Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Гипотезы, объясняющие механизмы старения 9
Глава 2 . Структурно-функциональные изменения в системе адаптивного иммунитета при старении 17
2.1. Возрастные изменения иммунной системы 17
2.2. Резервные возможности иммунной системы 26
Собственные исследования
Глава 3. Объекты, материалы и методы исследования 30
Глава 4. Характеристика иммунитета долгожителей 37
Глава 5. Динамика и характер изменений количественных показателей Т-лимфоцитов с фенотипами CD3+CD8+ и CD3+CD4'CD8" и уровня СТА долгожителей 43
Глава 6 . Доказательства, подтверждающие, что изменения численности минорной субпопуляции CD3+CD4*CD8" Т-лимфоцитов в периферической крови человека зависит от уровня СТА и количества CD3+CD8+ Т-лимфоцитов 52
Глава 7. Характеристика CD3+CD4"CD8" Т-лимфоцитов по данным цитометрии 60
Глава 8. Состав Т-лимфоцитов с общим фенотипом CD3+CD4"CD8" и его изменения у долгожителей в процессе лечения 65
Заключение 69
Выводы 76
Список литературы 79
- Возрастные изменения иммунной системы
- Резервные возможности иммунной системы
- Характеристика иммунитета долгожителей
- . Доказательства, подтверждающие, что изменения численности минорной субпопуляции CD3+CD4*CD8" Т-лимфоцитов в периферической крови человека зависит от уровня СТА и количества CD3+CD8+ Т-лимфоцитов
Введение к работе
Увеличение доли пожилых людей в обществе стало особенно заметно в последней четверти XX века. Это значительно повышает интерес к геронтологии и, прежде всего, к изучению первичных механизмов старения организма и факторов, определяющих продолжительность жизни. В принятой на Второй Всемирной ассамблее ООН по проблемам старения «Программе ООН по исследованиям старения в XXI столетии» (апрель 2002 г., Мадрид) отмечается, что лучшее понимание фундаментальных механизмов старения и факторов долголетия имеет первостепенное значение для реализации полного потенциала здорового старения [20, 30].
Процесс старения охватывает все уровни структурной организации человека - молекулярный, субклеточный, тканевой, органный. Суммарный результат многочисленных частных проявлений старения на уровне целостного организма заключается в нарастающем с возрастом снижении жизнеспособности его, уменьшении эффективности приспособительных, гомеостатических механизмов [40].
Важную роль в защите организма и поддержании его гомеостаза играет иммунная система, старение которой в нормальных условиях начинается раньше, чем в других системах и связано с инволюцией тимуса [35].
Поэтому многими исследователями старость рассматривается как Т-иммунодефицит, сопровождающийся ослаблением реакций иммунитета и часто изменением их характера. В результате развиваются аутоиммунные, онкологические процессы и хроническое течение заболеваний, что составляет основу полиморбизма в старости [25, 36, 78].
Вместе с тем иммунная система имеет значительный запас прочности, который создается в процессе формирования защитных сил организма с момента его рождения [78].
В связи с этим, с научной точки зрения, долгожители представляют интерес для исследователя как своеобразная модель сохранения защитных свойств организма до глубокой старости и его адаптации к существованию в измененных условиях стареющего организма на фоне полиморбидности.
Поэтому тщательное исследование параметров иммунной системы долгожителей является актуальным, поскольку открывает возможности не только для оценки иммунного статуса этого возраста, но и определения потенциальных и адаптационных способностей стареющей иммунной системы, как ключ к увеличению продолжительности жизни человека.
Цель работы
Выявление количественных изменений в показателях иммунитета и определение набора признаков, позволяющих оценить иммунореактивность организма долгожителей.
Задачи исследования
Определить среднестатистические показатели иммунитета, частоту их отклонений от нормы у долгожителей г. Москвы и выделить для дальнейшего анализа показатели с наибольшими отклонениями от нормы.
Выявить и доказать наличие связи между численностью Т-клеток с фенотипом CD3+CD4'CD8", изменениями уровня сывороточной тимической активности (СТА) и количества CD3+CD8+ Т-клеток.
Разработать метод двухцветной цитометрии для выявления Т-клеток с фенотипом CD3+CD4"CD8* и дополнительного уточнения их фенотипа.
4. Определить прогностическую значимость изменений уровня СТА,
количества CD3+CD8+ и CD3+CD4'CD8' Т-лимфоцитов у долгожителей.
