с лимфоузлами (полипаренхим). Они ингибируют условно-патогенные бактерии, стимулируют выделение пищеварительных ферментов, способствуют повышению фагоцитарной активности нейтрофи-лов и других факторов неспецифической резистентности, улучшают протекание пролиферативных процессов в патологических очагах.
Также используются пробиотические препараты, которые способствуют восстановлению качественного и количественного состава нормальной кишечной флоры. Пробиотики обладают разносторонним фармакологическим действием, а в частности, участвуют в процессах пищеварения и метаболизма, биосинтезе многих биологически-активных веществ, обеспечивают резистентность организма. Эффективность пробиотиков значительно возрастает при комплексном использовании с регидратационными и антитоксическими средствами, адсорбентами и иммуномодуляторами. Эти препараты чаще всего включают бифидумбактсрии, лактобактерии, молочно-кислый стрептококк, пропионовокислые (Е.П. Наймытенко и др. 1990; А.И. Панин, Н.И. Серых, 1992). Для стимуляции организма, повышения его защитных свойств и создание пассивного иммунитета при диареях используют гаммаглобулин, глюко-зоцитратную кровь, облученную кровь, биомос, лактоглобулин, сыворотка крови, иммуноглобулин М. и др. (А. Клебенсон, 1988; М.И. Немченко, 1990; В.И. Беляев с соавт., 1992; А.С. Дашкевич, Н. А. Верещак, 1992; М.А. Косты-на, 1992; Л.И. Ефанова, 2004).
В системе лечебно-профилактических мероприятий при диареях у новорожденных телят особое место имеет регидратационная терапия. Рациональная и интенсивная гидратирующая терапия совместно с одновременным этиотропным лечением обеспечивает положительный эффект, так как применение любых фармакологических средств на фоне обезвоживания и нарушения микроциркуляции приводит к неправильному их распределению в организме и выведению из него. Это проявляется отсутствием или снижением фармакологического эффекта, а так же появлением осложнений и побочных явлений.
Комбинированные химиотерапевтические средства
Данная группа препаратов обладают широким спектром антимикробного действия. Наибольшее распространение получили норфлоксацин, оф-локсации и ципрофлоксацин.
Фторхинолоны ингибируют ДНК-гиразу, что обуславливает бактерицидный эффект. В частности, особенностью механизма их действия является наличие двух мишеней действия в бактериальной клетке, которыми являются ферменты, ответственные за изменение пространственной конфиурации бактериальной ДНК. Ключевым моментом в действии фторхинолонов является образование трехкомпонентоного комплекса (бактериальная ДНК - фермент - фторхинолон), который предотвращает репликацию бактериальной ДНК (J.N. Krieger, KJ. Egan, 1991; В. Bergman, 1994; K.G. Naber, 2003). Антибактериальный эффект хинолонов определяется также и угнетающим влиянием на биосинтез ДНК и, естественно, белков, стабильнбость биологических мембран и другие жизненно важные процессы (В.М. Субботин, И.Д. Александров, 2004).
Оказывают действие на грамотрицательные, в том числе на кишечную палочку, шигелл, сальмонелл, гонококков, энтр о бактерии, синегнойную палочку, микоплазмы, хламидии и др. В отношении грамположительных бактерий менее активны (И.В. Сидоров, 1995; Д.А. Харкевич, 2000).
Большинство инфекционных заболеваний вызваны полирезистентными штаммами бактерий, что без сомнения является одной из важных проблем на сегодняшний день. Выходом из данной ситуации становится синтез новых антибактериальных средств, либо совершенство уже существующих. При этом, наиболее целесообразным является применение комплексных антибактериальных препаратов, которые обладающих широким спектром антимикробного действия, за счет активности каждого компонента в отношении определенного возбудителя микробной ассоциации (Г.Н. Ролинсон, 1971; В.Д. Соколов, 1990; 1992; Я.С. Старчунский, 2002).
Антибиотики, применяемые одновременно, могут быть полезны в очень специфических ситуациях, несмотря на то, что применение двух или более антибиотиков в одно и то же время повышает риск побочных эффектов.
