Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 7
1.1. Респираторные болезни животных бактериальной, микоплазменной и хламидийной этиологии 7
1.2. Терапия респираторных заболеваний животных 12
1.3. Азитромицин и его свойства 18
2. Собственные исследования 26
2.1. Материалы и методы 26
2.2. Результаты исследования 45
2.2.1. Результаты изучения антибактериальной активности азитромицина 45
2.2.2. Результаты изучения токсичности Азитромицин раствор для инъекций 10% в опытах на лабораторных животных 50
2.2.2.1. Результаты изучения острой токсичности в опытах на мышах и крысах 50
2.2.2.2. Результаты изучения субхронической токсичности ч в опытах на лабораторных животных 54
2.2.3. Результаты изучения фармакокинетики азитромицина в организме телят, щенков и поросят 66
2.2.3.1. Изучение фармакокинетики азитромицина в плазме крови телят после введения Азитромицина раствор для инъекций 10% 66
2.2.3.2. Изучение фармакокинетики азитромицина в плазме крови щенков собак после введения Азитромицина раствор для инъекций 10%
2.2.3.3. Результаты изучения фармакокинетики азитромицина в плазме крови поросят после введения Азитромицина раствор для инъекций 68
10%
2.2.4. Результаты изучения терапевтической эффективности Азитромицина раствор для инъекций 10% в производственных условиях 69
3. Обсуждение результатов 75
Выводы 94
Практические редложения список литературы
- Терапия респираторных заболеваний животных
- Азитромицин и его свойства
- Результаты изучения токсичности Азитромицин раствор для инъекций 10% в опытах на лабораторных животных
- Изучение фармакокинетики азитромицина в плазме крови щенков собак после введения Азитромицина раствор для инъекций 10%
Введение к работе
Актуальность проблемы.
Одной из важных задач современной ветеринарной фармацевтической науки является разработка и внедрение в практику эффективных и безопасных лекарственных средств, в том числе и для лечения заболеваний респираторного тракта животных. Данные ветеринарной статистики и многочисленные литературные источники указывают на то, что респираторные болезни занимают одно из ведущих мест в структуре заболеваемости молодняка (Шевцов А.А., Русале-ев B.C., Ширяев Ф.А., Потехин А.В., 2008; Мищенко В.А., Павлов Д.К., Думова В.В., 2008; Чугунова Е.О., 2004; Done S.H., 2002).
Уровень заболеваемости респираторными болезнями в России находиться в зависимости от региона, сопутствующих климатических условий, технологии содержания, кормления животных и составляет от 30 до 70%, при этом летальность может достигать 9,7-30,6% (Мищенко В.А., Думова В.В., Черных О.Ю., 2011).
Нарушение условий содержания, температурных режимов, влажности, воздухообмена, качества кормов приводят к стрессу, и, как следствие, к снижению иммунитета, нарушению обмена веществ, повышению восприимчивости организма к различным патогенам, циркулирующим в окружающей среде, в первую очередь к вирусам и микоплазмам, вызывающих заболевания верхних и нижних дыхательных путей (Martelli P., Balarini G., 2002; Топурия Л.Ю., 2006). Респираторные болезни животных, как правило, имеют полиэтилогический характер, т.к. на фоне первичного патогена всегда развивается вторичная бактериальная микрофлора, вызывающая серьезные деструктивные изменения в бронхах и альвеолах. Поэтому для лечения респираторной патологии у животных используют антибиотики широкого спектра действия, обладающие высокой активностью в отношении основных возбудителей бактериальных инфекций, а также хламидий и микоплазм (Мищенко В.А., Рахманов A.M., Русалеев B.C., 2003; Куриленко А.Н., Крупальник В.Н., Пименов Н.В., 2006; Орлянкин Б.Г., Мишин A.M., Алипер Т.Н., 2010).
Для лечения бронхопневмоний у животных в последнее время широко используются препараты на основе тиамулина, тилозина, энрофлоксацина и доксициклина (Орлянкин Б.Г., Мишин A.M., Алипер Т.Н., 2010; Godinho К. S., Wolf R. М., Sherington J., Rowan Т. G., Sunderland S. J., Evans N. A., 2005). Нарушение схемы применения, использование антибиотиков в заниженных дозах приводит к появлению устойчивых к антибиотикам форм микроорганизмов (Ковалев В.Ф., Волков И.Б., Виолин Б.В. и др.,1988; Брандер Дж.К., 1981). Учитывая, что некоторые микроорганизмы характеризуются мультирезистентно-стью, только выбор наиболее активного противомикробного препарата определяет рациональную тактику лечения и успешный результат, позволяющий сохранить не только здоровье животного, но и его продуктивность.
