Содержание к диссертации
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ j 6
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .»» 10
2.1- Распространение микроскопических грибов и микотоксинов в природе 10
2.2. Пути снижения содержания микотоксинов в кормах
2.2.1. Физические методы обезвреживания кормов 19
2.2.2. Химические методы обезвреживания кормов 22
2.2.3. Биологические методы обезвреживания кормов
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 37
4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1. Изучение антагонистических свойств микроорганизмов рода Bacillus Г„А 45
4.2. Изучение биологических свойств изолятов Bacillus subtilis
4.2.1. Обезвреживание кормов, загрязненных афлатоксином В биологическим методом 50
4.2.2. Обезвреживание кормов, загрязненных Т-2 токсином биологическим методом 56
4.3. Профилакгическая эффективность изолята В. subtilis - 2006 при воздействии Т-2 и афлатоксина В ] на белых крыс 61
4.3.1. Клинико-гсматологические показатели белых крыс при воздействии Т-2 и афлатоксина і
4.3.2. Биохимические показатели крови белых крыс при воздействии Т-2 и афлатоксина В на фоне применения изолята В. subtilis
4.3.3. Неспецифическая резистентность и активность лизоцима у белых крыс при воздействии Т-2 и афлатоксина В на фоне применения изолята В. subtilis - 2006 71
.3.4. Патоморфологические изменения белых крыс при воздействии Т-2 и афлатоксина Ъ\ на фоне применения изолята В. subtilis -2006
4.4. Остаточные количества Т-2 и афлатоксина В[ в органах и тканях белых крыс на фоне применение изолята В. subtilis - 2006 84
4.5. Определение безвредности препарата «Микосубтил»
4.5.1. Изучение острой токсичности препарата «Микосубтил» на белых крысах и поросятах 84
4.5.2. Изучение безвредности препарата «Микосубтил» на белых крысах и поросятах при многократном поступлении в организм Ш 85
4.5.3. Изучение воспроизводительной способности крыс при ведении препарата «Микосубтил» 86
4.6. Определение общей токсичности корма 87
4.6.1. Определение общей токсичности корма на стилонихиях обработанной препаратом «Микосубтил» 87
4.6.2. Определение общей токсичности корма обработанной препаратом «Микосубтил» биотестированием на кроликах 88
4.6.3. Определение общей токсичности корма обработанной препаратом «Микосубтил» в опытах на белых мышах 89
4.7. Клинические, гематологические и биохимические показатели овец при воздействии микотоксинов на фоне применения препарата «Микосубтил» 90
4.7.1. Клинический статус овец при введении микотоксинов на фоне применения препарата «Микосубтил» 90
4.7.2. Гематологические показатели крови овец при воздействии микотоксинов на фоне применения препарата «Микосубтил» 92
4.7.3. Биохимические показатели крови овец при воздействии микотоксинов на фоне применения препарата «Микосубтил» 94
4.7.4. Неспецифическая резистентность и активность лизоцима у овец при воздействии Т-2 токсина и афлатоксина В і на фоне
применения препарата «Микосубтил»
4.7.5. Содержание Т- и В- лимфоцитов в крови овец при воздействии Т-2 токсина и афлатоксина В\ на фоне применения препарата «Микосубтил» 105
4.7.6. Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса овец, получавших с кормом Т-2 и афлатоксин В і на фоне применения препарата «Микосубтил» 107
4.7.7. Биологическая оценка мяса овец, подвергшихся воздействию Т-2 и афлатоксина Ві на фоне применения препарата «Микосубтил» 108
4.8. Изучение профилактической эффективности препарата «Микосубтил» при Т-2 и афлатоксикозе в производственных условиях
4.9 Изучение показателей питательности зерна, обработанный препаратом «Микосубтил» 113
4.10 Методы контроля качества препарата «Микосубтил» 114
5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИИ 118
6. ВЫВОДЫ 132
7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 134
8. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 135
9. ПРИЛОЖЕНИЯ
Введение к работе
Актуальность темы. Корма растительного происхождения, контаминированные плесневыми грибами, представляют реальную опасность не только для здоровья сельскохозяйственных животных, но и для здоровья человека, потребителя продуктов животноводства. При контаминации кормов существует возможность накопления микотоксинов, вторичных метаболитов плесневых грибов, кроме того, угнетается полезная микрофлора самих растений (ГЛ. Кононенко, 2003; А.В. Иванов, М.Я. Тремасов, К.Х. Папуниди и др., 2008). Наиболее часто корма загрязняются микотоксинами грибов рода Fusarium и Aspergillus (В.Г. Иванов, 1981; AM. Смирнов, Г.П. Кононенко, Г.А. Таланов, 1999).
