Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА І. Обзор литературы . 15
1.1. Строение и функции печени 15
1.2. Этиология и патогенез печеночной недостаточности 30
1.3. Основные методы исследования печени 42
1.3.1. Инструментальные методы исследования 42
1.3.2. Функциональые методы исследования 44
1.3.3. Энзимологические исследования крови 45
1.4. Общие принципы терапии заболеваний печени . 47
ГЛАВА ІІ. Собственные исследования 58
2.1. Материалы и методы исследования 58
2.1.1. Сбор анамнеза и клинический осмотр . 58
2.1.2. Лабораторные исследования – анализ крови,
урологические и копрологические 58
2.1.3. Ультразвуковое исследование и биопсия печени . 63
2.1.4.Методика изучения электропроводности
биологически активных точек 66
2.1.5. Разработка препарата на основе кластерного серебра «Фаргентум-G» 72
2.1.6. Состав препарата «Фаргентум-G» . 82
2.1.7. Разработка технических условий препарата «Фаргентум-G» 82
2.1.8. Методика коррекции острой и хронической печеночной недостаточности препаратом «Фаргентум-G» 82
2.1.9. Методика коррекции острой и хронической печеночной недостаточности препаратом «Фаргентум-G» совместно с динамической электронейростимуляцией 83
2.1.10. Традиционный метод коррекции при печеночной недостаточности 84
2.1.11. Статистическая обработка результатов 85
2.2. Результаты исследования . 86
2.2.1. Исследования функционального состояния здоровых собак 86
2.2.2. Исследования собак с печеночной недостаточностью 96
2.2.2.1. Результаты первичного исследования собак с острой печеночной недостаточностью . 106
2.2.2.2. Результаты первичного исследования собак с хронической печеночной недостаточностью 123
2.2.3. Разработка методики коррекции острой печеночной недостаточности на основе препарата «Фаргентум-G» . 143
2.2.3.1. Результаты первичного исследования собак первой опытной группы с острой печеночной недостаточностью 143
2.2.3.2. Результаты исследования собак первой опытной группы (после начала коррекции) 150
2.2.3.3. Результаты исследования собак первой опытной группы на 30-е сутки после окончания
применения «Фаргентум-G» . 163
2.2.4. Разработка методики коррекции острой печеночной недостаточности на основе препарата «Фаргентум-G» совместно с динамической электронейростимуляцией 171
2.2.4.1. Результаты первичного исследования собак второй опытной группы с острой печеночной недостаточностью . 171
2.2.4.2. Результаты исследования собак второй опытной группы (после начала коррекции) . 178
2.2.4.3. Результаты исследования собак второй опытной группы на 30-е сутки после окончания совместного применения «Фаргентум-G» и динамической электронейростимуляцией . 191
2.2.5. Коррекция острой печеночной недостаточности третьей опытной группы с помощью традиционной методики 198
2.2.5.1. Результаты первичного исследования собак третьей опытной группы с острой печеночной недостаточностью . 198
2.2.5.2. Результаты исследования собак третьей опытной группы (после начала коррекции) 205
2.2.5.3. Результаты исследования собак третьей опытной группы на 30-е сутки после окончания применения традиционной методики . 219
Заключение 226
2.2.6. Разработка методики коррекции хронической печеночной недостаточности на основе препарата «Фаргентум-G» . 228
2.2.6.1. Результаты первичного исследования собак первой опытной группы с хронической печеночной недостаточностью 228
2.2.6.2. Результаты исследования собак первой опытной группы (после начала коррекции) . 235
2.2.6.3. Результаты исследования собак первой опытной группы на 30-е сутки после окончания применения «Фаргентум-G» . 250
2.2.7. Разработка методики коррекции хронической печеночной недостаточности на основе препарата «Фаргентум-G» совместно с динамической электронейростимуляцией 258
2.2.7.1. Результаты первичного исследования собак второй опытной группы с хронической печеночной недостаточностью
2.2.7.2. Результаты исследования собак второй опытной группы (после начала коррекции) 264
2.2.7.3. Результаты исследования собак второй опытной группы на 30-е сутки после окончания применения «Фаргентум-G» совместно с динамической электронейростимуляцией . 280
2.2.8. Коррекция хронической печеночной недостаточности третьей опытной группы с помощью традиционной методики . 287
2.2.8.1. Результаты первичного исследования собак третьей опытной группы с хронической печеночной недостаточностью 287
2.2.8.2. Результаты исследования собак третьей опытной группы (после начала коррекции) 294
2.2.8.3. Результаты исследования собак третьей опытной группы на 30-е сутки после окончания применения традиционной методики . 310
Заключение 317
ГЛАВА ІІІ. Обсуждение результатов 319
Выводы . 335
Предложения для практики . 337
Список используемой литературы
- Этиология и патогенез печеночной недостаточности
- Разработка препарата на основе кластерного серебра «Фаргентум-G»
- Результаты первичного исследования собак первой опытной группы с острой печеночной недостаточностью
- Коррекция хронической печеночной недостаточности третьей опытной группы с помощью традиционной методики
Введение к работе
1.1. Актуальность темы. По данным Комитета ветеринарии г. Москвы, внутренние болезни у мелких домашних животных составляют около 63%, из них на патологию печени приходится 25%. Болезни печени регистрируют у собак всех возрастов и пород (Уша Б.В., 2002; Денисенко В.Н., Кесаренко Е.А., 2011).