Применение сочетания двух, реже большего количества химиотерапев-тических препаратов, как правило, из числа имеющих неодинаковый механизм антимикробного действия, во многих случаях при правильном назначении оказывает разностороннее и поэтому более полноценное и активное действие. Синергизм или антагонизм не являются строго закономерными для конкретных сочетаний антимикробных препаратов, так как отмечается видо-и штаммоспецифичность микроорганизмов. В результате чего необходимо проверять чувствительность бактерий к данной композиции препаратов. Несмотря на то, что при назначении комбинированной химиотерапии меньше вероятность развития лекарственной устойчивости возбудителя. Ввиду этого комбинированная химиотерапия с каждым годом приобретает все большее распространение. Однако неправильное назначение сочетаний химиотера-певтических препаратов может быть более опасным, чем монотерапия, из-за возможности суммирования токсического действия препаратов, более частого и резкого развития дисбактериоза, суперинфекций и т. д. Поэтому, подбирая такие сочетания необходимо обеспечивать безопасность назначаемой комбинации и отсутствие отрицательного взаимовлияния ее компонентов. Следовательно, компоненты должны подбираться так, чтобы они имели близкие фармакокинетическис параметры, а в интервале между введениями в очаге инфекции обеспечивалась бактериостатическая или бактерицидная концентрация (Г.Я. Кивман, Э.Я. Рудзит, В.П. Яковлев, 1982). Так, антибактериальный эффект может усиливаться при комбинированном применении полимиксинов с сульфаниламидами, цефалоспоринами (Е.В. Щетинин, 2000).
Важной положительной особенностью комбинированной химио- терапии является часто наблюдаемое торможение развития лекарственной устойчивости возбудителей к компонентам сочетания. Но при этом обязательное условие - применение препаратов с различным механизмом действия, что задерживает адаптацию к ним возбудителя. Торможение развития устойчивости не наблюдается при отсутствии чувствительности возбудителя хотя бы к одному из компонентов сочетания. Выбор оптимальных компонентов сочетания по этой причине связан с чувствительностью возбудителя.
Следующей особенностью комбинированной химиотерапии является ее эффективность при смешанных инфекциях. Так, препараты широкого спектра действия могут подавить развитие бактерий нескольких видов, но, учитывая частую к ним устойчивость, при смешанных инфекциях желательно назначать комбинации из нескольких химиотерапевтических препаратов, имеющих широкий спектр действия.
Комбинированная химиотерапия не свободна и от ряда недостатков. Обычно сочетания более активно подавляют не только возбудителей инфекций, но и нормальную микрофлору организма, что способствует более легкому развитию дисбактериоза и суперинфекций. Поэтому при комбинированной химиотерапии следует применять препараты, способствующие нормализации микрофлоры (бифидумбактерин, бификол, ацидофильные продукты и др.), поливитаминные препараты ввиду возможности нарушения витаминного баланса (В.И. Терехов, 2002), иммуномодуляторы усиливающие лейкопоэз и фагоцитоз.
За последние 10 лет достижения в области синтеза новых антимикробных препаратов незначительны. Поэтому актуальным остаются изыскания новых комбинаций, повышающих эффективность лечения животных (В.Д. Соколов, 1990).
К перспективным препаратам, показавшие высокую эффективность при желудочно-кишечных заболеваниях телят можно отнести диастоп (СМ. Глаголев, 2006), диоксинор (А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, 2007), сульфатетрин и фурациклин (П.Н. Сисягин с соавт., 1991), диоксиген (А.Г. Шахов, Ю.Н. Бригадиров, 2007).
Хроническая токсичность тилоколина в опытах на лабораторных животных
Интенсификация сельскохозяйственного производства предусматривает, прежде всего, увеличение продуктов животноводства за счет сокращения потерь от заболевания, падежа и вынужденного убоя животных (В.Н. Павлов, 1990).
Большинство проблем отечественного животноводства связаны со снижением эффективности фармакотерапии и профилактики заболеваний животных, вследствие острого дефицита эффективных ветеринарных препаратов (СМ. Навашин с соавт., 1987; В.А. Антипов, 1995). Поэтому одним из путей создания надежной фармакологической защиты молодняка животных является использование новых лекарственных веществ, обладающих широ-ким спектром антимикробного действия, а также применение этих средств с препаратами, которые способствуют лучшему проникновению в ткани и повышающих защитные силы организма (В.Д. Соколов, 1990; 1992; 1997; Л.С Страчунский, Р.С. Козлов, 1997).
Одним из наиболее перспективных методов является разработка комплексных антимикробных средств, содержащих в своем составе несколько антибактериальных веществ различной фармакологической природы и, соответственно, обладающих различными избирательными антибиотическими свойствами. Терапевтическая широта таких препаратов достигается много-компонентностью, а выраженная антимикробная активность - синергическим или аддитивным эффектом. В результате чего повышается их терапевтическая эффективность, расшираяется спектр антимикробного действия. В свою очередь разработка пролонгированных форм антибактериальных препаратов предпочтительнее, чем нативных, так как длительное удержание рабочих концентраций антибиотиков в крови, тканях и органах сокращает количество инъекций за курс лечения, тем самым, снижается возможность развития побочных реакций (СМ. Навашин, 1987; СВ. Шабунин, 1999).
