Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 9
1.1 Яичник позвоночных в качестве объекта трансплантации и факторы, влияющие на ее результаты 9
1.2 Некоторые методы трансплантации яичника и их применение в экспериментальной биологии и медицине 14
1.3 Биотехнические подходы к искусственной репродукции птиц путем ортотопной трансплантации яичника молодкам-реципиентам 21
2. Материал и методы исследования 40
3. Результаты исследования и их обсуждение 57
3.1 Влияние породы цыплят на результаты проведения у них операций овариэктомии и ортотопной трансплантации яичника 57
3.2 Изменчивость результатов проведения ортотопных трансплантаций донорского яичника между цыплятами разных пород без применения каких-либо приемов преодоления барьеров гистонесовместимости 68
3.3 Новый способ сравнительной оценки силы реакции гистонесовме-стимости у птиц и возможность его практического использования при проведении ортотопных трансплантаций донорского яичника между цыплятами разных пород 81
3.4 Модифицированные способы индукции иммунотолерантности у птиц и возможность их практического использования при проведении ортотопных трансплантаций донорского яичника между цыплятами разных пород 89
Выводы 100
Рекомендации юз
Список литературы 104
Приложения 134
- Некоторые методы трансплантации яичника и их применение в экспериментальной биологии и медицине
- Биотехнические подходы к искусственной репродукции птиц путем ортотопной трансплантации яичника молодкам-реципиентам
- Изменчивость результатов проведения ортотопных трансплантаций донорского яичника между цыплятами разных пород без применения каких-либо приемов преодоления барьеров гистонесовместимости
- Новый способ сравнительной оценки силы реакции гистонесовме-стимости у птиц и возможность его практического использования при проведении ортотопных трансплантаций донорского яичника между цыплятами разных пород
Введение к работе
Актуальность темы. Одной из биологических проблем птицеводства является то, что почти все известные методы искусственной репродукции сельскохозяйственных птиц имеют существенные недостатки.
Так, известный метод искусственной репродукции птиц путем трансплантации овулировавшего желтка в воронку яйцевода несушки-реципиента [58;89] не достаточно технологичен, поскольку необходимость в проведении такой довольно сложной хирургической операции возникает при получении каждого яйца.
Известен также метод искусственной репродукции птиц путем трансплантации бластодиска на мембрану желтка не оплодотворенного яйца [117], но он совершенно не эффективен, поскольку трансплантированные эмбрионы замирают уже на ранних стадиях развития.
Наряду с этими известны методы искусственной репродукции птиц путем инъекции бластодермальных [118;130;254;266] или примордиальных клеток [201;255;267;271;296] ранним эмбрионам-реципиентам, которые также не достаточно технологичны и эффективны, поскольку проведение этих трудно выполнимых манипуляций в яйце приводит к гибели большинства эмбрионов-реципиентов на разных стадиях развития. Кроме того, далеко не все полученные таким путем химерные особи могут быть использованы в качестве производителей донорского потомства, поскольку многие из них оказываются либо только соматическими химерами, либо совершенно бесплодными из-за несовпадения генетического пола реципиентов и доноров герминативного материала.
Указанные недостатки известных методов искусственной репродукции птиц крайне затрудняют или делают вообще не возможной разработку на их основе различных биотехнологий, имеющих своей целью получение, сохранение или размножение особей с уникальным генотипом. В связи с этим актуальной темой научных исследований в области птицеводства продолжает оставаться изыскание и разработка альтернативных методов
искусственной репродукции птиц.
Весьма перспективной альтернативой известным методам искусственной репродукции птиц является ортотопная, то есть, прямоместная (от греч. орто - прямо и топос - место) трансплантация донорского яичника предварительно стерилизованным молодкам-реципиентам, предложенная еще в начале прошлого века Гатри [210;211]. Этот метод предполагает, что полученные таким путем несушки-реципиенты, фертильные за счет функций трансплантата донорского яичника, могут быть использованы в качестве искусственных производителей донорского потомства. Но, поскольку такие особи являются трансплантационными химерами, то они могут послужить также в качестве экспериментальной биологической модели при выяснении некоторых вопросов биологии развития, физиологии и генетики птиц.
