Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 8-36
1.1. Пересадка гипофиза в эксперименте и клинике 9-16
1.2. Влияние неспецифических факторов трансплантации и консервации на жизнеспособность пересаженного гипофиза 17-25
1.2.1. Влияние места пересадки на жизнеспособность пересаженного гипофиза
1.2.2. Влияние ишемии на жизнеспособность пересаженного гипофиза
1.2.3. Влияние консервации на жизнеспособность пересаженного гипофиза 48-74
1.3. Клеточный состав аденогипофиза 33-36
ГЛАВА 2. Материал и методы исследования 37-47
ГЛАВА 3. Влияние места пересадки на жизнеспособность аллогенного аденогипофиза после его тканевой трансплантации 49-54
3.1. Пересадка аллогенного аденогипофиза крысы под капсулу почки
3.2. Пересадка аллогенного аденогипофиза крысы в паренхиму семенника
3.3. Пересадка аллогенного аденогипофиза крысы под белочную оболочку семенника
ГЛАВА 4. Оценка клеточного состава аллогенного аденогипофиза крысы, пересаженного под белочную оболочку семенника 75
ГЛАВА 5. Влияние тепловой ишемии на жизнеспособность аллогенного аденогипофиза крысы после его тканевой трансплантации в семенник
ГЛАВА 6. Влияние гипотермической консервации на жизнеспособность аллогенного аденогипофиза крысы после его тканевой трансплантации в семенник 98
6.1. Гипотермическая консервация в растворе Евроколлинз 99-110
6.2. Криоконсервация 110-112
Заключение и обсуждение результатов 113-119
Выводы 120
Практические рекомендации 121
Список литературы 122-146
- Влияние неспецифических факторов трансплантации и консервации на жизнеспособность пересаженного гипофиза
- Влияние консервации на жизнеспособность пересаженного гипофиза
- Пересадка аллогенного аденогипофиза крысы под белочную оболочку семенника
- Влияние тепловой ишемии на жизнеспособность аллогенного аденогипофиза крысы после его тканевой трансплантации в семенник
Введение к работе
Актуальность проблемы
В связи с многогранным регулирующим влиянием, оказываемым гипофизом в организме, нарушение, в частности, ослабление деятельности этой железы, отражается на течении многих физиологических реакций, что приводит к развитию различных патологических процессов. При гипофизарной недостаточности заместительная гормональная терапия не всегда в состоянии полностью возместить недостаточность функции этой железы внутренней секреции. В качестве метода, который применяется наряду с медикаментозным лечением эндокринопатии, для восполнения утраченной гормональной функции может быть использована аллотрансплантация гипофиза. Поэтому внимание к пересадке гипофиза исследователей теоретических и клинических медицинских дисциплин очень велико (Гнилорыбов Т. Е. и Казаченок В. М., 1970; Хенкин В. Л., 1973; Казаченок В. М., 1974, Кирпатовский И.Д., 1998). Известно несколько вариантов этой операции: пересадка целого органа с восстановлением питающих его сосудов; свободная пересадка тканевых фрагментов и пересадка культуры клеток (Богораз Н. А., 1938, 1948; Гнилорыбов Г. Е., 1956-1966, 1970; Хенкин В. М., 1973; Казаченок В. И., 1973, 1974; З.С.Каитова, 1996, 2003; Кирпатовский И.Д., 1996, 1998). Существенную роль в приживлении и длительном функционировании тканевых и клеточных трансплантатов играет место пересадки. Свободную пересадку ткани гипофиза целесообразно осуществлять в иммунологически привилегированные области: желудочки мозга (Falconi G. и Rossi G.L., 1964, Knigge К.М.,1980, Tulipan N.B. с соавт., 1985), под капсулу почки, в переднюю камеру глаза (Siperstein E.R., Greer М.А., 1956; Goldberg R.C. и Knobil E., 1957; Funguist B.,1968; Мартинович П. И., с соавт., 1974), под белочную оболочку семенника (Кирпатовский И.Д.,
Нурманбетов Д.Н., Дендеберов Е.С., 1993; Лысенко А.И., Смирнова Э.Д., 1996; Aron М. с соавт., 1962, 1964), где наблюдается их длительное переживание.
