Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 10
1.1. Мастит крупного рогатого скота 10
1.2. Резистентность и механизмы ее развития 17
1.3. Фторхинолоны 29
1.4. Кетопрофен 42
2. Собственные исследования 48
2.1. Материалы и методы 48
2.2. Результаты исследований 67
2.3. Результаты изучения антибактериальной активности энрофлоксацина 67
2.4. Результаты изучения острой токсичности противомаститного препарата в опытах на лабораторных животных 77
2.5. Результаты изучения субхронической токсичности противомаститного препарата в опытах на лабораторных животных 79
2.6. Результаты изучения местно-раздражающего действия на паренхиму вымени после однократного и многократного интрацистернального введения противомаститного препарата 82
2.7. Результаты изучения фармакокинетики энрофлоксацина, ципрофлоксацина и кетопрофена в молоке и плазме крови коров 86
2.8. Результаты определения остаточных количеств энрофлоксацина, ципрофлоксацина и кетопрофена в молоке коров после многократного введения противомаститного препарата 90
2.9. Результаты определения оптимальной дозы противомаститного препарата 92
2.10. Результаты изучения терапевтической эффективности противомаститного препарата в условиях производства 93
Обсуждение результатов 99
Выводы 128
Практические предложения 130
Список литературы 131
- Резистентность и механизмы ее развития
- Фторхинолоны
- Результаты изучения острой токсичности противомаститного препарата в опытах на лабораторных животных
- Результаты определения остаточных количеств энрофлоксацина, ципрофлоксацина и кетопрофена в молоке коров после многократного введения противомаститного препарата
Введение к работе
Актуальность проблемы.
Анализ структуры заболеваний крупного рогатого скота в молочном скотоводстве показывает, что развитию отрасли существенно препятствуют инфекционные и незаразные болезни лактирующих коров, среди которых наиболее серьёзный ущерб наносит мастит. (Роман Л. Г., Полянцев Н. И., 2008; Слободняк, В.И. , 1999)
Экономический ущерб, связанный с маститом, складывается из снижения удоев и качества молока, потери молочной продуктивности и преждевременной выбраковки коров до завершения генетически заложенного лактационного периода. (Слободняк, В.И.,1999; Кузьмин Г. Н., 1995; Tollersrud T., Kenny K., Reitz Jr. A.J. and Lee J.C., 2000). Помимо экономического ущерба, мастит представляет серьезную опасность для здоровья людей, в связи с возможным попаданием в молоко патогенных для человека микроорганизмов и их токсинов (Модин А. Н., Климов Н. Т., Ефанова Л. И., 2010). Предрасполагающими факторами развития мастита являются нарушение условий содержания, кормления и доения, а также гинекологические заболевания и изменение обмена веществ, что в комплексе снижает общую резистентность организма и способствует ослаблению барьерной функции тканей вымени. На этом фоне создаются благоприятные условия для внедрения и распространения патогенных и условно-патогенных микроорганизмов в паренхиме вымени, что вызывает воспаление молочной железы – мастит.
Наиболее что при маститах выделяют монокультуры или ассоциации микроорганизмов, таких как стрептококки – Str. agalactiae, Str. dysgalactiae, Str. pyogenes, Str. uberis; стафилококки — Staph. pyogenes aureus, Staph. citreus, Staph. Albus, а также Escherichia coli и Pseudomonas aerugenosa ( Jones G.M., Bailey T.L., Roberson J.R.,1998).
Несмотря на большое количество, используемых противомаститных препаратов, их эффективность постоянно снижается, вследствие широкого распространения антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов. Поэтому разработка новых противомаститных препаратов активных в отношении устойчивых к антибиотикам патогенов продолжает оставаться актуальной и важной для ветеринарной практики проблемой (Париков В.А., Климов Н.Т., Романенко А.И., 2000).
Одним из путей воздействия на антибиотикорезистентные микроорганизмы является применение новых соединений, к которым у бактерий еще не сформировались механизмы устойчивости. К таким соединениям относятся фторхинолоны, механизм действия которых заключается в ингибировании активности ферментов ДНК-гиразы и топоизомеразы IV, приводящей к нарушению синтеза ДНК бактериальной клетки, что обеспечивает отсутствие перекрестной резистентности с другими антибактериальными соединениями, сульфаниламидами и нитрофуранами (Altreuhter P., 1987; Anadon A., 1992).
