Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы
1.1. Послеродовые эндометриты и их роль в развитии бесплодия у коров
1.1.1. Распространение послеродовых эндометритов у коров
1.1.2. Клинико-морфологическое проявление послеродовых эндометритов у коров
1.1.3. Диагностика послеродовых эндометритов у коров .
1.2. Роль микроорганизмов и показателей естественной резистентности в развитии эндометрита у коров
1.2.1. Микрофлора, выделяемая из матки коров с послеродовым эндометритом .
1.2.2. Влияние естественной резистентности на заболеваемость коров эндометритами
1.2.3. Факторы, предрасполагающие к развитию послеродовых эндометритов у коров
1.3. Терапия послеродовых эндометритов у коров .
1.3.1. Применение препаратов антимикробного действия
1.3.2. Применение препаратов патогенетического и общестимулирующего действия
1.3.3. Применение способов нетрадиционной терапии .
1.4. Методы профилактики послеродовых эндометритов у коров
1.5. Заключение по обзору литературы
2. Результаты собственных исследований
2. Материалы и методы иследований
2.1. Этиологическая структура послеродового эндометрита у коров в хозяйствах ЦЧР
2.2. Обоснование создания новых комплексных антибактериальных препаратов для лечения эндометрита у коров .
2.3. Фармакотоксикология диометра
2.3.1. Антимикробное действие диометра .
2.3.2. Острая токсичность диометра
2.3.3. Изучение безвредности (переносимости) диометра на коровах
2.3.4. Подострая токсичность диометра на лабораторных животных .
2.3.5. Субхроническая токсичность диометра на коровах
2.3.6. Раздражающее действие диометра
2.3.6.1 Раздражающее действие диометра на глаз кролика
2.3.6.2 Раздражающее действие диометра при внутрикожном методе введения кроликам
2.3.7. Эмбриотоксическое и тератогенное действие диометра .
2.3.8. Определение остаточных количеств диметилсульфоксида, канамицина и диоксидина в молоке
2.4. Клиническая фармакология диометра
2.4.1. Лечебная эффективность диометра при остром послеродовом эндометрите у коров
2.4.2. Профилактическая эффективность диометра при послеродовом эндометрите у коров
2.5. Фармакотоксикология тетраметра
2.5.1. Антимикробное действие тетраметра
2.5.2. Острая токсичность тетраметра .
2.5.3 Изучение безвредности (переносимости) тетраметра на коровах .
2.5.4. Подострая токсичность тетраметра на лабораторных животных
2.5.5 Субхроническая токсичность тетраметра на коровах .
2.5.6 Раздражающее действие тетраметра .
2.5.6.1 Раздражающее действие тетраметра на глаз кролика .
2.5.6.2 Раздражающее действие тетраметра при внутрикожном методе введения кроликам
2.5.7. Эмбриотоксическое и тератогенное действие тетраметра
2.5.8. Определение остаточных количеств диметилсульфоксида, диоксидина и окситетрациклина в молоке
2.6. Клиническая фармакология тетраметра
2.6.1. Лечебная эффективность тетраметра при остром послеродовом эндометрите у коров
2.6.2. Профилактическая эффективность тетраметра при послеродовом эндометрите у коров
2.7. Фармакотоксикология энроцида
2.7.1. Антимикробное действие энроцида
2.7.2. Острая токсичность энроцида
2.7.3. Изучение безвредности (переносимости) энроцида на коровах
2.7.4. Подострая токсичность энроцида на лабораторных животных .
2.7.5. Субхроническая токсичность энроцида на коровах
2.7.6. Раздражающее действие энроцида
2.7.6.1 Раздражающее действие энроцида на глаз кролика
2.7.6.2 Раздражающее действие энроцида при внутрикожном методе введения кроликам
2.7.7. Эмбриотоксическое и тератогенное действие энроцида .
2.7.8. Определение остаточных количеств диметилсульфоксида и энрофлоксацина в молоке .
2.8. Клиническая фармакология энроцида
2.8.1. Лечебная эффективность энроцида при остром послеродовом эндометрите у коров
2.8.2. Профилактическая эффективность энроцида при послеродовом эндометрите у коров .
2.9. Клинико-морфологическая, гистоструктурная и электронномикроскопическая характеристика острого послеродового эндометрита у коров
2.10. Клинико-морфологическая характеристика коров, после лечения эндометрита препаратами диометр, тетраметр и энроцид .