Мнения авторов о функции таких трансплантатов существенно расходятся. Одними было показано, что такой аденогипофиз секретирует все гормоны (Мартинович П. Н. и др., 1974) или некоторые из них: тиреотропный (Martini L. с соавт., 1959), адренокортикотропный, соматотропный (Cheng СР. с соавт., 1949; Goldberg R.C. и Knobil Е., 1957), хотя и на более низком уровне, чем интактный гипофиз. По мнению Goldberg R.C. и Knobil Е. (1957), Мартинович П. Н.5 Павич Д., Живкович Н. (1974), аллотрансплантат аденогипофиза в передней камере глаза может секретировать также ФСГ и ЛГ, но большинство исследователей не придерживается этого взгляда.
В связи с практикой пересадки органов и тканей от трупа, в том числе и эндокринных желез, всегда требуется четкий ответ о жизнеспособности трансплантата. После забора органа у донора его обычно сохраняют в консервирующем растворе. В связи с этим важное значение имеет вопрос о максимально допустимых безопасных сроках забора гипофиза от трупа и способах его сохранения до пересадки. Имеются лишь единичные работы, посвященные этому вопросу. Так на кафедре оперативной хирургии и клинической анатомии РУДН изучалось состояние нейрогипофиза при тепловой ишемии в различные сроки с использованием метода электронной микроскопии (Зимина И.С., 1988). Других работ по этой проблеме в доступной литературе нами не обнаружено.
Неоднозначность и противоречивость данных о клеточном составе тканевых трансплантатов аденогипофиза, а так же отсутствие в литературе сведения о безопасных сроках забора гипофиза от трупа и его консервации различными методами с целью дальнейшей трансплантации, подтвержденных в прямых опытах его пересадки, определило цель и задачи данного исследования.
Цель и задачи исследования
Целью настоящей работы явилось изучение влияния места пересадки, различных сроков ишемии и методов консервации на жизнеспособность ткани аллогенного аденогипофиза при его трансплантации.
Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:
Изучить влияние места пересадки на жизнеспособность ткани аллогенного аденогипофиза при пересадке его под капсулу почки, в паренхиму семенника, под белочную оболочку семенника в различные сроки после трансплантации.
Изучить клеточный состав аллогенного аденогипофиза в различные сроки после его тканевой трансплантации под белочную оболочку семенника.
3. Изучить влияние различных сроков тепловой ишемии на
жизнеспособность ткани аллогенного аденогипофиза при пересадке его
под белочную оболочку семенника.
4. Изучить влияние консервации на жизнеспособность ткани аллогенного
аденогипофиза при пересадке его под белочную оболочку семенника.
Научная новизна
Показано длительное (до 13 месяцев) выживание тканевого трансплантата аденогипофиза при его пересадке в паравазальную клетчаточную щель под белочную оболочку семенника. Доказано преимущество этой модели трансплантации, дающей максимальную сохранность семенника.
Впервые изучен клеточный состав аденогипофиза, пересаженного в паравазальную клетчаточную щель под белочную оболочку семенника, и выявлено выживание различных типов клеток до 6 месяцев после трансплантации.
Установлены максимально допустимые сроки ишемии для забора донорского аденогипофиза в качестве трансплантата: до 6 часов при немедленной пересадке и до 4 часов при гипотермическои консервации и последующей его пересадке. Практическая значимость.
Максимально допустимые сроки ишемии (4 и 6 часов) для забора аденогипофиза в качестве трансплантата, установленные в работе, могут быть использованы в клинической трансплантологии.
Минимальная травматизация семенника при тканевой субкапсулярной пересадке гипофиза в паравазальную клетчаточную щель с использованием микрохирургической техники позволяет рекомендовать эту модель трансплантации гипофиза в клиническую практику.