Научная новизна
Впервые дана характеристика иммунитета у долгожителей, особенностью которого является снижение уровня СТА, количественный дефицит субпопуляции CD3+CD8+ Т-лимфоцитов и увеличение численности Т-клеток с фенотипом CD3+CD4"CD8" у значительного процента долгожителей.
Впервые выявлены варианты связи между этими показателями: реципрокное и обратимое изменение количества CD3+CD4'CD8" Т-лимфоцитов по отношению к количеству CD3+CD8+ Т-клеток и уровню СТА и необратимое снижение количества CD3+CD8+ Т-клеток и уровня СТА при отсутствии в периферической крови CD3+CD4"CD8" Т-клеток. Показано, что первый вариант изменений согласуется с сохранением иммунореактивности, второй является предвестником летального исхода.
Впервые при первичном иммунологическом обследовании в
двухцветной цитометрии с использованием двух флюорохромов
фикоэритрина (ФЭ) и флюоресцеинизотиоцианата (ФИТЦ), с помощью
разработанных нами комбинаций моноклональных антител (МКАТ)
СОЗФЭ/(С04+СБ8)ФИТЦ и СОЗФЭ/(С04+С08+С016)ФИТЦ были
выявлены два типа клеток среди CD3+CD4"CD8" Т-лимфоцитов, которые различались экспрессией поверхностной молекулы CD 16 и интенсивностью свечения CD3-рецептора, и показано, что дефицит CD3+CD8+ Т-клеток восполнялся за счет Т-клеток с фенотипом CD3lowCD4"CD8"CD16".
Научно - практическая ценность работы
Разработанные дополнительные комбинации МКАТ
СОЗФЭ/(С04+С08)ФИТЦ и СОЗФЭ/(С04+С08+С016)ФИТЦ позволяют уже на уровне первичного обследования методом двухцветной цитометрии выявить минорные группы CD3hlCD4"CD8"CD16l0W (естественные Т-киллеры) и CD3 0WCD4'CD8"CD16" Т-лимфоцитов и по типу количественных изменений
субпопуляций CD3+CD8+ и CD3lowCD4"CD8'CD16" прогнозировать жизненный потенциал и эффективность лечения.
Основные положения, выносимые на защиту.
У значительной части долгожителей на фоне полиморбидности и снижения гормональной функции тимуса, определяемой по уровню СТА, наблюдали количественный дефицит CD3+CD8+ Т-лимфоцитов и появление Т-клеток, лишенных субпопуляционных маркеров (CD3+CD4-CD8-).
Появление и исчезновение CD3+CD4"CD8" Т-лимфоцитов связано с изменениями уровня СТА и количества CD3+CD8+ Т-лимфоцитов. Выявлено два варианта изменений:
обратимые и реципрокные количественные изменения CD3+CD4'CD8" Т- лимфоцитов по отношению к уровню СТА и количеству CD3+CD8+ Т-лимфоцитов, что является благоприятным прогностическим тестом;
необратимое снижение всех трех показателей, что расценивается как маркер риска близкого смертельного исхода.
3. Популяция Т-клеток с фенотипом CD3+CD4'CD8' является гетерогенной,
что показано с помощью разработанного метода двухцветной цитометрии и включает CD3hlCD4"CD8"CD16low (естественные киллерные Т-клетки) и CD3lowCD4"CD8"CD16" Т-клетки. Именно численность последнего типа клеток изменяется в зависимости от уровня СТА и количества CD3+CD8+ Т-лимфоцитов.
* * *
Благодарим главного врача клиники РНИИ геронтологии МЗ РФ Маргариту Георгиевну Филатову и заведующих отделениями: Наталью Викторовну Журавлеву (терапия), Светлану Ильиничну Муромову (кардиология), Валентину Васильевну Лопатину (гастроэнтерология), Зинаиду Степановну Митину (неврология), заведующую лабораторией возрастной гематологии Регину Николаевну Шишину, заведующую лабораторией иммуномодуляторов Веру Леонидовну Голубеву, заведующую лабораторией лазерных методов лечения Ольгу Матвеевну Карпенко за возможность работы с историями болезней пациентов клиники и использовании в нашем исследовании диагнозов и сотрудничество.