Гепатопатии возникают в результате использования недоброкачественных кормов, дефицита витаминов и незаменимых аминокислот, применения лекарственных препаратов, обладающих токсическими свойствами, что приводит к нарушению различных процессов метаболизма в печени, тем самым вызывая морфофункциональные изменения (Высоцкий Р.А., 2002).
В первую очередь это относится к служебным поисковым собакам МЧС, пограничных войск, а также к собакам – поводырям, на обучение и содержание которых затрачено немало материальных средств.
Кроме того, собаки представляют интерес как лабораторные животные, на которых отрабатывают методы и средства диагностики и лечения различных заболеваний с целью последующего использования изученных подходов при диагностике и лечении аналогичных болезней сельскохозяйственных животных и человека. Поэтому разработка новых методов диагностики и создание эффективных лекарственных средств при патологии печени для собак в настоящее время является весьма актуальной проблемой. И наконец, собаки стали неотъемлемой частью жизни многих людей, и эмоциональное, а также и физическое состояние хозяина зависит от состояния здоровья его собаки.
Несмотря на определенные успехи в диагностике, профилактике и лечении, болезни печени нередко приводят к гибели животных (Сысуева А.В., 2009).
В настоящее время для диагностики болезней печени разработано много современных методов, таких как ультразвуковое исследование, магнитно-резонансная и компьютерная томография, лапароскопия, биопсия и другие. Расширение спектра методов будет способствовать надежной диагностике и своевременному эффективному лечению. Таким методом, по нашему мнению, может быть диагностика по биологически активным точкам (БАТ), которая основана на изменение электропроводности в них. Диагностика по биологически активным точкам достаточно достоверна, быстра и безболезненна. Ранее нами было показано успешное использование динамической электронейростимуляции для лечения гастроэнтерита у собак (Концевова А.А., 2008), однако применение для диагностики и лечения хронической и острой печеночной недостаточности такой подход еще не применяли. Информация о диагностике по БАТ патологии печени у собак с помощью методики «Биорепер» в доступной литературе мы не нашли. В связи с этим, необходимо было провести исследования по экспериментальному обоснованию применения метода «Биорепер» и динамической электронейростимуляции для диагностики и лечения патологии печени у собак, а также по верификации соответствующих приборов.
Несмотря на достигнутые успехи в области лечения болезней печени с использованием различных лекарственных средств, вопрос остается открытым, поскольку медикаментозное лечение часто сопровождается осложнениями со стороны пищеварительной, мочевой, сердечно-сосудистой и нервной систем (Голигорсеий С.Д., Терехов Н.Г., 1960; Гуревич Е.С.,1963; Аруин Л.И.,1977; Беляков И.М. ,1984; Логинов А.С.,1985; Григорьев П.Я.,Яконенко Э.П.,1990; Гладских Л.В.,1995; Высоцкий Р.А., 2002; Симпсон Дж., Уильзе Р., 2003; Азатян К.Д., 2004; Маркарян А.Ш., 2005; Величко А.Я., 2006; Кожевников Ю.А., 2006; Сотникова Н.В., 2007; Шавырин Д.И., 2009; Уша Б.В., 2013 и др.). В связи с этим разработка новых препаратов и методов для лечения гепатопатий является весьма актуальной.
Материалы как отечественных, так и зарубежных авторов, посвященные применению препаратов на основе серебра, свидетельствуют о том, что при пероральном и парентеральном введении они оказывают стимулирующее влияние на ретикуло-эндотелиальную систему организма, характеризуются активным антибактериальным и антивирусным действием и выраженной противовоспалительной активностью, что особенно важно при патогенетической терапии (Соколов М.Ю., 2004).
Применение наносеребра серебра с желчью крупного рогатого скота, как отдельно, так и совместного с динамической электронейростимуляцией, (ДЭНС) при болезнях печени у собак не рассматривалось. Разработанные новые отечественные средства медицинского назначения на основе ДЭНС не были верифицированы для ветеринарной медицины и, в частности, для диагностики и лечения печеночной недостаточности у собак. Поэтому изучение возможности и целесообразности использования таких подходов для диагностики и коррекции патологии печени у собак весьма актуально.
1.2. Цель и задачи исследований. Целью работы являлось теоретическое и экспериментальное обоснование применения методов и средств нанобиотехнологии и электронейростимуляции для диагностики и коррекции печеночной недостаточности у собак.