В последние годы в медицине для лечения заболеваний дыхательных путей широкое применение нашел антибиотик из группы макролидов - азитроми-цин, обладающий не только высокой антимикробной активностью, но и проти-
вовоспалительным и иммуномодулирующим действием, а также низкой токсичностью (Retsema J., Fu W., 2001; Shinkai M., Henke M.O., Rubin B.K., 2008; Vrancic M., Banjanac M., Nujic K., Bosnar M., Murati Т., Mimic V., 2012).
Основу химической структуры азитромицина (являющегося единственным представителем группы азалидов) составляет 15-ти членное макроцикли-ческое лактонное кольцо (Жаркова Н.Е., 2010). Антибиотик активен в отношении большинства аэробных грамположительных и грамотрицательных бактерий, в том числе внутриклеточных микроорганизмов, таких как микоплазмы и хламидии (Яковлева СВ., 2003; Peters D.H., Friedel Н.А., McTavish D., 1992; Odenholt-Tornqvist I., Lowdin E., Cars O., 1995, Rubinstein E., 1996; Swainston H.T., Keam S.J.,2007). Если в ветеринарной практике имеются только отдельные сообщения о применении азитромицина, то в медицинской практике этот антибиотик широко используется в форме таблеток и суспензий для энтерального применения. Имеются сообщения о внутривенном применении азитромицина в форме порошка для приготовления раствора для инъекций.
Учитывая, что до настоящего времени в зарубежной и отечественной ветеринарной практике лекарственная форма - раствор азитромицина для инъекций не использовалась, представлялось актуальным изучить фармако-токсикологические свойства Азитромицин раствор для инъекций 10% и его эффективность применения для лечения респираторных заболеваний животных смешанной этиологии.
Для внедрения препарата в ветеринарную практику и доказательства безопасности и эффективности предложенной лекарственной формы был проведен ряд исследований, направленных на изучение антибактериальной активности, острой и субхронической токсичности на лабораторных животных, фармакоки-нетики в организме разных видов животных и терапевтической эффективности.
Цели и задачи исследования.
Изучить фармако-токсикологические свойства и терапевтическую эффективность новой оригинальной инъекционной лекарственной формы пролонгированного антибактериального препарата на основе азитромицина.
В задачи исследования входило:
изучить антибактериальную активность азитромицина в опытах in vitro в сравнении с широко применяемыми в ветеринарии антибактериальными соединениями разных фармакологических групп;
определить параметры острой и субхронической токсичности Азитромицина раствор для инъекций 10%, изучить влияние препарата на гуморальный и клеточный звенья иммунитета в опытах на лабораторных животных;
изучить фармакокинетику азитромицина в организме поросят, телят и щенков собак после применения Азитромицина раствора для инъекций 10% и определить его фармакокинетические параметры;
провести клинические испытания Азитромицина раствора для инъекций 10% для подтверждения его терапевтической эффективности при респираторных инфекциях смешанной этиологии животных.
Научная новизна.
Впервые на основе результатов экспериментальных исследований установлена антибактериальная активность азитромицина в отношении выделенных от больных животных возбудителей респираторных заболеваний, дана фармако - токсикологическая характеристика и обоснована возможность применения в ветеринарной практике азитромицина в форме раствора для инъекций.
Практическая значимость работы.
Доказана возможность безопасного и эффективного использования в ветеринарной практике Азитромицина раствора для инъекций 10% и обоснована схема его применения один раз в 72-96 часов в дозе 1 мл на 20 кг массы тела (5 мг/кг по действующему веществу) телятам и поросятам и в дозе 1 мл на 10 кг массы тела (10 мг/кг по действующему веществу) собакам при лечении респираторных инфекций смешанной этиологии.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
результаты изучения антибактериальной активности азитромицина;
характеристика фармако-токсикологических и фармакокинетических свойств антибактериального препарата на основе азитромицина в форме раствора для инъекций по результатам доклинических исследований;
результаты клинического испытания эффективности и безопасности Азитромицина раствора для инъекций 10% для лечения респираторных инфекций смешанной этиологии у крупного рогатого скота, свиней и собак;
практические предложения по применению Азитромицина раствора для инъекций 10% в ветеринарии.
Публикации.
По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, 4 из них в изданиях, рекомендованных ВАК России.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на:
- Московском Международном Ветеринарном Конгрессе по болезням мелких домашних животных в 2011 г.;
-Заседании ученого совета ФГБУ ««Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» в 2013 г.
Структура и объем диссертации.