2.11. Структурная организация эндометрия у коров после лечения послеродового эндометрита препаратами диометр, тетраметр и энроцид
3. Заключение
Список сокращеннных терминов
Список использованной литературы
Список иллюстрированного материала
Приложения
- Распространение послеродовых эндометритов у коров
- Терапия послеродовых эндометритов у коров
- Обоснование создания новых комплексных антибактериальных препаратов для лечения эндометрита у коров
- Профилактическая эффективность диометра при послеродовом эндометрите у коров
Введение к работе
Актуальность темы. Одной из причин возникновения временного или постоянного бесплодия у коров являются послеродовые эндометриты, сдерживающие воспроизводство стада крупного рогатого скота. Поэтому вопросам этиологии, патогенеза, профилактики послеродовых эндометритов, совершенствованию способов лечения больных коров уделяется большое внимание.
Однако, несмотря на достижения современной ветеринарной науки в этой области, послеродовые эндометриты повсеместно распространены, носят массовый характер и остаются одной из главных проблем в воспроизводстве животных.
Нежданов А.Г. с соавт. (2005), Турченко А.Н., Коба И.С. (2009), Шабунин С.В. с соавт.(2009, 2012), Михалев В.И. (2012) и др. считают, что болезни органов размножения у крупного рогатого скота представляют одну из важнейших проблем современного ветеринарного акушерства и гинекологии, так как являются основной причиной возникновения у коров длительного бесплодия, сопровождающегося снижением молочной продуктивности, прекращением лактации и преждевременной их выбраковкой. Болезни органов размножения развиваются на фоне глубоких структурных изменений в половых органах. В матке они проявляются в виде отечности серозной и мышечной оболочек, отсутствия признаков ретракции, диффузной инфильтрации эндометрия лимфоидными клеточными элементами, некроза, распада и отторжения поверхностного слоя, сильной секуляризации и кровенаполнения кровеносных сосудов, вследствие чего в матке образуется кровоточащая раневая поверхность, приводящая к обильным кровянистым выделениям из половых органов. При этом создаются благоприятные условия для проникновения в полость матки и размножения патогенных микроорганизмов, токсины которых усиливают нарушение обмена веществ и микроциркуляцию в пораженных тканях. Устанавливается порочный круг патологических процессов с изменением причинно-следственных отношений. В развитии патологического процесса значительно возрастает роль условно-патогенной микрофлоры, в связи с повышением ее вирулентности и числа штаммов, устойчивых к лекарственным препаратам, а также с высокой частотой инфицирования беременных животных.
Поэтому одной из причин недостаточно эффективной терапии коров и риска увеличения послеродовых осложнений является возрастающая лекарственная устойчивость возбудителей заболевания. В этой связи необходим постоянный мониторинг как за составом микроорганизмов-возбудителей, так и за динамикой развития их резистентности. Это позволяет разработать адекватную стратегию и тактику антибактериальной терапии в конкретных условиях каждого молочного комплекса или фермы с включением в лечебный курс препаратов широкого спектра действия (Нежданов А.Г. с соавт., 2005; Шабунин С.В. с соавт., 2009).
Исходя из этого, в системе лечебно-профилактических мероприятий при болезнях органов размножения важная роль принадлежит их фармакотерапии и фармакопрофилактике (Шабунин С.В. с соавт., 2005).
В настоящее время для профилактики и лечения эндометритов применяется большое количество фармакологических средств, имеющих различный механизм действия. Среди них перспективными являются комплексные антимикробные препараты.
Однако, при большом количестве предлагаемых препаратов для лечения больных эндометритами коров, недостаточное внимание уделяется их влиянию на последующую воспроизводительную функцию животных и экологическую чистоту, получаемых от них продуктов.
По данным литературы возникновение, развитие и исход воспалительных процессов в эндометрии у коров в значительной степени определяется состоянием естественной резистентности организма, и в частности местной защиты матки. При этом уровень местной защиты любого органа неразрывно связан с уровнем его структурной организации, что не всегда учитывается при изучении патогенеза эндометритов и испытании лечебно-профилактических средств (Жаров А.В., 2006; Сулейманов С.М., 2005).
В связи с этим многие предложенные препараты для лечения больных эндометритом коров, без учета их влияния на структурную организацию матки и организма животного, часто не обеспечивают получения желаемого результата.
Поэтому разработка как более эффективных методов и средств, так и комплексных препаратов для лечения больных эндометритом коров, должна проводиться с учетом местной защитной реакции матки, которая находится в прямой зависимости от состояния ее структурной организации и всего организма.
Однако до настоящего времени недостаточно изучены композиционные препараты при эндометритах у коров, а также их влияние на морфофункциональное состояние органов размножения у больных эндометритом коров.
