Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 9
1.1 Зубосохраняющие биотехнологии 9
1.2 Остеопластические материалы 14
1.3 Метод направленной регенерации костной ткани и его применение в стоматологии 22
CLASS Глава 2. Материалы и методы исследования 2 CLASS 8
2.1 Разработка новой резорбируемой биокомпозиционной мембраны «Диплен ГАМ» 28
2.2. Методы исследования биоинертности мембраны «Диплен ГАМ».. 29
2.3 Материалы и методы экспериментального исследования 31
2.4 Методы статистического анализа 35
2.5 Материалы и методы клинико-рентгенологического исследования. 37
2.6 Лазерная допплеровская флоуметрия 42
CLASS Глава 3. Результаты собственных экспериментальных исследований 5 CLASS 0
3.1 Результаты исследования биоинертности мембраны «Диплен ГАМ» 50
3.2 Результаты экспериментальных исследований 51
3.3 Результаты статистического анализа эксперимента 78
CLASS Глава 4. Результаты собственных клинико-ренгенологических исследований. Клинические примеры 8 CLASS 7
Глава 5. Результаты исследования микроциркуляции в области операционного поля путем лазерной допплеровской флоуметрии. 104
Заключение (Обсуждение результатов исследований) 118
Выводы 133
Практические рекомендации 134
Список литературы 135
Приложения 151
- Зубосохраняющие биотехнологии
- Разработка новой резорбируемой биокомпозиционной мембраны «Диплен ГАМ»
- Методы исследования биоинертности мембраны «Диплен ГАМ»..
- Результаты исследования биоинертности мембраны «Диплен ГАМ»
Введение к работе
Усовершенствование методов эндодонтического и хирургического
лечения одонтогенных периапикальных воспалительных процессов привело
к значительному снижению показаний для удаления причинных зубов
> (Боровский Е.В. 1997, 1999; Григорьянц Л.А. и соавт 2002; Митронин А.В.,
2005).
Зубосохраняющие операции такие как: резекция верхушки корня, гемисекция, коронарно-радикулярное разделение, премоляризация, ампутация корня, эндодонто-эндооссальная (трансдентальная) имплантация, цистотомия и цистэктомия получили новое развитие как одно из приоритетных направлений в амбулаторно-поликлинической хирургической стоматологии (Робустова Т.Г. и соавт., 2006; Дивини Т.А, 2005; Sailer H.F., Pajarola G.F., 1999).
Однако, неизбежное нарушение целостности кости в области хирургического вмешательства нередко сопряжено с длительным заживлением, исходом которого становится неполное и /или неполноценное восстановление костной ткани (Ефимов Ю.В., 1993; Лукиных Л.М., Лившиц Ю.Н., 1999).
Оптимизация процессов репаративной регенерации костной ткани является одной из важнейших проблем реконструктивной хирургии, в частности, в челюстно-лицевой области. При этом активно используются костнопластические материалы различного происхождения - алло-, ксено- и синтетические аналоги минерального и органического компонентов кости (Агапов B.C. и соавт., 1998; Абу Бакер Кефах, 2001; Дробышев А.Ю., 2002; Белозёров М.Н., 2003; Панин A.M., 2004).
В тоже время не всегда возможно надежно фиксировать остеопластические материалы в костной полости, что нередко ведет к
4 инфицированию костной раны, результатом которого является образование мягкотканого регенерата. Именно поэтому вопрос о средствах направленной тканевой регенерации (мембранах) сохраняет свою актуальность (Грудянов А.И. и соавт., 2003).
На сегодняшний день существует множество мембран, отличающихся по структуре и назначению, однако, одни из них неэффективны в инфицированных тканях, другие технически сложны или экономически малодоступны при использовании, третьи предполагают хирургические вмешательства, по их извлечению (Оразвалиев А.И., Лисная О.Н., 2004).
Исходя из вышеизложенного, представляется необходимым и актуальным разработка биосовместимой резорбируемой мембраны с повышенной адгезией к костной ткани, что определило цель и задачи нашего исследования.
Цель исследования
Повышение эффективности лечения больных с послеоперационными дефектами челюстей путем разработки и клинико-лабораторного обоснования применения резорбируемой биокомпозиционной мембраны «Диплен ГАМ».