Терапия респираторных заболеваний животных
Этиотропная терапия респираторных заболеваний направлена на подавление патогенной и условно - патогенной микрофлоры и должна руководствоваться принципами рациональной антибиотикотерапии, основанной на использовании препаратов с широким спектром действия или комбинаций антибиотиков (88).
Большинство известных видов возбудителей респираторных заболеваний животных, по данным различных исследователей, чувствительны к тиамулину, тилозину, тилмикозину, энрофлоксацину, доксициклину (51, 150). Однако следует отметить, что восприимчивость основных патогенов респираторного тракта к антимикробным препаратам в разных регионах значительно отличается (151, 165).
Нерациональное использование антибиотиков, снижение резистентности организма, возможность перезаражения животных, находящихся на ограниченных площадях, с одной стороны создает условия для усиления вирулентности возбудителей болезней, а с другой стороны к развитию смешанных инфекций и появлению мультирезистентных штаммов микроогранизмов (9, 31).
Смешанные инфекции респираторного тракта, ассоциированные с внутриклеточными возбудителями создают серьезную проблему для выработки эффективной схемы лечения животных. При такой патологии терапия бета-лактамами и тетрациклинами обычно оказывается неэффективной и может приводить к рецидивирующей инфекции. Несмотря на высокую активность in vitro в отношении основных возбудителей респираторных заболеваний аминог-ликозиды не всегда могут применяться, из-за плохого проникновения в клетку макроорганизма, место локализации микоплазм и хламидий, и в связи с высоким риском развития побочных эффектов (94, 154). При лечении микоплазмозной пневмонии хороший результат дают анти-биотки тилозин, тилмикозин, линкомицин, тиамулин (МПК50 0,06-0,5 мкг/мл), к которым возбудитель чувствителен. Однако использование этих препаратов предполагает длительный курс лечения (более 7 дней), в связи с внутриклеточной локализацией возбудителя и необходимостью создания в клетке постоянных высоких концентраций антибиотика (98).
«Респираторные» фторхинолоны (энрофлоксацин, ципрофлоксацин, спарфлоксацин, норфлоксацин, моксифлоксацин, левофлоксацин), несмотря на определенные ограничения к использованию у молодняка, высокоэффективны в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, а также внутриклеточных возбудителей заболеваний респираторного тракта. При этом они обладают непродолжительным постантибиотическим эффектом (в среднем 2 ч). В результате этого интервал между введением отдельных доз сокращается, что требует увеличения затрат на отработку животных и сказывается на конечной стоимости лечения. В схеме рациональной антибиотикотерапии эта группа антибиотиков является препаратом выбора при неэффективности других препаратов, а также при наличии аллергии к пенициллинам и макроли-дам, в случае выделения пневмококков, резистентных к пенициллину и макро-лидам (МПК 4 мкг/мл) (158, 265).
Повсеместное использование антибактериальных препаратов привело к изменению биологических свойств микроорганизмов, появлению антибиотико-резистентных штаммов и повышению их вирулентных свойств, что еще более усложнило проблему лечения бактериальных инфекций (31).
Под антибиотикорезистентностью понимают способность микроорганизма переносить значительно большие концентрации препарата, чем остальные микроорганизмы данного штамма, или развиваться при таких концентрациях, которые превышают достигаемые в макроорганизме при введении антибиотиков в терапевтических дозах(31, 55). Резистентность может быть как наследуемым видовым признаком, так и приобретенным. Природная резистентность является постоянным признаком и легко прогнозируема. Устойчивость к антибактериальной терапии может явиться результатом применения неадекватных доз и использования неэффективного антибиотика, а также при нерациональных комбинациях антибактериальных средств.
Механизмы устойчивости к антибактериальным веществам объединяются в следующие группы: -модификация структуры чувствительных к действию антибиотика ор-ганелл в микробной клетке; -инактивация антибактериального препарата энзимами; -активное выведение антибактериального препарата из микробной клетки; -нарушение проницаемости клеточных мембран для антибиотика (18). Формирование у микроорганизмов резистентности является основным фактором, снижающим эффективность существующих антибиотиков и стимулирующим разработку новых препаратов (50).
Очевидно, что с ростом резистентности возбудителей к антимикробным препаратам будет снижаться эффективность стандартных режимов лечения (107, 115, 117, 124, 151, 165). В связи, с чем актуальной становится разработка рациональных комбинаций антибактериальных препаратов или изучение и внедрение в практику новых молекул антибактериальных соединений, обладающих выгодными фармакодинамическими свойствами.