Однако в пионерской работе Гатрй и ряде работ других исследователей [92;95;187;209] по ортотопной трансплантации донорского яичника между молодками кур разных пород были допущены серьезные методические погрешности при постановке экспериментов. При этом, в частности, были использованы не достаточно надежные способы выполнения хирургических операций, а также проигнорирована необходимость применения методов генетического анализа при выяснении происхождения фертильно-сти у несушек-реципиентов, что привело к получению сомнительных или явно отрицательных результатов. Поэтому достаточно убедительные доказательства принципиальной возможности искусственной репродукции птиц указанным путем были представлены лишь в 1969 году Браром и Бенуа [174], которые провели ортотопные трансплантации донорского яичника между перепелками двух родственных пород после предварительной стерилизации реципиентов радиационным методом.
В последующие же десятилетия сообщений о проведении аналогичных работ на птицах в доступной литературе не появлялось и лишь в по-
следние годы снова наметился интерес к таким исследованиям (Song а. Silversides, 2006). В связи с этим многие вопросы, касающиеся технических возможностей получения несушек-реципиентов, фертильных за счет функций трансплантата донорского яичника, до недавних пор оставались не выясненными.
Так, не достаточно была изучена техника выполнения операций ова-риэктомии и ортотопной трансплантации яичника у молодняка птиц, а также возможность влияния их возраста и- породной принадлежности на результаты проведения этих операций. Не было также достоверных данных об изменчивости результатов проведения ортотопных трансплантаций донорского яичника между молодками птиц разных пород без применения каких-либо приемов преодоления барьеров гистонесовместимости. Кроме того, не были изучены некоторые способы оценки и преодоления барьеров гистонесовместимости у птиц, а также возможность их практического использования при проведении ортотопных трансплантаций донорского яичника между молодками разных пород.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей диссертационной работы явилось изучение и разработка биотехнических подходов к искусственной репродукции кур путем ортотопной трансплантации донорского яичника молодкам-реципиентам.
Задачи исследования были сформулированы следующим образом:
Изучить влияние породы цыплят на результаты проведения у них операций овариэктомии и ортотопной трансплантации яичника;
Изучить изменчивость результатов проведения ортотопных трансплантаций донорских яичников между цыплятами разных пород без применения каких-либо приемов преодоления барьеров гистонесовместимости;
Изучить некоторые способы сравнительной оценки силы реакции гистонесовместимости у птиц и возможность их практического использования при проведении ортотопных трансплантаций донорского яичника
между цыплятами разных пород;
4. Изучить некоторые способы индукции иммунотолерантности у птиц и возможность их практического использования при проведении ор-тотопных трансплантаций донорского яичника между цыплятами разных пород.
Научная новизна исследования. Новизна настоящей работы состоит в том, что впервые выявлено влияние некоторых породных особенностей цыплят на результаты проведения у них операций овариэктомии и ор-тотопной трансплантации яичника, а также установлены пределы изменчивости результатов проведения ортотопных трансплантаций донорского яичника между цыплятами разных пород без применения каких-либо приемов преодоления барьеров гистонесовместимости. Кроме того, предложен новый способ сравнительной оценки силы реакции гистонесовместимости у птиц (Пат. РФ № 22633318, приор, от 01.12.2003 г.) и проведена сравнительная оценка эффективности некоторых известных, но модифицированных нами способов индукции иммунотолерантности у птиц, а также показана возможность их практического использования при проведении ортотопньїх трансплантаций донорского яичника между цыплятами разных пород.
Практическое значение исследования. В настоящей работе установлено, что при проведении ортотопных трансплантаций донорского яичника между цыплятами разных пород без применения каких-либо приемов преодоления барьеров гистонесовместимости частота получения кур-реципиентов, фертильных за счет функций трансплантата, в целом не велика и колеблется в разных сочетаниях пород и вариантах трансплантации от 0 до 20,0 % в зависимости от частоты приживления трансплантатов и некоторых породных особенностей реципиентов, в частности - направления их продуктивности, типа конституции и уровня яйценоскости. Кроме того, показано, что предложенный нами новый способ сравнительной оценки силы
реакции гистонесовместимости у птиц может быть использован для выявления тех сочетаний пород и вариантов трансплантаций, в которых вероятность приживления трансплантатов донорского яичника наиболее высока, а частота получения кур-реципиентов, фертильных за счет их функций, достигает верхнего предела ее изменчивости. Наряду с этим установлено, что только один из двух известных, но модифицированных нами способов индукции иммунотолерантности у птиц достаточно эффективен, а его применение при проведении ортотопных трансплантаций донорского яичника между цыплятами разных пород позволяет повысить результативность таких трансплантаций против ее исходного уровня от 2 до 5 раз.
