Содержание к диссертации
Введение
Обзор литературы 9
Этиология и патогенез эндометритов животных 9
Роль микотоксинов в развитии эндометритов 18
Эндометриты, осложненные кандидозом 21
Профилактика и лечение эндометритов, в том числе 27
кандидозного характера
Материалы и методы исследований 36
Результаты собственных исследований 43
Этиология эндометритов у коров в животноводческих 43
хозяйствах Республик Татарстан и Марий Эл
1. Анализ условий содержания и эксплуатации животных 43
2. Анализ кормовой базы 44
3. Биохимические показатели крови у больных эндометритом коров
4. Микрофлора половых органов коров при эндометрите
Изучение фармако-токсикологических свойств препарата ДС- 1.
Острая токсичность ДС-2 при внутрижелуд очном применении
2. Острая токсичность ДС-2 при подкожном введении
3. Острая токсичность ДС-2 при накожном применении
Изучение субхронической токсичности и кумулятивных свойств ДС-2
1. Влияние ДС-2 при длительном применении на гематологические показатели
3.3.2. Влияние ДС-2 на содержание общего белка и его фракций в сыворотке крови
3.4. Изучение раздражающего действия ДС- 2 60
3.5. Изучение канцерогенных, эмбриотоксических и тератогенных свойств прапарата ДС
3.5.1. Оценка канцерогенных свойств ДС-2 63
3.5.2. Изучение репродуктивной токсичности ДС
2 3.6. Изучение фунгистатического и фунгицидного действия препарата ДС-2
3.7. Изучение лечебного и профилактического действия препарата ДС - 2 в лабораторных и производственных условиях
3.7.1. Экспериментальный кандидоз половых органов крыс 71
3.7.2. Лечение экспериментального кандидоза половых органов крыс
3.7.3. Определение оптимальной терапевтической дозы препарата ДС-2 при эндометритах коров
3.7.4. Изучение влияния ДС - 2 и других лекарственных средств на клинико-гематологические и биохимические показатели крови больных эндометритами коров
3.7.5. Испытание лечебного и профилактического действия препарата ДС
3.7.5.1. Сравнительная эффективность препарата ДС-2 и других методов лечения эндометрита в производственных условиях
3.7.5.2. Микрофлора матки у коров после использования терапевтических средств
3.8. Методы контроля качества препарата ДС - 2 88
4. Обсуждение результатов исследований
5. Выводы 100
6 Практические предложения w2
7 Список использованной литературы
- Роль микотоксинов в развитии эндометритов
- Биохимические показатели крови у больных эндометритом коров
- Влияние ДС-2 на содержание общего белка и его фракций в сыворотке крови
- Изучение влияния ДС - 2 и других лекарственных средств на клинико-гематологические и биохимические показатели крови больных эндометритами коров
Введение к работе
1.1 Актуальность темы. Существенным препятствием для развития
животноводства и повышения продуктивности животных, являются
заболевания органов воспроизводства, среди которых значительное место
занимают эндометриты, в крупных хозяйствах заболевает до 90 %
отелившихся коров (Н.И. Баженов, 2001; Е.Г. Подугольникова, 2002; А.В.
Андреева, 2003). Воспалительные процессы в гениталиях самок возникают в
результате действия специфической и неспецифической микрофлоры. В
основном они обусловлены условно-патогенной микрофлорой, способной
при снижении резистентности организма животных провоцировать
субинволюцию матки, задержание последа, эндометриты и т.п., что
неблагоприятно влияет на последующую воспроизводительную функцию
животных. Активизация микроорганизмов, переход условно-патогенной
микрофлоры в патогенную, происходит в результате воздействия
неблагоприятных факторов, среди которых выделяют неполноценное
кормление, употребление кормов, содержащих микотоксины и другие
экотоксины (А.Х. Саркисов, 1954; В.В. Курасова и др., 1971; Б.Н.
Хмелевский и др., 1985; A.M. Смирнов, Г.А. Таланов, Г.П. Кононенко, 1999;
А.Ф. Кузнецов, 2001; В.И. Дорожкин, В.Г. Иванов, 2008; В.А. Антипов, 2008;
А.В. Иванов и др., 2008).
Часто такие эндометриты осложняются кандидозом, имеющие латентный характер, что затрудняет постановку диагноза и проведение лечебных мероприятий (М.Я. Тремасов, 2002; А.Н. Турченко, 2007; С.С. Дегтярева, 2008).