Для выполнения поставленных целей необходимо было решить следующие задачи:
изучить основные симптомокомплексы у собак при острой печеночной недостаточности (ОПН) и хронической печеночной недостаточности (ХПН);
провести комплекс лабораторных морфометрических и биохимических исследований при ОПН и ХПН для отбора опытных групп собак;
изучить структурно-функциональные изменения печени у собак при нарушении кормления;
измерить электропроводность в биологически активных точках (БАТ) у собак и изучить ее изменение при ОПН и ХПН;
разработать методику применения наносеребра серебра с желчью крупного рогатого скота для коррекции ОПН и ХПН;
разработать методику применения ДЭНС для коррекции ОПН и ХПН у животных;
изучить возможность применения наносеребра с желчью для коррекции ОПН и ХПН;
изучить возможность совместного наносеребра с желчью и ДЭНС для коррекции ОПН и ХПН;
провести верификацию отечественного оборудования, зарегистрированного, как изделия медицинского назначения, для применения в ветеринарной медицине, в частности, для диагностики и лечения печеночной недостаточности у собак;
разработать нормативную документацию по применению препарата на основе наносеребра и желчи для коррекции ОПН и ХПН у животных;
разработать нормативную документацию на совместное применение препарата на основе наносеребра с желчью и ДЭНС для коррекции ОПН и ХПН у животных.
1.3. Научная новизна. Данная работа открывает новое направление в диагностике и коррекции печеночной недостаточности у животных с применением комплекса методов и средств, в основе которых лежит использование БАТ и наносуспензии кластерного серебра с добавлением желчи крупного рогатого скота, а также их совместного применения с динамической электронейростимуляцией (ДЭНС).
На основании определения биологически активных точек и изучения их электропроводности у здоровых собак и животных с патологией печени впервые экспериментально обоснованы новые диагностические показатели ОПН и ХПН – электропроводность в биологически активных точках. Установлена взаимосвязь показателей электропроводности БАТ с клиническими и биохимическими показателями крови при патологии печени, которые являются «внутренним зеркалом» – отражением гомеостаза животных, что доказывает возможность использования показателей электропроводности БАТ в качестве нового теста при диагностике указанных заболеваний.
Впервые в отечественной практике на основе суспензии наносеребра (кластерное серебро) и желчи крупного рогатого скота разработаны новые препараты «Фаргентум» и «Фаргентум-G» для лечения патологий пищеварительной системы у животных. Патент (19)РФ(11) «Средство для лечения желудочно-кишечных заболеваний животных» № 2010132875 – опубликовано 10.09.2011 – на изобретение, Патент (19)РФ(11) «Средство для лечения желудочно-кишечных заболеваний животных» № 2010132876 – опубликовано 10.11.2011 – на изобретение.
Разработана методика коррекции при ОПН и ХПН препаратом «Фаргентум-G» и схема совместного его применения с ДЭНС для животных.
Впервые экспериментально обоснована возможность эффективного применения разработанного метода и средства для лечения ОПН и ХПН.
Впервые проведена верификация зарегистрированного изделия медицинской техники – прибора «ДиаДэнс-ДТ» для диагностики биологически активных точек при печеночной недостаточности у собак с помощью метода «Биорепер», регистрационное удостоверение №29/230330902/5391-03 от 26 июня 2003г.
Впервые проведена верификация сертифицированной продукции – аппарата «Электростимулятор чрескожный, портативный для воздействия на биологические активные зоны и точки, со встроенными электродами», модели «ЗооДЭНС», сертификат соответствия № РОСС RU. 0001.11МЕ01, ТУ 9439-001-44148620-2007 для лечения печеночной недостаточности у собак с помощью динамической элетронейростимуляции (ДЭНС), ФС№2010/015 от 27 января 2010 г.
Впервые получены научно обоснованные данные о возможности применения предложенного подхода для диагностики и коррекции печеночной недостаточности у мелких домашних животных.
1.4.Практическая значимость работы. В результате проведенного большого объема экспериментальных исследований изучены клинические, биохимические и энзимологические показатели крови при печеночной недостаточности. Методами ультразвукового исследования и биопсии выявлены морфологические изменения в печени в зависимости от тяжести заболевания гепатобилиарной системы. Изучена электропроводность БАТ с помощью «ДиаДэнс-ДТ», которая может служить надежным диагностическим тестом при заболевании.
Разработаны методики коррекции патологии печени на основе препарата, в состав которого входят кластерное серебро, полученное нанобиотехнологическим методом, и желчь крупного рогатого скота – «Фаргентум-G» и совместного его применения с ДЭНС. На основе исследования разработаны методические рекомендации и пособия, утвержденные РАСХН; Технические условия ТУ 9337 – 003 – 14189356-09 и Технические условия ТУ 9337 – 004 – 14189356-09.
Изучена возможность применения раствора кластерного серебра, полученного с помощью нанобиотехнологии, с желчью крупного рогатого скота для коррекции печеночной недостаточности, а также совместного его использования с ДЭНС.