Цели и задачи исследований. Целью настоящей работы являлось изучение распространения, патогенеза и патологической морфологии острых послеродовых эндометритов у коров, разработка, изучение экспериментальной и клинической фармакологии новых композиционных препаратов для терапии и профилактики острых послеродовых эндометритов у коров с учетом их влияния на морфофункциональное состояние эндометрия.
Задачи исследования:
1. Изучить распространение и этиологическую структуру послеродовых эндометритов у коров в хозяйствах ЦЧР;
2. Дать клинико-морфологические и гисто-структурную характеристику матки коров при развитии в ней воспалительного процесса;
3. Разработать новые композиционные антибактериальные препараты для лечения коров с воспалительными заболеваниями матки и провести их фармако-токсикологическую оценку;
4. Выявить влияние новых композиционных препаратов на иммунобиохимический статус коров и структурную организацию эндометрия;
5. Провести клинические испытания и определить эффективность применения новых композиционных антибактериальных препаратов в комплексной терапии коров при послеродовом эндометрите;
6. Установить возможность применения новых антибактериальных препаратов для профилактики послеродовых заболеваний у коров;
7. Разработать и утвердить нормативно-техническую документацию и инструкции по применению на новые комплексные антибактериальные препараты для профилактики и лечения послеродовых эндометритов у коров.
Научная новизна. Определена этиологическая структура и дана клинико-морфологическая, гистологическая и ультраструктурная оценка тканей матки у коров после родов. Расширены представления о механизмах развития острого послеродового эндометрита у коров. Научно обоснованы состав и рецептура новых высокоэффективных комплексных антибактериальных препаратов диометр, тетраметр и энроцид для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров. Проведена их фармако-токсикологическая оценка. Выяснено их действие на организм коров на морфобиохимическом уровне и на матку - на тканевом, клеточном и субклеточном уровне организации эндометрия. Научно аргументирована, экспериментально и клинически доказана перспективность использования новых комплексных антибактериальных препаратов диометр, тетраметр и энроцид в ветеринарной практике.
Новизна исследований подтверждена патентами РФ на изобретение №2455992 и № 2467755.
Практическая значимость и внедрение. На основании результатов исследований разработаны новые эффективные антибактериальные препараты диометр, тетраметр и энроцид для профилактики и лечения больных эндометритом коров и налажено их серийное производство.
Материалы исследований вошли в «Методическое пособие по профилактике бесплодия у высокопродуктивного молочного скота», одобренное секцией патологии, фармакологии и терапии Отделения ветеринарной медицины РАСХН (Воронеж, 2010) и «Практическое руководство по обеспечению продуктивного здоровья крупного рогатого скота», допущенное учебно-методическим объединением в области зоотехнии и ветнадзора в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений (УМО №06-19-275 от 18.03.2011 г.).
В Российской Федерации Россельхознадзором проведена регистрация препаратов диометр (регистрационный номер ПВР-2-0.3/01214), тетраметр (регистрационный номер ПВР-2-0.3/01216) и энроцид (регистрационный номер ПВР-2-0.3/01215) и утверждены инструкции по их применению.
Апробация. Основные положения и результаты исследования представлены, доложены и одобрены на: годовых отчетах по НИР Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии (Воронеж, 2003-2012); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы болезней обмена веществ у сельскохозяйственных животных в современных условиях», посвященной 40-летию ГНУ ВНИВИПФиТ (Воронеж, 2010); 3-м съезде фармакологов и токсикологов России «Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации» (Санкт-Петербург, 2011); 17-ой Всероссийской научно-методической конференции по патологической анатомии животных «Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных» (Москва, 2011); Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 65-летию Краснодарского НИВИ (Краснодар, 2011); Международной научно-технической конференции «Биотехнологические системы в производстве пищевого сырья и продуктов: инновационный потенциал и перспективы развития» (Воронеж, 2011); Международной научно-практической конференции «Экологические проблемы использования природных и биологических ресурсов в сельском хозяйстве» (Екатеринбург, 2012); Международной научно-практической конференции, посвященной 85-летию со дня рождения профессора Г.А. Черемисинова и 50-летию создания Воронежской школы ветеринарных акушеров «Современные проблемы ветеринарного акушерства и биотехнологии воспроизведения животных» (Воронеж, 2012); IV съезде фармакологов и токсикологов России «Актуальные вопросы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации» (Москва, 2013).
Публикации. Основные научные результаты, включенные в диссертацию, опубликованы в 38 печатных работах, в том числе 14 статей в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК Минобразования РФ («Ветеринария», «Актуальные вопросы ветеринарной патологии», «Ветеринарная патология», «Ветеринарный врач», «Международный вестник ветеринарии»), 3 методических пособиях, 3 патентах.