Существует большое количество препаратов, предлагаемых для лечения акушерско-гинекологических болезней животных. Однако, многие из них не устраивают ветеринарную практику, особенно при эндометритах, осложненных кандидозом, так как обладают побочными эффектами (Л.С. Шубит и др., 1994; Ф.А. Сунагатуллин, 1995; А.Н. Турченко и др., 2005; М.А. Багманов, 2005; К.Х. Папуниди, З.М. Зухрабова, 2007).
В ФГУ «ФЦТРБ - ВНИВИ» (г. Казань) разработано лекарственное средство для лечения эндометритов, в том числе, осложненных кандидозом -эндометрии 2 (ДС-2).
Однако, фармако-токсикологическая оценка препарата ДС-2, изучение его эффективности при эндометритах не проводились, методы контроля лекарственного средства не разработаны.
1.2 Цель и задачи исследования. Целью исследования явилась оценка
токсикологических параметров и определение эффективности препарата ДС-2
при эндометритах коров в сравнении с другими средствами. В этой связи
перед нами были поставлены следующие задачи:
-
Изучить этиологию эндометритов у коров в ряде животноводческих предприятий Республик Татарстан и Марий Эл;
-
Оценить показатели токсичности и безвредности препарата ДС-2, разработать дозы и способы его применения при эндометритах;
3. Изучить в лабораторных и производственных условиях
профилактическую и терапевтическую эффективность препарата ДС-2 при
эндометритах коров.
-
Научная новизна работы. Впервые установлена безвредность нового препарата ДС-2; изучены острая и субхроническая токсичность, раздражающие, аллергизирующие, кумулятивные, канцерогенные, эмбриотоксические и тератогенные свойства, профилактическая и терапевтическая эффективность его при эндометритах коров. Определено влияние препарата на клинико-гематологический статус животных. Лабораторными и производственными опытами показано, что применение ДС-2 при эндометритах коров способствует выздоровлению большинства животных.
-
Практическая ценность работы. Для ветеринарной практики предложено новое средство лечения эндометритов. Установлено, что применение ДС-2 обеспечиваем выздоровление до 95% больных коров, сокращает курс лечения, восстанавливает репродуктивные способности животных. По результатам исследования разработаны Методические рекомендации по борьбе с микотоксикозами животных в Республике Татарстан и проекты ТУ и Инструкции по применению ДС-2 в ветеринарии.
-
Апробация материалов диссертации. Основные материалы диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на научных сессиях ученого совета ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по итогам НИР за 2006-2008 г.г., Международных и Межрегиональных научно-практических конференциях (Казань, 2006, 2008, 2009; Троицк, 2007; Ульяновск, 2008; Ижевск, 2008; Москва, 2008, 2009).
-
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 научных работ, в том числе три - в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК РФ, в которых отражены основные положения и выводы диссертации.
1.7 Основные положения, выносимые на защиту:
- фармако - токсикологическая и биологическая оценка препарата ДС-2;
- эффективность препарата ДС-2 при лечении и профилактики
эндометритов.
1.8 Объем и структура работы. Диссертация изложена на 132
страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы,
материалов и методов исследований, результатов собственных исследований,
обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений,
списка литературы и приложений. Работа иллюстрирована 30 таблицами.
Список литературы включает 284 источника, в том числе - 98 зарубежных
авторов.
Роль микотоксинов в развитии эндометритов
Болезни матки отрицательно влияют на плодовитость, снижают работоспособность и продуктивность животного (К.А. Елпаков, 1961; С.А. Митрофанов, 2000, В.И. Михалев, 2001).
Вследствие воспалительных процессов в матке создаются неблагоприятные условия для спермиев (спермолизины, спермотоксины, активные формы фагоцитов, бактериотоксины и др.), даже после оплодотворения в полости такой матки зародыш может погибнуть.
Воспаление матки может возникать и во время беременности. Глубокие морфологические изменения ее слизистой оболочки также могут сопровождаться нарушением связи плодной части плаценты с материнской. Через измененный плацентарный барьер в ткани и органы плода могут проникать микробы и их токсины (А.П. Студенцов и др., 2000, 2005).