Оптимизация фармакодинамических параметров может не только усилить эффективность применения антибактериальных препаратов, но и снизить вероятность развития антибиотикорезистентности и материальных затрат, связанных с лечением. Сочетание оптимальных режимов дозирования с высокой антибактериальной активностью вещества способствует получению максимальной эффективности терапии, при снижении количества штаммов микроорганизмов, способных вызывать рецидивы инфекции и подвергаться мутациям (132).
Азитромицин и его свойства
Результаты изучения антибактериальной активности азитромицина в отношении различных изолятов микроорганизмов в сравнении с основными мак-ролидными антибиотками, используемыми в ветеринарии, тилозином, тилмико-зином, толутромицином, тиамулином представлены в таблице 6.
Изоляты стафилококков и стрептококков были выделены от больных бронхопневмонией телят, а изоляты пастерелл и клебсиелл - от свиней больных энзоотической пневмонией.
За исключением изолята 13, все изученные изоляты стафилококков были чувствительны к азитромицину (МПК 1 мкг/мл), при этом изоляты 9, 10, 14, 16, 17, 19, 21 были более чувствительны к азитромицину, чем к другим антибиотикам группы макролидов. МГЖ азитромицина в отношении большинства чувствительных изолятов была на уровне тилмикозина и толутромицина (0,1-0,5 мкг/мл), в то время как тилозин и тиамулин оказались менее активными (0,25-1,0 мкг/мл). Чувствительность изолята 18 к азитромицину была умеренной (МПК=2,5 мкг/мл), однако, она была в 2 раза выше, чем у тилозина, и соответствовала чувствительности к тилмикозину, толутромицину и тиамулину. Резистентный к азитромицину микроорганизм был также устойчив и к другим мак-ролидам, при этом уровень устойчивости к тилозину и тиамулину был выше в 2 раза.
Все изученные изоляты стрептококков были чувствительны к азитромицину (МПК 1 мкг/мл). Изолят 29 был чувствителен только к азитромицину, к другим антибиотикам макролидной группы проявлял умеренную устойчивость (МПК=2.5 мкг/мл), изолят 30 был мало чувствителен к толутромицину (МПК=2.5 мкг/мл), сохраняя умеренную чувствительность к другим макроли-дам.
Только около 50 % изученных изолятов клебсиелл и пастерелл, выделенных от больных животных, были чувствительны к азитромицину. В отношении 18 % изолятов грамотрицательных микроорганизмов МІЖ азитромицина была в 2,5-5 раз ниже, чем МІЖ тилмикозина, тилозина, толутромицина и тиамули-на. В 33 % случаев грамотрицательные микроорганизмы показывали к азитромицину незначительно большую или равнозначную чувствительность по сравнению с другими антибиотиками макролидной группы. 50 % пастерелл и клебсиелл оказались умеренно чувствительными к азитромицину (МІЖ 0,5-2,5мкг/мл), в 50 % случаев к азитромицину и другим антибиотикам макролидной группы были устойчивы (МПК=5 мкг/мл). МІЖ азитромицина в отношении умеренно-чувствительных изолятов Pasteurella multocida была в 2-4 раза ниже, чем МІЖ тилозина и тиамулина.
Для сравнения антибактериальной активности азитромицина с другими широко используемыми в ветеринарной практике антибиотиками были определены их минимальные подавляющие концентрации для этих же изолятов пастерелл, сальмонелл, стрептококков и стафилококков, выделенных от животных, больных респираторными заболеваниями смешанной этиологии. Результаты сравнительного изучения чувствительности микроорганизмов к разным группам антибактериальных соединений представлены в таблице 7.