Возрастные изменения иммунной системы
Костный мозг. По данным морфологических исследований, в процессе старения наблюдаются разрастание жировой ткани и уменьшение доли кроветворного красного костного мозга [34]. За период от детского до старческого возраста содержание последнего уменьшается почти втрое, в результате изменений в клетках микроокружения снижается уровень секреции ИЛ-7, что нарушает условия дифференцировки предетерминированных стволовых клеток костного мозга (СКК), и увеличивается секреция интерлейкина ИЛ-6 [43]. Последний цитокин влияет на процессы ремоделирования кости, что, в свою очередь, меняет условия микроокружения СКК. В экспериментальных исследованиях отмечено снижение у старых мышей экспрессии мРНК рецепторов для цитокинов ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-3, ИЛ-6, фактора некроза опухоли (ФНО)а и интерферона (ИФН)у.
Возрастные изменения СКК зависят не только от взаимодействия их с измененным микроокружением, но и связаны с генетически обусловленными процессами, протекающими в самой клетке. В старости снижается пролиферативный потенциал CD34+ СКК. Это документировано в экспериментах: а) прогрессирующим укорочением теломеры при хронической стимуляции пролиферации этих клеток in vitro; б) ослаблением способности восстанавливать количество и функции Т-лимфоцитов у мышей-реципиентов после трансплантации им донорских клеток костного мозга от старых мышей [69]. Для СКК молодых мышей, как правило, характерно состояние покоя, у старых мышей эти клетки находятся в цикле. В старости увеличивается поступление в костный мозг зрелых Т- и В-лимфоцитов из периферии.
Тимус. Считают, что старение иммунной системы связано с инволюцией тимуса и, прежде всего, с повреждением стромальных элементов. Экспериментально это положение подтверждается пересадкой стромы тимуса, освобожденной от тимоцитов, от мышей разного возраста сингенным реципиентам. С увеличением возраста донорского тимуса степень заполнения его тимоцитами реципиента снижается. По этой причине способность к регенерации тимуса резко снижается.
Так как процесс старения иммунной системы определяется событиями, происходящими в тимусе, этот орган рассматривают в качестве своеобразных иммунологических часов [10, 123]. Существует также теория "сменной сомы" [72]. Она постулирует, что тимус необходим организму только в период, когда формируется пул Т-клеток памяти с достаточно обширным репертуаром распознаваемых антигенов. В дальнейшем, для поддержания этих клеток тимус оказывается не нужным [123].
Максимального размера тимус достигает в возрасте 12 месяцев. Атрофия этой железы начинается в период полового созревания и идет более быстрыми темпами в коре, чем в мозговом слое. Доля лимфоидной ткани с возрастом снижается [50, 123, 124]. По скорости инволюции лимфоидной ткани выделяют 4 фазы: быструю (до 10 лет), медленную (до 25 лет), снова быструю (до 40 лет) и замедленную в последующие годы жизни [34]. Так, к 60 годам лимфоидная ткань составляет всего лишь 10% от максимального объема и сохраняется в виде небольших островков, вкрапленных в жировую ткань и околососудистые соединительнотканные структуры [71, 122].
Имеется информация о снижении численности дендритных клеток, которые осуществляют отрицательную селекцию тимоцитов [49, 97, 125]. В наибольшей степени страдают эпителиальные клетки тимуса [90]. Они подвергаются процессам дегенерации, которые охватывают экспрессию генов ряда цитокинов - ИЛ-2, ИЛ-9, ИЛ-10, ИЛ-13, ИЛ-14. Экспрессия гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ) и ИЛ-15 не изменяется [119]. Данные об экспрессии ИЛ-7 противоречивы. Экспрессия метахондриальной РНК (мРНК) фактора стволовых клеток (ФСК), ИЛ-6, лейкемия-ингибирующего фактора (ЛИФ) и онкостатина М (ОСМ) усиливается [119]. Об изменении гормональной активности эпителия тимуса существуют противоречивые сведения. Большинство исследователей сходятся во мнении, что первое снижение уровня тимусных гормонов в сыворотке крови регистрируется уже в возрасте от 15 до 36 лет, и остается стабильно низким до 80 лет [58]. Снижение уровня активности основного гормона тимуса, тимулина, связывают с недостатком ионов цинка, вследствие чего он становится функционально неполноценным, и возникают затруднения с определением его в существующих функциональных лабораторных тестах [106, 107]. С возрастом снижается количество рецепторов для соматостатина. Это способствует снижению секреции гормона и инволюции органа. Имеются сведения о снижении экспрессии молекул ГКГ класса II, которым принадлежит важнейшая роль в дифференцировке и селекции CD4+ Т-клеток [69].