Воспаление слизистой оболочки матки - эндометрит. По течению различают острый, подострый и хронический; по клиническому проявлению -клинически выраженный и скрытый; по характеру воспаления - серозный, фибринозный, катаральный, гнойно-катаральный и гнойный; в зависимости от возникновения - послеродовой, постабортальный и посткоитальный (после осеменения) (В.П. Шишков, 1998; А.П. Студенцов, B.C. Шипилов и др., 2005).
Преимущественным этиологическим фактором возникновения эндометритов считают микрофлору, проникшую в матку в послеродовой период, во время течки или осеменения. Возбудители инфекции могут быть внесены в органы нестерильными ветеринарными инструментами, руками, а также с окружающих предметов (ограждения, кормушки и др.) (А.И. Пучковский, 1977; Н.Г. Балашов, 1980; Б.Ф. Муртазин, Г.С. Пулатов, 1995). J
Воспаление в 85-90% случаях обусловлено внедрением в ткани матки условно-патогенных бактерий (стрепто -, стафило-, диплококки, кишечная палочка, коринебактерии, протей, микобактерии и др.), микроскопических грибов (Candida, Aspergillus, Mucor и др.) (Н.Ы. Михайлов, 1971; Р.Г. Кузьмич, 2000; Е. Kudlac, 1970), чаще всего встречаются различные их ассоциации.
При микробиологическом исследовании влагалищной и цервикальной слизи больных эндометритом коров выделяются патогенные и непатогенные штаммы микроорганизмов: Е. coli, Salm. typhimurium, Staph, aureus, Streptococcus pyogenes, CI. perfringens, Klebsiella aerogenes, B. subtilis (Д.В. Губанов, 2001; Л.Н. Косолович, 2004; А.Ф. Исмагилова, Ю.М. Ыигматуллин, 2008 и др.). Причем, в большинстве случаев микрофлора представлена различными ассоциациями микроорганизмов. Этиологическим фактором возникновения эндометритов являются и дрожжеподобные грибы рода Candida, микромицеты Aspergillus, Mucor (З.И. Казаева, 1978; И.С. Коба, 2003; Э.Э. Грига, 2007).
Исследованиями И.В. Гордеева (2008) установлено, что возникновение острого эндометрита обусловлено наличием в маточном биоценозе патогенных S. pyogenes (40,2 %), S. aureus (18,3 %), S.epidermidis (11,9 %), S. xylosus (28,0), S. hyicus (1,28 %). Генитальные микробиоценозы при острой форме течения характеризовались также присутствием транзиторпой микрофлоры в количестве 0,12 %. В ее составе были идентифицированы Р. aeruginosa, P. vulgaris, Bacteroides spp., Е. coli, Bacillus spp., Fusobacterium spp., грибы рода Candida. Хроническую форму течения эндометрита обусловливало присутствие в составе маточно-цервикального биоценоза патогенных S. aureus (2,3 %), P. aeruginosa (11,0 %). Возросла также роль условно-патогенной микрофлоры - S.epidermidis (28,3 %), S. xylosus (31,9 %), Е. coli (12,7 %) и К. pneumonia (2,9 %). Генитальные микробиоценозы коров с субклиническим течением эндометрита были также представлены совокупностью патогенных и условно-патогенных бактерий: S. aureus (18,2 %) и P. aeruginosa (2,5 %). В состав условно-патогенной микрофлоры вошли грибы рода Candida (21,2 %), S. xylosus (18,2 %), Е. coli (14,3 %), Bacillus spp., S. hyicus (7,5 %), а также анаэробные Bacteroides spp. (7,5 %).
В последние годы увеличивается заболеваемость сельскохозяйственных животных эндометритами бакгериально-микозной этиологии. Исследованиями С.С. Дегтяревой (2008) в маточных выделениях больных эндометритом коров изолированы следующие ассоциации микроорганизмов и грибов: Str. pyogenes + P. vulgaris + Candida albicans (22,8 %), Staph, aureus + E. coli + Candida albicans (22,8 %), Staph, aureus + P. mirabilis + Candida albicans (20 %), E. coli + P. mirabilis + Candida albicans (11,4 %), E. coli + P. vulgaris + Candida albicans + Aspergillus fumigatus (8,5%), Staph, aureus + P. mirabilis + E. coli + Candida albicans + Aspergillus fumigatus (8,5 %), Staph. aureus + P. mirabilis + E. coli + Candida albicans + Aspergillus fumigatus + Mucor racemosus (5,7 %).