Более 75 % изолятов стафилококков были чувствительны к амоксициллину, гентамицину, энрофлоксацину, цефтиофуру и доксициклину (МІЖ 0,1-2,0 мкг/мл). До 70 % изолятов стафилококков проявляли устойчивость к флорфени-колу (МГЖ 5 мкг/мл), а к тетрациклину были резистентны 25 % изолятов (М1Ж 5 мкг/мл). Изолят 18 был чувствителен только к действию гентамицина (М1Ж=0,1 мкг/мл) и доксициклина (МПК=1,0 мкг/мл). Изолят 13, обладающий устойчивостью к макролидным антибиотикам, оставался чувствительным к гентамицину и энрофлоксацину (МІЖ 0,5 и 0,25 мкг/мл соответственно), проявляя умеренную чувствительность к амоксициллину и цефтиофуру (МПК=2,5 мкг/мл). Таблица 7. Чувствительность полевых изолятов микроорганизмов к антибакте риальным соединениям разных групп Изоляты Амокс. Гент. Энрофл. Цефт. Флорф. Доке. Тетрац. Азит. Staph, aureus. 1 0,5 0,1 0,1 0,25 5 од 0,5 0,25 Staph.aureus. 2 0,5 0,1 0,1 0,25 2,5 0,25 0,5 0,5 Staph.aureus. 3 0,5 0,5 0,1 0,5 5 од 0,5 0,25 Staph.aureus. 4 0,25 0,1 0,5 0,5 2,5 0,25 0,5 0,5 Staph.aureus. 5 0,5 0,1 2,5 0,5 1 од 0,5 ОД Staph.aureus. 6 0,25 0,1 5 0,25 2,5 0,5 1,0 1,0 Staph.aureus. 7 0,5 0,5 0,25 0,25 5 од 0,5 од Staph.aureus. 8 0,5 0,5 0,25 0,25 5 0,25 1,0 0,25 Staph.aureus. 9 0,5 0,25 0,5 0,5 10 0,5 0,5 од Staph.aureus. 10 0,25 0,1 0,5 од 10 0,25 0,5 од Staph.aureus. 11 0,25 0,25 0,1 од 5 од 0,5 0,25 Staph.aureus. 12 0,25 0,25 од 0,25 5 0,5 0,5 од Staph.aureus. 13 2,5 0,5 0,25 2,5 50 5 5 50 Staph.aureus. 14 1 0,5 0,5 1 2,5 1 1,0 0,5 Staph.aureus. 15 2,5 0,25 2,5 2,5 2,5 0,5 0,5 1,0 Staph.aureus. 16 0,25 0,25 од од 5 0,25 1,0 0,5 Staph.aureus. 17 1,0 0,25 од 0,5 5 0,25 5 1,0 Staph.aureus. 18 50 од 10 50 50 1 10 2,5 Staph.aureus. 19 1,0 од 10 1,0 5 1 5 0,5 Staph.aureus. 20 1,0 5 5 1,0 10 10 10 1,0 Staph.aureus. 21 0,5 0,1 од од 1 - 5 0,25 Str.faecalis 28 0,5 0,1 од од 1 - 5 0,5 Str.faecalis 29 2,5 10 од 0,5 10 - 5 1,0 Str.faecalis 30 50 1 од 50 100 50 50 1,0 Str.faecalis 31 2,5 1 од 1,0 1 2,5 0,5 0,5 Str.faecalis 32 2,5 1 0,5 1,0 2,5 1 1,0 0,5 Str.faecalis 33 2,5 10 1 2,5 5 1 5 0,25 Str.faecalis 34 0,5 0,1 од ОД 1 - 5 0,25 Klebsiella pneumoniae 40 5 2,5 2,5 1 10 5 10 50 Klebsiella pneumoniae 41 100 1 2,5 0,5 25 5 10 2,5 Klebsiella pneumoniae 42 10 1 1 10 25 2,5 5 0,5 Klebsiella pneumoniae 43 2,5 1 10 2,5 10 50 10 50 Pasteurella multocida 50 100 50 10 10 50 50 25 2,5 Pasteurella multocida 51 0,5 1 5 0,5 5 25 10 2,5 Pasteurella multocida 52 2,5 0,5 2,5 1 5 2,5 5 5 Pasteurella multocida 53 5 0,5 2,5 5 10 2,5 10 5 Амокс. - амоксициллин; Гент. - гентамицин; Энрофл - энрофлоксацин; Цефт. - цефтиофур; Флорф. - флорфеникол; Доке. - доксициклин; Тетрад. - тетрадиклин; Азит-азитромицин Полученные результаты показали, что из всех изученных антибиотиков гентамицин оказался наиболее эффективным в отношении стафилококков. В большинстве случаев его МПК была такой же или ниже МПК амоксициллина, цефтиофура, доксициклина и энрофлоксацина, и в 2-5 раз ниже МПК тетрациклина и флорфеникола.
Изоляты, устойчивые к флорфениколу (МПК 5 мкг/мл), оставались чувствительными к гентамицину (МПК 0,25-0,5 мкг/мл). Только 5 изолятов были более чувствительны к доксициклину, чем к гентамицну (МПК 0,1 и 0,5 мкг/мл соответственно). Один изолят оказался более чувствителен к амоксициллину и цефтиофуру, чем к гентамицину (МПК - 1,0 мкг/мл); при этом к флорфениколу, доксициклину и тетрациклину этот изолят был малочувствителен (МПК 5-10 мкг/мл). Микробиологическая активность гентамицина в отношении стафилококков была сопоставима с эффективностью азитромицина.