Задачи исследования
Разработать и провести токсикологическое исследование резорбируемой биокомпозиционной мембраны «Диплен ГАМ».
Изучить в эксперименте in vivo на экспериментальных животных остеопластические свойства биокомпозиционной мембраны «Диплен ГАМ».
Апробировать биокомпозиционную мембрану «Диплен ГАМ» в клинике при лечении пациентов с интраоперационными дефектами челюстных костей.
5 4. Дать практические рекомендации по применению резорбируемой биокомпозиционной мембраны «Диплен ГАМ» в стоматологической практике при закрытии интраоперационных дефектов кости.
Научная новизна
Разработан способ замещения костных дефектов челюстей с применением резорбируемой биокомпозиционной мембраны «Диплен ГАМ» (Патент РФ № 2276587).
Впервые в эксперименте in vivo на экспериментальных животных проведено гистологическое и гистохимическое исследование остеопластических свойств биокомпозиционной мембраны «Диплен ГАМ».
Впервые изучено влияние биокомпозиционной мембраны «Диплен ГАМ» на репаративную регенерацию, исходя из клинических данных, характеризующих стадии заживления костной раны, при их сопоставлении с рентгенологическими признаками течения указанного процесса в челюстных костях.
Впервые установлено, что при использовании биокомпозиционной мембраны «Диплен-ГАМ» при закрытии интраоперационных дефектов челюстей стабилизация микроциркуляторных параметров наступает через 6 месяцев, что свидетельствует о значительном ускорении восстановления костной ткани в зоне дефекта (в отличие от 12-14 месяцев без применения мембраны).
Практическая значимость
Разработанная в результате проведенных экспериментальных исследований новая биокомпозиционная мембрана «Диплен ГАМ» помимо барьерных свойств обладает повышенной адгезионной способностью к костной ткани. Указанная характеристика расширяет возможности использования данной мембраны в зубосохраняющих биотехнологиях.
Предложенная методика применения новой биокомпозиционной мембраны «Диплен ГАМ» повышает эффективность хирургических вмешательств на костях челюстей, проводимых в рамках зубосохраняющих биотехнологий.
Внедрение результатов исследования в практику
Результаты настоящего исследования используются в учебном процессе кафедры стоматологии общей практики и подготовки зубных техников ФПКС МГМСУ на лекциях, семинарах и практических занятиях интернами, ординаторами и врачами-стоматологами практического здравоохранения на курсах усовершенствования факультетов последипломного образования, в углубленных исследованиях, проводимых на кафедре по изучению вопросов регенерации костной ткани для повышения эффективности проведения зубосохраняющих операций, внедрены в клиническую практику Лечебно-профилактического стоматологического центра МГМСУ.
Диссертационное исследование выполнено по проблеме 30.02 «Вопросы этиологии, патогенеза, профилактики и лечения кариеса зубов и его осложнений», включено в план НИР ГОУ ВПО «МГМСУ РОСЗДРАВА» номер Государственной регистрация №01200700513.
Основные положения, выносимые на защиту
Разработанная биокомпозиционная мембрана «Диплен ГАМ» является нетоксичным стоматологическим материалом, которая надежно изолирует послеоперационный дефект челюстной кости от микробной инвазии, удерживает остеопластические препараты в костной ране, препятствует прорастанию эпителия в полость дефекта кости и обладает выраженными остеопластическими свойствами.
Клинико-рентгенологические и допплерографические характеристики восстановления костной ткани доказывают высокую эффективность
7 использования резорбируемой биокомпозиционной мембраны «Диплен ГАМ» для направленной регенерации костной ткани в зубосохраняющих биотехнологиях.
Личное участие автора в разработке проблемы
При непосредственном участии диссертанта разработана новая резорбируемая биокомпозиционная мембрана «Диплен ГАМ» для направленной регенерации костной ткани. Автором лично проведено комплексное - экспериментальное и клиническое исследование мембраны. Автором лично обследовано 256 пациентов и проведено лечение 93 пациентов с послеоперационными костными дефектами челюстных костей.
