Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1. Биологические особенности вируса инфекционной бурсальной болезни (ИББ) 11
1.2. Распространение и особенности патогенеза и инфекционного процесса при ИББ 14
1.3. Экономический ущерб 15
1.3.1. Морфология и химический состав вируса 16
1.3.2. Устойчивость вируса 18
1.3.3. Иммунобиологическая реакция птицы на антигены вируса 19
1.3.4. Культивирование вируса 20
1.3.5. Иммунодепрессивные свойства вируса 25
1.4. Характер проявления эпизоотического процесса при ИББ 31
1.5. Клинические признаки и течение болезни 36
1.6. Патологоанатомические изменения 39
1.7. Методы диагностики \ 40
1.7.1. Выделение возбудителя вКЭ и ФЭК 43
1.7.2. Постановка биопробы 44
1.7.3. Реакция нейтрализации 46
1.7.4. Реакция диффузионной преципитации 47
1.7.5. Метод флуоресцирующих антител 51
1.7.6. Иммуноферментный анализ 53
1.7.7. Гистологический диагноз 54
1.7.8. Влияние лучистой энергии на поствакцинальный иммунитет 55
1.7.9. Влияние бентонитовых глин (ирлитов) на формирование поствакцинального иммунитета 60
1.8. Специфическая профилактика инфекционной бурсальной болезни 63
Глава 2. Материалы и методы исследования 80
Глава 3. Результаты собственных исследований 92
3.1. Изучение биологических свойств вакцинного штамма «СТ» вируса инфекционной бурсальной болезни кур 92
3.1.1. Патогенность вируса ИББ для эмбрионов 93
3.1.2. Патогенность вируса ИББ для цыплят 98
3.1.3. Культивирование вируса ИББ в культуре клеток 107
3.1.4. Бляшкообразующие свойства вируса ИББ 115
3.1.5. Изучение контаминации штамма «СТ» посторонними микроорганизмами 119
3.1.6. Изучение стабильности штамма «СТ» вируса 120
3.1.7. Морфология и структура вируса 121
3.1.8. Гемагглютинирующая активность 123
3.1.9. Изучение условий хранения вируса и влияние физико-химических факторов на вирус ИББ 124
3.1.10. Лиофилизация вируса 125
3.1.11. Интерферогенная активность вируса 130
3.1.12. Иммунодепрессивная активность штамма «СТ» 133
3.1.13. Иммуногенная активность вакцинного штамма «СТ» 138
3.1.14. Проверка штамма «СТ» на безвредность 144
3.1.15. Реверсибельность вакцинного штамма «СТ» 146
3.2. Изучение действия светолазерной обработки инкубационных яиц для стимулирования иммуногеннои активности вирусвакцины из штамма «СТ» 147
3.3. Изучение влияния бентонитовых глин (ирлитов) на формирование иммунитета против ИББ 151
3.4. Апробация вакцинного штамма «СТ» 158
3.5. Технология изготовления и контроль сухой вирусвакцины из штамма «СТ» и изучение ее свойств 159
3.5.1, Требования к штамму 159
3.5.2. Требования к сырью 161
3.5.3. Отработка режима лиофилизации для производства вирус вакцины 162
3.5.4. Изготовление опытных серий сухой вирусвакцины в условиях лаборатории и их контроль 163
3.5.5. Определение 50%-ной иммунизирующей дозы опытных серий вакцины 166
3.5.6. Срок образования и продолжительность иммунитета у птиц, привитых вирусвакциной 167
3.5.7. Проверка схем иммунизации птиц в условиях лаборатории 169
3.5.8. Изготовление опытно-промышленных серий вирусвакцины и ее контроль 174
3.5.9. Оценка противоэпизоотической и экономической эффективности специфической профилактики ИББ 177
3.5.10. Ветеринарно-санитарные мероприятия по профилактике и ликвидации заболевания птиц ИББ 191
4. Обсуждение результатов 195
4.1. Выводы 224
4.2. Практические предложения 225
4.3. Список использованной литературы 226
4.4. Приложение 274
- Биологические особенности вируса инфекционной бурсальной болезни (ИББ)
- Материалы и методы исследования
- Изучение биологических свойств вакцинного штамма «СТ» вируса инфекционной бурсальной болезни кур
Введение к работе
Актуальность работы. Птицеводство, как скороспелая отрасль животноводства, позволяет быстро, относительно с небольшими затратами, получить значительное количество высококачественных продуктов питания.