На защиту выносятся следующие основные положения диссертации:
Влияние породы цыплят на результаты проведения у них операций овариэктомии и ортотопной трансплантации яичника.
Изменчивость результатов проведения ортотопных трансплантаций донорского яичника между цыплятами разных пород без применения каких-либо приемов преодоления барьеров гистонесовместимости.
Новый способ сравнительной оценки силы реакции гистонесовместимости у птиц и возможность его использования для повышения результативности ортотопных трансплантаций донорского яичника между цыплятами разных пород.
Модифицированные способы индукции иммунотолерантности у птиц и возможность их использования для повышения результативности ортотопных трансплантаций донорского яичника между цыплятами разных пород.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на Всесоюзной научно-технической конференции «Применение биотехнологий в животноводстве, растениеводстве и ветеринарии» 11-13 октября 1988 года в г. Ленинграде, на I Украинской конференции с международным
участием «Актуальные проблемы современного птицеводства» 4-5 декабря 1991 года в г. Харькове, на Конференции Российского отделения ВНАП 4-6 августа 1999 года в г. Зеленограде, на XXI Международном конгрессе по птицеводству 20-24 августа 2000 года в г. Монреале (Канада), на III Украинской конференции с международным участием «Актуальные проблемы современного птицеводства» 18-21 сентября 2001 года в г. Алуште, а также на 4 Международной научной конференции «Актуальные проблемы биологии в животноводстве» 5-7 сентября 2006 года в г. Боровске.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 научных статей, в том числе 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК, а также получено авторское свидетельство об изобретении и патент на изобретение.
Некоторые методы трансплантации яичника и их применение в экспериментальной биологии и медицине
После того, как стало известно о вышеуказанных биологических особенностях яичника и гонад в целом, были предложены разные методы их трансплантации, которые со временем нашли достаточно широкое применение в экспериментальной биологии и медицине. В частности, методы подкожной и внутрибрюшной трансплантации гонад были использованы для изучения механизмов формирования половых признаков у позвоночных разных классов [49], в том числе - у пресмыкающихся [236] и птиц [50; 173; 196]. С помощью этих же методов были изучены некоторые механизмы регуляции размера гонад и половой активности у птиц [93; 109; 147], а также возможность получения у них некоторых фенотипических изменений [20;92].
Наряду с этим еще в первой половине прошлого века был предложен метод нормализации гормонального статуса у женщин, страдающих разными формами эндокринопатии, путем имплантации им в область бедра или передней стенки лшвота фрагментов донорского яичника [34;44;123;282]. Позже было установлено, что он намного эффективнее гормонального метода и, не смотря на отторжение донорского имплантата, может приводить даже к полному восстановлению репродуктивной способности у реципиентов [136;148;166;188;250]. В дальнейшем этот метод был значительно усовершенствован путем применения разных способов консервации яичника [41;61;82] и преодоления барьеров гистонесовмести-мости [68;81;269], благодаря чему он остается востребованным до сих пор [21;61;72;74;149].
Но еще раньше, то есть, в начале прошлого века был предложен метод восстановления фертильности у женщин с непроходимостью маточных труб путем внутриматочной трансплантации им собственных яичников [188;228]. После значительного усовершенствования [10;34;70;200;235;249] этот метод получил достаточно широкое распространение в медицинской практике [40; 122; 193]. Однако со временем выяснилось, что внедрение яичников в матку нередко приводит к возникновению различных нарушений в состоянии здоровья реципиентов [47; 102], поэтому уже к 60-м годам прошлого века указанный метод утратил свое практическое значение. Следует отметить, что в немалой степени этому способствовала и разработка современного метода искусственной репродукции человека путем внутри-маточной трансплантации яйцеклеток или ранних эмбрионов [3;94].
В то же время была показана возможность восстановления фертильносте у женщин, страдающих поликистозом и новообразованиями гонад, путем их удаления и трансплантации на естественное место фрагментов собственных или донорских яичников [185;250]. Однако ортотопная трансплантация донорского яичника не нашла широкого применения в медицинской практике из-за возникновения этико-правовых проблем, связанных с выбором донора. Что же касается аутопластики яичника у женщин, то она практикуется до сих пор, а объектами для отработки ее приемов в разные годы послужили обезьяны и кролики [106;159;241;243].