Апробация работы
Результаты диссертационной работы доложены и обсуждены:
На II Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке», Москва, 2001 г.
На клинической конференции молодых ученых ФППО ММА им. И.М. Сеченова «Актуальные вопросы клинической медицины», Москва, 2002 г.
На научно-практической конференции «Новые оперативные технологии (анатомические, экспериментальные и клинические аспекты)», Москва, 2002 г.
На конференции молодых ученых, Эндокринологический научный центр РАМН, 2002 г.
На научно-практических конференциях кафедры оперативной хирургии и клинической анатомии РУДН в 2001-2004 гг.
Влияние неспецифических факторов трансплантации и консервации на жизнеспособность пересаженного гипофиза
Свободную пересадку эндокринных органов целесообразно осуществлять в иммунологически привилегированные зоны, куда в силу анатомо-физиологических особенностей не возможен или ограничен доступ иммунокомпетентных клеток, и где наблюдается длительное выживание трансплантатов, даже без применения иммуносупрессивной терапии. Общепризнанными иммунологически привилегированными областями являются: передняя камера глаза, полость желудочков мозга, защечный мешок хомяков, семенники.
По результатам многих исследований своеобразной биологической камерой для пересадки является передняя камера глаза (Siperstein E.R., Greer М.А., 1956; Goldberg R.C. и Knobil E., 1957; Funguist B.,1968; Мартинович П.И., с соавт., 1974), подоболочечное пространство мозга (Falconi G. и Rossi G.L., 1964) и семенники (Aron М. с соавт., 1962, 1964). В последних двух случаях, как и в передней камере глаза, доступ иммунокомпетентных клеток реципиента к аллотрансплантатам затруднен.
Более удачные результаты были получены при трансплантации гипофиза в переднюю камеру глаза и в семенник. Gardner и Hill (1935) пересаживали гипофизы 22-50-дневных мышей в семенник и получали сохранность трансплантатов до 12 недель (цит. по Е.П.Володиной). Во всех случаях опытов ткани передней доли были хорошо васкуляризированы. Возникшие структуры имели такое же строение, как в органе, расположенном на своем обычном месте, т. е. содержали такие же типы клеток. А при пересадках кусочков органа в переднюю камеру глаза кроликам и морским свинкам описали хорошую сохранность железистых клеток. В трансплантатах на 91-й день ими были обнаружены митозы, а от краев кусочков шли эпителиальные разрастания, в которых авторы наблюдали типичные железистые клетки, сохранившие обычную способность к окраске. При трансплантации гипофиза гипофизэктомированным морским свинкам в переднюю камеру глаза и под конъюнктиву обнаружили у реципиентов фолликулостимулирующий эффект. Одновременно с трансплантатами гипофиза исследовали половые, надпочечные, молочные и щитовидные железы в сроки от 3 до 13 недель с момента операции. При успешной трансплантации морские свинки были в отличном состоянии: масса их, тела увеличилась, и они имели вид здоровых животных. Гистологическое исследование трансплантатов показало наличие массивных групп эпителиальных клеток с митозами, окруженных синусоидными капиллярами. Вначале в трансплантатах преобладали базофильные аденоциты, но уже через 50 суток среди железистых клеток встречались лишь единичные хромофобные и ацидофильные аденоциты. Авторы отмечают, что только отсутствие продуцирования трансплантатами гипофиза лютеинизирующего гормона (ЛГ) послужило причиной нарушения цикличности в яичниках у самок-реципиентов. Данные других исследователей подтверждают их предположение. ЛГ, как писали об этом Green J.D. с соавт. (1949), необходим не только для лютеинизации, но и для овуляции, ибо ЛГ действует как синергист фолликулостимулирующего гормона (ФСГ). Поэтому наличие многих граафовых пузырьков в яичниках реципиентов является результатом выделения гипофизом только фолликулостимулирующего гормона; для продукции же лютеинизирующего гормона необходимо сохранение нервных связей, которые в условиях трансплантации органа оказываются нарушенными.