A.K. Бутаковым и др. (1979) из половых органов больных коров выделены те же микроорганизмы, что и из спермы. По данным Д.Д. Логвинова (1977) и Н.Г. Балашова (1980), инфицирование коров происходит вследствие использования спермы, контаминированной условно-патогенными микроорганизмами. Кроме этого, не менее опасным источником патогенных бактерий являются коровы - бактерионосители, особенно при скученном содержании, нарушении санитарных правил проведения родов.
Биохимические показатели крови у больных эндометритом коров
В ходе экспериментов определялись гематологические и биохимические показатели крови, регистрировался прирост массы тела животных. Количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, СОЭ определяли общепринятыми методами. Определение общего белка в сыворотке крови проводили рефрактометрическим методом на рефрактометре RL-3 (Польша), белковых фракций - нефелометрическим, глюкозы - ортотолуидиновым методами (А.А. Кудрявцев и д.р., 1974; Б.И. Антонов и д.р., 1991; И.П. Кондрахин, 2004).
После окончания опыта часть животных подвергали патологоанатомическому исследованию по методике А.В. Жарова (1995).
Оценку местно-раздражающего действия препарата проводили на кроликах, руководствуясь «Методическими указаниями по изучению раздражающих свойств и обоснованию ПДК избирательно действующих раздражающих веществ в воздухе рабочей зоны».
Аллергизирующие свойства препарата изучали в соответствии с Методическими указаниями МУ 1.1.578-96 «Требования к постановке экспериментальных исследований по обоснованию предельно допустимых концентраций промышленных химических аллергенов в воздухе рабочей зоны и атмосферы».
Канцерогенные свойства препарата оценивали на кроликах путем его аппликации на кожу уха (3 раза в неделю) в течение 6 месяцев.
Эмбриотоксическое и тератогенное действие оценивали в соответствии с «Методическими указаниями по изучению эмбриотоксического действия фармакологических веществ и влияния их на репродуктивную функцию». Показатели предимплантационной, постимплантационной гибели эмбрионов и общей эмбриональной смертности (%) вычисляли по формулам: ПРЕДИМП = (ЖТ - МИ) / ЖТ х 100%, где ПРЕДИМП - предимплантационная гибель эмбрионов ЖТ - количество жёлтых тел в яичниках МИ — количество мест имплантаций ПОСТИМП = (МИ - ЖП) / МИ х 100%, где ПОСТИМП- постимплантационная гибель эмбрионов МИ - количество мест имплантаций ЖП - количество живых плодов ЭМБ = (ЖТ - ЖП) / ЖТ х 100%, где ЭМБ - общая эмбриональная смертность ЖТ - количество жёлтых тел в яичниках ЖП - количество живых плодов
Для выявления тератогенного эффекта плоды взвешивали, измеряли их длину. Исследования проводили под бинокулярной лупой, разместив плоды в чашки Петри с физиологическим раствором. Далее плоды разделяли на две равные группы. Одну группу фиксировали в жидкости Буэна в течение недели и использовали для послойной оценки макроструктуры внутренних органов по методу Вильсона. Другую группу плодов использовали для изучения развития скелета: фиксировали в 96%-ном спирте в течение 7 дней, затем эмбрионы погружали в 1% раствор перманганата калия для просветления мягких тканей с дальнейшим помещением на 3 суток в раствор ализарина для окрашивания скелета в интенсивный красно-фиолетовый цвет и растворы для предупреждения загнивания (Dawson, 1926).
Фунгистатическая и фунгицидная активность препарата изучена in vitro по методике С.Н. Миловановой, З.Г. Степанищевой (1971), в модификации О.С. Бочарниковой, В.М. Лещенко (1981), в отношении к грибам рода Candida (С. albicans).
Для изучения действия ДС-2 на больных лабораторных животных воспроизводили экспериментальный кандидоз половых органов крыс по методике Л.В. Кричковской (1989).