Стрептококки были более устойчивы к действию изученных антибактериальных соединений, чем стафилококки. Все изоляты были чувствительны только к энрофлоксацину. 16 % изолятов были устойчивы к амоксициллину, цефтиофуру и тетрациклинам (МПК=50 мкг/мл), 28 % изолятов - к гентамицину (МПК 10 мкг/мл) и 71 % изолятов - к тетрациклину (МПК 5 мкг/мл). Активность энрофлоксацина в отношении стрептококков была на уровне МПК азитромицина (МПК 1 мкг/мл).
При изучении антибактериальной активности антибиотиков в отношении клебсиелл и пастерелл были получены следующие результаты: максимальную активность показал гентамицин, только 12 % изолятов были к нему устойчивы (МПК 5 мкг/мл); в то время как к энрофлоксацину и цефтиофуру были резистентны 37,5 % изолятов (МПК 5 мкг/мл); к амоксициллину и доксициклину -50% пастерелл и 25% клебсиелл проявляли умеренную чувствительность.
Результаты изучения токсичности Азитромицин раствор для инъекций 10% в опытах на лабораторных животных
Заболеваемость молодняка в России респираторными болезнями в зависимости от региона, климатических условий, технологии содержания и кормления животных находится на уровне 30 - 70%, при этом летальность может достигать 9,7-30,6 % (3, 90, 38).
Нарушение условий содержания, температурных режимов, влажности, воздухообмена, качества кормов приводят к стрессу, и, как следствие, к снижению иммунитета, нарушению обмена веществ, повышению восприимчивости организма к различным патогенам, циркулирующим в окружающей среде, в первую очередь к вирусам и микоплазмам, вызывающих заболевания верхних и нижних дыхательных путей (48, 75, 76). Респираторные болезни животных, как правило, имеют полиэтилогический характер, т.к. на фоне первичного патогена, которым, как правило, становятся вирусы или микоплазмы, всегда развивается вторичная бактериальная микрофлора, вызывающая серьезные деструктивные изменения в бронхах и альвеолах. Поэтому основными принципами рациональной антибиотикотерапии респираторной патологии у животных становится применение антибиотиков широкого спектра действия, быстро создающих высокие антибактериальные концентрации в легких, и, обладающих активностью в отношении основных возбудителей бактериальных инфекций, а также хлами-дий и микоплазм.
Для лечения бронхопневмоний у животных в последнее время широко используются препараты на основе тиамулина, тилозина, тилмикозина, энроф-локсацина и доксициклина (51, 150). Нарушение схемы применения антибактериальных препаратов, использование их в заниженных дозах и короткими курсами приводит к появлению устойчивых к антибиотикам форм микроорганизмов (31, 9, 152).
В связи с этим эффективное применение антибактериальных препаратов при терапии респираторных инфекций возможно только при условии постоянного контроля за уровнем резистентности возбудителей инфекций к антибиотикам на региональном и локальном уровнях. Учитывая, что некоторые штаммы микроорганизмов характеризуются мультирезистентностью, выбор наиболее активного противомикробного препарата определяет рационально выбранную тактику лечения и успешный результат, позволяющий сохранить не только здоровье животного, но и его продуктивность (11).
В последние годы в медицине для лечения заболеваний дыхательных путей широкое применение нашел антибиотик из группы макролидов - азитроми-цин, обладающий не только высокой антимикробной активностью, но и противовоспалительным и иммуномодулирующим действием, а также низкой токсичностью (141, 216, 233, 255).
Основу химической структуры азитромицина (являющимся единственным представителем азалидов) составляет 15-членное макроциклическое лак-тонное кольцо (79). Антибиотик активен в отношении большинства аэробных грамположительных и некоторых грамотрицательных бактерий, в том числе внутриклеточных микроорганизмов, таких как микоплазмы и хламидии (58, 169,198,206,243,267).
Если в ветеринарной практике имеются только отдельные сообщения о применении азитромицина, то в медицине этот антибиотик широко используется в форме таблеток и суспензий для энтерального применения. Имеются сообщения о внутривенном применении азитромицина в форме порошка для приготовления раствора для инъекций.
Учитывая, что до настоящего времени в зарубежной и отечественной ветеринарной практике лекарственная форма - раствор азитромицина для инъекций не использовалась, представлялось актуальным изучить фармако-токсикологические свойства препарата Азитромицин раствор для инъекций 10% и его эффективность применения для лечения респираторных заболеваний животных смешанной этиологии
Для внедрения препарата в ветеринарную практику и доказательства безопасности и эффективности предложенной лекарственной формы был проведен ряд исследований, направленных на изучение антибактериальной активности, острой и субхронической токсичности на лабораторных животных, фар-макокинетики в организме разных видов животных и терапевтической эффективности.