1.5. Апробация материалов диссертации: «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (посвященная 90-летию Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина (Москва, 2009); Международная научно-практическая конференция, посвященная 40-летию ГНУ ВНИВИПФиТ (г. Воронеж, 2010); V Международная научно-техническая конференция студентов и молодых ученых (Москва, МГУПБ, 2010); Международная научная конференция, посвященная 80-летию организации ВГНКИ (Москва, ВГНКИ, 2011); ІІІ Съезд фармакологов и токсикологов России «Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации» (С-Пб., 2011); Х Международная научно-техническая конференция студентов и молодых ученых (Москва, МГУПП, 2011); ІІ Международный конгресс ветеринарных фармакологов и токсикологов, посвященный 80-летию заслуженного деятеля науки РФ, профессора Владимира Дмитриевича Соколова (С-Пб.,2012); Материалы І Международной научно-практической конференции «Проблемы ветеринарной медицины и зооэкологии российского и азиатско-тихоокеанского регионов» (Благовещенск, 13 – 15 июня 2012); Материалы Х Международной научной конференции студентов и молодых ученых (Москва, МГУПП 2012); Материалы VІІ Московского Международного конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, ЗАО «Экспо-биохим-технологии», РХТУ им. Д.И. Менделеева, 19 – 22 марта 2013); Материалы международной научно-практической конференции «Наука и общество в современных условиях» (г. Уфа 30 – 31 октября, 2013);
1.6. Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 29 работ: в сборниках материалов всероссийских и международных конференций, центральных журналах и отдельных изданиях. Из них: в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ для опубликования основных результатов диссертации на соискание ученой степени доктора и кандидата наук – 16 («Политематический сетевой электронный НАУЧНЫЙ ЖУРНАЛ Кубанского государственного аграрного университета» - «КубГАУ» – 6, «Ветеринария» – 2, «Ветеринария и кормление» – 7, «Ученые записки», Белоруссия, Витебск – 1); в региональной печати – 13 (тезисы – 11, Патент РФ – 2).
1.7. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 395 страницах компьютерного текста. Состоит из листа сокращений, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений, списка литературы, включающего 263 источника, в том числе 217 отечественных и 46 иностранных авторов, приложений. Диссертация содержит 102 таблицы и 30 рисунков.
Этиология и патогенез печеночной недостаточности
Печень – выполняет в организме разнообразные функции. В период внутриутробного развития она играет существенную роль в процессе кроветворения; еще у новорожденных и молодых животных печень имеет относительнобольшие размеры (40 – 45 г/кг массы тела) и занимает большое пространство в брюшной полости. У взрослых особей она меньше (20 г/кг массы тела), однако все равно отсается самой крупной железой в организме. Печень участвует в различных обменных процессах, является накапливающим органом, забирает из крови вредные вещества и обеззараживает их, выделяет желчь. Поэтому она связана системой протоков с двенадцатиперстной кишкой. Особенности функционирования печени связаны со своеобразием ее клеток, гепатоцитов, и с ее уникальным включением в систему кровообращения (Фольмерхаус Б., Фревейн Й., 2003).
Гепатоцитами – выполняются все функции печени. Из них формируются балки, образующие печеночную дольку, которая является морфологической и функциональной единицей органа. У собак печеночная долька имеет диаметр до 1 мм (Уша Б.В., 1974, 2002).
Гепатоциты имеют многогранную форму. В их составе регистрируется одно, два или более ядер, хорошо развитых органеллы и включения. В цитоплазме клеток расположены гранулярная эндоплазматическая сеть (ЭПС), рибосомы, мелкие митохондрии и лизосомы. Комплекс Гольджи и гладкая ЭПС принимают активное участие в синтезе желчи, а также гликогена. Гликоген откладывается в гепатоцитах в виде гранул. В клетках в значительном количестве содержатся и другие включения – жир и пигмент (Уша Б.В., 2002). Доли печени. Красно-коричневая грубоэластичная печень собаки отчетливо делится на доли. Паренхима пересекается глубокими междольковыми вырезками, которые идут от острого вентро-латерального края. Печень имеет шесть долей: правую медиальную, правую латеральную, квадратную, левую латеральную, левую медиальную (Акаевский А.И., 1984; Галуаз-Бриде М., 1999). Следует ометить, что в вырезку между медиальной левой долей и квадратной долей входит круглая связка печени, а между медиальной правой долей и квадратной долей глубоко располагатся желчный пузырь, который у взрослых собак касается диафрагмы. Также необходимо указать на типичное деление хвостатой доли, на более крупный, направленный вправо хвостатый отросток, и меньший, пиромидообразный сосцевидный отросток. Под центральной частью хвостатого отростка находятся ворота печени. Вентральный, правый и левый края, а также края долей имеют острые кромки. Дорсальный край – тупой. Над ним по пищеводному вдавливанию, проходит пищевод, а задняя полая вне при пересечении досального края печени полностью охватывается ее тканью ((Уша Б.В., 1979; Галуаз-Бриде М., 1999; Kenawy A.A., 1998).
Поверхность печени, обращенная к диафрагме, имеет выпуклую форму, обеспечивающую плотное прилегание к мышечному куполу. Поверхность, обращенная к прочим органам брюшной полости, в целом вогнутая, в местах контакта с органами на ней образуются особые вдавливания. Эти вдавливания могут иметь различную форму вследствие эластичной консистенции печени и изменений длинны и степени наполнения соседних органов. Кроме того, можно упомянуть желудочное, дуоденальное, ободочное и почечное вдавливание; в почечном вдавливании располагается краниальный полюс праволй почки, только у собаки оно имеет более или менее постоянную форму (Фольмерхаус Б., Фревейн Й., 2003). Таким образом, относительное положение печени и ее соседство с другими органами, видно, что в подреберной части брюшной полости печень заполняет вогнутость диафрагмы. Свободной остается лишь левая дорсальная ниша диафрагмы, и в этом месте к диафрагме прилегает дно желудка. В правой дорсальной нише диафрагмы на уровне XІІ ребра в правую латеральную и хвостовую доли вдавливается краниальный полюс правой почки. Латеральныет края печени с обеих сторон повторяют форму ребер; вентральный край выступает из подреберной области и достигает пупочного жирового тела. Поэтому вентральная части печени у не очень жирных животных можно пальпировать через брюшную стенку (Уша Б.В., 1979).