R.M.May (1935), трансплантируя гипофизы зародышей или новорожденных крыс и кроликов в переднюю камеру глаза взрослым животным, получил весьма показательные результаты. Передняя доля гипофиза даже на 135-й день имела нормальную величину и строение. В последующих опытах (R.M.May, 1955) автор при пересадке гипофиза новорожденных крысят гипофизэктомированным крысам получил у животных восстановление веса тела и сперматогенеза. Трансплантаты, изъятые через 5-6 мес, имели нормальное топографическое строение и расположение клеток. У некоторых самок восстанавливался эстральный цикл и наступала беременность.
В настоящее время благодаря, научным достижениям в области иммунологии и иммуноморфологии, феномен положительной регенерации пересаженных тканей аденогипофиза в передней камере глаза может быть объясним. Дело в том, что трансплантация тканей в переднюю камеру глаза -это особый случай аллотрансплантации, при котором трансплантат мало доступен воздействию Т-лимфоцитов из-за наличия гематоорганного барьера и поэтому со стороны организма реципиента длительное время отсутствует реакция отторжения трансплантата.
Мнения авторов о функции таких трансплантатов также существенно расходятся. Одними было показано, что такой аденогипофиз секретирует все гормоны (П. Н. Мартинович с соавт., 1974) или некоторые из них: тиреотропный (Martini L. с соавт., 1959), адренокортикотропный, соматотропный (Cheng СР. с соавт., 1949; Goldberg R.C. и Knobil Е., 1957), хотя и на более низком уровне, чем интактный гипофиз. По мнению Goldberg R.C. и Knobil Е. (1957), П. Н. Мартинович, Д. Павич, Н. Живкович (1974), аллотрансплантат аденогипофиза в передней камере глаза может секретировать также ФСГ и ЛГ, но большинство исследователей не придерживается этого взгляда.
Еще Gardner и Hill в 1935-36 годах (цит. по Е.П.Володиной) , производя аллотрансплантацию аденогипофиза в атрофированный семенник гипофизэктомированным мышам, отметили, что такие трансплантаты были жизнеспособны в течение 3-12 мес, восстанавливали сперматогенез у реципиентов и имели нормальную гистологическую структуру. Эти наблюдения затем были подтверждены работами R.M.May (1955), Aron М. и Petrovic А.(1962), Aron М. с соавт. (1964).
Aron М. и Petfovie А. (1962) трансплантировали в семенники гипофизарную ткань, взятую от неполовозрелых и взрослых морских свинок. По их мнению, отсутствие реакции на аллотрансплантат связано с защитным влиянием области трансплантации, как и при пересадках в переднюю камеру глаза. Однако при трансплантациях аденогипофиза в семенники лучшие результаты были получены при генетической близости донора и реципиента (Aron М. с соавт., 1962, 1964).
Дальнейшие исследования П.Н.Мартинович и Д.Павич (1960, 1974) показали иные результаты. Имплантируя переднюю долю гипофиза в камеру глаза или под капсулу почки гипофизэктомированным крысам, авторы получили восстановление функции семенников, близкое к нормальной и считают, что трансплантаты продуцируют гонадотропины. Как пишет Е.П.Володина, с результатами этого исследования согласуются данные Cutuly (1941). Автор при аутотрансплантации крысам в область турецкого седла или переднюю камеру глаза ткани гипофиза нашел, что все трансплантаты в функциональном отношении были неполноценны. Они не оказывали заметного влияния на восстановление функции щитовидной железы, но продуцировали гонадотропины и АКТГ. Гистологическое изучение трансплантатов из передней камеры глаза показало плохую их васкуляризацию, а цитологический состав был представлен преимущественно хромофобными аденоцитами, хотя были немногочисленные базо- и ацидофильные клетки. Трансплантаты, помещенные в турецкое седло, имели лучшее кровоснабжение и строение, приближающееся к норме. Среди клеток преобладали малые базофильные аденоциты, присутствовали «клетки кастрации».