Поэтому на основании собственных исследований и литературных данных в качестве антибактериального компонента в состав нового противомаститного препарата был включен энрофлоксацин из группы фторхинолонов, ранее не использовавшийся в лекарственных средствах для интрацистернального введения при лечении мастита. Энрофлосацин обладает широким спектром действия в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, хорошей биодоступностью из места введения, а также малотоксичен для теплокровных животных. (Kanemaki N., Matsuura K., Yashiro N., Takasu K., Ushuruda H., 1995; Abd el-Aziz M.I., Aziz M.A., Soliman F.A., Afify N.A., 1997).
Хотя основным этиотропным фактором в развитии мастита являются инфекционные агенты, патогенез болезни во многом основан на развитии воспалительных процессов в паренхиме вымени, приводящих к появлению боли и отеков, что осложняет течение болезни и увеличивает сроки выздоровления.
Поэтому важной составляющей успешной терапии мастита, помимо этиотропного компонента, воздействующего на причину болезни – микроорганизмы, является применение фармакологических средств, обладающих противовоспалительным действием и снижающих болевую реакцию, то есть, воздействующих на патогенез и симптомы заболевания (Anderson K.L., Kindahl H., Petroni A., Smith A.R., Gustafsson B.K.,1985). Применяемые в противомаститных препаратах глюкокортикоиды (преднизолон, дексаметазон), несмотря на выраженный противовоспалительный эффект, обладают рядом нежелательных побочных реакций, например, таких как снижение местного иммунитета. Поэтому в последнее время широкое применение в медицине и ветеринарии нашли нестероидные противовоспалительные соединения (НПВС), которые обладают выраженным противовоспалительным, анальгезирующим и жаропонижающим действием, при этом практически не оказывают побочного действия на макроорганизм. Среди НПВС одним из наиболее сильных обезболивающих соединений является кетопрофен, широко применяемый у нас в стране и за рубежом в различных лекарственных формах. Поэтому в качестве противовоспалительного компонента в состав нового противомаститного препарата дополнительно был включен кетопрофен.
Учитывая, что до настоящего времени в зарубежной и отечественной ветеринарной практике лекарственный препарат для интрацистернального введения на основе энрофлоксацина с кетопрофеном не использовался, представлялось актуальным изучить его фармако-токсикологические свойства и терапевтическую эффективность при лечении мастита бактериальной этиологии у лактирующих коров.
Цели и задачи исследований.
Изучить фармако-токсикологические свойства и терапевтическую эффективность нового лекарственного препарата для интрацистернального введения на основе энрофлоксацина и кетопрофена при лечении мастита у лактирующих коров.
В задачи исследований входило:
- определить антибактериальную активность энрофлоксацина в опытах in vitro на изолятах микроорганизмов, выделенных из молока коров больных маститом, в сравнении с другими группами антибактериальных средств, широко используемыми при лечении мастита у коров;
- изучить фармако-токсикологические свойства лекарственного препарата на основе энрофлоксацина и кетопрофена на лабораторных животных;
- изучить раздражающее действие на паренхиму вымени лекарственного препарата для интрацистернального введения на основе энрофлоксацина и кетопрофена;
- изучить фармакокинетику и установить сроки выведения остаточных количеств энрофлоксацина, ципрофлоксацина и кетопрофена с молоком лактирующих коров после интрацистернального введения лекарственного препарата;
- установить оптимальную терапевтическую дозу и разработать схему применения лекарственного препарата на основе энрофлоксацина и кетопрофена для лечения мастита бактериальной этиологии у коров в период лактации;
- оценить терапевтическую эффективность и безопасность применения лекарственного препарата на основе энрофлоксацина и кетопрофена при мастите дойных коров в условиях производства.
Научная новизна.
Впервые изучены фармако-токсикологические свойства нового лекарственного препарата на основе энрофлоксацина и кетопрофена для интрацистернального введения. Установлены особенности распределения, накопления в тканях паренхимы вымени и сроки выведения остаточных количеств кетопрофена, энрофлоксацина и его метаболита ципрофлоксацина с молоком. В условиях животноводческих хозяйств обоснована эффективность применения противомаститного препарата в ветеринарной практике.
Практическая значимость работы.