При наполнении желудка печень смещается и справа придавливается к правой почке. Изменения положения тела также сопровождается изменениями уровня расположения и смещениями в вентральном направлении. У молодых собак, у которых печень имеет еще относительно большие размеры, правая медиальная доля выступает далеко за пределы грудной клетки до уровня пупка (Фольмерхаус Б., Фревейн Й., 2003).
Связки печени. От досального края печени у собак почти полукругом отходят связки к диафрагме. Благодаря им, отдельные доли печени могут сдвигаться относительно друг друга, а сама печень в целом – смещается в поперечной плоскости. Мощная левая треугольная связка, натянута между левой латеральной долей печени и левой ножкой диафрагмы. Правая треугольная связка, более слабая, соединяет правую латеральную долю печени и правую ножку диафрагмы. Венечная связка печени, особенно короткая, дугообразно располагается между обеими треугольными связками. Под задней полой веной она соединяет левую и правую медиальные доли с сухожильным центром диафрагмы.
Разработка препарата на основе кластерного серебра «Фаргентум-G»
Рациональное лечение болезней печени у животных дает положительные результаты даже при поражении 70 – 75% гепатоцитов. Эффективность лечения в значительной мере зависит от стадии болезни, характера и степени поражения тканей органа. Лучшие результаты достигаются при ранней диагностике и комплексном лечении на острой стадии болезни. При хроническом течении, сопровождающемся пролиферацией и склеротизацией междольковой соединительной ткани, лечение менее эффективно (Денисенко В.Н., 2006).
Лечение направлено на устранение этиологических факторов, снижение токсической нагрузки на печень, активизацию обменных и регенерационных процессов в гепатоцитах, нормализацию барьерной, мочевинообразовательной, желчеобразовательной и других функций органа. При выраженном болевом синдроме назначают болеутоляющие, спазмолитические, антигистаминные препараты (Денисенко В.Н., 2006). Этиотропная терапия. При пищевых отравлениях направлена на исключение из рациона животных недоброкачественных кормов.
Рационы животных должны быть сбалансированы по белку, незаменимым аминокислотам – метионину, цистину, триптофану, лизину, углеводам, витаминам и минеральным веществам (Уша Б.В., 2002; Денисенко В.Н., 2006). Патогенетическая терапия. Направлена, прежде всего, на предотвращение накопления токсичных продуктов распада, образующихся в кишечнике, особенно аммиака. Для этой цели используют антибиотики (метронидазол 7,5 мг/кг 3 раза в день перорально или неомицин 5 – 10 мг/кг каждые 8 ч), которые, подавляя микрофлору толстого отдела кишечника, способствуют снижению концентрации аммиака, образованию летучих жирных кислот и превращению метионина в метилмеркаптан. Назначение антибиотиков также является мерой профилактики развития секундарной микрофлоры. Противопоказаны антибиотики тетрациклинового ряда, эритромицин, стрептомицин, линкомицин и сульфаниламидные препараты.
Очень эффективны пробиотики – лактобактерин, бифидобактерин, бифидол, лактобифидол, линекс, интестевит и др., которые предотвращают развитие дисбактериоза, бродильных и гнилостных процессов в кишечнике, нормализуют его моторную и секреторную функции (Денисенко В.Н., 2006).
Для уменьшения всасывания токсинов из кишечника используют энтеросорбенты, обладающие сорбционно-детоксикационными свойствами. Это вещества, которые связывают токсины в кишечнике и вместе с ними выводятся из организма с фекалиями. Энтеросорбенты для перорального применения: энтеросорб, энтеродез, аминодез, энтеросгель, активированный уголь, каолин и др. Их растворяют в воде и выпаивают больным животным в течение 5 – 8 сут (Денисенко В.Н., 2006).
Назначают слабительные препараты лактулозы (2 – 4 мл на 10 кг массы тела 3 раза в день), которые снижают уровень рН содержимого толстого отдела кишечника и ограничивают реабсорбцию аммиака (Денисенко В.Н., 2006).
Желчегонные препараты стимулируют образование желчи гепатоцитами, разжижают ее, повышают тонус желчного пузыря и желчных путей, оказывают спазмолитическое действие. Желчегонные препараты применяют перорально при подостром и хроническом течении. Назначают холагол, холензим, аллохол и др., а также отвары лекарственных трав (Денисенко В.Н., 2006). Гепатопротекторные средства улучшают метаболические процессы в печени, повышают ее устойчивость к патологическим воздействиям и ускоряют восстановление функции при различных повреждениях.