Для птицеводческих предприятий особую опасность представляют вирусные заболевания из-за их недостаточной изученности, высокой контагиозности, большого разнообразия путей и факторов передачи инфекционного агента. Проблема вирусных болезней приобретает все возрастающую актуальность еще и по той причине, что ряд заболеваний стали протекать атипично, значительно возросла роль ассоциации различных агентов вирусной и бактериальной этиологии. [53].
В связи с этим дальнейшему развитию отрасли и повышению её эффективности препятствуют различные заболевания, среди которых наиболее слабо изучена инфекционная бурсальная болезнь (ИВЕ);' которая вызывает значительные потери, связанные с гибелью молодняка птиц (от 5 до 40%), снижением продуктивности и увеличением процента выбраковки птиц и тушек, особенно, в хозяйствах бройлерного направления [145, 269].
ИББ - высококонтагозное вирусное заболевание молодняка птиц 3-6-недельного возраста, характеризующееся поражением клоакальной сумки, почек, внутримышечными геморрагиями, диарей [122, 206].
Вирус ИББ снижает эффективность специфической профилактики против многих инфекционных заболеваний в условиях птицеводческих хозяйств. Вследствие разрушения вирусом В-лимфоцитов резко снижается иммунная реакция организма птиц в ответ на любое антигенное воздействие. Инфекция представляет серьезную опасность для хозяйств как бройлерного, так и яичного направления.
В основе профилактики и ликвидации ИББ лежит применение специфических средств и проведение общих ветеринарно-санитарных мероприятий.
В большинстве стран с промышленным птицеводством разработаны методы диагностики и предложены различные типы вакцин для специфической
профилактики ИББ. Накопленный опыт борьбы с ИББ показывает, что строгое соблюдение ветеринарно-санитарных мероприятий и систематическая вакци-нопрофилактика позволяют значительно снизить потери от ИББ, Однако проблема искоренения этого заболевания в последние годы осложнилась с увеличением случаев субликнического течения заболевания, при котором иммуноде-прессивное действие вируса и экономические последствия проявляются и не уступают острому течению заболевания [96, 237, 348, 419].
Специфическая профилактика ИББ проводится с помощью живых и инак-тивированных вакцин [513]. При этом наряду с предупреждением прямых экономических потерь, обусловленных самой болезнью, вакцинация одновременно обеспечивает сохранность структуры и функции фабрициевой сумки птиц, что гарантирует стабильность поствакцинального иммунитета против других инфекционных болезней птиц. Для изготовления живых вакцин используют не авирулентные, а природно-ослабленные и атенуированные штаммы [7, 20].
Трудности в создании эффективной вакцины против ИББ связаны со сложностью ослабления иммунодепрессивного действия полевого штамма, без снижения его иммуногенной активности.
Кроме того, основным свойством вакцинного штамма является его генетическая стабильность, исключающая возможность как реверсии вируса, в патогенный, так и его дальнейшей спонтанной аттенуации. В этой связи всестороннее изучение генетических маркеров, связанных с вирулентностью и иммуно-генностью, а также условия культивирования и хранения вакцинного штамма вируса ИББ, предлагаемого для производства варусвакцины имеет важное практическое значение [29].
Интересы отечественного промышленного птицеводства настоятельно требуют разработки новых эффективных средств и методов специфической профилактики ИББ [27,28].
Цель и задачи исследования. Целью исследования явились разработка и внедрение в практику птицеводства эффективных средств и методов специфической профилактики инфекционной бурсальной болезни. В соответствии с
этим, в задачи наших исследований входило:
Изучить распространение ИББ в ряде птицеводческих хозяйств.
Изучить биологические свойства эпизоотических и вакцинных штаммов вируса ИББ.
Разработать технологию изготовления вирусвакцины против ИББ из штамма «СТ»,
Определить эффективность вирусвакцины против ИББ в лабораторных и производственных условиях.
Изучить действие лучистой энергии и ирлитов на формирование поствакцинального иммунитета против ИББ.
Разработать систему мероприятий по профилактике и борьбе с ИББ.
Научная новизна работы заключается в том, что впервые проведено сравнительное изучение иммуногенньтх и реактогенных свойств некоторых вакцинных штаммов, предложен биологически активный, высокоиммуногенный и аре-актогенный штамм «СТ» для производства вирусвакцины против ИББ.