На основании результатов исследований доказана возможность безопасного и эффективного использования лекарственного препарата для интрацистернального введения на основе энрофлоксацина и кетопрофена в ветеринарной практике. Экспериментально обоснованы оптимальная терапевтическая доза (300 мг энрофлоксацина и 50 мг кетопрофена в шприце-дозаторе 7,5 мл), схема применения (трехкратно с интервалом 12 ч) и сроки возможного использования молока (через 1 сутки) в пищевых целях после интрацистернального введения препарата дойным коровам.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на:
- IV съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов России «Актуальные вопросы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации» Москва, 2013 г.;
- Заседании ученого совета ФГБУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» в 2012, 2013 гг.
Личный вклад соискателя.
Диссертационная работа является результатом научной работы в период с 2009 по 2013 гг. Основной объем исследований проведен автором самостоятельно и выполнен при научно-методической и консультационной помощи кандидата ветеринарных наук Б.В. Виолина.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
- результаты изучения антибактериальной активности энрофлоксацина;
- характеристика фармако-токсикологических свойств лекарственного препарата для интрацистернального введения по результатам доклинических исследований;
- результаты изучения фармакокинетики и динамики выведения остаточных количеств кетопрофена, энрофлоксацина и ципрофлоксацина с молоком коров после интрацистернального введения нового противомаститного препарата;
- результаты клинических исследований лекарственного препарата на основе энрофлоксацина и кетопрофена при лечении мастита коров в условиях производства;
- практические предложения по применению лекарственного препарата на основе энрофлоксацина и кетопрофена в ветеринарной практике.
Публикации.
По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, 4 из них в изданиях, рекомендованных ВАК России.
Структура и объем диссертации.
Диссертация изложена на 173 листах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы, приложение. Работа иллюстрирована 33 таблицами, 8 рисунками, 6 графиками. Список литературы содержит 292 источников, в том числе 187 иностранных.
Резистентность и механизмы ее развития
С момента, когда человек одомашнил животных с целью получения молока, возникла проблема заболевания вымени – маститы. За тысячелетия развития молочного скотоводства ситуация существенно не изменилась в лучшую сторону, маститы, даже на фоне сбалансированного кормления, остаются основным ограничивающим фактором в полной реализации генетического потенциала коров по молочной продуктивности и качеству молока. Сегодня в зависимости от региона и страны мира клинической и скрытой формами мастита болеют в среднем от 17 до 20 % коров, а в отдельных регионах – 50% (15, 16, 75, 76, 80, 121, 209, 257).
В России скорее всего из-за неорганизованного сбора информации по животным, заболевшим маститом, ситуация выглядит несколько иначе. По данным Иноземцева В.П., (1999 г.) в 1995 году в России более 10% маточного поголовья переболело маститом (24, 25). При этом в 1995 - 1997 годах мастит был диагностирован в зависимости от области у 10,4 - 36,3% животных; по России в среднем 8,3 - 9,8%. Наибольший процент поражения коров маститом отмечен в хозяйствах Вологодской (27,3 - 36,3%) и Кировской (23,9 - 30,0%) областей, несколько реже заболевание встречается в Свердловской (18,9 - 25,6%) и Ульяновской (16,2 - 17,5%) областях; низкий уровень зарегистрирован в Воронежской области (10,3 - 13,8%) и Приморском крае (10,4 - 13,8%) (21, 22, 31, 76).
Экономический ущерб, наносимый маститами, складывается из снижения удоев и качества молока, потери молочной продуктивности и выбраковки коров (31).
Помимо экономического ущерба, мастит бактериальной этиологии представляет серьезную опасность для здоровья человека в связи с возможным попаданием в молоко патогенных для людей микроорганизмов и их токсинов. Так стафилококковые энтеротоксины, не разрушающиеся даже при кипячении и пастеризации молока, вызывают тяжелые пищевые 1 отравления, часто с летальным исходом. Патогенные стрептококки в молоке могут приводить к эндокардитам, менингитам новорожденных, ангинам и пищевым расстройства. Молоко, содержащее токсины кишечной палочки, может вызывать тяжело протекающие энтериты (278).
Мастит - заболевание молочной железы, возникающее в результате воздействия факторов внешней и внутренней среды и характеризующееся типичными признаками воспалительного процесса: покраснение, болезненность, отек, повышение местной температуры и нарушение секреторной деятельности молочной железы (81).
Маститы диагностируются во все циклы развития молочной железы: запуска, сухостоя, сразу после отела, но наиболее часто возникают в лактационный период (31, 80).