В связи с ограниченным ассортиментом комплексных антибактериальных препаратов и актуальностью их применения, нам предоставлялось разработать и внедрить в производство удобный в применении и эффективный комплексный антимикробный препарат для лечения колибактериоза у телят.
При разработке комплексных препаратов особое внимание должно быть обращено на то, что входящие в состав комплексного препарата ингредиенты не должны взаимодействовать друг с другом в разработанной лекарственной форме и сохранять стабильность при хранении препарата.
На основе литературных данных (В.А. Антипов, 1995; Е.В. Щетинин, 2000; М.Д. Машковский, 2007) и собственных исследований разработан новый комплексный антибактериальный препарат тилоколин, обладающий си-нергидным действием и новыми полезными свойствами. В его состав входят тилозин, колистин, 1,2-пропиленгликоль и воды для инъекций. Тилозин относится к группе макролидов, продуцентом которого является Streptomyces Fradiae. Основу химической структуры составляет макро-циклическое лактоновое кольцо с одним или несколькими углеводными остатками. Одним из общих свойств макролидов является бактериостатическое действие, которое обусловлено нарушением синтеза белка в микробной клетке путем необратимого связывания с 508-субъединицей рибосомы. Для макролидов характерен поетантибиотический эффект, проявляющийся, отсутствием эффекта возобновления роста бактерий, противовоспалительным и иммуномодулирующим действием. Они повышают активность Т-киллеров, накапливаются в нейтрофилах и макрофагах, усиливают их фагоцитарную активность и миграцию в очаг воспаления. Колистин представляет собой полимиксин Е. Полимиксины активны в отношении грамотрицательной микрофлоры: Escherihia coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp., Shigella spp., Haemophilus influenzae, Brucella spp., Pseudo-monas aeruginosa, Acinobacter spp., находящиеся вне клетки как в стадии покоя, так и стадии размножения. Механизм действия колистина заключается в бактерицидном действии на цитоплазматичсскую мембрану бактериальной клетки, взаимодействуя с фосфолипидами. Они связываются санионными участками мембраны и по характеру действия напоминают катионные детергенты. Повреждение структуры мембраны приводит к изменению её проницаемости как для внутри, так и внеклеточных компонентов. Согласно литературным данным, колистин обладает высокой эффективностью в предупреждении нозокомиальных инфекций, как в отдельности, так и в сочетании с другими антимикробными средствами (Е.В. Щетинин, 2000). Полимиксины in vitro могут проявлять синергидное действие с другими антибактериальными средствами в отношении отдельных возбудителей инфекций. Так, например, выявлен синергизм с бацитрацином и миконазо-лом - против Staphilococcus aureus и Staphilococcus epidermidis (Comelissen F., Van de Bossche H.). Выявляемый при этом in vitro синергизм не исследовался в контролируемых клинических исследованиях. По данным Мс Cabe W.R. и др. колистин обладает бактерицидным действием в отношении многих видов кишечных бактерий, включая Pseudomo-nas aeruginosa. Обоснование состава комплексного антибактериального препарата проводили на основании данных, полученных в опытах in vitro и in vivo. По всей видимости, колистин, повышая проницаемость клеточных мембран, способствует проникновению в микробную клетку тилозина, который, в свою очередь, обуславливает нарушение синтеза белка в микробной клетке путем необратимого связывания с одной из субъединиц рибосомы.
В опытах нами выявлен устойчивый эффект усиления антимикробного действия колистина при его комбинированном применении с тилозином. Основной целью сочетанного применения тилозина и колистина является расширение спектра антибактериального действия, восполнение пробелов в действии каждого из компонентов комбинации и предупреждение формирования устойчивости микроорганизмов.
Фармакокинетика тилоколина и определение сроков выведения ти-лозина и колистина из организма телят
Изучение раздражающего действия и аллергизирующих свойств тило-колина па белых крысах, морских свинках и кроликах методом накожных аппликаций при однократном и многократном нанесении, втиранием препарата, путем воспроизведения анафилактического шока и выявления кожных реакций (отека, зуда)1 у предварительно сенсибилизированных животных не выявило раздражающего действия и аллергизирующих свойств исследуемого препарата. Тилоколин не обладает эмбриотоксическим и тератогенным действием.