Основные положения, выносимые на защиту:
распространение, клинико-морфологическая и патоморфологическая характеристика острого послеродового эндометрита у коров в хозяйствах ЦЧР;
обоснование состава и рецептуры новых композиционных препаратов - диометр, тетраметр и энроцид
фармако-токсикология новых композиционных препаратов диометр, тетраметр и энроцид;
обоснование применения новых композиционных препаратов диометр, тетраметр и энроцид при остром послеродовом эндометрите с учетом их влияния на структурную организацию эндометрия у коров;
клиническая фармакология диометра, тетраметра и энроцида при терапии и профилактике острого послеродового эндометрита у коров.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 318 страницах и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, предложений, списка литературы, который включает 396 источников, в том числе 76 зарубежных. Работа иллюстрирована 60 рисунками и 89 таблицами.
Распространение послеродовых эндометритов у коров
Эндометрит (Endometritis) – воспаление слизистой оболочки матки. По те-чению его подразделяют на острый, подострый, хронический; по проявлению - на клинически выраженный и скрытый. По характеру воспалительного процесса острый эндометрит делят на катаральный, гнойно-катаральный, фибринозный, некротический и гангренозный (А.П. Студенцов с соавт., 2000; В.П. Гончаров, Д.А. Черепахин, 2004). Послеродовые эндометриты у коров широко распространены (В.А. Агафо-нычев, 1989; Е.Ю. Смертина и А.В. Петляков, 2001; И.Г. Конопельцев с соавт., 2003; А.Н. Шевченко и А. Н. Турченко, 2005; В.И. Михалев, 2005; Б.К. Акназаров с соавт., 2009; Н.Н. Гавриленко, 2009; А.Н. Турченко и И.С. Коба, 2009; А.Я. Бат-раков и С.В. Васильева, 2012; Т.Е. Григорьева с соавт., 2012; Ю.Г Ткаченко, 2012). По их сообщению эндометритом ежегодно переболевает от 25-40% до 70-90% коров. Послеродовым эндометритам принадлежит ведущее место среди акушер-ско-гинекологических болезней, вызывающих у коров бесплодие. По сообщению И.Ф. Заянчковского (1969), Е.В. Ильинского (1972); В.А. Акатова с соавт., (1976), Ю.А. Скрипицына (1979), А.Г. Нежданова (1985), Г.А. Черемисинова и В.Д. Ми-сайлова (1988), А.Г. Андреева (1995), Т.В. Борисовой (1995) эндометритами пере-болевают от 15 до 60% коров, вызывая у них длительное бесплодие. По данным А.Г. Нежданова и Л.П. Сергеевой (1983) из числа переболевших послеродовым эндометритом коров до 30-35% животных остаются бесплодными на длительное время и, как правило, их выбраковывают из стада. Из сообщения И.А. Порфирье-ва (2009) по этой причине ежегодно из стада выбывает до 50-70% высокопродук-тивных молочных коров. Выбраковка и убой бесплодных коров вследствие эндометрита по данным В.Д. Кочаряна (2008) достигает 24-72% от числа заболевших. О значительном распространении послеродовых эндометритов у коров в разных регионах страны приводятся сведения во многих работах.
В хозяйствах различных зон Краснодарского края заболеваемость коров острым послеродовым эндометритом составляет в пределах 20-55% (А.Г. Шипи-цин, 1981; Е.В. Ильинский с соавт., 1995; А.Н. Турченко, 1999; А.Н. Шевченко и А.Н. Турченко, 2005), Ростовской области и Ставропольского края послеродовой эндометрит регистрировали у 30-45% отелившихся коров (Н.И. Полянцев и А.Н. Синявин; 1989; С.Н. Слипченко, 1994; Н.И. Полянцев и В.В. Подберезный, 2004). В Воронежской области гнойно-катаральным эндометритом переболевает до 38,5% коров. В.И. Михалев (2001) приводит данные по распространению после-родового эндометрита у коров в хозяйствах Воронежской области за три года. В 1998 году острый послеродовой эндометрит регистрировали у 17,2%, в 1999 году – у 18,1% и в 2000 году - у 19,8% отелившихся коров. Выявляя степень распро-странения акушеско-гинекологических болезней у коров ряда хозяйств Чернозем-ной зоны России Д.А. Ерин и В.И. Зимников (2012) установили, что в хозяйствах Воронежской области послеродовым эндометритом переболевает от 35,4% до 39,1%, в среднем 37,6%, Белгородской – от 34,9% до 41,9%, в среднем 39,0%, Орловской области – от 30,2% до 48,2%, в среднем 34,4% отелившихся коров. В Западной Сибири осложненное течение послеродового периода воспалительного характера выявляется у 22,0% коров (А.Н. Вяткин, 1979). Почти такое же распро-странение (27,8%) послеродовые эндометриты имеют у коров хозяйств Амурской области (В.И. Казеев, А.И. Ивашура, 1975). От 18,2% до 25,6% коров с болезнями органов размножения выявляются в хозяйствах Вологодской области (А.Г. Хмы-лов, 2006). В хозяйствах Владимирской области заболеваемость коров острым по-слеродовым эндометритом в 2001 году составила 29,8% и в 2003 году – 32,4% от числа больных коров.