Кроме того, в разные годы прошлого века предпринимались попытки искусственной репродукции аналогичным методом таких сельскохозяйственных и промысловых млекопитающих, как овцы [295] и свиньи [96], а также кролики [9;71;91;242] и норки [11; 12; 13] с целью выяснения возможности наследования так называемых приобретенных признаков у животных. Однако эти исследования не получили дальнейшего развития, что объясняется как упрочением позиций генетики в биологии, так и появлением более простого и доступного метода искусственной репродукции крупных млекопитающих путем внутриматочной трансплантации самкам-реципиентам донорских яйцеклеток или зигот [60;80;162].
Более продуктивными в этом плане оказались аналогичные исследо вания, проведенные на лабораторных животных таких видов, как морские свинки [178; 179] и сирийские хомячки [264], а также крысы [262;263] и мыши [272;273]. После демонстрации принципиальной возможности искусственной репродукции этих мелких млекопитающих путем ортотопной трансплантации донорских яичников самкам-реципиентам последовала детальная разработка рассматриваемого метода. В частности, была усовершенствована техника выполнения необходимых хирургических операций у реципиентов [286;289], а также изучено влияние факторов гистосовмести-мости на результаты трансплантаций донорского яичника между самками разных инбредных линий [226;231]. Кроме того, была показана возможность повышения результативности таких трансплантаций путем применения разных способов преодоления барьеров гистонесовместимости [230;277], а также использования в качестве трансплантатов эмбриональных и неонатальных яичников [244;276]. В то же время было установлено, что трансплантация криоконсервированных яичников также позволяет получить некоторое количество фертильных самок-реципиентов, но уровень их фертильности оказываются значительно ниже, чем обычно [7;259;265]. Такая детальная разработка этого метода позволила использовать его для выяснения некоторых вопросов физиологии [161;197;232;257 и генетики [227;278;290] лабораторных млекопитающих указанных видов, а также для сохранения некоторых мутантных линий мышей, не способных к естественной репродукции из-за полной стерильности самок [54].
Биотехнические подходы к искусственной репродукции птиц путем ортотопной трансплантации яичника молодкам-реципиентам
Как известно, у самок птиц функционирует только левый яичник, а правый представлен индифферентным в половом отношении рудиментом (прогонадой). У взрослых самок яичник имеет вид грозди фолликулов разной степени зрелости, которая подвешена к верхней стенке брюшной полости между надпочечником и почкой на короткой соединительно-тканной связке, называемой мезоварием. Через мезоварий в яичник входят питающие его нервы и сосуды [15;25;78;90]. Такое строение яичника у взрослых самок птиц и молодок старшего возраста позволяет сравнительно легко выполнять у них операцию овариэктомии, то есть, иссечения этого органа [204;281].
У молодок же раннего возраста яичник представляет собой ромбовидную эпителиальную пластинку, состоящую из трех слабо дифференцированных долей, каждая из которых прочно прикреплена к подлежащим органам. При этом передняя доля яичника прилегает к оболочке левого надпочечника, средняя доля, включающая в себя зачатки соединительнотканной связки и нервно-сосудистой ножки - к спинной части брюшной полости, а задняя доля - к стенке очень крупной левой подвздошной вены, расположенной вдоль нижнего края левой почки [15;25;154]. Вследствие такого сложного строения этого органа операция овариэктомии у молодок птиц раннего возраста технически трудно выполнима, причем, как отмечают многие авторы, ее проведение нередко сопровождается крупным кровотечением, возникающим из-за повреждения стенки выше указанной вены [50;192;247]. Что же касается способов выполнения этой операции у молодок птиц раннего возраста, то в работах разных авторов они несколько различаются в зависимости от целей исследования и использованных технических средств. При этом детального их описания в большинстве публикаций не приведено [50;95;160;187], но в целом они сводятся к последовательной экстирпации, то есть, вылущиванию, сначала периферических долей, а затем средней доли яичника [177;247]. В связи с тем, что при проведении этой операции нередко возникает крупное кровотечение, то некоторая часть прооперированных молодок погибает от полного обескровливания, а у большинства выживших особей полного удаления яичника добиться не удается. Поэтому в некоторых работах после удаления основной части яичника его остатки прижигали специальным термокаутером [160;192;204;247].