Растительные субстраты, обсемененные токсигенными грибами, не могут быть использованы в корм без соответствующей саттитарной обработки, так как большие дозы микотоксинов у животных вызывают ярко выраженные признаки отравления, приводят часто к гибели. Микотоксины даже малых дозах вызывают значительные снижение продуктивности, прироста массы тела, ослабления резистентности организма, при этом создаются благоприятные условия для возникновения многих инфекционных болезней (М.Я. Тремасов, 2002, 2005; В.А. Антипов, 2005; В.И. Дорожкин, В.Г. Иванов, 2007).
В настоящее время разработаны физические, химические и биологические способы деконтаминации кормов токсигенными и патогенными грибами. Большинство физических и химических методов детоксикации дорогостоящие, требуют определенных производственных затрат, отрицательно влияют на показатели качества кормов и незначительно снижают количество микотоксинов (Д-В. Алеев, 2007; A.L Patey, 1987; Е Boutrif, 1998).
В ФГУ "ФЦТРБ-ВНИВИ" выделены изоляты микроорганизмов В. ilis для обработки кормов, контаминированиых микотоксинами. Однако оставались неизученными морфологические, физиолого-биохимическис. патогенные свойства микроорганизма и обезвреживающее действие изолята В. subtilis - 2006 в отношении микотоксинов.
Цель и задачи исследований. Целью работы явились скрининг и изучение биологических свойств микроорганизмов рода Bacillus для разработки биологических средств обезвреживания кормов от микотоксинов, сравнительная оценка их эффективности при профилактике микотоксикозов животных.
В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи:
1. Изучить морфологические, культуральные, биохимические и патогенные свойства бактерий рода Bacillus и их антагонистическое действие по отношению Aspergillus fiavus и Fusarium sporotrichiella;
2. Провести скрининг и дать оценку профилактической эффективности препарата, созданного на основе отобранного изолята В. subtilis при длительном поступлении Т-2 и афлатоксина В], учитывая изменение клинических, гематологических и биохимических показателей и факторов неспецифической резистентности организма;
3. Провести ветеринарно-санитарную оценку мяса, патологоанатомические и гистологические исследования органов и тканей животных получавших корм, обработанный препаратом на основе В. subtilis 2006;
4. Разработать способ профилактики микотоксикозов животных препаратом на основе В. subtilis в условиях животноводческих предприятий.
Научная новизна. Впервые экспериментально обосновано применение препарата «Микосубтил», разработанного на основе В. subtilis, для обезвреживания кормов от Т-2 токсина и афлатоксина Bt.
Установлена антагонистическая активность изолятов В. subtilis в отношении грибов рода Aspergillus и Fusarium — продуцентов микотоксинов и их безвредность для животных. Проведен скрининг и дана оценка профилактической эффективности препарата, созданного на основе і T-2 и отобранного изолята В. subtilis при длительном поступлении афлатоксина Bh с учетом изменения клинических, гематологических и биохимических показателей и факторов неспецифической резистентности организма, Проведена ветеринарно-санитарная экспертиза мяса и изучена гистоструктура тканей внутренних органов животных после применения препарата «Микосубтил».
Практическая ценность работы. В качестве средств профилактики при воздействии Т-2 токсина и афлатоксина на организм животных рекомендуется применять препарат «Микосубтил» в концентрации 10,0 мл/кг корма с содержанием 2 млрд. микр. кл./мл.
По результатам проведенных исследований разработана «Инструкция по применению препарата «Микосубтил» для обезвреживания кормов от микотоксинов», утвержденная в установленном порядке.
Апробация материалов диссертации. Основные материалы диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на научных сессиях ученого совета ФГУ "ФЦТРБ-ВНИВИ" по итогам НИР за 2006-2008 г.г.. Международных и Всероссийских симпозиумах (Казань, 2006, 2007, 2008, 2009; Москва, 2008, 2009; Санкт-Петербург, 2008; Екатеринбург, 2008; Ижевск 2008; Ульяновск, 2008).
Публикации. По результатам выполненных исследований опубликовано 11 научных работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, в журнале «Ветеринарный врач» ( Казань, 2009), «Вестник Российской военно-медицинской академии» (Санкт-Петербург, 2008), 1 руды междисциплинарного микологического форума (2009).
Основные положения, выносимые на защиту:
- антагонистические свойства изолята В. subtilis - 2006 по отношению к токсигениым грибам рода Aspergillus и Fusarium.
- эффективность препарата на основе изолята В. subtilis — 2006 для реживания кормов от микотоксинов;
- клинико-гематологические, биохимические показатели и факторы неспецифической резистентности животных при воздействии Т-2 токсина и афлатоксина на фоне применения препарата «Микосубтил»
Объем н структура работы. Материалы диссертации изложены на 158 страницах компьютерного текста и включают следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список использованной литературы, приложения. Работа иллюстрирована 34 таблицами и 15 рисунками. Список использованной литературы содержит 210 библиографических источников, в том числе 73 зарубежных авторов.