Довольно широкое распространение послеродовые осложнения воспали-тельного характера коров встречаются в хозяйствах стран Ближнего зарубежья. Так, по данным Д.Д. Логвинова и М.В. Вельбивца (1993) в отдельных хозяйствах Киевской и Черкасской областей Украины острым послеродовым эндометритом переболевает от 10,2 до 72,1% коров. В хозяйствах Белоруссии данная патология проявляется у 30-70% коров (Г.Ф. Медведев с соавт, 1994; Л.Н. Рубанец с соавт., 2007; Р.Г. Кузмич, 2009). До 78% достигает симптоматическое бесплодие коров в основном по причине послеродовой патологии у коров в хозяйствах Молдовы (А.И. Буданцев, 2005). В хозяйствах Таджикистана послеродовые эндометриты регистрируются у 35-60% коров и являются самой распространенной патологией среди акушерско-гинекологических заболеваний маточного поголовья крупного рогатого скота (Ш.Р. Мирзоахметов и П. Асоев, 2003; П Асоев, 2009).
Из стран Дальнего зарубежья в США послеродовой эндометрит выявлен у 10% коров. В штате Калифорния его диагностировали у 1,96-13,2% коров, в штате Огайо (при обследовании 12 молочных ферм) – у 32% коров (G.Y. Miller, C.R. Dorn, 1990). В Канаде послеродовым эндометритом переболевает 15-20% коров (S. J. Le Blans, 2008). В Южной Америке среди бесплодных коров эндометриты составляют 47,6% (T.F. Nascimento et al., 1994). В Аргентине заболеваемость ко-ров клинически протекающим послеродовым эндометритом составляет 35% и субклиническим – 38%. При этом коровы с острым послеродовым эндометритом подвергаются выбраковке в 1,6 раза чаще, чем без признаков заболевания (L.V. Madoz et al., 2010; J. Plntzke et al., 2010).
В Израиле заболеваемость коров эндометритом в 2004-2008 годах составила в пределах 38-46% (T. Goshen, N.Y. Shpigel, 2006; N. Zeron et al., 2010). В Англии послеродовой эндометрит регистрируется у 5-10% (A.P. Mc.Naughton, R.D. Murray, 2009), во Франции – у 27% (I.Steffan, 1987), Германии – у 47-48% (A. Linke et al., 2007; S. Pleticha et al., 2009), Италии – у 40% (G. Donofrioet al., 2007; A.N. Miller et al., 2007) коров. В Югославии послеродовым эндометритом перебо-левает от 16,7 до 33,3% коров (Z. Uremovic еt al.,1989). Степень распространения послеродывых эндометритов у коров в хозяствах Румынии составляет 22,6% (T. Barbu, 1984). В Японии распространение послеродового эндометрита у коров со-ставляет 25,9% (G. Gautam et al, 2009; T. Nakao et al., 2010).
Терапия послеродовых эндометритов у коров
Основные принципы лечения эндометритов у коров сводятся к подавлению микрофлоры, повышению резистентности организма, удалению экссудата, по-вышению тонуса и сократительной деятельности матки, ускорению регенерацион-ных процессов в эндометрии, улучшению кормления и содержания (А.П. Студен-цов с соавт., 2000; И.Я. Шматко, 2001; А.Г. Нежданов, 2005; Е.В. Ильинский с со-авт., 2006; Л.Г. Войтенко и В.Я. Никитин, 2011). Для этого используют средства этиотропной, симптоматической, патогенетической общестимулирующей терапии, а также методы физиотерапевтического воздействия.
В литературе имеются многочисленные сообщения о применении антимик-робных препаратов при терапии послеродового эндометрита у коров. Для получе-ния положительного эффекта при лечении коров с эндометритом антимикробные препараты должны обладать высокой активностью в отношении микрофлоры, за-селяющей матку, хорошо переноситься организмом, не снижать факторы местной защиты, не вызывать раздражения слизистой оболочки матки. В матке должна создаваться необходимая концентрация их активно действующих веществ, что обеспечивается схемой применения антимикробного препарата (I.M. Sheldon, 2004; O.I. Azawi, 2008). По мнению Б.Г. Панкова с соавт. (1994) при лечении коров с эндометритом на первом этапе следует использовать сильнодействующие антимикробные препа-раты.