Влияние консервации на жизнеспособность пересаженного гипофиза
После забора, который проводился с соблюдением правил асептики и антисептики, трансплантат аллогенного аденогипофиза помещался в стерильные пенициллиновые флакончики со стерильным раствором Евроколлинз и закрывался стерильной пробкой. В этих флаконах материал сохранялся при температуре не выше +4С в течение 24 ч до трансплантации.
Криоконсервация аденогипофиза Метод криоконсервации использовался для сохранения тканевых фрагментов аденогипофиза до операции и включал 3 этапа: 1. подготовка трансплантата к низкотемпературному хранению; 2. непосредственно низкотемпературное хранение (при -50С); 3. отмывка трансплантата от консерванта перед пересадкой.
Первый этап: гипофиз, забранный по описанной ранее методике и разделённый на фрагменты размерами до 1 мм3, промывали в холодном растворе Евроколлинз, а затем переносили в охлажденный до 4С криозащитный раствор, приготовленный на основе раствора Евроколлинз добавлением криопротектора диметилсульфоксида (ДМСО), 0,5 М сахарозы и 2% альбумина. ДМСО добавляли в раствор Евроколлинз с погружёнными в него трансплантатами аденогипофиза постепенно, для того, чтобы избежать резкой разницы осмотического давления между тканью и окружающим раствором, повышая его концентрацию на 5% через каждые 15-20 мин до конечной концентрации 15%. Через 15 минут после достижения конечной концентрации ДМСО ткань аденогипофиза извлекали из раствора, просушивали на салфетке и помещали в пластиковые пробирки. Пробирки помещали в термоизолированный пенопластовый контейнер, который помещали в морозильную камеру при -50С. Термоизоляция стенок контейнера была подобрана таким образом, чтобы максимальная скорость охлаждения пробирок не превышала 5С/мин.
Второй этап: пробирки с тканью аденогипофиза хранили в замороженном состоянии при -50С 10 суток, после чего извлекали из камеры морозильника и подготавливали к пересадке.
Третий этап: пробирки после извлечения из морозильной камеры отогревали в водяной бане с температурой воды 18-20С. Ткань гипофиза извлекали и помещали в охлажденный до 4С раствор для отмывания от криопротектора. Этот раствор состоял из раствора Евроколлинз с добавлением 0,5 М сахарозы и 5% ДМСО. Через 15-20 минут инкубации в этот раствор добавляли равное количество стандартного раствора Евроколлинз, еще через 15 мин такое разведение повторяли, и через 20 минут ткань переносили в стандартный раствор Евроколлинз, а затем - в охлажденный физиологический раствор. При таком постепенном уменьшении осмолярности окружающего раствора криопротектор вымывается из криоконсервированной ткани более плавно и с меньшем повреждением клеточных мембран.
Во всех сериях экспериментов оценка жизнеспособности трансплантата аллогенного аденогипофиза проводилась с помощью приготовления препаратов семенника с пересаженным гипофизом по стандартной методике и их гистологической окраски гематоксилин-эозином. Во второй серии опытов клеточный состав трансплантата оценивался гистохимическим методом - окраской срезов семенника с пересаженным под белочную оболочку аллогенным аденогипофизом специфическими красителями: оранжевым G - для выявления ацидофильных аденоцитов, продуцирующих соматотрофный гормон (СТГ); ШИК-реакция с тианином и альдегидфуксином - для выявления базофильных клеток аденогипофиза, продуцирующих тиреотропный гормон (ТТГ), фолликулостимулирующий гормон (ФСГ), лютеинизирующий гормон (ЛГ), адренокортикотропный гормон (АКТГ); Эритрозином - для выявления лактотропоцитов - клеток, продуцирующих про л актин. Влияние места пересадки на жизнеспособность аллогенного аденогипофиза после его тканевой трансплантации Известно несколько вариантов трансплантации гипофиза: пересадка целого органа с восстановлением питающих его сосудов; свободная пересадка тканевых фрагментов и пересадка культуры клеток. Существенную роль в приживлении и длительном функционировании тканевых и клеточных трансплантатов играет место пересадки. Свободную пересадку ткани целесообразно осуществлять в иммунологически привилегированные области: желудочки мозга, под капсулу почки, в переднюю камеру глаза, под белочную оболочку семенника, где наблюдается их длительное переживание. Но мнения разных авторов о сроках выживания таких трансплантатов существенно расходятся. Поэтому в нашей работе проводилась сравнительная оценка длительности переживания ткани аллогенного аденогипофиза, пересаженного под капсулу почки, в паренхиму семенника и под белочную оболочку семенника.