Апробация диссертации
Основные положения диссертации доложены и обсуждены на научной конференции молодых ученых по вопросам хирургической стоматологии, посвященной 122-летию со дня рождения Евдокимова А.И. (-М., 2005); научной конференции молодых ученых по вопросам хирургической стоматологии, посвященной профессору Рудько В.Ф. (-М., 2006); XXIX итоговой конференции молодых ученых МГМСУ (-М.,2007); совместном заседании кафедры стоматологии общей практики и подготовки зубных техников ФПКС, кафедры факультетской хирургической стоматологии и имплантологии МГМСУ (26 января 2007, протокол №18).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ, из них 1 в журнале из перечня ВАК РФ, получен патент РФ на изобретение № 2276587 от 20.05.06.
8 Объем и структура диссертации
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, глав «Материалы и методы исследования», «Результаты собственных экспериментальных и клинических исследований», заключения; выводов, практических рекомендаций, списка цитируемой литературы и приложений. Работа иллюстрирована 9 таблицами, 85 рисунками. 129 страниц и 156 источников 53 отечественных и 103 зарубежных.
Зубосохраняющие биотехнологии
Многие десятилетия терапевтическая стоматология занимается поиском щадящих и эффективных методов лечения околоверхушечных хронических очагов воспаления. Консервативное лечение хронического верхушечного периодонтита в последнее время весьма эффективно (Иванов B.C. и соавт. 1984; Максимовский Ю.М., 2003). Еще Briant С. и Polewitzvi К. (1930) писали, что оздоровление периапикальных очагов консервативным путем дало несравненно лучшие результаты, чем удаление зубов. Можно с уверенностью утверждать, что оснащенность современного стоматолога позволяет сохранить зуб как полноценно функционирующий орган на многие годы.
Однако проблема лечения верхушечного периодонтита является одной из важных и не полностью решенных задач стоматологии (Григорянц Л.А. 2000). Это связано со значительной распространенностью этого заболевания, сложностью и трудоемкостью врачебных манипуляций, что обусловлено анатомо-топографическими особенностями строения зуба и периодонта.
По данным литературы у 50% пациентов в возрасте до 35 лет удаление зубов связано с осложнениями кариеса. У лиц старшего возраста показатель удаления зубов по этой причине доходит до 80% (Боровский Е.В. 1997, 1999; Максимовский IO.M. 1996). Это обусловлено значительным количеством случаев (68% и более) некачественной обтурации каналов корней зубов и неадекватным лечением пульпитов и периодонтитов, приводящих к нередким осложнениям (перфорации и истончение стенок каналов корней во время эндодонтического лечения, выведение пломбировочного материала за пределы верхушки корня, поломка эндодонтического инструментария в канале корня, резорбция верхушечной части корня зуба, лизис околоверхушечных тканей и т.д.).
Объектом вмешательства при лечении хронического периапикального периодонтита являются: корневой канал с его многочисленными разветвлениями, дентинные канальцы с обильной микрофлорой, а также ткань периодонта, находящаяся в состоянии хронического воспаления. Консервативный метод лечения должен обеспечить купирование воспалительного процесса в околоверхушечных тканях, способствовать восстановлению функции периодонта и, наконец, исключить возможность инфекционно-токсического и аллергического влияния околоверхушечного патологического очага на организм (Овруцкий Г.Д. и соавт. 1999).
Успех эндодонтического лечения зависит от технологии препарирования стенок канала корня, основанный на применении современных эндодонтических инструментов, классификация и практическое использование которых предложены Жоховой Н.С., Макеевой И.М. (1996), Боровским Е.В. (1997).
Эффективность эндодонтического лечения хронических периапнкальных периодонтитов определяется в сроки до 2-х лет. Оценка эффективности эндодонтического лечения - вопрос довольно сложный, так как результаты лечения следует проводить с учетом диагноза, применяемых лекарственных препаратов, выбора пломбировочного материала и степени заполнения корневого канала (Боровский Е.В. 1999). При этом следует придерживаться общепризнанного критерия - степень восстановление костной ткани в периапикалыюй области определяет качество проведенного лечения.