Для определения противомикробного спектра действия и подтверждения эффективности азитромицина было проведено изучение антибактериальной активности и определение минимальных подавляющих концентраций (МІЖ) азитромицина в отношении стафилококков (п=17), стрептококков (п=7), пастерелл (п=4) и клебсиелл (п=4), выделенных от телят больных бронхопневмонией и свиней с энзоотической пневмоний, в сравнении с макролидными антибиотиками (тилозин, тилмикозин, толутромицин, тиамулин) и антибактериальными соединениями других групп, широко используемыми в ветеринарной практике (амоксициллин, гентамицин, доксициклин, тетрациклин, энрофлоксацин, флорфеникол, цефтиофур).
В наших исследованиях было установлено, что полевые изоляты стафилококков, стрептококков, клебсиел и пастерелл были высокочувствительны к азитромицину, и только 11% изолятов оказались устойчивы к действию антибиотика (МПК 5 мкг/мл).
Наши результаты о чувствительности стаффилококков к азитромицину (0,1-0,5 мкг/мл) совпадают с данными Matijasic М., Kos V.M., Nujic К.(2007), но были несколько выше, чем полученные (0,01-0,05 мкг/мл) O Grady F., Lam-pert Н. Р. и Finch R. G.(1997) (188, 199).
Из антибиотиков других групп сопоставимую с азитромицином микробиологическую активность проявил представитель аминогликозидов - гентамицин, который оказался наиболее эффективным в отношении стафилококков: в большинстве случаев его МПК была такой же или немного ниже МІЖ амок-сициллина, цефтиофура, доксициклина и энрофлоксацина, и в 2-5 раз ниже МІЖ тетрациклина и флорфеникола. Изоляты, устойчивые к флорфениколу (МГЖ 5 мкг/мл), оставались чувствительными к гентамицину (МІЖ 0,25-0,5 мкг/мл) и азитромицину (МГЖ 1 мкг/мл). Только 5 изолятов были более чувствительны к доксициклину, чем к гентамицну (МІЖ 0,1 и 0,5 мкг/мл соответственно), оставаясь высоко чувствительными к азитромицину (МПК 0,1-0,25 мкг/мл). Один изолят оказался более чувствителен к амоксициллину и цефтиофуру, чем к гентамицину (МІЖ 1,0 мкг/мл) и азитромицину (МІЖ 1,0 мкг/мл); при этом к флорфениколу, доксициклину и тетрациклину этот изолят стафилококка был малочувствителен (МІЖ 5-10 мкг/мл).
Все изученные изоляты стрептококков были чувствительны к азитромицину (МПК 1 мкг/мл), что соотносится с результатами, полученными Будановым СВ. (2000) (МІЖ 0,06-0,12мкг/мл) в отношении микроорганизмов, выделенных от человека (12). Стрептококки оказались высоко чувствительны к действию энрофлоксацина и были более устойчивы к действию изученных антибактериальных соединений, чем стафилококки (7).
Изучение фармакокинетики азитромицина в плазме крови щенков собак после введения Азитромицина раствор для инъекций 10%
Для определения практической зависимости между дозой препарата и его эффективностью необходимо в совокупности с фармакодинамическими (ФД) свойствами (антимикробная активность) препарата учитывать и его фармако-кинетические (ФК) характеристики (19).
Азитромицин относится к концентрация-зависимым антимикробным препаратам, поэтому главная цель при определении режима дозирования заключается в достижении максимальной концентрации и создании максимально продолжительного времени нахождения антибиотика в патологическом очаге (19).
Основным ФК/ФД параметром для концентрация - зависимых антибиотиков является величина ПФК/МПК - отношение площади под фармакокинети-ческой кривой (ПФК) концентрация-время к минимальной подавляющей концентрации (МІЖ), а также значение Cmax/МПК - соотношение между максимальной концентрацией и МІЖ (83). Оптимальное соотношение ПФК/МПК, обеспечивающее терапевтическую эффективность антибиотика является величина от 25 и выше (29).
Результаты наших исследований позволяют утверждать о перспективности применения азитромицина в отношении респираторных патогенов, так как отношение площади под фармакокинетической кривой к минимальной подавляющей концентрации в зависимости от микроорганизма находиться в пределах от 24 до 116.
На основании данных по изучению фарм акокинетики азитромицина в плазме крови поросят после однократного внутримышечного введения нами были рассчитаны основные фармакокинетические параметры, характеризующие пролонгированное действие и постепенное выведение азитромицина из организма животных (таблица 29).
Площадь под фармакокинетической кривой (AUC) при изучении фарма-кокинетики азитромицина в плазме поросят составила 2546,9 нг/млхч, что свидетельствует о постепенном всасывании и длительном нахождении антибактериального соединения в тканях организма животных.