По данным разных авторов, во время лактации маститы встречаются у 36,3% животных, при запуске — у 22,6%, в сухостойный период – у 15,8% и в первые дни после отела — у 25,3% (23, 28, 31, 35, 43, 53, 58, 75, 80, 185, 264). Ведущая роль в этиопатогенезе маститов принадлежит бактериям, грибам и вирусам, причем доля бактериальных маститов превышает 80% (9, 26, 28, 35, 68).
Микроорганизмы могут быть непосредственной причиной развития мастита или осложнять воспалительный процесс, вызванный другими факторами, как например, травмированием тканей вымени, при неудачно выбранном режиме доения. Маститы возникают, как под влиянием микрофлоры, проникающей в вымя из внешней среды (через сосковый канал или при повреждении кожи вымени), так и вследствие развития условно-патогенной микрофлоры в результате снижения резистентности организма (31, 50).
Анализируя спектр микроорганизмов, выделяемых при маститах, установлено, что основную роль играют стрептококки — Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus uberis; стафилококки — Staphylococcus aureus, Staphylococcus citreus, 2
Staphylococcus albus; кишечная палочка — Escherichia coli; синегнойная палочка — Pseudomonas aerugenosa (272). В исследовании, проведенном Jones G.M., Bailey, T.L, Roberson JR (1998) было показано, что кишечная палочка выделена в 28,2% случаев, стафилококки – в 26,9%, стрептококки – в 25% случаев (163).
В Корее в 2008 г было установлено, что количество коагулазонегатиных стафилококков составило 40,7%, грамотрицательных (кроме Escherichia coli) – 19,5%, Staphylococcus aureus – 12,2%, Streptococcus uberis – 5, 3%, Enterococcus spp – 4,8%, Escherichia coli – 4, 5% (195).
В последнее время появляется все больше сообщений о возросшей роли микоплазм и микроскопических грибов в развитии мастита. Из воспаленных четвертей вымени были выделены грибы рода Aspergillus, Mucor, Penicillum, Trihoderma, а также Candida pseudotropikalus (146, 199, 210). Причем частота индикации маститов микозного происхождения имеет тенденцию к увеличению, что, вероятно, обусловлено массовым бесконтрольным применением антибиотиков.
Патогенез развития мастита
При маститах, как и при других типичных воспалительных процессах, развиваются следующие взаимосвязанные процессы: в ответ на раздражающее действие этиологического фактора в молочной железе происходит повреждение тканей, что ведет к расстройству функций, связанных с выведением альвеолярного молока в молочные ходы и цистерну вымени, что в свою очередь приводит к застою молока, повышению внутритканевого давления, нарушению циркуляции крови и лимфы и расстройству питания тканей. В результате нарушения кровообращения, происходят процессы экссудации и эмиграции и пролиферации, что впоследствии сопровождается накоплением в поврежденных тканях вымени воспалительного экссудата и клеточного инфильтрата, которые и определяют характер воспалительного процесса (19, 81). В ходе последовательной цепочки развития патологического процесса вокруг очага воспаления 3 образуется демаркационная линия; в тканях концентрируются недоокисленные продукты воспаления, повышается осмотическое и онкотическое давление, приводящее к усилению болевой реакции воспаленной молочной железы. Поврежденные эпителиальные клетки отторгаются и выделяются вместе с секретом молочной железы, за счет чего увеличивается количество соматических клеток в молоке, что является одним из диагностических признаков мастита у лактирующих коров (75).
Фторхинолоны
Кетопрофен относится к среднетоксичным соединениям. При изучении острой токсичности кетопрофена было установлено, что у мышей, кроликов и собак ЛД50 при оральном, подкожном и внутрибрюшинном путях введения была около 500 мг/кг. Смертельная доза кетопрофена в форме 10% инъекционного раствора при многократном подкожном введении составляет 2467 (2236-2698) мг/кг (18). Кетопрофен относится к веществам со слабой кумуляцией – коэффициент кумуляции равен 5,27 (26).
При изучении хронической токсичности кетопрофена в опытах на крысах в течение одного месяца не вызывающая токсического эффекта доза (недействующая доза NOEL (no observed effective dose)) составила при пероральном введении 2 мг/кг массы тела в день, а при применении в смеси с кормом – 6 мг/кг массы тела в день. В исследованиях на обезьянах в течение 6 мес. NOEL при пероральном введении составила 4,5 мг/кг массы тела в день.