Эксперименты по изучению влияния места пересадки на жизнеспособность ткани аллогенного аденогипофиза проведены на 144 половозрелых самцах нелинейных крыс. Пересадку аллогенного аденогипофиза крысы осуществляли под капсулу почки, в паренхиму семенника и под белочную оболочку семенника по методикам, описанным в главе 2. Гистологическое исследование пересаженного аденогипофиза проводили в различные сроки (3,7,10,14 суток, 1,3,5 месяцев) после его тканевой трансплантации. В группе экспериментов по пересадке аллогенного аденогипофиза под белочную оболочку семенника максимальный срок наблюдения составил 13 месяцев.
Пересадка аллогенного аденогипофиза крысы под белочную оболочку семенника
Во второй группе экспериментов проводилась пересадка аллогенного аденогипофиза половозрелого самца крысы в паренхиму семенника другой половозрелой особи крыс мужского пола.
При пересадке аллогенного аденогипофиза в паренхиму семенника через 3 суток после операции макроскопически трансплантат определялся во всех 3 случаях. При гистологическом исследовании среди паренхимы семенника небольшие фрагменты ткани аденогипофиза, центральная часть которых с дистрофическими изменениями эпителиальных клеток вплоть до некрозов, а на периферии достаточно сохранные структуры в виде балок эпителиальных клеток. В перифокальных к трансплантату участках ткани семенника значительная воспалительная клеточная инфильтрация и просвет нескольких канальцев заполнен некротическими массами. Остальная ткань семенника без выраженных изменений. Извитые семенные канальцы хорошо сохранены, содержат свыше 5 слоев эпителиальных клеток. Сперматогенез завершается в них образованием большого количества сперматозоидов (рис. 16).
Через 7 дней после пересадки аллогенного аденогипофиза в паренхиму семенника макроскопически трансплантат определяется во всех 3 случаях. При гистологическом исследовании центральная часть трансплантата, располагающегося среди паренхимы семенника, склерозирована, тогда как на периферии определяются структуры, характерные для аденогипофиза, в виде колонок эпителиальных клеток, соседствующих с синусоидными капиллярами. Вокруг трансплантата аденогипофиза сохраняется незначительная воспалительная инфильтрация, а в прилежащих к нему извитых семенных канальцах наблюдается запустевание просвета и начальные признаки склероза. Остальная паренхима семенника хорошо сохранена. В семенных канальцах видны сперматозоиды (рис. 17). При гистологическом исследовании трансплантата аллогенного аденогипофиза, пересаженного в паренхиму семенника, через 10 дней после операции во всех 3 случаях в его периферических отделах отчетливо выявляются базофильные и ацидофильные клетки в виде трабекулярных структур, между которыми располагается строма с большим количеством синусоидных кровеносных капилляров. Центральная часть трансплантата замещена соединительной тканью. Собственная ткань семенника в перифокальных к трансплантату участках и по ходу канала, образованного при погружении фрагментов аденогипофиза в паренхиму, со склерозом и запустеванием канальцев. Признаков повреждения остальной стромы семенника не выявлено. Извитые семенные канальцы хорошо сохранены, содержат свыше 5 слоев эпителиальных клеток. Сперматогенез завершается в них образованием большого количества сперматозоидов (рис. 18).