Изучение качества мясопродуктов в опыте на кроликах, которым в течение 7 дней вводили внутримышечно тилоколин в дозе 0,05 мл/кг массы тела один раз в сутки, показало, что существенных различий между качеством проб мяса и бульона кроликов контрольной и опытной групп установлено не было.
Изучение фармакокинетики и определение остаточных количеств ти-локолина в биологическом материале показало, что активнодействующие компоненты препарата в течение 7 суток полностью выводятся из организма. После курсового пятидневного применения тилоколина установлено, что ко-листин менее длительное время задерживается в организме животных, чем тилозин. Так колистин, после парентерального введения выводится из организма на 5 сутки, а тилозин через 7 суток полностью отсутствует во всех органах, тканях и жидкостях организма.
При изучении терапевтической эффективности тилоколина было установлено, что препарат при колибактериозе телят обеспечивает сохранность в среднем 92,5% телят. Проведенные экспериментальные исследования по изучению специфической активности, острой, субхронической и хронической токсичности, раздражающего действия, аллергенных свойств, эмбриотоксического и тератогенного действия, фармакокинетики, влияния на качество мяса и мясопродуктов и терапевтической эффективности препарата были использованы при разработке технических условий на опытную партию, временного наставления по применению тилоколина для лечения колибактериоза телят, а в дальнейшем стандарта организации и инструкции по применению тилоколина в ветеринарии. 1. Тилоколии - комплексный антибактериальный препарат, состоящий из тилозина и колистина в % соотношении 5:5, на пролонгированной основе. 2. Компоненты тилоколина - тилозин и колистин обладают взаимоуси-ливающим антимикробным действием в отношении микроорганизмов вызывающих колибактериоз телят. Антимикробная активность тилоколина (МБсК составляет 0,19 мкг/мл) в отношении эшерихий увеличивается по сравнению с колистином в 8 раз, "а по сравнению с тилозином - в 16 раз. 3. Тилоколин является малотоксичным препаратом (4 класс опасности). ЛД50 тилоколина при внутрижелудочиом введении для белых мышей составляет 10702,6 мг/кг, для белых крыс - 11669,7 мг/кг; при подкожном введении для белых мышей - 789,4 мг/кг, для белых крыс - 1421,1 мг/кг; при внутримышечном введении для белых мышей - 1500,3 мг/кг, для белых крыс -1033,8 мг/кг. 4. При многократном (21 день) внутримышечном введении тилоколина белым крысам в дозах 1/20 от ЛД5о (51,7 мг/кг) и 1/10 от ЛД5о (103,4 мг/кг) не выявлено функциональных измененной в организме животных. Применение препарата в максимальной дозе 1/5 от ЛД5о (206,8 мг/кг) повышает нагрузку на печень (повышение активности АсАТ на 48,2-51,5%, АлАТ - на 67,9-60,3%, ГГТ - 60,8-67,5%, ЩФ - в 1,6-1,7 раза, билирубина - на 67,6-68,6%) и, главным образом, на почки (повышение содержания креатинина на 48,2-51,3%), мочевины - на 26,8-40,4%)) при отсутствии клинических признаков интоксикации и восстанавливающихся через 10 суток после отмены препарата. 5. Тилоколин не обладает раздражающим и кожно-резорбтивным действием. У препарата отсутствуют кумулятивные и аллергенные свойства. 6. При внутримышечном введении в дозе 0,05 мл/кг (терапевтическая доза) в течение 14 дней телятам тилоколин не оказывает существенного влияния на их клинический статус, -скорость роста, поведение и аппетит. Многократное применение препарата в терапевтической дозе существенно не влияет на морфологические и биохимические показатели крови телят. 7. При внутримышечном введении тилоколина в дозе 0,05 мл/кг максимальное содержание колистина и тилозина в крови телят наблюдается через 1 час в концентрации в среднем 3,84 мкг/мл для колистина и 1,98 мкг/мл для тилозина. Минимальная концентрация (через 24 часа для колистина составляет в среднем 0,14 мкг/мл, а для тилозина — 0,22 мкг/мл, что позволяет на всем протяжении интервала дозирования поддерживать их концентрацию на уровне минимальной подавляющей концентрации для возбудителей колибактериоза телят. 8. Терапевтическая эффективность препарата тилоколин в дозе 0,05 мл/кг при лечении колибактериоза у телят составляет 92,2-92,8 %. 9. Препарат при длительном применении не оказывает отрицательного влияния на качество мяса и бульона, срок возможного использования продуктов убоя составляет - 7 дней после окончания применения препарата.