Перед постановкой производственных опытов, в каждом хозяйстве изучали состояние воспроизводства коров с учетом породы, продуктивности животных, условий кормления и содержания, организации работы отделений и пунктов искусственного осеменения. Исследования проводились в хозяйствах, где наиболее часто отмечались массовые эндометриты у коров с охватом значительного поголовья, с использованием статистической отчетности, количества выбракованных стельных коров, абортов, мертворожденных телят. Определяли продолжительность сервис периода, сроки прихода коров в охоту и кратность осеменения. В родильных отделениях проводили текущую гинекологическую диспансеризацию. При этом учитывали течение родов, время отделения последа, течение послеродового периода.
Состояние половых органов животных определяли клиническими методами, которые подразделялись на наружные, вагинальные и ректальные исследования. При наружном исследовании устанавливали состояние вульвы, наличие или отсутствие выделений из половых органов, их цвет, запах и консистенцию. При вагинальном исследовании учитывалось состояние слизистой оболочки влагалища и влагалищной части шейки матки, их целостность, положение шейки матки и степень раскрытия ее канала, а также характер и объем маточных выделений. Ректальным исследованием устанавливали величину, форму матки и рогов, наличие в них содержимого, тонус маточной стенки, а также определяли величину яичников и наличие в них фолликулов или желтых тел.
Проводили микробиологическое и микологическое исследование влагалищной слизи. Из взятых проб делали посевы на жидкие и плотные питательные среды: МПБ, МПА, Эндо, Сабуро, цветные среды Гиса.
У выделенных культур были изучены морфологические, культурально-биохимические свойства в пределах, необходимых для надежной идентификации. Идентификацию выделенных штаммов проводили руководствуясь «Определителем бактерий Бержи». Патогенность изучали при внутрибрюшинном заражении белых мышей культуральной массой, в дозе 0,5 мл, с содержанием в 1 мл 1 млрд микробных клеток.
Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проводили методом диффузии в агар.
С животноводческих помещений брались соскобы (до и после дезинфекции) для изучения видового состава имеющейся микрофлоры. При выяснении этиологии заболевания нами проанализировано 120 образцов проб кормов, отобранных из СХП «им. Вахитова», СХП «Урал», СХП «Игенче» Кукморского района республики Татарстан и хозяйства «им. Кузнецова» - Горно - Марийского района республики Марий-Эл на содержание микроскопических грибов и микотоксинов. Микроскопические грибы выделялись согласно методике В.В. Курасовой и др. (1971), токсичность грибов - по Н.А. Спесивцевой (1964), кормов - по И.А. Курманову (1977), анализ микотоксинов в кормах осуществляли методом тонкослойной хроматографии, биоавтографии (Б.И. Антонов, 1991) и хроматомасс-спектрометрии.
Для лабораторной диагностики Candida использовали микроскопию приготовленных препаратов по Граму и культуральную диагностику путем посева на Сусло-агар.
Профилактическую и терапевтическую эффективность ДС - 2 изучали на 1060 коровах голштино-фризской, черно-пестрой и холмогорской пород в хозяйствах Кукморского, Буинского районов Республики Татарстан и в хозяйствах Параньгинского и Моркинского районов Республики Марий Эл. При постановке диагноза учитывали эпизоотическую обстановку в подопытных хозяйствах, клинические признаки, данные лабораторных исследований.
Влияние ДС-2 на содержание общего белка и его фракций в сыворотке крови
Для исключения посткоитального заражения коров кандидозом, во всех исследуемых хозяйствах, проведен отбор спермы быков-производителей, при помощи искусственной вагины, для дальнейшего микологического анализа. Всего отобрано 26 проб.
Исследования показали наличие в 50 % случаев в сперме быков гриба Candida albicans, кроме того, в 90 % - аналогичные виды микроорганизмы, что и из половых органов больных коров.
При микологическом исследования 20 образцов проб спермы быков-производителей, (СХП им. Вахитова, Игенче, Hyp, СХП Кузнецовский от Марий - Эл, 3/С Бирюлинский) используемой для искусственного осеменения в 16 обнаружили грибы C.albicans. При заражении мышей этими видами грибов развивался кандидоз, с гибелью животных на 6-7 сут.
Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что основными этиологическими факторами возникновения эндометритов у коров, осложненных кандидозом, в изучаемых хозяйствах являются неудовлетворительное содержание животных, некачественная дезинфекция животноводческих помещений, неполноценное кормление, приводящие к активации неспецифической микрофлоры (Е. соН, St. aureus и др.), систематическое загрязнение кормов микотоксинами и использование спермы, загрязненной патогенными представителями Candida albicans.