Гепатопротективный эффект могут оказывать препараты различных групп, в том числе витамины (В1, В2, В3, В5, В6,В12, фолиевая кислота, липоевая кислота, аскорбиновая кислота); средства, ингибирующие перекисное окисление липидов и обладающие антигипоксической активностью. В качестве специальных гепатопротекторов используют лекарственные средства легалон, силибилин, препараты растительного происхождения – Лив -52, валилив и др., а также экстракты и гидролизаты печени – серепар, эссенциале и др. Они активизируют обменные и регенерационные процессы в гепатоцитах, содержат пластические вещества, необходимые для восстановления клеточных органелл. Витамины входят в состав коферментов. Гепатотропные препараты и витамины применяют при остром, подостром и хроническом течении болезни печени (Денисенко В.Н., 2006).
Комплексные гомеопатические препараты обладают антигомотоксическим свойством. В состав этих препаратов входит ряд гомеопатических средств, сочетанное действие которых обеспечивает нейтрализацию токсинов и стимуляцию механизмов естественной резистентности (препарты фирмы Hell – Кардус композитум, Холидониум Гомаккорд) (Денисенко В.Н., 2006).
Растворы аминокислот для парентерального питания назначают для парентерального белкового питания в случае развития гипопротеинемий различного происхождения, в том числе и для лечения заболеваний печени, сопровождающихся снижением ее белковообразовательной функции (Полиамин, Вамин, Аминостерил Гепа) (Денисенко В.Н., 2006). Глюкокортикостероиды (ГКС) назначают для стимуляции глюконеогенеза, снижения вязкости желчи и достижения антифиброзного эффекта. Анаболическое действе ГКС на паренхиму печени выражается в увеличении скорости синтеза альбумина и повышении содержания общего белка в печени и сыворотке крови. Обычно применяют преднизолон (Денисенко В.Н., 2006). ГКС показаны при хронических гепатитах аутоиммунной природы, также их назначают в активной стадии цирроза и при выраженной спленомегалии. ГСК противопоказаны при острых и инфекционных гепатитах и на терминальной стадии цирроза (Денисенко В.Н., 2006).
Симптоматическая терапия. Назначают спазмолитические и обезболивающие средства. Атропина сульфат блокирует М холинорецепторы; понижает тонус гладких мышц. Снижает секрецию слюнных, желудочных, бронхиальных, потовых желез, поджелудочной железы. Но-шпа обладает спазмолитической активностью. Снимает спазмы желчных протоков, желчного пузыря, желудка, кишечника. Анальгин обладает анальгезирующим, противоспалительным и жаропонижающим свойствами. Баралгин оказывает анальгетическое и антиспастическое действие при печеночных, кишечных, почечных коликах и спазмах кровеносных сосудов (Денисенко В.Н., 2006).
Результаты первичного исследования собак первой опытной группы с острой печеночной недостаточностью
На рисунке 7 представлен спектр поглощения коллоидного водного раствора серебра после 2,5 лет выдержки при температуре 20 ± 5 С, в рассеянном свете. Видно общее снижение поглощения и размытие резонансной кривой. Вероятно, имеет место агрегация наночастиц серебра в водном растворе и, как следствие, укрупнение агломерирующих частиц, что ведет к сдвигу резонансных частот агломератов в длинноволновую область и уменьшению число частиц, резонирующих на длине волны 387 нм.
ООО «Фрактал» разработаны методика и приборный комплекс для измерений концентраций, оценки распределения наночастиц по размерам и контроля кинетики агрегации наночастиц в растворах в условиях различных воздействий на коллоидную систему.
В качестве источников излучения в УФ-области спектра были выбраны излучающие диоды со спектром излучения, идентичным спектрам поглощения коллоидного раствора. Максимум излучения 390 нм, полуширина спектров интервале 0,5 – 50 нм, Imax 700 мА. В качестве фотоприемников использовали фотосопротивления. В качестве источников питания диодов использовали стабилизаторы тока с регулируемым выходом. Регистрирующей аппаратурой служил осциллограф “Актаком АСК-4106 в режиме самописца.
Измерения концентрации коллоидного серебра. В реакторе получаем раствор коллоидного серебра при фиксированных технологических параметрах ( U, имп, Fимп, Iразр, зазор) и различной длительности процесса: t1;2 t1;4 t1;6 t1;8 t1. Записи измерений коэффициентов поглощения представлены на рисунке 8.
Диаграмма измерения затухания УФ-излучения (=395 нм) в растворе по мере роста концентрации серебра
Время измерения между 0 – 1,1 – 2,2 – 3 60 с. Начиная с точки 5, затухание уменьшается в течение цикла измерения 60 с. Далее затухание за цикл измерения падает все быстрее. От начала измерения видно, что затухание растет пропорционально концентрации (С). Затем, начиная с концентрации 150 мг/л затухание падает в течение цикла измерения. При высоких концентрациях скорость агрегации наночастиц растет под действием зондирующего УФ-излучения. На рисунке 9 приведены результаты измерения влияния интенсивности УФ излучения на скорость агрегации наночастиц серебра.