Вследствие инволюционных процессов в микроокружении тимуса изменяются численность и свойства лимфоидных клеток тимуса. В возрасте от 3 до 20 месяцев численность тимоцитов у мышей снижается на 83%, а в возрасте 24 месяцев фактически прекращается эмиграция клеток из тимуса, составляя 0,7% от той, которая наблюдалась при рождении [46]. В связи с ослаблением аттрактивной активности клеток стромы снижается приток предшественников Т-клеток из костного мозга. Возрастные изменения практически не затрагивают фракцию клеток, недавно мигрировавших из костного мозга. Возможно, это связано с аутокринным характером роста этих клеток. Однако уже к возрасту 12 месяцев у мышей уменьшается число клеток следующих стадий развития, имеющих фенотипы CD44+CD25+ и CD44"CD25+ [46]. Известно, что на этих стадиях осуществляется перестройка генов TCR. О снижении интенсивности перестройки свидетельствует также ослабление экспрессии генов рекомбиназ RAG-1 и RAG-2 [138]. На этих стадиях тимоциты старых мышей в большей степени, чем молодых, подвергаются апоптозу in vitro. У старых мышей сокращается численность CD4+CD8+ тимоцитов за счет усиления апоптоза [48]. В то же время увеличивается количество CD3+CD4"CD8" Т-тимоцитов. В процессе старения ограничивается антигенраспознающий репертуар [100]. Интенсивность и качество развития тимоцитов у старых мышей оказывается существенно сниженной. При старении в тимусе появляются в значительном количестве зрелые Т- и В-лимфоциты периферического пула.
Резервные возможности иммунной системы
Таким образом, процессы старения системы адаптивного иммунитета охватывают все его компоненты и заканчиваются снижением функциональной активности клеток адаптивного иммунитета. Тем не менее, иммунная система выполняет свою защитную функцию в течение всей жизни человека в силу ее высокой резервной и адаптационной способности. Формирование в раннем возрасте репертуара клеток "памяти" к широкому спектру АГ обеспечивает защиту организма до самой его кончины. С другой стороны, катастрофически снижается количество "наивных" клеток, и они подвергаются естественному старению и снижению функционального потенциала. В связи с этим встреча с новой инфекцией, особенно вызванной мутантным вирусом, может представлять для старых людей большую опасность, чем для молодых. Резервные и адаптационные возможности сохраняются во всех компартментах иммунной системы. Так, у молодых мышей для СКК характерно состояние покоя, из которого клетка выходит только при стрессовых состояниях и облучении. У старых мышей эти клетки находятся в цикле, то есть являются источником пополнения периферических клеток иммунной системы. Однако на фоне измененного микроокружения и снижения способности ДНК к репарации увеличивается риск появления в старости неконтролируемых мутаций. Присутствие в костном мозге зрелых Т- и В-лимфоцитов рассматривается также как компенсаторная реакция. Эти клетки выделяют цитокины, секреция которых клетками стромы костного мозга стала дефицитной.
Такой же резерв имеется в тимусе. К 60 годам лимфоидная ткань составляет всего лишь 10% от максимального объема [65]. Вместе с тем показано, что тимус сохраняет в этом возрасте ограниченную функциональную активность, что подтверждается обнаружением в кровотоке наивных Т-клеток со следами недавней перестройки генов TCR. Даже у лиц в возрасте 80-100 лет в пределах тимуса остаются крошечные островки эпителиальных клеток с небольшим количеством тимоцитов, расположенных чаще всего вокруг мелких сосудов. Однако надо помнить, что вследствие инволюции в тимусе нарушаются условия дифференцировки, и повышается вероятность развития дефектов в зрелых Т-клетках.
Иммунная система обладает большими компенсаторными возможностями. Так, у макрофагов от старых мышей на фоне снижения внутриклеточной бактерицидности, экспрессии АГ ГКГ и способности представлять АГ цитотоксическим Т-лимфоцитам был выше уровень мРНК рецептора CCR7, чем у макрофагов от молодых мышей. По-видимому, увеличение миграционных свойств макрофагов компенсирует снижение способности представлять АГ цитотоксическим Т-клеткам.