При изучении эмбриотоксического и тератогенного действия кетопрофена было установлено, что при введении препарата в дозе 9 мг/кг проявляется отрицательное воздействие на формирование эмбриона. Данная доза является токсичной также и для организма матери. При оральном введении кетопрофена в дозе 2 мг/кг массы тела в день эмбриональное и тератогенное действие не наблюдалось.
Исследование канцерогенности на крысах (3; 4,5 и 7 мг кетопрофена в течение 91 недели) и мышах (4, 8, 16 и 32 мг кетопрофена в течение 105 недель) показали отсутствие связи между применением кетопрофена и образованием спонтанных опухолей у исследуемых животных (1). Исследование кетопрофена и его метаболита RP 69400 не выявило мутагенной активности этих веществ (128).
Фармакокинетика кетопрофена характеризуется следующими особенностями. Он очень быстро абсорбирует из ЖКТ после перорального введения и в течение 0,5-2 ч достигает максимальной концентрации в плазме крови. Биодоступность кетопрофена после внутримышечного введения 6 варьирует у разных видов животных: так у кролика она составляет 38%, коров – 85-100%, а у верблюдов – 100% (206).
Кетопрофен обладает коротким периодом полувыведения (1-2 ч. – у людей; 0,88 ч – у лошадей; 0,42 ч – у телят; 0,26 ч – у кошек) и низким объемом распределения, что характерно для производных кислот, которые интенсивно связываются с белками плазмы крови (49, 98, 99, 178, 205, 226, 230, 286). Несмотря на то, что кетопрофен до 97% связывается с белками плазмы крови, он легко проникает в полость суставов и длительно задерживается в синовиальной жидкости (49, 286). Результаты исследований проведенных на лошадях с синовитами показали, что концентрация кетопрофена в синовиальной жидкости была в 6,5 раз выше, чем у здоровых лошадей и определялась уже через 1 ч после инъекции препарата, тогда как у здоровых – только через 3 часа. Важной особенностью кетопрофена, является отсутствие существенного влияния на синтез протеогликана хондроцитами кролика и человека (113, 157). Период полувыведения кетопрофена существенно ниже, чем у аспирина (3 ч), индометацина (5 ч) и кеторолака трометамина (5-6 ч), что позволяет отнести кетопрофен к лекарственным препаратам с коротким периодом полувыведения, которые представляют меньший риск для пациентов, благодаря их быстрой элиминации в случае возникновения осложнений (3).
Кетопрофен в основном метаболизируется в печени, где он подвергается глюкуронизации с образованием сложных эфиров с глюкуроновой кислотой, выводимых главным образом почками (128). Populaire et al (1973) выявили два пути метаболизма кетопрофена, первый заключается в окислении ароматического кольца и продукции 3-гидрокси- и 4-гидроксикетопрофена, а другой – в соединении с группой карбоновых кислот (106).
После однократного внутримышечного введения кетопрофена в дозе 3 мг/кг массы тела коровам, 90% вещества определялось в моче в течение 96 часов, из них 90-93% составлял метаболит RP 69400, который в 10-100 раз 7 менее активен, чем исходный кетопрофен. После дальнейшего применения кетопрофена раз в день в дозе 3 мг/кг массы тела в течение 3 дней кетопрофен и его метаболиты обнаруживались только в почках и их концентрация через 24 часа после третьей инъекции составила 0,19±0,14 мкг/г и 0,24±0,17 мкг/г соответственно. В других тканях эти вещества не выявляются или их уровень был ниже предела детектирования метода (0,05 мкг/г для кетопрофена, 0,1 мкг/г для RP 69400). В месте инъекции обычно находится только неметаболизированный кетопрофен. Имеются данные, что кетопрофен и его метаболит RP 69400 не детектируются ( 0,025 мкг/мл) в молоке, полученном во время или сразу после лечения в рекомендуемых дозах (128).
Изучение стереоселективности кетопрофена на крысах, собаках, кошках, лошадях, обезьянах и кроликах подтвердило преобладание концентрации в плазме крови S(+)-формы кетопрофена (86).
С другой стороны у лошадей и телят концентрации двух энантиомеров находятся на одном уровне, а у коз и овец преобладает R(-)-форма (98, 141, 142, 167, 172, 173, 224)
Метаболизированный кетопрофен главным образом выводится почками (60–80%) – в виде глюкуронида. Выведение с каловыми массами составляет менее 1%.