При пересадке в паренхиму семенника аллогенного аденогипофиза через 14 дней после операции трансплантат был обнаружен во всех 3 случаях. При гистологическом исследовании фрагменты трансплантата располагаются среди паренхимы семенника и представлены неодинаковыми участками: в центральной части железистая ткань аденогипофиза замещена соединительной тканью, на периферии сохранные структуры, характерные для аденогипофиза, в виде чередования колонок базофильных и ацидофильных аденоцитов и органоспецифических синусоидных капилляров. Семенные канальцы, непосредственно прилежащие к трансплантату и располагающиеся по ходу канала, образованного при погружении фрагментов аденогипофиза, не содержат половые клетки, а просвет их заполнен гомогенной эозинофильной белковой массой. Остальная паренхима семенника не изменена. В семенных канальцах видны сперматозоиды (рис.19). При пересадке аллогенного аденогипофиза в паренхиму семенника через 7 месяц после операции трансплантат определялся так же во всех 3 случаях. При его гистологическом исследовании базофильные и ацидофильные клетки в виде трабекулярных структур располагались преимущественно по периферии трансплантата. В центральной части пересаженных фрагментов ткани аденогипофиза были обнаружены выраженные явления склероза стромы с запустевшими синусоидами. В прилежащих к трансплантату семенных канальцах наблюдается запустевание и склерозирование просвета. В остальной паренхиме семенника не выявлены какие-либо изменения, канальцы содержат свыше 5 слоев эпителиальных клеток. Сперматогенез завершается в них образованием сперматозоидов (рис.20).
Через 3 месяца после пересадки ткани аллогенного аденогипофиза в паренхиму семенника трансплантат макроскопически определялся во всех 3 случаях. При гистологическом исследовании располагающиеся в окружении семенных канальцев тканевые фрагменты представлены колонками аденоцитов, чередующиеся с органоспецифическими синусоидными капиллярами на периферии, и участками склероза в центре (рис.21).
В паренхиме семенника наблюдается картина, аналогичная предыдущим срокам, то есть повреждение прилежащих к трансплантату канальцев, и сохранная структура остальной части семенника.
Влияние тепловой ишемии на жизнеспособность аллогенного аденогипофиза крысы после его тканевой трансплантации в семенник
При гистологическом исследовании трансплантата аллогенного аденогипофиза, пересаженного под белочную оболочку семенника, через 13 месяцев после операции он так же был обнаружен во всех 3 случаях и представлял собой морфологические структуры, характерные для аденогипофиза: колонки базофильных и ацидофильных аденоцитов, оплетаемые большим количеством синусоидных кровеносных капилляров. В центре трансплантата наблюдается разрастание рубцовой ткани с небольшим количеством запустевших кровеносных сосудов (рис.32). Несколько прилежащих к трансплантату извитых семенных канальцев повреждены, их просвет запустевший или склерозирован. Остальные извитые семенные канальцы хорошо сохранены, содержат свыше 5 слоев эпителиальных клеток. Сперматогенез завершается в них образованием сперматозоидов.
Таким образом, после пересадки аллогенного аденогипофиза под фиброзную капсулу почки трансплантат в 16 из 21 случая оказался жизнеспособным. В 5 случаях трансплантат аллогенного аденогипофиза был замещен соединительной тканью: через 3 месяца в 2 из 3 опытов и во всех 3 опытах через 5 месяцев. Во всех 16 случаях, когда пересаженный аденогипофиз оказался жизнеспособным, при гистологическом исследовании трансплантат располагался сразу под капсулой почки и представлял скопление эпителиальных клеток: базофильньтх и ацидофильных, в виде трабекулярных структур или неупорядоченных комплексов, разделённых скудной стромой с большим количеством синусоидных органоспецифических капилляров. Такая картина наблюдалась преимущественно в периферических участках трансплантата. В его центральной части отмечалось разрастание рубцовой ткани различной степени зрелости. В ряде случаев вокруг в прилежащих к трансплантату участках паренхимы почки была обнаружена воспалительная инфильтрация. Остальная паренхима почки - без видимых повреждений.