Актуальной также является проблема перепломбировки канала в связи с наличием хронического очага в периапикальных тканях при рентгенологически полноценной обтурации канала. Распломбирование корневого канала довольно сложная задача даже для опытного стоматолога. Грозным осложнением, возникающим во время проведения эндодонтического вмешательства и значительно затрудняющим, а порой делающим невозможными дальнейшие манипуляции в канале, является наличие фрагмента сломанного инструмента. Для повторного эндодонтического вмешательства не вызывает сомнений эффективность применения эндодонтической системы ультразвукового стоматологического аппарата Пьезон Мастер (Швеция). Совсем недавно эндодонтическая система была дополнена насадками, специально предназначенными для удаления фрагмента сломанного инструмента (Барер Г.М., Овчинникова И.А. и др. 2003).
Если говорить об общей ситуации в эндодонтическом лечении периодонтитов, то она неблагоприятная, что подтверждается исследованиями последних лет (Шаргородский А.Г., 1990; Рогинский В.В. и др. 1996), указывающими на значительный рост острых воспалительных процессов в челюстно-лицевой области одонтогенного происхождения. Особого внимания заслуживает высказывание, что причиной флегмон в 98-99% случаев служат не леченые и плохо леченые зубы с хроническим периодонтитом (Бажанов Н.Н., 1996).
Несмотря на значительные успехи дентальной имплантологии, преимущество сохранения естественных зубов, вовлеченных в воспалительные процессы околокорневых тканей, не вызывает сомнений. Опыт свидетельствует, что сохранение таких зубов целесообразно как с точки зрения перспектив результатов лечения, качества функционирования сохранившихся зубов, так и с экономической точки зрения.
Разработка новой резорбируемой биокомпозиционной мембраны «Диплен ГАМ»
Требования предъявляемые к современным средствам направленной тканевой регенерации, а именно: биологическая безопасность субстрата мембран, достаточная их резистентность к агрессивным факторам тканевой среды, надежность методики и технических средств, обеспечивающих фиксацию мембран in situ, микробонепроницаемость, остеопластнчность, были нами положены в основу разработки новой резорбируемой биокомпозиционной мембраны «Диплен ГАМ». Разработки проводились совместно с фирмой «Норд-Ост» Москва. В качестве основы мембраны мы решили использовать адгезионную стоматологическую пленку «Диплен-Дента».
Преилгущество данной пленки состоит в надежной ее фиксации, как на подвижной слизистой оболочке рта так и на кости. Что происходит за счет сил поверхностного натяжения. Увеличение адгезии, стабилизация ренее используемых лекарственных препаратов, пролонгирование их действия обеспечиваемое за счет содержания сополимера винилпирролидона с вшшлацета-том в гидрофильном слое пленки в соотношении 90:10. Говорит о возможности введения в пленку «Диплен Дента» необходимой для решения поставленных перед нами задач остеопластической композиции. Для проявления максимальной активности препарата необходимо определенное кислотно-основное равновесие (6-9), которое было достипгуто путем введения моноэта-ноламина в состав пленки.
Для предотвращения самопроизвольного расслаивания пленки в нее был введен дополнительный биполярный компонент, полярная гидрофильная часть молекулы которого погружена в гидрофильный слой, а неполярная гидрофобная - в гидрофобный. Основным компонентом гидрофильного слоя был выбран поли-(бэта-оксиэтил)-метакрилат, пщрофобный же слой состоит из пластифицированного полившшлбутираля.
В качестве остеопластческой композиции мы использовали гидрокси-аппатит и трикальцийфосфат которые являются остеокондукторами и обладают сорбционными свойствами к костному морфогенетическому белку, играющему значительную, роль в регенерации костной ткани.
Учитывая резорбционные свойства гидрофильного слоя исходного материала (отработанные экспертиментальпо) и известную терапевтическую активность пщрокснаппатита, четырнадцать суток, что не достаточно для обеспечения искомого эффекта, мы решили ввести остеопластическую композицию, как в гидрофильный, так и в гидрофобные слои. Увеличив тем самым терапевтический эффект препарата.
Для обеспечения необходимой жесткости мембраны, мы снизили количество пластификатора в гидрофильном слое на 50% от исходного материала.