Анализ литературы показал, что кетопрофен характеризуется быстрым и мощным анальгетическим эффектом, сравнимым с опиоидным, по противовоспалительной и жаропонижающей активности кетопрофен не уступает, а по анальгетической – превосходит большинство НПВС; отличается коротким периодом полувыведения (1,5-2 ч), что имеет существенное значение при использовании у коров в лактационный период. (3, 194, 267, 290). Кроме того, применение кетопрофена в комплексной терапии мастита повышает эффективность лечения на 5-14% (3, 103, 196, 237, 281, 284). 8
Результаты изучения острой токсичности противомаститного препарата в опытах на лабораторных животных
Исходя из того, что активным в антибактериальном отношении метаболитом энрофлоксацина в организме является ципрофлоксацин, то при определении остаточных количеств в молоке коров анализировали содержание обоих продуктов (таблица 25).
В ходе определения остаточных количеств энрофлоксацина и его метаболита ципрофлоксацина в молоке из опытной четверти вымени коров установлено, что энрофлоксацин обнаруживался на три срока: 12, 24 и 36 часов из опытной четверти вымени после пятикратного введения противомаститного препарата (таблица 25). Максимальная концентрация (41,56±6,45 нг/мл) имела место на 12 часов, в последующие сроки содержание препарата снижалось до 16,39±2,37 нг/мл. Спустя 36 часов содержание энрофлоксацина было на уровне предела количественного определения метода (5,00 нг/мл). Через 48 часов после последнего введения препарата энрофлоксацин не обнаружили ни в одном образце молока.
Динамика содержания ципрофлоксацина в молоке из опытной четверти вымени носила несколько иной характер (таблица 25). Максимальная концентрация также имела место через 12 часов после последнего введения препарата, и она составила 65,78±4,80 нг/мл. Через 24 часа его уровень снизился примерно в 3 раза и был в пределах 20,01±4,60 нг/мл, что наблюдалось и через 36 часов. Далее концентрация ципрофлоксацин была ниже количественного определения метода ( 5,00 нг/мл).
Согласно полученным результатам на первые сроки отбора проб энрофлоксацин обнаружили в молоке из контрольной четверти вымени только у одной коровы на уровне количественного определения метода (6,13 нг/мл). Спустя 24 часа энрофлоксацин не обнаружили ни в одном образце молока. При этом концентрация ципрофлоксацина из контрольной четверти вымени была сопоставима с концентрацией из опытной четверти вымени и определялась в течение 36 часов в пределах от 64,20±10,31 до 17,10±3,36 нг/мл.
Во все периоды отбора проб в молоке из опытной и контрольной четвертей вымени кетопрофен не обнаружили.
Исследование по определению оптимальной терапевтической дозы препарата проводили в СПК «Колхоз « Красавский», п. Новая Красавка, Лысогорского района Саратовской области на 57 коровах черно-пестрой породы 3-4 лактации. У отобранных животных при клиническом осмотре отмечали изменение консистенции молока, оно имело водянистый характер с мелкими сгустками, вымя при этом не было отёкшим и болезненным. В ходе лабораторных исследований из молока пораженных четвертей вымени были выделены Staphylococcus aureus и Escherichia coli. Результаты исследований показали, что в первой группе вылечено 22 четверти вымени из 28, во второй – 23 из 25, в третьей группе – 25 из 27. У выздоровевших животных отмечали исчезновение клинических признаков мастита и отрицательные результаты с 2% раствором мастидина и пробой отстаивания (таблица 26).
Эффективность применения препарата, содержащего 300 мг энрофлоксацина + 50 мг кетопрофена в шприце-дозаторе (7,5 мл) достоверно (Р0,05) на 13,6% превосходило эффективность лечения препаратом, содержащего 250 мг энрофлоксацина + 50 мг кетопрофена в шприце-дозаторе (7,5 мл). В тоже время эффективность препарата 2-й и 3-й серий была практически одинакова.
Учитывая, что эффективность препаратов с максимальным и средним содержанием энрофлоксацина достоверно не отличалась между собой (Р0,05), то в дальнейших исследованиях по изучению терапевтической эффективности энрофлоксацина+50 использовали препарат, содержащий 300 мг кетопрофена в шприце-дозаторе (7,5 мл).