Острую токсичность ДС-2 изучали на белых беспородных мышах, массой 18-20 г и белых крысах обоего пола массой 182-200 г. Формировали опытные и контрольные группы по 10 животных в каждой.
Препарат задавали внутрижелудочно, при помощи атравматического зонда, в дозах мышам - 2500, 7500, 12500 мг/кг, крысам 15000, 20000 мг/кг. Контрольным животным, в аналогичных дозах, вводили растворитель ДМСО. Объем вводимой жидкости внутрижелудочно не превышал 0,5 мл для мышей и 5,0 мл для крыс.
Наблюдения вели в течение 14-30 сут с момента введения препарата. При этом учитывали клиническую картину, количество павших и выживших животных, динамику изменения массы тела.
При введении препарата гибели животных не наблюдалось. Установлено, что препарат в дозах для мышей - 2500 и 7500 мг/кг, для крыс -15000 видимых изменений в поведении и общем состоянии животных не вызывал. Мыши и крысы в течение всего срока наблюдения активно двигались, шерстный покров оставался гладким, блестящим, клинических признаков отравления не наблюдали. По мере увеличения дозы мышам до 12500 мг/кг, крысам до 20000 мг/кг исследуемого средства, через 1,5-2 ч после введения, отмечалось общее угнетение, вялость, отказ от приема корма и воды, шерсть взъерошена. Клинические признаки интоксикации исчезали в среднем через 1,5 часа. При патологоанатомическом вскрытии специально умерщвленных животных видимых изменений во внутренних органах не обнаружено.
В ходе опыта была изучена динамика изменения массы тела опытных групп животных на 14 сут после введения препарата ДС-2, результаты представлены в таблице 5. Из данных таблицы видно, что прирост массы опытных групп животных принципиально не отличался от контрольных. Таблица 5 - Динамика массы тела белых мышей и крыс после однократного внутрижелудочного введения ДС - 2 (п =10) Животные Доза препарата (мг/кг) Масса тела животных (г)
Эксперименты проведены на 60 белых мышах, по 10 в каждой группе. Исследуемый препарат вводили подкожно в дозе 20000, 30000 и 50000 мг/кг, животным контрольных групп в аналогичных дозах - ДМСО. Исследования показали, что в испытываемых дозах ДС-2 не вызывал гибели животных. При введении максимально возможных (1,0 мл раствора по 0,5 мл в различные участки) доз отмечено небольшое угнетение общего состояния мышей, которое исчезало в течение 1,5-3 часов.
Следующая серия опытов проведена на 40 крысах. ДС-2 вводили подкожно в дозе 5000, 10000, 15000 мг/кг. При введении максимально возможных доз (5 мл раствора, по 1,5 мл в различные участки) через 15-20 мин после введения препарата, отмечали незначительное угнетение животных, которое исчезало через 1,5-2,5 часа.
При вскрытии специально убитых животных визуальным осмотром изменений со стороны внутренних органов отмечено не было.
Общепринятая математическая обработка материала при токсикологических исследованиях по Керберу (1931) в нашем опыте оказалась неприемлемой, т.к. основное требование для проведения расчетов было невыполнимо, а именно не произошло гибели животных. В связи с этим для дальнейших расчетов использовали условное ЛД5о от максимано вводимой дозы для каждого вида животных - 0,5 мл для мышей и 5 мл для крыс. Таким образом, результаты проведенных опытов свидетельствуют о малой токсичности препарата ДС-2. По классификации (Л.И. Медведь и др., 1986), его можно отнести к 4 классу - нетоксичные или малотоксичные соединения, а по ГОСТ 12.11.1.007- 76 к 4 классу опасности - вещества малоопасные.
Изучение влияния ДС - 2 и других лекарственных средств на клинико-гематологические и биохимические показатели крови больных эндометритами коров
У самок крыс, острый вагинит воспроизводили введением во влагалище стандартного ватного тампона пропитанного 10 % водным раствором формалина. На следующие сутки тампоны извлекали и вводили тампоны, содержащие чистую культуру гриба Candida albicans - 1. Через сутки тампоны меняли на аналогичные. После удаления тампонов, крыс определяли в группы по выраженности воспалительного процесса во влагалище. За развитием воспалительного процесса наблюдали в течение 2Г сут, регистрировали клинические признаки эндометрита (гиперемия слизистой оболочки влагалища, наличие и характер выделений), количество осложнений, летальных исходов. Результаты, полученные в. данном опыте, приведены в таблице 19.