Из антимикробных средств в арсенале лечебно-профилактических средств прочное место заняли антибиотики. По мнению Е.В. Ильинского (1964) рациональное использование антибио-тиков при неспецифических воспалительных заболеваниях половых органов (ва-гиниты, цервициты, эндометриты, метриты, оофориты) способствует получению терапевтического эффекта в 85-100% случаев. Я.Г. Губаревич (1964) применял пенициллин и наблюдал выздоровление 70% коров на 10-14 день лечения. К.Г. Дашукаева с соавт. (2002) достигли 100% выздоровления коров, боль-ных послеродовым эндометритом, применив комплексный препарат Эндометра-маг-К", в состав которого входят полимиксин, гентамицин, карбахолин, витамины А и Е. Препарат вводили внутриматочно по 100 мл, двукратно, с интервалом 24 часа. Продолжительность лечения составила в среднем 11 дней, инволюция поло-вых органов завершилась через 29 дней, оплодотворяемость составила 80%, про-должительность бесплодия - 39 дней.
Более эффективными являются антибиотики с широким спектром действия. Е.Г. Тришкина (1987) при лечении препаратом левоэритроциклин отмечала вы-здоровление 89,6% коров. Н.И. Полянцев и Ю.Н. Полянцев (2000) получили вы-сокий эффект при лечении коров с подострым и хроническим эндометритом, ис-пользуя метрагель.
Е.В. Ильинский (1972), И.Н. Зюбин с соавт. (1988), J.B. Woplocock (1979) в своих работах подчеркивают, что применение препаратов антибиотического ряда при воспалительных процессах в воспроизводительной системе должно прово-диться с учетом чувствительности к ним микрофлоры, выделяемой из половых органов животных, так как длительное применение антибиотиков ведет к сниже-нию лечебного эффекта и образованию к ним резистентных видов микроорганиз-мов.
При эндометритах, обусловленных патогенными грибами или ассоциациями бактерий и микромицетов, антибиотики при длительном применении не только не способствуют выздоровлению, но, наоборот, усиливают тяжесть заболевания (Е.П. Кремлев с соавт., 1979; В.С. Авдеенко, 1996).
Наряду с антибиотиками в ветеринарной практике широко используются сульфаниламиды, которые применяются как по отдельности, так и в сочетании с другими лечебными средствами (Г.В. Зверева и С.П. Хомин, 1976; В.С. Шипилов, 1977; Е.В. Ильинский с соавт., 1995). Комбинированное применение антибиоти-ков и сульфаниламидов имеет ряд преимуществ, особенно в гинекологической практике, так как воспаление в гениталиях часто является результатом воздейст-вия ассоциированной флоры различных микробов-возбудителей с разным отно-шением к антибиотикам. При этом достигается возможность одновременного по-давления в очаге воспаления всех ассоциаций микроорганизмов благодаря взаим-ному усилению (синергизм) их антибактериального действия (Н.Н. Михайлов с соавт., 1970).
Обоснование создания новых комплексных антибактериальных препаратов для лечения эндометрита у коров
Представленные выше данные явились основанием для разработки новых антибактериальных препаратов для лечения и профилактики послеродовых забо-леваний у коров. Исходя из данных литературы, фармакологической и фармацев-тической совместимости, возможного эффекта синергизма были разработаны сле-дующие составы препаратов: 1 – диоксидин : канамицин : ДМСО, 2 – диоксидин : окситетрациклин : ДМСО и 3 – энрофлоксацин : ДМСО. Далее было проведено изучение антимикробной активности препаратов и их компонентов (диоксидин и канамицин; диоксидин и окситетрациклин; энроф-локсацин). Для выявления оптимального соотношения компонентов в препаратах антимикробную активность различных комбинаций сравнивали с активностью исходных действующих веществ. Соотношение диоксидина и канамицина (составляющие компоненты) в препарате изучено в следующих комбинациях (табл. 5).
Комбинация 5 (К5) 0,25 1,25 до 100, На рисунке 1 представлены результаты изучения антимикробной активно-сти различных комбинаций в сравнении с диоксидином и канамицином.
Как следует из представленных данных, минимальная бактериостатическая концентрация диоксидина в отношении Staph. аureus 209 Р составила 15,6 мкг/мл и E. coli 866 – 3,9 мкг/мл, а канамицина соответственно – 0,78 и 3,9 мкг/мл.