Спонтанная секреция макрофагами здоровых девяностолетних людей хемокинов RANTES и MIP-1 и рецепторов к хемокинам CCR1, CCR3 и CCR5 не отличалась от макрофагов людей молодого возраста [73, 102, 126].
Другой особенностью иммунной системы является компенсация дефицита функции клетками, необычными для здорового молодого индивидуума. Так, при снижении количества и функции цитотоксических Т-клеток с обычным фенотипом CD3+CD8+, появляются ар Т-клетки с признаками киллерных клеток, CD3+CD16+CD56+, также выполняющие функцию цитотоксичности. [24, 128]. Есть другая субпопуляция Т-лимфоцитов, TCR которых состоит из у и 8 цепей [51]. Эти клетки не экспрессируют CD4 молекулу, но на некоторых клетках имеется молекула CD8, димер которой состоит из двух цепей а [7, 79]. Они имеют разное происхождение и обнаруживаются, в основном, в эпителиальной ткани, в связи с чем получили название интраэпителиальных Т-лимфоцитов [8]. Их обнаруживают также в коже. После стимуляции они продуцируют разные цитокины, в том числе, ИФу и ИФа. Для распознавания АГ им не нужны молекулы главного комплекса гистосовместимости. Антигенная презентация для них осуществляется, в основном, белками теплового шока. В настоящее время их рассматривают как сторожевые клетки эпителиальных тканей и кожи, способные распознавать и разрушать как возбудитель, в том числе, внутриклеточный, так и собственные стрессированные эпителиальные клетки. Есть данные, что у5 Т-клетки способны секретировать цитокины, регулирующие рост эпителиальных клеток в период их восстановления.
Характеристика иммунитета долгожителей
Для определения средних значений показателей иммунитета проведено иммунологическое исследование крови у 103 долгожителей, из них у 84 дополнительно определяли уровень СТА. В качестве контроля использовали нормативы для здоровых лиц в возрасте 20 - 50 лет. В таблице 4 и на рис. 1 представлены средние арифметические значения показателей иммунитета с доверительными интервалами при уровне вероятности 95%. Большинство средних показателей иммунитета у долгожителей соответствовали нормальным значениям. Сохранение нормального абсолютного количества лимфоцитов обеспечивалось увеличением их процентного содержания в крови. Для ЕКК, IgA и IgM наблюдалась тенденция роста показателей в сторону верхней границы нормы, для Т-хелперов и В-лимфоцитов - в сторону нижней границы. Колебания показателей IgG были незначительны и также находились в пределах нормы. Исключение составили достоверно отличающиеся от нормы показатели относительного и абсолютного содержания CD3+CD8+ Т-лимфоцитов, Т-лимфоцитов с фенотипом CD3+CD4"CD8" и уровня СТА. По-видимому, в связи с разнонаправленностью изменений показателей иммунитета у отдельных лиц средние арифметические значения не могут отражать истинного состояния иммунитета в обследованной группе долгожителей. В связи с этим полученные данные были проанализированы также по частоте отклонений от нормальных величин. Этот показатель дает больше информации о состоянии иммунитета по всей группе долгожителей, чем средние величины. Таблица 4 Характеристика иммунитета долгожителей Рис.1. Средние арифметические величины абсолютных показателей иммунитета у долгожителей по сравнению с нормой. Примечание: - статистически значимые отклонения показателей иммунитета долгожителей от нормы. В таблице 5 представлено процентное количество долгожителей, относительные и абсолютные показатели которых соответствовали норме, были ниже нормы или выше нормы.