Однако во многих случаях, в частности - при проведении ортотопных трансплантаций донорского яичника, прижигание остатков собственного яичника у овариэктомированных молодок птиц крайне не желательно. Поэтому в работе Брара и Бенуа [174] перед проведением ортотопных трансплантаций донорского яичника между молодками перепела двух разных пород была предпринята попытка стерилизации будущих реципиентов с помощью рентгеновского излучения. Для этого не задолго до проведения операций их подвергали двукратному с интервалом в 5 дней облучению в области расположения гонад в суммарной дозе 1200 Р. Такая доза облучения оказалась не достаточной для полной стерилизации молодок, но вызывала существенное снижению общей массы их тела. Позже нами был проведен аналогичный эксперимент на цыплятах 3-4 недельного возраста [64]. При этом двукратное облучение зоны расположения яичника в суммарной дозе 1500 Р также привело к снижению общей массы тела и сохранности облученных цыплят при выращивании, а добиться полной их стерилизации не удалось. После повышения же суммарной дозы облучения до 1800 Р большинство цыплят погибло от острой лучевой болезни вскоре после обработки, что объясняется, видимо, повышенной чувствительностью молодняка животных, в частности - птиц, к жестким излучениям [275]. В связи с этим применение радиационного метода стерилизации при проведении операции овариэктомии у молодок птиц раннего возраста представляется не целесообразным.
С учетом этих данных заслуживает внимания тот факт, что с возрастом в яичнике молодняка птиц происходят весьма существенные морфологические изменения. Проявляется это, прежде всего, в том, поверхность этого органа становится бугристой, а его общая масса постепенно увеличивается, что, как известно, связано с образованием и ростом фолликулов. В то же время развивается его нервно-сосудистый аппарат и подвешивающая связка, а связь его периферических долей с подлежащими органами постепенно ослабляется [26;78;83;150;153]. Сведения об этой возрастной изменчивости яичника у птиц дает основания предполагать, что результативность операции овариэктомии у молодняка разного возраста также может существенно различаться, но прямых указаний на это в доступной литературе выявить не удалось. Не удалось также выявить каких-либо данных о сравнительной эффективности разных способов выполнения этой операции у молодок птиц.
Изменчивость результатов проведения ортотопных трансплантаций донорского яичника между цыплятами разных пород без применения каких-либо приемов преодоления барьеров гистонесовместимости
Но, не смотря на то, что значительная часть кур-реципиентов разных пород имела прижившийся трансплантат донорского яичника, большинство из них оказались не способными к яйцекладке по разным причинам. Наиболее частой причиной стерильности кур-реципиентов, имевших прижившийся трансплантат, явилась дегенерация, то есть, обратное развитие этого трансплантата. Куры-реципиенты, стерильные по указанной причине, даже по достижению возраста половой зрелости выглядели как интерсексы, то есть, бесполые особи. При вскрытии у них нередко обнаруживали наличие не только дегенерировавшего трансплантата яичника, но и овотестиса, развившегося из правой рудиментарной гонады (прогонады). При этом сам дегенерировавший трансплантат имел относительно низкую массу и по форме напоминал либо инфантильный яичник с мелкими и почерневшими фолликулами, либо овотестис с зернистой или практически гладкой поверхностью. Доля особей, стерильных по указанной причине, среди кур-реципиентов разных пород была различной и колебалась в разных сочетаниях пород и вариантах трансплантации от 14,3 до 35,7 %. При этом в тех вариантах, где частота приживления трансплантатов была сравнительно низкой и составляла не более 26,4 %, все куры-реципиенты, имевшие прижившийся трансплантат, оказались стерильными из-за его дегенерации. Объяснить это можно тем, что дегенерация прижившихся трансплантатов донорского яичника обусловлена факторами гистосовместимости и является свидетельством их хронического отторжения. На это указывает и тот факт, что в предыдущей серии экспериментов при проведении трансплантаций собственного яичника у цыплят разных пород случаев их дегенерации не было.