Уменьшение поглощения коллоидного раствора серебра при разной интенсивности зондирующего УФ излучения (=395 нм) Рассматриваемая методика позволяет эффективно (в короткие сроки) исследовать седиментационную устойчивость растворов полученных при разных режимах работы реактора. На рисунке 10 показана диаграмма изменения поглощения коллоидного раствора серебра (исходная концентрация 150 мг/л) при добавлении к раствору ПАВ. Рис.10. Зондирующее УФ-излучение Кювету с исследуемым коллоидным раствором серебра ставили на подложку для измерения поглощения света с длиной волны =395 нм, проходящего через кювету. В начальный период времени от 0 до 10 мин наблюдался характерный спад коэффициента поглощения вследствие агрегации наночастиц серебра. На 10-й минуте в раствор добавляли поверхностно активное вещество (ПАВ Fary), коэффициент поглощения при этом становился неизменным, что совпадает с общими представлениями о характере действия ПАВ на гидрозоли. Таким образом, если существует необходимость получать высококонцентрированные растворы токопроводящих металлов с длительным сроком хранения, целесообразно прибегнуть к использованию данных средств.
Упаковывание. Полученные лекарственные растворы – частицы высокодисперсного серебра в дистиллированной воде – разливают в пластиковые емкости вместительностью 100, 200, 5 000 мл. При этом предотвращают контакт полученных растворов с металлами, резиной и др.
Москвы «Московское объединение ветеринарии» Городская ветеринарная лаборатория дала следующее заключение по препарату «Фаргентум-G»: при кожной пробе на кроликах, воспалительной реакции не наблюдалось; в опыте на мышах - при пероральном введении его мышам падежа не наблюдалось. При вскрытии убитых мышей патолого-анатомических изменений не обнаружено (ГОСТ Р 52337-2005). Результат исследования по экспертизе № 10085/10, от 29.10.2009г. Код 121025. (см. Приложение 4).
Препарат вводили перорально, после кормления, 2 раза в день (с интервалом 12 ч); дозу препарата для животных назначали из расчета 1 мл/кг массы тела. Способ воздействия ДЭНС: лабильный, 2 раза в день после дачи препарата, длительность сеанса 10 мин. Курс применения «Фаргентум - G» и ДЭНС составлял при ОПН – 14 суток, при ХПН – 19 суток.
Способ ДЭНС лабильный. Сеанс проводят 2 раза в день после выпаивания «Фаргентум-G». Длительность сеанса 10 мин. Воздействие оказывают на биологически активные точки, которые применяют в диагностики функционального состояния печени. Они располагаются на брюшной стороне тела и относятся к меридианам печени, желудка, селезенки – поджелудочному, переднему срединному. Основные диагностические БАТ при заболеваниях печени приведены в таблицах 1 и 2 и на рисунке 1. (Работы выполнены совместно и опубликованы: в зарубежном журнале ВАК РФ – Смирнов А.М. Некоторые аспекты применения инновационных технологий в ветеринарии / А.М. Смирнов, Б.В. Уша, В.В. Светличкин, А.А. Концевова // Научно-практический журнал «Ученые записки», «Витебская государственная академия ветеринарной медицины» – Витебск. – 2011. – Т. 47, вып. 2, часть 1. – С. 205 – 207; журнале ВАК РФ – Уша Б.В. Перспективность различных направлений нанобиотехнологии для ветеринарии / Б.В. Уша, А.А. Концевова, А.М. Смирнов, В.В. Светличкин, А.В. Артемов, О.А. Ярова, С.П. Ярков // Ветеринария. – 2012. – № 2. – С. 53 – 55.).
Коррекция хронической печеночной недостаточности третьей опытной группы с помощью традиционной методики
Признаками ХПН у 55 собак являлись: угнетение, сухость, тусклость, взъерошенность шерстного покрова и повышенная ломкость волос у 100 % животных; анорексия и снижение массы тела – у 29 (52,72 %); жажда – у 38 (69,09 %); рвота – у 18 (32,72 %); диарея – у 25 (45,45 %); меркаптановый запах из ротовой полости – у 20 (36,36 %); запоры – у 30 (54,54 %); метеоризм кишечника – у 19 (34,54 %); гепатомегалия и болезненность при пальпации в эпигастральной области – у 22 (40,0 %); кожный зуд и расчесы – у 18 (32,72 %) собак. Иктеричность слизистых оболочек и непигментированных участков кожи отмечали у 25 (45,45 %), анемичность у 9 (16,36 %), бледно-розовый цвет у 21 (38,18) % обследованных собак. Асцит и приступы колик не выявлены.
Таким образом, основными признаками хронической печеночной недостаточности являются: иктеричность слизистых оболочек и непигментированных участков кожи, снижение массы тела, анорексия, угнетение, жажда, гепатомегалия, сухость, тусклость, взъерошенность шерстного покрова и повышенная ломкость волос.
Шерстный покров (сухой, тусклый, взъерошен, повышенная ломкость волос) 55 (100 %) Результаты клинического, биохимического и энзимологического исследования крови. При клиническом исследовании крови больных собак установлено, что содержание эритроцитов снижено до 5,34 + 0,21 1012 /л, гематокрита до 38,91 + 1,13 %, гемоглобина до 13,21 + 0,51 г/дл, в то время как у здоровых собак они находились на уровне соответственно 6, 84 + 0,14 1012/л, 43,53 + 1,30 %,16,34 + 0,33 г/дл; число тромбоцитов и СОЭ были повышены до 349,15 + 12,89 109/л и до 3,18 + 0,11 мм/ч, а у здоровых животных они находились на уровне соответственно 269,39 + 5,38 109/л и 2,78 + 0,05 мм/ч; число лейкоцитов составляло 8,52 + 0,28 109/л, а у здоровых собак - 8,55 + 0,17 109/л.