Все изменения, необходимость их введения и эффективность были отработанны экспериментально.
Результатом данной разработки явилось получение патента РФ на способ лечения костных дефектов челюстей и средства для его реализации (Приложение 1)
Изучение биоинертности биокомпозиционной мембраны «Диплен ГАМ» проводилось совместно с ФГУ Всероссийский Научно-Исследовательский и Испытательный Институт Медицинской Техники Росз-дравнадзора Ил по токсилогическим испытаниям медицинских изделий. Испытания проводились в соответствии с документами: Стандарты серии ГОСТ Р ИСО 10993"Оценка биологического действия медицинских изделий:" "Ч. 1. Оценка и исследования."
Исследование изделий, взаимодействующих с кровью." "ЧАИсследование раздражающего и сенсибилизирующего действия." "4.11 .Исследование общетоксического действия." "Ч.12.Приготовление проб и стандартных образцов."
ГОСТ 31214-2003 "Изделия медицинские. Требования к образцам и документации, представляемым на токсикологические, санитарно-химические испытания, испытания на стерильность и пирогенность" "Сборник руководящих методических материалов по токсиколого-гигиеническим исследованиям полимерных материалов и изделий на их основе медицинского назначения", МЗ СССР, 1987.
Изучение подострой токсичности проводили в условиях многократного внутри-брюшинного введения вытяжки из пленки белым мышам. Оценивалось изменения внешнего вида, поведения, поедаемости корма, двигательной активности, смерть животного. При выведении из эксперимента у животных, макро и микроскопически определяли патологические изменения внутренних органов и тканей.
Гемолитическое действие биокомпозиционной мембраны «Диплен ГАМ» изучалось «in vitro» путем смешивания вытяжки из образцов с изолированными эритроцитами кроликов.
Так же изучении биокомпозиционной мембраны «Диплен ГАМ» проводилось в условиях подкожной имплантации образцов белым крысам у которых проводили патом орфологические исследования внутренних органов и окружающих имплантат тканей на предмет выявление дистрофических, воспалительных и др.патологических изменений.
Методы исследования биоинертности мембраны «Диплен ГАМ»..
Морфологическое изучение остеопластических характеристик биокомпозиционной резорбируемой мембраны «Диплен ГАМ» проводили совместно с лабораторией экспериментальной патоморфологии ГОУ ВПО Московская Медицинская Академия им. Сеченова «Росздрава».
Эксперименты проведены на 36 белых лабораторных крысах «Wistar» самцах с исходным весом 220-300 гр (рис.1)., полученных из питомника экспериментальных животных РАМН «Крюково». Животные были разделены на 3 равные группы по 12 крыс в каждой: -Контрольная группа - заполнение дефекта кровяным сгустком и область дефекта укрывалась мышечной тканью. -I опытная группа - кость в области дефекта циркулярно обертывали пленкой Диплен-ГАМ -И опытная группа - конусообразно свернутую пленку Диплен-ГАМ в виде пломбы вводили в полость дефекта так, чтобы утолщенная часть укрывала поверхность дефекта. Методика операции
Животным под гексеналовым наркозом, производили разрез кожи и подкожной клетчатки по передней поверхности правого бедра длиной 1,5 см (рис. 2). Тупым путем выделяли бедренную кость в области диафиза. Надкостницу рассекали и частично удаляли в области планируемого костного дефекта, края раны были разведены острыми крючками (рис 3). Далее с помощью портативной стоматологической установки Simens и установленного в нее фиссурпого бора на малых оборотах создавали овальный дефект в области диафиза бедренной кости (рис 4). Размер дефекта: около 3X5 мм, глубина 2 мм (рис 5).
У животных контрольной группы после гемостаза, операционный дефект укрывали фасциалыю-мышечным лоскутом, далее рану послойно ушивали шелком (рис 6, 7).
Животным первой опытной группы кость в области дефекта циркулярно обертывали мембраной Диплен-ГАМ (рис 8) с последующим послойным ушиванием раны шелком.
Во второй опытной группе в костный дефект вводилась мембрана Диплен-ГАМ конусообразно свернутая в виде пломбы так, чтобы утолщенная часть перекрывала поверхность дефекта (рис 9). Рана так же послойно ушивалась шелком.