Следующей по частоте причиной стерильности кур-реципиентов, имевших прижившийся трансплантат донорского яичника, явилась инкапсуляция этого трансплантата спайками, образовавшимися между серозными оболочками окружающих его листков брюшины. Куры-реципиенты, не способные к яйцекладке из-за инкапсуляции прижившегося трансплантата, сначала выглядели как обычные несушки, но, по мере накопления в образовавшейся капсуле овулировавших желтков и фолликулярной жидкости, их живот значительно увеличивался и некоторые из них погибали от удушья или желточного перитонита. Доля особей, оказавшихся стерильными по указанной причине, среди кур-реципиентов разных пород была различной и колебалась от 0 до 34,5 %, причем, среди кур-реципиентов линии П6 породы белый леггорн таких особей не оказалось, а среди кур-реципиентов русской белой (РБ) и калифорнийской серой (КС) пород доля их была максимальной. Как было отмечено выше, объясняется это тем, что у цыплят яичной линии ГТ6, имеющих наиболее нежную конституцию, операция ова-риэктомии обычно протекает наиболее успешно, что позволяет избежать излишней травматизации серозных оболочек окружающих органов и образования спаек между ними. У цыплят же русской белой и калифорнийской серой пород мясо-яичного направления продуктивности, имеющих наиболее грубую конституцию, та же операция нередко сопровождается возникновением крупного кровотечения из подлежащей вены, что неизбежно приводит к травматизации окружающих яичник серозных оболочек листков брюшины и последующему образованию спаек вокруг прижившегося трансплантата.
Еще одной причиной стерильности некоторой части кур-реципиентов, имевших прижившийся трансплантат донорского яичника, являлась дисфункция этого трансплантата. Куры-реципиенты, не способные к яйцекладке из-за дисфункции прижившегося трансплантата, на протяжении всего периода наблюдения имели не достаточно развитые гребень и сережки, то есть, выглядели молодками, а прижившийся у них трансплантат яичника не содержал зрелых и созревающих фолликулов, то есть, оставался инфантильным. Доля особей, оказавшихся стерильными по указанной причине, среди кур-реципиентов разных пород была различной и колебалась от 0 до 10,0 %, причем, такие особи встречались только в тех породах, которые находятся в генетической коллекции. Как было отмечено выше, объясняется это тем, что сохранение кур разных пород в генетической коллекции в виде малочисленных аутбредных популяций не исключает возможности их инбредизации, из-за чего некоторые несушки имеют пониженную яйценоскость, а при их использовании в качестве реципиентов наблюдается полная дисфункция трансплантата донорского яичника.
Однако некоторая часть кур-реципиентов, имевших прижившийся трансплантат донорского яичника, все же оказалась фертильной за счет функций этого трансплантата. Внешне эти куры-реципиенты ничем не отличались от обычных несушек, но их половое созревание происходило на 1-2 недели позже, чем у интактных кур тех же пород. Если же снесение первых яиц у них начиналось одновременно с интактными курами, то их фертильность имела либо смешанное происхождение, либо только за счет функций мелких остатков собственного яичника, но по истечению 2-3 недель яйцекладки запас яйцеклеток в этих остатках полностью истощался и после недельного перерыва они начинали нести яйца только за счет яйцеклеток из трансплантата. Доля особей, имевших фертильность за счет функций трансплантата донорского яичника, среди кур-реципиентов разных пород была различной и колебалась в разных сочетаниях пород и вариантах трансплантации от 0 до 14,3 %, причем, получены они были только в тех сочетаниях пород и вариантах трансплантации, где частота приживления трансплантатов донорского яичника была достаточно высокой и колебалась от 46,9 до 60,0 %, а в качестве реципиентов были использованы цыплята некоторых яичных пород и линий, а именно - итальянской куро-патчатой (ИК), нью-гемпшир (НГ) и П6, имеющих достаточно нежный тип конституции
Новый способ сравнительной оценки силы реакции гистонесовме-стимости у птиц и возможность его практического использования при проведении ортотопных трансплантаций донорского яичника между цыплятами разных пород
В 3 серии экспериментов были изучены некоторые способы сравнительной оценки реакции гистонесовместимости у птиц путем реципрокного проведения известного кожно-трансплантационного теста на гистосовме-стимость между партнерами разного происхождения, а также возможность их практического использования при проведении о. т. д. я. между цыплятами разных пород. Основные результаты настоящей серии экспериментов представлены в таблицах 6 и 7.
Как видно из таблицы 6, результаты реципрокного проведения известного кожно-трансплантационного теста на гистосовместимость (дальше - к.-т. т. г.). между цыплятами некоторых пород и линий двух разных возрастов оказались совершенно различными.