Изучение терапевтической эффективности противомаститного препарата в сравнении с препаратом Тетра-Дельта (Phiser, США), содержащим в своем составе в качестве действующих веществ: новобиоцина натрий, неомицина сульфат, прокаина пенициллин, дигидростептомицина сульфат и преднизолон, проводили на 37 коровах черно-пестрой породы 3-4 лактации больных катаральным маститом. Исследование проводили в СПК «Колхоз Красавский», п. Новая Красавка, Лысогорского оайона Саратовской области. При клиническом осмотре у коров отмечали изменение консистенции молока, оно имело водянистый характер с мелкими сгустками, вымя при этом не было отёкшим и болезненным и его исследование давало положительные результаты с 2% раствором мастидина и пробой отстаивания. В ходе лабораторных исследований из проб молока был выделен Staphylococcus aureus.
Опытной группе животных вводили противомаститный препарат интрацистернально в каждую пораженную четверть вымени по 1 шприцу-дозатору с интервалом 12 часов в течение 1-2 дней. Животным контрольной группы вводили препарат Тетра-Дельта трехкратно с интервалом 12 часов в соответствии с утвержденной Россельхознадзором инструкцией по его применению.
Другой аналогичный опыт проводили в ЗАО «Племзавод «Трудовой», с. Павловка, Марксовского района Саратовской области, на 63 коровах черно-пестрой породы 2-3 лактации с признаками серозного и катарального мастита.
У животных с серозным маститом наблюдали угнетенное общее состояние, снижение аппетита. Больная четверть уплотнена, болезненна и с местным повышением температуры, относительно противоположной. Отмечалось изменение консистенции молока, оно было более жидкое с хлопьями. В ходе лабораторных исследований из молока была выделена Pseudomonas aeruginosa.
При клиническом осмотре коров с катаральным маститом отмечали общее состояние животных без изменений, консистенция молока имела водянистый характер с мелкими сгустками, вымя при этом не было отёкшим и болезненным, и его исследование давало положительные результаты с 2% раствором мастидина и пробой отстаивания. В ходе лабораторных исследований из молока был выделен Staphylococcus aureus.
Исследование терапевтической эффективности противомаститного препарата проводили в сравнения с препаратом Мастилекс, («Invesa, Испания»), содержащим в качестве действующих веществ гентамицина сульфат и цефалексина моногидрат.
Опытной группе вводили противомаститный препарат интрацистернально в каждую пораженную четверть вымени по 1 шприцу-дозатору с интервалом 12 часа в течение 1-2 дней. Животным контрольной группы вводили препарат Мастилекс («Invesa», Испания) трехкратно с интервалом 12 часов в соответствии с утвержденной Россельхознадзором инструкцией по его применению.
Результаты определения остаточных количеств энрофлоксацина, ципрофлоксацина и кетопрофена в молоке коров после многократного введения противомаститного препарата
Проведенные исследования по изучению фармакокинетики энрофлоксацина и его метаболита после 5-кратного применения препарата в плазме крови подтверждают этот факт. Однако энрофлоксацин обнаруживался в концентрациях на уровне количественного определения метода в плазме крови и его содержание не превышало 5,16-11,43 нг/мл. Даже максимальная индивидуальная концентрация энрофлоксацина составляла 16,34 нг/мл, а в большинстве образцов количество фторхинолона было ниже предела определения, т.е. 5,00 нг/мл. Ципрофлоксацин не обнаруживали в плазме крови, либо его уровень был ниже предела количественного определения метода ( 5 нг/мл). Все это позволяет нам заключить, что энрофлоксацин и ципрофлоксацин всасываются незначительно, следовательно, можно предположить, что они практически не будут поступать в органы и ткани животного и накапливаться в них, следовательно, полученную продукцию от обработанных животных можно будет использовать без ограничений, и она не будет представлять опасность для потребителя.