Животных выводили из эксперимента на 10, 30 и 60 сутки по 4 животных на каждый срок в каждой группе путем внутрибрюшинного введения калипсола в дозе 750 мг/кг и листенона в дозе 200 мг/кг массы экспериментального животного.
Фрагмент бедренной кости, содержащий дефект, фиксировали в 70 спирте в течение 10 суток (рис 10) и декальцинировали в растворе трилона-Б в течение 3-х недель. После отмывания образцов в спирте их заливали в парафин. Парафиновые срезы толщиной 4-5 мк окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван-Гизону для выявления коллагеновых волокон и толуидиновым синим для выявления кислых гликозаминогликанов (ГАГ).
Для объективизации результатов морфологического исследования, кроме описания, использовали полуколичественный (балльный) анализ. Для этого были выделены 16 морфологических признаков, характеризующих основные процессы дистрофии, воспаления и регенерации: 1. Дистрофические изменения в материнской кости 2. Воспалительная инфильтрация у краёв дефекта 3. Энхондральный остеогенез внутри дефекта 4. Периостальный остеогенез 5. Остеогенная соединительная ткань 6. Остеоид 7. Новообразование трабекулярных костных структур 8. Остеобласты 9. Остеокласты 10. Соединительная ткань в межтрабекулярном пространстве 11. Кроветворная ткань в межтрабекулярном пространстве 12. Хрящевые и костно-хрящевые структуры 13. Незрелая компактизированная кость 14. Зрелая компактизированная кость 15. Степень заполнения костію-мозгового канала костной тканью 16. Интегральный показатель регенерации структуры трубчатой кости Каждый признак оценивали по пятибалльной системе: 0 - отсутствие признака; 1 - слабо выраженный признак; 2 - умеренно выраженный признак; 3 - хорошо выраженный признак; 4 - максимально выраженный признак для данной группы опытов. Вычисляли среднее значение показателя для всех животных в данной группе на данный срок. Полученные данные обрабатывали статистически. Статистический анализ данных полуколичественной оценки морфологических признаков выполняли при помощи стандартного пакета статистических программ SPSS 8.0 for Windows. Для выбора программ и интеграции данных использована следующая литература: А.Бююль, П.Цефель, 2002, А.Петри, К.Сэбин, 2003, О.Ю.Реброва, 2003, В.В.Власов, 2001. Целью проведения статистического анализа были критическая оценка и интеграция данных, полученных на исследуемой выборке индивидуальных животных, а также выяснение вопроса о возможности экстраполяции полученных результатов на популяцию, из которой была проведена эта выборка. В ходе статистического анализа были решены такие задачи, как описание объектов исследования, сравнение групп и исследование взаимосвязей признаков.
Поскольку все исследуемые признаки оценивались баллами, они не являются строго количественными и не подчиняются параметрическому распределению, поэтому использование критерия Стьюдента для них недостаточно адекватно. В связи с этим, а также в связи с ограниченным объёмом выборки были использованы непараметрические методы, позволяющие установить достоверность отличий между группами. Для этого проводили парное сравнение с использованием U-критерия Манна-Уитни (Mann-Whitney Test), а также вычисляли коэффициент корреляции Спирмена (Nonparametric Correlations Spearman Test) для анализа взаимосвязи дихотомических признаков.
Результаты исследования биоинертности мембраны «Диплен ГАМ»
Содержание в водных вытяжках из образцов пленки восстановительных примесей, выраженное в объеме 0.02 н. раствора тиосульфата натрия, затраченного на их определение, составляет 0.70 мл (допустимое - 1.00 мл). Изменение рН вытяжки в сравнении с контролем составляет 0.22 (допустимое -±1.00).