Так, при реципрокном проведении этого к.-т. т. г. между цыплятами некоторых пород и линий 14 дневного возраста трансплантаты донорской кожи отторглись, то есть, отмерли с образованием струпа у всех реципиентов разных пород уже к концу 2 недели после трансплантации. Следует отметить, однако, что процесс их отторжения несколько варьировал по продолжительности в пределах этого срока, причем, у большинства реципиентов он занимал не более 2-3 дней и заканчивался уже к 8-9 дню, а у меньшей их части этот процесс был несколько более растянутым и заканчивался к 10-13 дню после трансплантации. При этом наблюдались некоторые различия по частоте сохранения трансплантатов к указанным срокам в разных вариантах трансплантации внутри конкретных сочетаний пород, но обнаруженная разность была не значительной и трудно уловимой.
При проведении же того же теста между цыплятами тех же пород, но 2 дневного возраста лишь меньшая часть реципиентов отторгла трансплантаты донорской кожи уже к концу 2 недели после трансплантации, тогда как у большинства из них отторжение произошло в значительно более поздние сроки, а именно - в период со 2 по 14 неделю после трансплантации. Необходимо отметить, что с удлинением сроков отторжения трансплантатов сам этот процесс становился все более растянутым во времени, а в тех случаях, когда трансплантаты сохранялись вплоть до 10 недели после трансплантации и дольше, их отторжение происходило не путем образования струпа, как обычно, а путем постепенного слущивания отмирающего эпителия и появления-на их месте едва заметного блестящего шрама. Однако главным отличием результатов этого эксперимента от предыдущего явилось то, что в 2 из 3 испытанных сочетаний пород обнаружилась достоверная (при Р 0,1) разность между разными вариантами трансплантации по-частоте сохранения трансплантатов к определенному сроку. Важно отметить также то, что разность по указанному признаку проявлялась уже к концу 2 недели после трансплантации и сохранялась до конца периода наблюдения.
Результаты этой серии экспериментов свидетельствуют о том, что при реципрокном проведении к.-т. т. г. между цыплятами нескольких пород и линий 14 дневного отторжение трансплантатов донорской кожи закончилось уже к концу 2 недели после трансплантации, а существенных различий по частоте сохранения трансплантатов в пределах этого срока между разными вариантами трансплантации ни в одном из трех испытанных сочетаний пород обнаружить не удалось. Объяснить это можно тем, что у цыплят указанного возраста, имеющих, как известно, уже вполне компетентную иммунную систему, процесс отторжения трансплантатов донорской кожи протекает в острой или под острой форме, то есть, в очень сжатые сроки и поэтому некоторая вариабельность по частоте их сохранения в этот период в разных сочетаниях пород и вариантах трансплантации остаются мало заметными. При реципрокном же проведении того же теста между цыплятами тех же пород, но 2 дневного возраста отторжение трансплантатов донорской кожи протекало в период со 2 до 14 неделю после трансплантации, а в 2 из 3 испытанных сочетаний пород были обнаружены весьма существенные различия между разными вариантами трансплантации по частоте сохранения трансплантатов в определенные сроки. Объясняется это тем, что у цыплят неонатального возраста, имеющих еще не достаточно компетентную иммунную систему, процесс отторжения трансплантатов донорской кожи протекает в хронической форме и поэтому некоторая вариабельность по частоте их сохранения к тому или иному сроку в разных сочетаниях пород и вариантах трансплантации в них становится значительно более заметной.
Обнаруженная асимметричность результатов реципрокного проведения известного к.-т. т. г. между цыплятами разных пород неонатального возраста, судя по литературным данным [35; 125; 151], указывает на то, что партнеры разного происхождения в некоторых сочетаниях пород имеют существенные различия по силе так называемых реакций гистонесовме-стимости, то есть, иммунных реакций на несовместимые антигены донорских тканей. В связи с этим указанная модификация известного к.-т. т. г. была представлена нами в качестве нового способа сравнительной оценки силы реакции гистонесовместимости у птиц (Пат. № 22633318 РФ, приор, от 01.12.2003 г.), а реципрокное проведение указанного теста между цыплятами разных пород иммунокомпетентного возраста было признано аналогичным, но не достаточно эффективным способом.
Для выяснения возможности практического использования предложенного нами нового способа сравнительной оценки этой реакции у птиц при проведении о. т. д. я. между цыплятами разных пород было проведено сравнение некоторых экспериментальных данных, полученных в настоящей и предыдущей сериях экспериментов. Основной момент сравнения этих данных представлен в сводной таблице 7.
