Введение к работе
Актуальность темы. Вирус гриппа птиц относится к роду Influenzavirus А семейства Orthomyxoviridae. Различные штаммы могут существенно различаться по вирулентности, биологические свойства вируса гриппа А разнообразны. Высоковирулентные штаммы способны вызывать острую контагиозную болезнь со смертностью до 100%, сопровождаемую системным поражением различных тканей и органов. Высокопатогенный грипп птиц включен в перечень карантинных и особо опасных болезней животных, способен к эпизоотическому распространению (Сюрин В.Н., 1998, Loeffelholz M.J., 2010, Lupiani B., 2009, Swayne D., 2000).
Низковирулентные штаммы, как правило, не вызывают клинически выраженных признаков болезни и патологических изменений в органах, однако могут существенно изменять свои вирулентные свойства в зависимости от целого ряда факторов (Swayne D., 1998, Werner O., 2006).
За последнее десятилетие эпизоотическая ситуация по высокопатогенному гриппу птиц в мире значительно изменилась (Власов Н.А., 2010, Alexander D., 2006, 2007, Capua I., 2007, Senne D.A., 2006, Stegeman A., 2004). Повышенное внимание ветеринарных служб вызвано распространением вируса гриппа А/H5N1, сформировавшегося в странах Азии и вызвавшего эпизоотию среди диких и сельскохозяйственных птиц (Alexander D., 2007, Chen H., 2005, Shortridge K.F., 1998, Xu X., 1999). Первые случаи заболевания на территории Российской Федерации были зарегистрированы в июне 2005 г. в Западной Сибири, затем очаги болезни возникали с различной периодичностью в других федеральных округах на протяжении 2005 – 2010гг. (А.В. Андриясов, 2007, Власов Н.А., 2010, Львов Д.К., 2006-2008, Чвала И.А., 2007).
Существенную угрозу для птицеводства Российской Федерации также представляет и вирус высокопатогенного гриппа подтипа Н7. За последнее десятилетие он вызвал вспышки болезни в странах Европы (Италия, 1999-2000гг., Голландия, Бельгия и Германия, 2003г., Англия, 2008г.), Азии (Корея, 2005г.), а также в Чили (2002г.) и Канаде (2003 и 2007гг.). В результате было потеряно около 60 миллионов голов сельскохозяйственной птицы, нанесен значимый урон популяциям диких птиц (Aamir U.B., 2009, Alexander D.J., 2007, Capua I., 2003, Elbers A.R. 2004, 2005, Pasick J., 2005, Stegeman A., 2004).
Своевременная постановка диагноза является залогом последующего выполнения ветеринарно-санитарных мероприятий. В комплексе диагностических мероприятий решающее значение имеет лабораторная диагностика гриппа птиц. Существенное влияние на результаты лабораторных исследований может оказать качество и скорость выполнения преаналитических (долабораторных) мероприятий, которые, как правило, осуществляются в полевых условиях и менее всего стандартизированы. По различным оценкам до 80% ошибок при постановке диагноза приходится на преаналитический этап исследований (Киршина А.А., 2007).
Таким образом, очевидна необходимость изучения особенностей высокопатогенного и низкопатогенного гриппа птиц, вызванного актуальными эпизоотическими штаммами вируса. Важнейшими его результатами являются оптимальный выбор органов разных видов птиц, содержащих наибольшее количество вируса и пригодных для дальнейших лабораторных исследований, а также описание клинических признаков и патологоанатомических изменений у разных видов птиц.
Цель и задачи исследований. Цель работы - изучить особенности гриппа, вызванного эпизоотическими изолятами вируса у разных видов птиц, и оптимизировать преаналитические мероприятия для постановки предварительного диагноза в полевых условиях.
Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:
1. Описать особенности высокопатогенного гриппа A/H5N1 при заражении цыплят различными эпизоотическими изолятами вируса.
2. Изучить особенности высокопатогенного и низкопатогенного гриппа A/H7N1 при заражении цыплят.
3. Воспроизвести и изучить особенности гриппа у разных видов диких и сельскохозяйственных водоплавающих птиц (разновозрастные мускусные утки, кряквы, серые гуси), вызванного высоковирулентным вирусом A/H5N1.
4. Оценить возможность применения коммерческих экспресс-тестов для выявления вируса гриппа птиц в пробах биоматериала.
5. Разработать набор для выявления антител к вирусам ньюкаслской болезни и гриппа птиц подтипов Н5 и Н7 в реакции торможения гемагглютинации.
Научная новизна. Впервые представлены экспериментальные данные по изучению особенностей высококопатогенного гриппа A/H5N1 у разных видов диких и сельскохозяйственных птиц.
Впервые воспроизведена и изучена инфекция гриппа A/H7N1 у цыплят, вызванная высоко- и низковирулентными штаммами вируса.
Впервые проведено сравнительное изучение разрешенных к применению в Российской Федерации коммерческих экспресс-тестов для обнаружения вируса гриппа в пробах биоматериала: Flu Detect, AIV Ag, Н5 AIV Ag, H7 AIV Ag, H9 AIV Ag.
Разработан «Набор для выявления антител к вирусам ньюкаслской болезни и гриппа птиц подтипов Н5 и Н7 в реакции торможения гемагглютинации».
Практическая значимость. На основании проведенных исследований разработаны и утверждены ФГУ «ВНИИЗЖ»: «Методические рекомендации по определению индекса патогенности штаммов вируса гриппа А птиц», «Методические рекомендации по определению нейраминидазного подтипа вируса ГП и антител к вирусу ГП в реакции ингибиции нейраминидазной активности», «Методические рекомендации по идентификации вируса гриппа птиц в реакции торможения гемагглютинации».
Разработаны и утверждены Россельхознадзором «Методические рекомендации по отбору, хранению и транспортировке биологического материала при подозрении на грипп А птиц».
Материалы исследований вошли в СТО ФГУ «ВНИИЗЖ» 00495527-0161-2010 «Набор для выявления антител к вирусам ньюкаслской болезни и гриппа птиц подтипов Н5 и Н7 в реакции торможения гемагглютинации».
Апробация результатов. Результаты исследований по теме диссертации доложены и обсуждены на Международной научной конференции «Грипп птиц 2009: Грипп птиц и здоровье человека» (Великобритания, Оксфорд, 2009), Международной научно-практической конференции «Современные системы биобезопасности и биозащиты в ветеринарной медицине» (Феодосия, Украина, 2010), Международной научно-практической конференции молодых ученых «Достижения молодых ученых в ветеринарную практику», посвященной 30-летию создания СМУ ФГУ «ВНИИЗЖ» (Россия, Владимир, 2010) и на заседаниях учёного совета ФГУ «ВНИИЗЖ» в 2008-2010 гг.
Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Отдельные этапы выполнены совместно с сотрудниками ФГУ «ВНИИЗЖ» Чвала И.А., Бабиным Ю.Ю., Циванюк М.А., Сарбасовым А.Б., за что автор выражает им искреннюю благодарность.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе 7 работ опубликовано в изданиях, включенных в Перечень ведущих периодических изданий ВАК РФ.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 185 листах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, данные о практическом использовании научных результатов, список использованной литературы (232 источника, в том числе 182 зарубежных автора), приложения. Работа иллюстрирована 29 таблицами и 37 рисунками.