Результаты токсикологических испытаний:
Изучение подострой токсичности проводили в условиях многократного внутри-брюшинного введения вытяжки из пленки белым мышам. На протяжении всего периода наблюдения не отмечено гибели подопытных животных, изменений внешнего вида, поведения, поедаемости корма, двигательной активности по сравнению с контрольной группой. На вскрытии животных макроскопически не выявлено патологических изменений внутренних органов и тканей. Коэффициенты масс внутренних органов подопытных животных не имеют статистически достоверных отличий от аналогичных показателей контрольных животных. Вытяжки из образцов не проявили гемолитического действия в опытах "in vitro" с изолированными эритроцитами кроликов: гемолиз 0% при допустимом значении показателя менее 2%.
При изучении биокомпозиционной мембраны «Диплен-ГАМ» в условиях подкожной имплантации образцов белым крысам проведенные патоморфологические исследования внутренних органов и окружающих имплантат тканей не выявили дистрофических, воспалительных и др.патологических изменений по сравнению с контролем. Результаты испытаний на стерильность: Образцы стерильны. Выводы по результатам испытаний: Биокомпозиционная мембрана «Диплен-ГАМ» по токсикологическим и санитарно-химическим показателям отвечает требованиям, предъявляемым к медицинским изделиям аналогичного назначения.
Пленка полимерная двухслойная самоклеющаяся ДИПЛЕН-ГАМ с гидроксиапатитом ТУ 9444-002-29244220-95, производства АОЗТ «НОРД-ОСТ» нетоксична, стерильна, отвечает требованиям нормативной документации. 10-е сутки эксперимента Контрольная группа. Материнская пластинчатая кость вблизи дефекта имеет признаки дистрофических изменений. Обнаруживаются участки некротизированной костной ткани, в которой отсутствуют костные элементы - остеоциты (рис.14). Нечетко видны гаверсовы структуры и сосуды. По мере удаления от области дефекта дистрофические изменения уменьшаются, хотя встречаются изменения остсоцнтов с явлениями кариолиза. В матриксе кости - местами разрыхление и пикринофилия коллагеновых волокон при окраске по Ван-Гизону.
Внешняя поверхность дефекта закрыта мышечной тканью, претерпевающей склеротическое перерождение. Мышечные волокна некротизируются и резорбируются макрофагами и гигантскими клетками инородных тел. На месте их возникает фиброзная ткань с элементами воспалительной инфильтрации. В инфильтрате преобладают лимфоциты и макрофаги, присутствуют также немногочисленные нейтрофильные лейкоциты.
Глубже развивается остеогенная соединительная ткань, которая местами имеет грубоволокнистыЙ характер с пучками фукешюфильных по Ван Гизону коллагеновых волокон (рис.15). Однако преобладает клеточно-волокнистая ткань, которая отличается высоким содержанием клеточных элементов типа веретеновидных фибробластов. Как правило, эта ткань имеет рыхлый характер, инфильтрирована макрофагами и лимфоцитами с единичными нейтрофилами. Выявляются здесь и отдельные тучные клетки с метахроматичной при окраске толуидиновым синим зернистостью. Матрикс остеогенной соединительной ткани содержит тонкие фуксинофильные коллагеновые волокна и умеренное количество кислых ГАГ (протеогликанов), выявляющихся метахромазией при окраске толуидиновым синим.
В более глубоких отделах (в костном канале) остеогенная ткань постепенно переходит в новообразованную кость, занимающую от 1/2 до 2/3 просвета канала (рис.15). Большая часть новообразованной костной ткани имеет губчатую (трабекулярную) структуру. Она состоит из незрелых фиброзных трабекул, умеренно базофильных при окраске гематоксилином и эозином и метахроматична при окраске толуидиновым синим (рис.16). Трабекулы формируют сетчатую структуру, имеют гомогенный матрикс, в котором, однако, просматриваются беспорядочно расположенные коллагеновые волокна (рис.17).
Зрелость костной ткани постепенно увеличивается по мере удаления от входа в дефект. В менее зрелых трабекулах клетки представлены веретеновидными фибробластоподобными клетками, а местами видны остеоидные структуры в соединительной ткани. В более зрелых трабекулах количество клеток уменьшается. Внутри трабекул преобладают остеобласты, располагающиеся в лакунах, а на поверхности их видны остеогенные соединителыю-тканные клетки (рис.18). Фуксинофилия при окраске по Ван-Гизону и метахромазия при окраске толуидиновым синим уменьшаются незначительно.