Изучена динамика накопления вирусов в различных видах клеток.
Определены оптимальные условия культивирования вируса ИББ в культуре ФЭК, ПЭК и перевиваемой культуре типа VERO и ВГМ - 70.
Изучено влияние различных защитных сред на инфекционную и иммуно-генную активность вируса штамма «СТ» при лиофилизации и его хранении.
Найдена высокопродуктивная биологическая система для культивирования вакцинного штамма и определены оптимальные условия его накопления.
Дана оценка чувствительности различных методов титрования вакцинного штамма «СТ». Изучена стабильность основных иммунобиологических свойств - штамма «СТ» при длительном пассировании в культуре ФЭК, безвредность его для цыплят различного возраста. Вакцинный штамм «СТ» обладает выраженной иммуногенностью и обеспечивает 100% защиту иммунизированной СПФ птицы при экспериментальном заражении и более 90% коммерческой птицы.
Разработан способ изготовления вирусвакцины против ИББ и метод ее
применения.
Изучено влияние лучистой энергии и ирлитов на поствакцинальный иммунитет.
Штамм паспартизирован и депонирован под № 124 - ДЕЛ во Всероссийском государственном центре качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов (ФГУ ВГНКИ), 2006 г.
Вакцина против инфекционной бурсальной болезни птиц из штамма «СТ» признана изобретением (патент РФ от 16 февраля 2006 г).
Теоретическая и практическая значимость работы. Разработана технология изготовления вакцины против ИББ, метод ее контроля и условия применения. Изготовлены три опытные серии сухой вирусвакцины против ИББ, в количестве 3 млн. доз, которые использовались для специфической профилактики болезни в неблагополучных хозяйствах.
Результаты исследований использованы в нормативно-технической документации на «вирусвакцину против инфекционного бурсита кур», утвержденной директором ВНИВИП для опытно-промышленного производства указанного препарата.
Разработано временное наставление по применению сухой вирусвакцины против инфекционной бурсальной болезни из штамма «СТ», утвержденного департаментом ветеринарии МСХ РСО - Алания.
Результаты научных исследований используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по эпизоотологии: в Ставропольском государственном аграрном университете, Горском государственном аграрном университете, Кабардино-Балкарской государственной сельскохозяйственной академии и в Санкт-Петербургской академии ветеринарной медицины.
Результаты исследований могут быть использованы при разработке мероприятий против ИББ в угрожаемых и неблагополучных птицехозяйствах.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на XXXII Всесоюзной конференции молодых ученых и аспирантов
по птицеводству (г. Загорск, 1989 г.), Всесоюзной научно-практической конфе
ренции «Комплексная система ветеринарных мероприятий в птицеводстве - ре
зерв повышения эффективности производства» (г. Ленинград, 1989 г), научно-
производственной конференции Горского госагроуниверситета по итогам НИР
* (г, Владикавказ, 1995 г); Всероссийской научно-практической конференции
«Актуальные проблемы производства птицы и птицепродуктов и свинины в Российской Федерации (пос. Персиановский, 2004 г); Международной научно практической конференции «Актуальные вопросы производства и применения биологических препаратов» (Алма-Аты, 2004 г); первом международном ветеринарном конгрессе по птицеводству (Москва, 2005 г).
Результаты основных этапов исследований прошли комиссионную провер-
ку и доложены на методических советах отдела вирусологии ВНИВИП (1988,
1989, 1990 гг.); на заседании ученого совета ВГ1ИВИП (1990 г.); на заседаниях
ученого совета факультета ветеринарной медицины Горского ГАУ (2002, 2003,
2004, 2005 гг.); на заседании департамента ветеринарии МСХ РСО - Алания,
на кафедре инфекционных и инвазионных болезней Горского ГАУ (2006 г) и на
кафедре эпизоотологии Ставропольского ГАУ (2006 г).
I Публикация результатов исследований. По теме диссертации опублико-
вано 43 научные работы, из них 5 в центральных научных журналах и 4 монографии.
Основные положения диссертационной работы выносимые на защиту.
1. Характеристика биологических свойств вакцинного штамма «СТ» вируса ИББ.
Технологические параметры получения культурального вирусного сырья для изготовления вирусвакцины.
Результаты оценки безвредности и иммуногенной активности вирусвакцины в лабораторных условиях.