Объем распределения (Vd) азитромицина в организме поросят был на уровне 77,9 л, что подтверждает способность антибиотика проникать внутрь клетки и накапливаться в тканях в более высоких концентрациях, чем в сыворотке крови. Такой характер распределения азитромицина играет важную роль при терапии респираторных инфекций смешанной этиологии, когда патогены локализуются внутри клетки.
Максимальная концентрация азитромицина в плазме крови после однократного внутримышечного введения достигалась через 1,3 ч. и составила 166,40 нг/мл, что позволяет сделать вывод о быстром всасывании антибиотика из места инъекции. При этом азитромицин не создает высоких сывороточных концентраций, за счет выраженного тканевого аффинитета.
Пролонгированное действие и постепенное выведение антибиотика из организма подтверждают длительный период полувыведения азитромицина (25,1 час) и величина среднего времени удерживания вещества в организме поросят (33,6 час). Наши данные соответствуют исследованиям многих авторов, которые отмечали поддержание высоких концентраций азитромицина в течение длительного периода времени в организме человека и животных, даже после однократного перорального приема препарата (146, 175, 232, 255).
Такой продолжительный период полувыведения обеспечивается благодаря уникальному строению молекулы азитромицина (путем включения атома азота в лактонное кольцо между 9 и 10 атомами углерода), обеспечивающей высокие внутриклеточные концентрации и медленное высвобождение из клеток (104, 166).
Химическая структура азитромицина обеспечивает его прочную связью с органеллами клетки, создание в полиморфно-ядерных лимфоцитах и других иммунокомпетентных клетках высоких концентраций антибиотика, что приводит к быстрому киллингу и эрадикации возбудителя из очага воспаления и препятствует появлению резистентных штаммов микроорганизмов (102). Данная особенность на фоне глобального роста устойчивых к антибиотикам штаммов микроорганизмов в очередной раз положительно характеризует азитромицин.
Современное животноводство требует применения рациональных способов введения лекарственных веществ. Одним из таких способов является использование пролонгированных форм антибиотиков, которые позволяют сокращать количество манипуляций с животными и уменьшать сроки лечения.
Для оценки терапевтической эффективности Азитромицина раствор для инъекций 10% и подтверждения режима дозирования, предложенного на основании данных, полученных при изучении фармакокинетики и фармакодинами-ки препарата, был проведен ряд опытов на сельскохозяйственных животных (крупный рогатый скот, свиньи) и собаках в хозяйствах и клинике Саратовской области.
Азитромицин раствора для инъекций 10% вводили однократно, при необходимости повторяя инъекцию через 96 часов.
При применении Азитромицин раствор для инъекций 10% поросятам, собакам и телятам с клиническими признаками респираторных заболеваний был полу 92 чен выраженный терапевтический эффект - от 93,3 % до 100 % (таблица 30). Кроме того, в опытных группах отмечали более высокие привесы, меньшее количество павших и наибольшее количество выздоровевших животных в сравнении с препаратами аналогичного назначения Тилозин 50 и 200, Байтрил 5% и Нитокс 200, которые применяли в соответствии с инструкциями, утвержденными Россель-хознадзором РФ.
Применение препарата Азитромицин раствор для инъекций 10% позволило значительно сократить кратность инъекций антибиотика и уменьшить сроки лечения животных по сравнению с контрольными группами животных. В опытной группе, как правило, было достаточно одной инъекции, при необходимости повторяли ее через 96 часов, в то время как в контрольных группах требовалось многократное введение антибиотиков (5-6 инъекций).
Таким образом, результаты изучения терапевтической эффективности в производственных условиях доказывают высокую эффективность и удобство применения Азитромицин раствор для инъекций 10%, что позволяет рекомендовать его для лечения заболеваний животных в дозе 1 мл на 20 кг массы тела для телят и поросят (5 мг/кг массы по действующему веществу), в дозе 1 мл на 10 кг массы тела собакам (10 мг/кг массы по действующему веществу). Троп-ность к очагам воспаления, накопление антибиотика в иммунокомпетентных клетках и медленная элиминация азитромицина из организма животных позволяет достичь терапевтического эффекта, как правило, только однократной внутримышечной инъекцией.
На основании проведенной нами работы и полученных результатов можно сделать вывод о том, что Азитромицин раствор для инъекций 10% является перспективной пролонгированной лекарственной формой антибиотика для лечения респираторных заболеваний животных, благодаря высокой антибактериальной активности, низкой токсичности и положительными фармакокинетиче-скими свойствами.
