Введение к работе
Актуальность темы. Одним из факторов, ухудшающих качество молока и снижающих продуктивность молочного скотоводства, является мастит коров. Несмотря на проводимые профилактические мероприятия, данная патология отмечается у 60 - 75 % коров (Париков В.А., 1990; Батраков А.Я., 2001; Андреев А.В., 2003; Васильев В.Г., 2003; Кузьмин Г.Н., 2004; Архипов А.А., 2008; Акназаров Б.К., 2009; Sartory R., 2002; Tanja Lehtolainen 2004; Maarit Haverti 2008; Submer I., Valerian F., 2010).
Мастит возникает в результате сочетанного воздействия на организм микробного и предрасполагающих факторов, главнейшими из которых являются, нарушение правил кормления, содержания и доения коров, неудовлетворительное проведение на фермах профилактических мероприятий, нарушение техники доения (недодаивание или передой, перевод на машинное доение неподобранного стада коров; неисправные доильные аппараты и установки, не обеспечивающие необходимый уровень вакуума, изношенная резина доильных стаканов и т.д.). Это приводит к раздражению, травмированию слизистой оболочки сосков и паренхимы вымени, а проникновение в поврежденные ткани вымени различных видов микроорганизмов вызывает ее воспаление (Болгов А.Е., Карманов Е.П., Муравья Л.П., 1996; Рубцов В.И., 2006; Васильев В.В., 2008; Горлов И.Ф., 2008; Chaves C.J., Tirante L., Pol M., 2001). Данный процесс вызывают микроорганизмы рода Streptococcus, Staphylococcus, Pseudomonas, Corynebacterium, Bacillus, также представители сем. Enterobacteriaceae, дрожжеподобные грибы и т.д. ( Ивашура А.И., Карташова В.М., 1988; Батраков А.Я., 2001; Erskine R.J. et al., 2002 ).
Развитие современной микробиологии неразрывно связано с совершенствованием методов идентификации патогенных микроорганизмов. Успехи в этой области, достигнутые в последние десятилетия, обеспечены в первую очередь фундаментальными исследованиями в области химии, иммунологии и генетики. На смену серологическим методам, выявляющим специфические антитела и антигены, приходят методы, позволяющие проводить исследование генетического аппарата микроорганизмов. Использование молекуляpно-генетических методов объясняется необходимостью расшифровки последовательностей генов-вирулентности, кодирующих факторы-патогенности с последующим созданием на их основе перспективных методов внутривидовой идентификации патогенных стрептококков (Гинцбург А.Л., 1998; Бондаренко В.М., 1999; Дмитриев А.В., 2004).
Очевидно, что изучение особенностей организации генома патогенных стрептококков и разработка на этой основе комплекса стандартизированных молекулярных методов может лечь в основу их комплексной диагностики, дать более полную картину вирулентных свойств и помочь усовершенствовать способы лечения и профилактики стрептококкозов.
Учитывая вышеизложенное цель работы: провести молекулярно-генетический анализ патогенных стрептококков, возбудителей мастита коров и определить антибактериальную эффективность препарата «Тимукотин».
Задачи исследований:
Провести анализ заболеваемости коров маститом в хозяйствах Ленинградской области;
Изучить видовой состав, морфологические и культурально-биохимические свойства патогенных микроорганизмов;
Подобрать праймеры, изучить распространенность генов вирулентности cfb, bac, scpB, lmb, cylE и определить гетерогенность популяции стрептококков группы В, выделенных от коров больных маститом;
На клиническом материале апробировать метод ПЦР – для экспресс-диагностики S.agalactiae;
Определить антимикробную активность препарата «Тимукотин» в отношении клинических изолятов патогенных стрептококков.
Научная новизна: Впервые проведено исследование клинических изолятов Streptococcus agalactiae, выделенных от больных маститом коров в хозяйствах Ленинградской области, на наличие генов-вирулентности (cfb, bac, scpB, lmb, cylE). Получены новые данные о гетерогенности популяции данного возбудителя на территории Ленинградской области. Определена антимикробная активность препарата «Тимукотин» в отношении клинических изолятов патогенных стрептококков и эффективность при лечении коров больных маститом кокковой этиологии.
Практическая значимость исследований: Предложенный метод экспресс-диагностики мастита коров стрептококковой этиологии с помощью ПЦР, основанной на использовании в качестве специфических маркеров сконструированные праймеры на гены-вирулентности cfb и cylE, позволяет ветеринарным специалистам в короткие сроки определить спектр выделяемой микрофлоры. Полученные данные вошли в методические рекомендации по лабораторной диагностике стрептококков (одобрены и утверждены научным координационным Советом по животноводству и ветеринарии Северо-Западного научно-методического центра Россельхозакадемии). Результаты производственных испытаний нового антибактериального препарата «Тимукотин» были использованы фирмой-производителем ООО «НВЦ Агроветзащита С.-П.» (ООО «Ареал - Медикал») для расширения инструкции по применению препарата. Основные положения диссертации используются в качестве информационного материала в учебном процессе курса «Ветеринарная микробиологии и иммунология» на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии СПбГАВМ.
Основные положения, выносимые на защиту:
- Молекулярно-генетический анализ патогенных стрептококков, выделенных от больных маститом коров в хозяйствах Ленинградской области;
- Антимикробная активность препарата «Тимукотин» в отношении клинических изолятов патогенных стрептококков и при лечении коров больных маститом кокковой этиологии.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на конференции профессорско-преподавательсвого состава СПбГАВМ (Санкт-Петербург, 2008-2010), на 64-й научной конференции молодых ученых и студентов СПбГАВМ (Санкт-Петербург, 2009); на международной конференции посвященной 80-летию Самарской НИВС Россельхозакадемии (Самара, 2009); на международной научно-практической конференции, посвященной 90-летию кафедры органической и биологической химии СПбГАВМ (Санкт-Петербург, 2009); на научно-практической конференции, посвященной 80-летию Вятской государственной сельскохозяйственной академии и 45-летию подготовки биологов-охотоведов (Вятка, 2010); на международной научно-практической конференции «Ветеринарная медицина-теория, практика, обучение» (Санкт-Петербург, 2010).
Проведено производственное испытание применения препарата «Тимукотин» в 2-х хозяйствах Ленинградской области. От ветеринарной службы хозяйств получены акты, подтверждающие его эффективность.