Наиболее выраженным антимикробным действием обладала четвертая ком-позиция, минимальная бактериостатическая концентрация которой в отношении Staph. Аureus 209 Р снизилась в 40 раз, в отношении E. coli 866 – в 2,5 раза по сравнению с таковой у диоксидина, а по сравнению с канамицином - в 2 раза в от-ношении Staph. аureus и в 2,5 раза в отношении E. coli 866. Таким образом, совместное применение диоксидина и канамицина в раз-личных соотношениях позволило снизить минимальную бактериостатическую концентрацию препарата в отношении изученных культур, что свидетельствует о синергидном действии составляющих компонентов. Но наиболее эффект синер-гизма проявился в композиции 4. Так антимикробная активность диоксидина в отношении стафилококков возросла в 120 раз, в отношении эшерихий - в 1,25 раз. Антимикробная активность канамицина в отношении эшерихий возросла в 3,8 раза, стафилококков - возросла в 3 раза. В связи с этим в дальнейшей работе из изученных композиций была выбра-на композиция 4, которая была названа – диометр. Соотношение диоксидина и окситетрациклина (составляющие компоненты) в препарате изучено в следующих комбинациях (табл. 6). Комбинация 5 (К5) 0,50 2,50 до 100, Как следует из представленных данных, минимальная бактериостатическая концентрация диоксидина в отношении Staph. аureus 209 Р составила 15,6 мкг/мл и E. coli 866 – 3,9 мкг/мл, а окситетрациклина соответственно – 3,9 и 12,5 мкг/мл.
Наиболее выраженным антимикробным действием обладала четвертая ком-позиция, минимальная бактериостатическая концентрация которой в отношении Staph. аureus снизилась в 40,0 раз, в отношении E. coli 866 - в 1,25 раза по сравне-нию с таковой у диоксидина. По сравнению с окситетрациклином минимальная бактериостатическая концентрация снизилась в 10 раз в отношении Staph. аureus и в 4 раза в отношении E. coli 866.
Таким образом, совместное применение диоксидина и окситетрациклина в различных соотношениях позволило снизить минимальную бактериостатическую концентрацию препарата в отношении изученных культур, что свидетельствует о синергидном действии составляющих компонентов. Но наиболее эффект синер-гизма проявился в композиции 4. Так антимикробная активность диоксидина в отношении стафилококков возросла в 120 раз, в отношении эшерихий - в 3,8 раза. Антимикробная активность окситетрациклина в отношении эшерихий возросла в 6 раз, стафилококков - возросла в 15 раз.
В связи с этим в дальнейшей работе из изученных композиций была выбра-на композиция 4, которая была названа – тетраметр. Обоснованность данных композиций обусловлена тем, что в данной лекар-ственной форме сочетаются по два антимикробных компонента с различным спектром и механизмом антимикробного действия, что в свою очередь обеспечи-вает синергидный эффект.
Исходя из данных, полученных в опытах in vitro, энрофлоксацин показал наиболее высокую минимальную бактериостатическую концентрацию в отноше-нии Staph. аureus 209 Р и E. coli 866 составила 0,39 мкг/мл (рис. 3). Рис. 3. Антимикробная активность энрофлоксацина, диоксидина, окситетрациклина и канамицина, мкг/мл
В сравнении с энрофлоксацином антимикробная активность диоксидина в отношении Staph. аureus 209 Р была ниже в 40 раз, у канамицина – в 2 раза и у окситетрациклина – в 10 раз. В отношении E. coli 866 у диоксидина и канамицина в сравнении с энрофлоксацином антимикробная активность была ниже в 10 раз, у окситетрациклина – в 32 раза. Также в ходе экспериментов было установлено, что лекарственные формы комплексных препаратов на основе энрофлоксацина и ка-намицина или окситетрациклина нестабильны. Поэтому обоснованность состава препарата энроцид обусловлена высокой антимикробной активностью энрофлок-сацина и достаточно ограниченной фармацевтической совместимостью его с ка-намицином и окситетрациклином.
При подкожном введении диометра в дозах 3500,0-4500,0 мг/кг через 2-3 часа у животных наблюдалось состояние возбуждения, учащенное дыхание. Спустя 4 часа животные находились в слегка заторможенном состоянии, пере-движения их по клетке были ограниченными. У некоторых животных наблюда-лась шаткая походка и слабая тактильная реакция. Отмеченные симптомы сохра-нялись на протяжении 5-6 часов и по истечении этого срока животные начинают активно умываться, пить воду и принимать корм.