При изучении сроков выведения остаточных количеств кетопрофена было установлено, что после введения препарата уже в первый срок отбора проб, т.е. через 12 часов, кетопрофен не определяли в молоке из опытной и контрольной четвертей вымени. Кроме того, кетопрофен отсутствовал во все сроки исследований в плазме крови при изучении его фармакокинетики после многократного введения противомаститного препарата. На основании полученных данных, можно заключить, что кетопрофен не аккумулируется, не всасывается в системный кровоток из места введения и выводиться в течение короткого времени из вымени. Полученные в наших исследованиях результаты согласуются с данными ЕМЕА, согласно которым кетопрофен быстро выводится из организма животного и не представляет риска для потребителя. Так согласно данным ЕМЕА, после трехкратного внутримышечного введения препарата в дозе 3,3 мг/кг/день кетопрофен не обнаруживали в молоке в период лечения, и после применения кетопрофена у коров. При этом его остаточные количества детектировали только в почках через 24 часа после последнего введения препарата, и концентрация была 0,19±0,14мкг/г, в других тканях (жир и мышцы) кетопрофен не обнаруживали (127).
Результаты наших исследований по изучению остаточных количеств активных компонентов препарата показали, что концентрация ципрофлоксацина в молоке выше, чем энрофлоксацина и в то время как энрофлоксацин не обнаруживали в молоке спустя 48 часов, ципрофлоксацин определяли в следовых количествах, но его концентрация была ниже предела детектирования метода, поэтому определение остаточных количеств этого фторхинолона необходимо учитывать для установления сроков возможного использования молока от больных коров, обработанных препаратом. В соответствии утвержденными нормами Таможенного союза МДУ суммарное содержание энрофлоксацина и ципрофлоксацина в молоке составляет 0,1 мкг/мл. Согласно полученным в наших исследованиях результатам, уже через 24 часа после последнего интрацистернального введения препарата, максимальное суммарное содержание энрофлоксацина и ципрофлоксацина не превышало 0,1 мкг/мл и составило 0,055 мкг/мл при среднем значении 0,036 мкг/мл.
С учетом полученных данных по остаточному содержанию энрофлоксацина, ципрофлоксацина и кетопрофена в молоке коров после интрацистернального введения препарат мы рекомендуем использовать молоко коров в пищевых целях не ранее чем через 1сутки после последней обработки животных.
При выборе оптимальной дозы противомаститного препарата было установлено, что применении препарата, содержащего 300 мг энрофлоксацина+50 мг кетопрофена в шприце-дозаторе и 350 мг энрофлоксацина+50 мг кетопрофена в шприце-дозаторе, при лечении мастита коров в лактационный период обеспечивало высокую терапевтическую эффективность – более 92%. В тоже время эффективность препарата, содержащего 250 мг энрофлоксацина+50 мг кетопрофена в шприце-дозаторе была существенно ниже и составила 78,5%. Исходя из того, что препарата со средним и максимальным содержанием энрофлоксацина по эффективности достоверно (р0,05) не отличались, с экономической точки зрения более целесообразно использовать лекарственное средство, содержащее 300 мг энрофлоксацина+50 мг кетопрофена в шприце-дозаторе, которое в дальнейших исследованиях в производственных условиях приняли за терапевтическую дозу.
Подтверждением того, что схема применения и доза опытного препарата 300 мг энрофлоксацина + 50 мг кетопрофена в шприце-дозаторе (7,5 мл) являются оптимальными, служат наши исследования по изучению фармакокинетики препарата, согласно которым в молоке в течение 9-12 ч суммарная концентрация энрофлоксацина и ципрофлоксацина поддерживается на уровне терапевтической в отношении большинства патогенов (0,2-2,0 мкг/мл), выделяемых при мастите у коров.
Изучение терапевтической эффективности противомаститного препарата с выбранной оптимальной дозой 300 мг энрофлоксацина + 50 мг кетопрофена в шприце-дозаторе (7,5 мл) проводили хозяйствах Саратовской области в сравнении с отечественными и зарубежными лекарственными средствами широко применяемыми для лечения мастита бактериальной этиологии у лактирующих коров (таблица 33). На основании полученных результатов можно заключить, что опытный препарат обладает высокой терапевтической эффективностью при лечении катарального и серозного мастита коров – 91,3%±1,12 и 90,9% соответственно и при этом не уступает по эффективности ряду зарубежных аналогов и более эффективен, чем некоторые отечественные лекарственные средства.
Полученные результаты клинических испытаний, проведенные на 201 лактирующей корове в производственных условиях, доказывают высокую эффективность трехкратного применения с интервалом 12 ч противомаститного препарата с содержанием в шприце-дозаторе 300 мг энрофлоксацина и 50 мг кетопрофена при лечении катарального и серозного мастита бактериальной этиологии