Для подтверждения диагноза брали мазки со слизистой оболочки влагалища крыс или выделения, делали посевы на питательные среды для обнаружения грибов рода Candida, и наличие сопутствующей микрофлоры (таблица 20). Для проверки нарушения репродуктивной способности крыс осеменяли естественным путем, установлено, что из 22 животных, двукратно осемененных, 19 оставались бесплодными.
Ставили биологический контроль на мышах, который выявил наличие патогенности у гриба рода Candida. При внутрибрюшинном введении наблюдали до 76 % гибели белых мышей, преимущественно на 5 сутки.
При вскрытии павших животных было установлено общее истощение животных, гиперемия слизистой тонкого отдела кишечника и желудка, точечные кровоизлияния в ней. В почках и легких облегались узелки белого цвета - микроскопические гранулемы с грибными элементами в центральной части. Слизистая оболочка покрыта рассеянной серовато-белой пленкой, плотно соединенной с подлежащей тканью. При микроскопии препаратов, приготовленных из патматериала (налеты, наложения, узелки), выявили нити бесцветного мицелия с перегородками и почкующимися клетками, отчетливо элементы гриба видны в препаратах, окрашенных по Граму.
Из данной таблицы видно, что более 80 % случаев отмечено совместное пребывание во влагалищной слизи грибов рода Candida и кокковых форм микроорганизмов (стафило-, стрептококки). Биологический контроль на белых мышах показал отсутствие патогенности у выделенных кокковых гоорганизмов.
Эксперимент проведен на белых крысах, разделенных на 7 групп, по 10 в каждой. 1 - контрольная группа - для воспроизведения кандидозного эндометрита использовали внутривагинально 10% раствор формалина + С. albicans; 2 - контрольная группа - внутривагинально 10% раствор формалина; 3 - контрольная группа - внутривагинально С. albicans; 4 - опытная группа -ДС - 2 в дозе 0,3 мл; 5 - опытная - ДС - 2 в дозе 0,5 мл; 6 группа -нистатиновая мазь; 7 группа служила биологическим контролем.
У крыс первой группы признаки воспаления половых органов начали проявляться на 2 - 3 сут опыта, отмечалась гиперемия слизистой оболочки влагалища, повышение местной температуры, на 4 - 5 сут появлялись слизистые и серозно-слизистые выделения, на 7 - 8 сут - густая слизь с прожилками гноя. Крысы в начале беспокоились, затем у них наблюдалось угнетение, они преимущественно лежали, не охотно принимали корм и воду. У животных взяли мазок из влагалища и делали посевы на сусло-агаре для выявления грибов рода Candida и в мясопептонный агар - для кокковой микрофлоры. Перед взятием пробы область наружных половых- органов обмывали теплой водой и обсушивали стерильным ватно-марлевым тампоном. Пробы помещали в стерильные пробирки объемом 2 мл и плотно закрывали тампонами.
В пробах, отобранных у всех крыс, зараженных грибами из рода Candida были выделены грибы Candida albicans, стафилококки и стрептококки. Биологический контроль на мышах выявил наличие патогенности у выделенных грибов; стафилококки и стрептококки не были патогенными.
У животных, которым вводили только раствор формалина, воспалительный процесс в начальной стадии развивался аналогично крысам первой группы, в дальнейшем течение эндометрита было менее тяжелое, выделения из половых путей были преимущественно слизистые и серозно -слизистые, у одной из десяти крыс в выделениях отмечали прожилки гноя.
У животных третьей группы, которых подвергали лечению препаратом ДС - 2 в стадии развития болезни, симптомы воспаления половых путей постепенно исчезали, через 12-24 ч. прекращался зловонный запах, затем исчезали, в начале гнойные, в последующим и слизистые истечения. Двукратное введение средства было достаточным для излечения 8 из 10 крыс, 2 животным препарат вводили 4-х кратно с интервалом 24 часа. Все животные, подвергнутые лечению выздоровели. В мазках, отобранных на 3 сут. после исчезновения клинических признаков грибы Candida albicans не выделялись, не отмечалась и кокковая микрофлора (таблица 21).