Эффективность влияния лучистой энергии и ирлитов на поствакцинальный иммунитет против инфекционной бурсальной болезни.
Эффективность специфической профилактики ИББ вирусвакциной из штам-
11 ма «СТ».
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 280 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, результатов, выводов, практических предложений, библиографического списка и приложения. Работа иллюстрирована 46 таблицами, 13 рисунками. Список использованной литературы включает 519 источников, из которых 428 иностранных авторов.
Биологические особенности вируса инфекционной бурсальной болезни (ИББ)
Инфекционная бурсальная болезнь («Болезнь Гамборо», «Инфекционный бурсит») - высококонтагиозная вирусная болезнь птиц, преимущественно 2-15 - недельного возраста, характеризующаяся поражением фабрициевой сумки, почек, внутримышечными геморрагиями [244, 146, 268].
Болезнь может протекать в клинической и субклинической формах [2, 66, 74,77,94,107,111].
Возбудитель ИББ - вирус семейства Birnovlridae, поражает в основном В-лимфоциты фабрициевой сумки, вызывая атрофию лимфоидных фолликулов бурсы [112, 206, 384].
Семейство включает вирус инфекционной бурсальной болезни птиц, вирус инфекционного некроза поджелудочной железы форелей (штамма VR - 229), бактериофаг.
Общим свойством семейства Birnoviridae является наличие в составе генома РНК в виде 2-х цепочек с двумя сегментами, в то время как у представителей семейства Reoviridae число сегментов в геноме обычно доходит до 10-11 и представлены в виде одной цепочки [92, 122, 123, 388].
Следует отметить, что до настоящего времени по вопросу структуры и таксономическому положению вируса ИББ существовало много противоречий и значительных расхождений во мнениях. Так, согласно исследованию J, Cho et al, [175, 178] вирус ИББ относится к классу пикорновирусов в виду наличия в пораженных бурсах вирусных частиц различных диаметров. Многие авторы считали, что данный вирус следует отнести к реовирусам [269, 306, 346, 421]. Морфология вирусных частиц, выделенных из патологического материала цыплят, позволила некоторым ученым дать заключение о том, что этиологический агент данного заболевания относится к группе орбивирусов [4, 72, 271, 274], Эти расхождения, по мнению Н. Becht [121], объясняются тем, что в большинстве случаев авторами вирус не был изолирован или очищен и классификация инфекционного агента почти полностью основывалась на его морфологических свойствах.
Долгое время считалось, что существует один серотип вируса ИББ. В настоящее время установлены два серологических варианта вируса инфекционной бурсальной болезни. Первый вариант выделен от больных цыплят, второй вариант - от индюшат. Перекрестный иммунитет между двумя вариантами вируса ИББ - минимальный, т.к. их антигенное родство не превышает 30% [426, 123, 233, 292,297,298, 364, 461].
Вирус ИББ не имеет внешней оболочки. По данным электронно-микроскопических исследований диаметр вируса 55-65 нм, а по результатам фильтрации через набор калиброванных бактериальных фильтров - около 50 нм [169, 165,269].
Исследованиями вируссодержащего материала в иммунной электронной микроскопии были обнаружены два типа вирусных частиц - крупные с диаметром 55-60 нм и мелкие с диаметром 18-22 нм. Оба типа частиц имели общий поверхностный антиген [104, 130, 131]. Авторами высказано предположение о том, что эти частицы вируса ИББ не что иное, как вирус и зависимый сателлит. Однако, по мнению других авторов, мелкие частицы следует рассматривать как продукт деградации более крупных [259]. В то же J. Kaufer et al [310] отрицает присутствие в вируссодержащем материале более чем одного типа вирусных частиц. По его мнению некоторые частицы с меньшей электронной плотностью являются незрелыми, а безъядерные - неполные.
Электронно-микроскопическими исследованиями показано сходство морфогенеза вирусных частиц в лимфатических узелках бурсы инфицированной птицы и в клеточных культурах [350, 382]. Вирус ИББ размножается в цитоплазме клеток без образования кристаллических структур. Полные вирионы и вирионы лишенные суперкапсидного слоя, накапливаются в расширенных цис-тронах гранулярной эндоплазматической сети. Вблизи скопления вирусных частиц обнаруживают виропласты в виде гранулярного матрикса, содержащего электронно-плотные нуклеиды (сердцевины). Вирусные частицы выделяются из клеток через разрывы в цитоплазматической мембране [109, 298, 316, 319, 346, 389].