Из этих данных следует, что при пересадке ткани аллогенного аденогипофиза под капсулу почки наблюдается различная морфологическая картина трансплантата в одни и те же сроки экспериментов — как его приживление, так и отторжение. При приживлении трансплантата во все сроки наблюдения строение его периферических участков сравнимо с интактным аденогипофизом. Лимфоидная воспалительная инфильтрация как на границе с тканью почки, так и в паренхиме аденогипофиза не наблюдалась. При таком временном приживлении до 2-3 месяцев отличий в формировании новой структуры аденогипофиза не обнаруживалось. Однако в некоторых случаях к этому сроку трансплантат обильно инфильтрируется лимфоцитами, ткань гибнет с формированием очагов склероза, сохраняются лишь отдельные трабекулы и рассеянные клетки. При пересадке аденогипофиза как в паренхиму семенника, так и под белочную оболочку фрагменты тканевого трансплантата аллогенного аденогипофиза обнаружены во все сроки наблюдения во всех 51 случае. При гистологическом исследовании на 3 сутки центральная часть трансплантата подвергается некрозу, а жизнеспособные клетки занимают его периферическую область. Репаративные процессы протекают быстро: к 7 суткам некротические участки рассасываются и замещаются рыхлой соединительной тканью, а к 10 суткам - рубцовой. К 14 суткам на периферии трансплантата аденоциты формируют тяжи, которые оплетаются синусоидными кровеносными капиллярами, и трансплантат приобретает органоидную структуру, т.е. в нем к этому сроку завершаются все репаративные процессы. Через 1,3 и 5 месяцев гистологическая картина тканевых трансплантатов аденогипофиза оставалась аналогичной 14 суткам: жизнеспособные клетки в виде колонок аденоцитов, тесно соседствующих с синусоидными капиллярами, располагаются на периферии трансплантата, в то время как его центральная часть замещена соединительнотканным рубцом. Учитывая вышеизложенное, срок 14 суток выбран нами для выведения животных из эксперимента в других сериях опытов как прогностический показатель приживления ткани аденогипофиза.
Различная гистологическая картина наблюдалась только в ткани семенника. Так, при пересадке в паравазальную клетчаточную щель под белочной оболочкой семенника, в примыкающих к трансплантату извитых канальцах структура сохранена, в них активно протекает сперматогенез с образованием сперматозоидов, или изредка лишь в одном слое канальцев, непосредственно окружающих аденогипофиз, наблюдается картина повреждения сперматогенного эпителия, проявляющаяся запустеванием просвета канальцев или их склерозом. Однако это не оказывает влияния на хорошую сохранность структуры извитых канальцев в других отделах семенника. Совсем иная картина обнаруживается при пересадке в паренхиму семенника, когда наблюдается повреждения большого количества извитых канальцев, как вокруг трансплантата, так и по ходу туннеля, созданного при его проведении в глубину семенника.
Таким образом, при пересадке ткани аллогенного аденогипофиза в семенник, как в паренхиму, так и под белочную оболочку наблюдается выживание трансплантатов во всех случаях во все сроки наблюдения (максимальный срок при пересадке под белочную оболочку семенника — 13 месяцев). Различным является степень воздействия на паренхиму семенника: минимальная ее травматизация при трансплантации в паравазальную клетчаточную щель под белочной оболочкой семенника, и более выраженное повреждение паренхимы семенника при пересадке в его глубину.
![Сравнительное исследование влияния на ткани зуба и пародонта пломбировочных материалов для устранения дефектов корня (экспериментальное исследование) [Электронный ресурс]](/i/i/4287/203356.png "Сравнительное исследование влияния на ткани зуба и пародонта пломбировочных материалов для устранения дефектов корня (экспериментальное исследование) [Электронный ресурс] Бойков Михаил Игоревич")