У 52±0,5% долгожителей процентное содержание лимфоцитов в формуле крови превышало норму. Благодаря этому увеличивалось число лиц (77±0,3%) с абсолютными показателями, соответствующими норме, в связи с чем средняя арифметическая величина, представленная в табл.4 по всей группе изменялась незначительно. Примерно у половины долгожителей абсолютное количество Т-хелперов (47±0,6%) и В-лимфоцитов (46±0,6%) соответствовало норме, а у второй половины, эти показатели были ниже нормы (44±0,6% и 49±0,6%, соответственно). Это согласовалось со сдвигом доверительного интервала средних абсолютных значений в сторону нижнего предела (табл. 4). Относительный и абсолютный дефицит CD3+CD8+ Т-лимфоцитов отмечался у значительного числа долгожителей (62±0,5% и 78±0,4%, соответственно), что отразилось на снижении средней арифметической величины по всей группе (табл. 4). Наличие у 59 из 103 долгожителей (57±5,1%) значительного количества CD3+CD4"CD8" Т-лимфоцитов влияло на увеличение среднего арифметического значения этого показателя. У 68 из 84 обследованных пациентов (81±4,5%) был снижен показатель СТА. В таблице 6 представлены относительные и абсолютные средние значения показателей иммунитета долгожителей, распределенных по группам в соответствии с отклонениями от нормальных показателей. В группе лиц с низкими показателями CD3+CD8+ Т-лимфоцитов и уровня СТА средние арифметические величины были более чем в 2 раза ниже нормы; в группе лиц с увеличенным количеством CD3+CD4 CD8 Т-клеток средние арифметические величины превышали нормальные показатели более чем в 5 раз. РОССИЙСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ БИБЛИОТЕКА Таблица 5 Оценка варьирования относительных и абсолютных показателей иммунитета долгожителей по частоте отклонения (Е) от нормы Показатели иммунитета Количествообследованныхдолгожителей Частота встречаемости показателей (Е ±т), %, соответствующих: Примечание: - жирным шрифтом вьщелены значения, наиболее отклоняющиеся от нормы. Таблица 6 Относительные и абсолютные средние значения показателей иммунитета долгожителей, распределенных по группам в соответствии с отклонениями от нормы Показатели иммунитета Количество обследованных долгожителей М ±т показателей по группам, соответствующих: Примечание: - жирным шрифтом выделены значения, наиболее отклоняющиеся от нормы. Таким образом, наиболее существенные изменения в иммунитете долгожителей характеризовались снижением уровня СТА, количества CD3+CD8+ Т-лимфоцитов и появлением необычной субпопуляции Т-клеток с фенотипом CD3+CD4"CD8". В связи с этим перед нами встала задача определить, существует ли связь между увеличением числа CD3+CD4"CD8 Т-клеток, низким уровнем СТА и количественным дефицитом CD3+CD8+ Т-лимфоцитов.
. Доказательства, подтверждающие, что изменения численности минорной субпопуляции CD3+CD4*CD8" Т-лимфоцитов в периферической крови человека зависит от уровня СТА и количества CD3+CD8+ Т-лимфоцитов
Для объяснения причины увеличения количества CD3+CD4"CD8" Т-лимфоцитов у долгожителей в связи со снижением количества CD3+CD8+ Т-лимфоцитов и уровня СТА мы определяли эти показатели у людей в ситуациях, когда один из параметров был искусственно снижен в результате воздействия внешних факторов. Известно, что облучение сопровождается снижением секреторной функции эпителиальных клеток тимуса и отражается на уровне сывороточных гормонов тимуса [39]. Известно также, что лечение апластической анемии направлено на супрессию CD3+CD8+ Т-лимфоцитов, для чего в практике используют препарат антилимфоцитарный глобулин [фирмы-производители: Pharmacia & Upjohn Company, США; Fresenius, Германия; ФГУ РНИИ геронтологии, Россия]. В связи с этим были рассмотрены результаты цитометрического анализа периферической крови и уровня СТА у двух групп пациентов, подвергшихся иммуносупрессии: 1) дети в возрасте от 1 до 7 лет (9 человек), родившиеся после аварии на ЧАЭС, и от 8 до 15 лет (12 человек), родившиеся до аварии, проживающие на территории, загрязненной радионуклидами. Обследование проводили через 6 лет после аварии; 2) больные (8 человек) с диагнозом апластическая анемия (АА), которым проводился иммуномониторинг до и после супрессивного лечения АТГ-Кз. В