Методом электрофореза в полиакриламидном геле в вирионах вируса ИББ обнаружено 4 полипептида. В культуре клеток куриных фибробластов, зараженных вирусов ИББ, также идентифицировано 4 структурных полипептида [280, 290]. В вирионе на долю белков приходится 90% массы и 10 % - рибонуклеиновой кислоты [190, 318, 380].
Анализ вирусной популяции в градиенте сахарозы позволил обнаружить вирионы с плавучей плотностью 1,34 - 1,45 г/см3, которые рассматриваются как стандартные, и вирионы с плавучей плотностью 1,25 г/см3, считающейся ДИ -частицами вируса.
Материалы и методы исследования
Работа выполнена 1987 - 2005 гг. по отраслевой научно-технической программе НИР в отделе вирусологии Всесоюзного научно-исследовательского ветеринарного института птицеводства, НИИ особо чистых биологических препаратов Министерства биологической промышленности РФ, Горском государственном аграрном университете, на Рязанской птицефабрике по производству бройлеров, и птицехозяйствах Северного Кавказа. В работе использованы различные штаммы вируса ИББ: вакцинный штамм «СТ», реизолированный из коммерческой вакцины производства Голландия и модифицированный путем клонирования в культуре ФЭК под агаровым покрытием; эпизоотический штамм «27/94» выделенный в отделе вирусологии о ВНИВИП в 1983 г, эталонный вирулентный штамм «52/70», полученный из Англии в 1986, а таюке вирусвакцину «П-2» производство Германия. Штаммы вируса ИББ хранили в лиофилизированном виде при температуре не выше + 4-8 С или при минус 20 в нативном виде. В лабораторных опытах при изучении эффективности вирусвакцины ис пользовали 10 тыс. куриных эмбрионов, 65 тыс. цыплят кроссов «Бройлер» и «Хайсекс - белый» [319], экспериментально зараженных вирусом ИББ. Методы и дозы заражения культур клеток различного происхождения, эмбрионов и птиц разными штаммами вируса ИББ, в зависимости от цели проводимого опыта, приведены в соответствующих разделах. Штаммы вируса ИББ, использованные в данной работе проверяли по морфологическим, антигенным, культуральным, вирулентным свойствам, а также по степени их устойчивости к воздействию физико-химических факторов. Морфологические свойства вируса изучали электронно - микроскопически совместно со старшим научным сотрудником ВНИВИП Бакулиным В.А. Предварительно материал осветляли в течение 10 минут низкоскоростным центрифугированием при 5000 об/мин, затем 1,5 ч при 30000 об/мин на ультрацентрифуге «Бэкман» в роторе Т-30. Центрифугат обрабатывали общепринятыми методами негативного контрастирования и иммунной электронной мик- роскопии. Приготовленные препараты изучали в электронном микроскопе Tesla - BS - 540, при ускоряющем напряжении 80 кВ. В опытах по изучению интерфероногенной активности в качестве тест - вируса использовали вирус везикулярного стоматита, штамм «Индиана», адап- тированный к культуре клеток ФЭК (титр вируса - 5 lg ТЦД so/мл), и вирус ньюкаслской болезни, штамм Ла - сота с активностью - 9 lg ЭИД эо/мл. Для определения интерфероногенной активности испытуемый материал прогревали 30 мин на водяной бане при 70 С. Полноту инактивации вируса ИББ проверяли путем заражения культуры ФЭК, Полученные препараты ин терферона центрифугировали 30 мин при ЗОООоб/мин и титровали методом уменьшения репродукции бляшек в культуре ФЭК. Титр интерферона - величи- на, обратная наивысшему его разведению, вызывающему 50% - ное уменьше- ние количества бляшек тест - вируса по сравнению с не обработанными интерфероном культурами (контроль). Для изучения цикла репродукции вируса ИББ (штаммы - «СТ», «П - 2»»52/70» и «27/94», наносили на культуру ФЭК в дозе 0,1-1,0 ТЦД на - клетку и для адсорбции последнего выдерживали 60 мин при 37СС, Затем фла- коны трехкратно отмывали раствором Хенкса, добавляли поддерживающую среду 199 с 2% сыворотки крупного рогатого скота и антибиотиками. Нулевую пробу брали сразу после отмывки. Зараженную и незараженную (контроль) культуру клеток инкубировали в стационарных условиях при 37С. Степень развития цитопатического эффекта устанавливали, просматривая испытуемый материал с помощью светового микроскопа через определенные промежутки времени, и одновременно отбирали пробы для определения титра инфекционного вируса в жидкой и клеточной фазах. При исследовании внутриклеточного вируса ИББ, культуральную жидкость сливали в отдельный сосуд, а во флаконы в таком же объеме добавляли среду 199. Вирус освобождали из клеток быстрым трехкратным замораживанием при минус 20С и оттаиванием при 37С, Образцы вируссодержащей жидкости делили на две части и до титрования на инфекционную и интерфероногенную активность хранили в холодильнике при минус 20С. Активность внутри - и внеклеточного вируса ИББ в культуре ФЭК рассчи тывали по методу Рида и Менча. Бляшкообразующую способность вируса ИББ изучали по методике, изло- женной в работе B.R. Cho et al. [174]. Культура клеток. Вирус культивировали в первично - трипсинизирован-ной культуре и перевиваемых культурах клеток млекопитающихся Vero и BGM -70.