Таким образом, у собак с ХПН число эритроцитов было ниже физиологической нормы для животных данного вида и возраста; концентрация гемоглобина и гематокрит находились на нижней границе физиологической нормы; число тромбоцитов было повышенно по сравнению со здоровыми собаками, но не вышло за пределы физиологической нормы; содержание лейкоцитов был практически на уровне такового у здоровых животных, а СОЭ приближалась к верхней границе физиологической нормы.
При биохимическом и энзимологическом исследовании крови больных собак выявили повышенное содержание: общего белка до 64,46 + 2,58 г/л, альбумина до 33,31 + 1,33 г/л, глобулина до 31,15 + 1,25 г/л, в то время как у здоровых собак они находились на уровне соответственно 62, 93 + 1,24 г/л, 31,68 + 0,63 г/л, 31,25 + 0,61 г/л; общего билирубина до 5,19 + 0,14 мкмоль/л и прямого билирубина до 0,015 + 0,00 мкмоль/л, а у здоровых животных значения этих показателей составляли соответсвенно 2,05 + 0,04 мкмоль/л и 0,004 + 0,00015 мкмоль/л; креатинина до 76,46 + 2,86 мкмоль/л и мочевины до 2,87 + 0,13 ммоль/л, против 73,12 + 2,19 мкмоль/л и 2,28 + 0,05 ммоль/л у здоровых собак; АсАТ до 44,17 + 1,76 МЕ/л, АлАТ до 55,08 + 2,18 МЕ/л и ЩФ до 127,91 + 5,06 МЕ/л, а у здоровых особей эти показатели находились на уровне 10,51 + 0,21 МЕ/л, 12,07 + 0,24 МЕ/л и 61,05 + 2,44 МЕ/л; -амилазы до 680,18 + 26,93 Мг/(сл), против 26,57 + 0,79 Мг/(сл) у здоровых животных; холестерина до 5,68 + 0,16 ммоль/л, против 4,23 + 0,08 ммоль/л; триглицеридов до 0,70 + 0,01 ммоль/л, против 0,60 + 0,01 ммоль/л; ЛДГ до 186,06 + 7,44 МЕ/л и ГГТ до 5,74 + 0,17 МЕ/л, тогда как у здоровых собак эти показатели находились на уровне соответственно 121,50 + 4,86 МЕ/л и 5,07 + 0,15 МЕ/л.
Биохимические и энзимологические показатели крови собак с хронической печеночной недостаточностью Показатель Единицы измерения Собаки с ХПН (n=55) Здоровые собаки (n=10) Норма (для собак) Таким образом, концентрации: общего белка, альбумина, глобулина, креатинина, мочевины, холестерина, триглицеридов и ГГТ были повышены, по сравнению со здоровыми животными, но находились в пределах физиологической нормы; содержание общего и прямого билирубина, АсАТ, АлАТ, ЩФ, -амилазы и ЛДГ значительно превышало физиологические значения этих показателей для собак.
Результаты урологических и копрологических исследований. При определении физических свойств установлено, что моча от бурого до темно-желтого цвета, мутная, слизистой консистенции, с неприятным запахом. При химическом исследовании выявлено наличие желчных кислот, белка, кетоновых тел, глюкозы, уробилина и билирубина (см. рисунок 14 а, б) Интенсивность реакции оценивали следующим образом: “++” – выраженная реакция, “+++” – ярко выраженная реакция).
При исследовании фекалий установлено: массы оформленные, от светло-серого до глинистого цвета. Яиц паразитов методом Фюллеборна не выявлено.
Результаты ультразвукового исследования и биопсии печени. При ультразвуковом исследовании (УЗИ) у отобранных 55 животных в паренхиме печени наблюдали жировую и вакуольную дистрофии. Для подтверждения диагноза мы провели гистологическое исследование ткани печени с помощью прицельной биопсии, выполненной под контролем УЗИ.
У 12 собак регистрировали жировую дистрофию. Печень выступает за край реберной дуги, увеличена в размерах. Структура печени диффузно неоднородная, крупнозернистая. В органе визуализируются многочисленные облиторированные сосуды с эхопозитивными умеренно склерозированными стенками. Капсула печени слабо визуализируется.
При гистологическом исследовании биоптатов в пределах всей печеночной дольки в клетках выявлены пустоты, соответствующие местам отложения жира, растворившегося в спиртах и ксилоле в процессе приготовления препаратов. Балочное строение неразличимо вследствие сдавливания внутридольковых капилляров увеличенными измененными печеночными клетками. При этом жировая ткань почти полностью замещает печеночную паренхиму, которая становиться похожей на жировую клетчатку (рисунок 22).
У 20 собак диагностировали жировую дистрофию. Печень не выступает за край реберной дуги, но незначительно увеличена. Структура печени диффузно неоднородная, крупнозернистая. Края органа неровные, закругленные. Отмечается усиление рисунка капсулы печени и диафрагмы.