первой группе в обоих возрастных интервалах у детей наблюдалось снижение уровня активности гормонов тимуса. Уровень СТА находился в интервале 0-3 log2 (при норме больше 3 log2). Нами были проанализированы также данные цитометрического обследования этих пациентов. У детей в возрасте от 8 до 15 лет наблюдалась тенденция снижения числа CD4+ Т-лимфоцитов (32 ± 7% и 690 ± 240 кл/мкл, соответственно). У всех обследованных детей наблюдали снижение CD3+CD8+ Т-лимфоцитов (19 ± 5% и 410 ± 180 кл/мкл). Из них у половины детей относительное и абсолютное количество CD3+CD4"CD8" Т-лимфоцитов в крови превышало норму (15 ± 6 % и 290 ±150 кл/мкл, соответственно) (табл.8, 9). У 5 из 9 обследованных детей, родившихся после аварии, прослеживали тенденцию к увеличению относительного и снижению абсолютного количества CD4+ Т-лимфоцитов. Однако средние показатели по группе не отличались от нормы. У 7 из 9 пациентов в том же возрасте наблюдались низкие относительные и абсолютные значения CD3+CD8+ Т-клеток. Средняя арифметическая величина по всей группе для этого показателя 20±6% или 620±450 кл/мкл (при норме 27 ± 4 % или 1150±350 кл/мкл, соответственно). У 7 из 9 обследованных детей в периферической крови появлялись CD3+CD4" CD8" Т-лимфоциты. Средняя арифметическая величина для этого показателя составила 4±2% или 170 ± 140 кл/мкл. Таблица 8 Норма для иммунологических показателей в разном возрасте
Таким образом, у детей, переселенных из зоны аварии на ЧАЭС, в обеих возрастных группах под действием радиационного облучения и его последствий снизился уровень СТА и численность субпопуляции CD3+CD8+ Т-клеток, а также наблюдалось появление субпопуляции CD3+CD4 CD8" Т-лимфоцитов. Во второй группе мы рассматривали изменение иммунологических показателей под действием другого супрессирующего фактора - АТГ-Кз. Ретроспективно были проанализированы гистограммы пациентов с тяжелой формой АА, полученные в результате иммуномониторинга до и после лечения АТГ-Кз. После проведения курса АТГ-Кз наблюдалось снижение количества CD3+CD8+ Т-лимфоцитов и появление CD3+CD4"CD8 Т-лимфоцитов. При изначально нормальном уровне СТА (больше 3 log2) эти изменения наступали в более поздние сроки. Были выделены два типа изменений иммунологических показателей, наблюдавшихся после окончания применения АТГ-Кз. Первый тип характеризовался появлением (больной К.Р.) или увеличением (больные М.Б., Б.Р. и СЕ.) количества CD3+CD4"CD8 Т-лимфоцитов на 3 -10 сутки после окончания введения АТГ-Кз на фоне снижения количества CD3+CD8+ Т-лимфоцитов (рис.6). В более поздние сроки у больных наблюдалось обратное увеличение CD3+CD8+ Т-лимфоцитов и уменьшение количества клеток с фенотипом CD3+CD4 CD8" (больной Г.Э.). У больного Г.Э. до лечения количество CD3+CD8+ превышало норму (830 кл/мкл) и наблюдались CD3+CD4 CD8" Т-клетки (104 кл/мкл). На 10 сутки после окончания введения препарата также наблюдалось снижение количества CD3+CD8+ Т-клеток (460 кл/мкл) и увеличение количества CD3+CD4"CD8 Т-клеток (222 кл/мкл). На 20 сутки после окончания введения препарата наблюдалось восстановление показателя CD3+CD8+ Т-клеток до нормы (650 кл/мкл) и уменьшение количества CD3+CD4 CD8" Т-клеток (130 кл/мкл). Второй тип количественных изменений показателей после окончания курса лечения препаратом характеризовался отсутствием (больной Е.Е.) или появлением в очень небольшом количестве (больные СТ. и П.С) CD3+CD4" CD8" Т-лимфоцитов на фоне снижения количества CD3+CD8+ Т-клеток. При дальнейшем снижении численности CD3+CD8+ субпопуляции CD3+CD4 CD8 Т-клетки исчезали или их количество не превышало норму (рис.7), что у больных Е Е. и С.Т. впоследствии привело к летальному исходу. У больной П.С. число CD3+CD8+ Т-клеток значительно снизилось только к 30 суткам, при этом CD3+CD4"CD8" Т-лимфоцитов увеличилось незначительно, что также привело к летальному исходу (рис.7). При иммуносупрессирующей терапии с применением АТГ-Кз было выявлено два типа взаимосвязи между CD3+CD8+ и CD3+CD4"CD8" Т-лимфоцитами. Появление CD3+CD4 CD8" Т-лимфоцитов ассоциировалось с эффективностью лечения заболевания, отсутствие CD3+CD4"CD8" Т-лимфоцитов при низком количестве CD3+CD8+ Т-лимфоцитов вело к скорому летальному исходу.