Изучение биологических свойств вакцинного штамма «СТ» вируса инфекционной бурсальной болезни кур
На первом этапе исследований предстоял подбор чувствительной биологической модели для культивирования и титрации вируса ИББ.
В этой серии опытов в работе использовали вирулентные («52/70», «27/94») и вакцинные («П-2», «Д-78») штаммы вируса ИББ. Которыми заражали эмбрионы различного происхождения.
Полученные в ходе этих исследований результаты приведены в табл. 1.
Из данных табл. 1 следует, что наиболее чувствительными к вирусу ИББ являются эмбрионы СПФ и кур безлейкозной линии русской белой породы и перепелок, наименее чувствительными - эмбрионы уток. При заражении эмбрионов кур породы белый леггорн линий і-4 и К-5, русской белой линии 9787 и нечистолинейных вирус их гибели не вызывал.
После пяти последовательных пассажей вируса на СПФ - эмбрионах и эмбрионах кур безлейкозной линии отмечали повышение титра вируса, что, очевидно, связано с адаптацией его к данной системе.
Примечание: «+» - наличие гибели и патологоанатомических изменений эмбрионов; «-» - гибель и патологоанатомические изменения отсутствуют.
По-видимому, существующая разница в гибели эмбрионов не связана с чувствительностью породы птицы к вирусу ИББ, а скорее всего, это результат наличия специфических антител в желтке эмбриона. Об этом свидетельствуют результаты исследований других авторов [94, 281, 325].
Зараженные эмбрионы, независимо от используемого для инокуляции штамма, в значительной степени отставали в росте и развитии, особенно была заметна задержка образования перьев по сравнению с эмбрионами в контроле.
Для заражения 10-суточных СПФ - эмбрионов при исследовании вакцинных штаммов ИББ использовали вируссодержащую эмбриональную жидкость, а в опытах с патогенным и эпизоотическим штаммами - гомогенат фабрициевых сумок цыплят, зараженных в экспериментальных условиях, соответственно каждым из этих штаммов. Пассирование на СПФ - эмбрионах кур, изучаемых в экспериментах штаммов вируса ИББ, проводили до 10 пассажа. Заражение змбрионов проводили на ХАО.
Заражение СПФ - эмбрионов на ХАО показало, что изучаемые штаммы («52/70», «27/94», «П-2», «Д-78») вируса ИББ являются патогенными для 10-суточных СПФ - эмбрионов. Характерна 80-100% гибель эмбрионов на 3-6 сутки после заражения их эталонными и вакцинными штаммами в разведении 1:10. Погибшие эмбрионы до гибели значительно отставали в росте и развитии. Однако при заражении эпизоотическим штаммом процент гибели СПФ - эмбрионов на первом пассаже составил - 34,0%, на втором -63,0%, на третьем -85,0 и 100%) на пятом пассаже.
В то же время патологические изменения у павших эмбрионов при заражении разными штаммами вируса ИББ были одинаковы и проявлялись в виде разлитых геморрагии на коже в области головы, шеи и конечностей. При этом зараженные эмбрионы заметно отставали в росте и развитии по сравнению с контрольными (рис.1).