Подкожное введение диометра в дозах 5500,0-6500,0 мг/кг (мыши) 5500,0 мг/кг (крысы) через 1,5 часа вызывало у животных возбуждение, которое через 2,5-3 часа сменялось заторможенностью. Крысы и мыши вяло передвигались по клетке, слабо реагировали на звуковые и тактильные раздражители. Спустя еще 2 часа животные лежали на животе, у них было глубокое дыхание и на раздражите-ли они не реагировали. Описанное состояние отмечалось на протяжении 3 часов и затем животные начинали слабо реагировать на раздражители, слегка двигаться, подходить к поилке. Через сутки погибла одна крыса, одна мышь в группе с дозой 5500,0 мг/кг и две с дозой 6500,0 мг/кг. Последующее наблюдение за животными этих групп не выявило изменений в их общем состоянии.
Подкожное введение диометра в дозах 5500,0-6500,0 мг/кг (мыши) 5500,0 мг/кг (крысы) через 1,5 часа вызывало у животных возбуждение, которое через 2,5-3 часа сменялось заторможенностью. Крысы и мыши вяло передвигались по клетке, слабо реагировали на звуковые и тактильные раздражители. Спустя еще 2 часа животные лежали на животе, у них было глубокое дыхание и на раздражите-ли они не реагировали. Описанное состояние отмечалось на протяжении 3 часов и затем животные начинали слабо реагировать на раздражители, слегка двигаться, подходить к поилке. Через сутки погибла одна крыса, одна мышь в группе с дозой 5500,0 мг/кг и две с дозой 6500,0 мг/кг.
Профилактическая эффективность диометра при послеродовом эндометрите у коров
Изучение профилактической эффективности препарата диометр при после-родовых эндометритах проводилось в опытах на коровах, принадлежащих хозяй-ствам Воронежской области. Животные находились в одинаковых условиях со-держания и кормления. Рацион сбалансирован по основным питательным компо-нентам, животные пользовались активным моционом.
Опыт проводился на трех группах животных, созданных по принципу ана-логов. Коровам первой группы применялся диометр 1 раз по 100 мл на введение после отделения последа, абортов или оказания помощи при осложнениях и пато-логических родах. Животным второй группы применялись палочки с фуразолидо-ном 1 раз по 3 суппозитория на одно введение. Коровам третьей группы препара-ты не применялись и они являлись отрицательным контролем.
Как видно из таблиц 27 и 28, лучший профилактический эффект был дос-тигнут при применении препарата диометр. Приведенные данные свидетельству-ют о том, что препарат диометр является эффективным профилактическим сред-ством при послеродовых акушерских заболеваниях и в 82,6% и 83,4% случаях предотвращает заболевания коров послеродовыми эндометритами. Заболевае-мость коров острым послеродовым эндометритом после применения диометра оказалась в 1,69-1,9 раза меньше в сравнении с животными контрольной группы (палочки с фуразолидоном), а в сравнении с животными из группы отрицательно-го контроля – меньше в 4,5 и 5,3 раза.
Оплодотворение у животных после внутриматочного введения диометра на-ступило у 73,9 и 75,0%, что на 21,0 и 22,4% больше, чем у коров после введения им палочек с фуразолидоном и на 38,2 и 51,4% - в сравнении с животными, кото-рым препараты не назначали. При этом период от отёла до оплодотворения у жи-вотных опытной группы оказался короче на 11,1 и 10,6 дней, чем у коров кон-трольной группы и на 15,8 дней – в сравнении с отрицательным контролем, а ко-эффициент оплодотворения – меньше соответственно на 0,46-0,57 и 1,02-0,69.
Широкие производственные испытания профилактической эффективности диометра при остром послеродовом эндометрите у коров проводились в пяти хо-зяйствах Воронежской и Белгородской областей. Первый опыт был проведен в ООО «Сторожевское» Острогожского района Воронежской области на 123 коровах, больных эндометритом, второй - в ООО «Криниченское» Острогожского района Воронежской области на 217 коровах, третий - в СПК «Новая жизнь» Алексеевского района Белгородской области на 150 коровах, четвертый - в СХА «Родина» Россошанского района Воронежской области на 135 коровах и пятый - в СХА «Свобода» Россошанского района Воро-нежской области на 122 коровах (табл. 29-33
Полученные результаты также показали, что при применении препарата диометр заболеваемость коров послеродовыми эндометритами была ниже в сред-нем на 5,8% по сравнению с заболеваемостью в группе, которой применялись фу-разолидоновые палочки, сокращался период от отела до оплодотворения, увели-чивалось количество оплодотворенных при 1 осеменении коров. 2.5. Фармакотоксикология тетраметра
При изучении антимикробной активности тетраметра установлено, что пре-парат обладает широким спектром антимикробного действия. Наиболее выраженное действие он проявлял в отношении кокковой микро-флоры: стрептококков и стафилококков – 0,39 мкг/мл. Активность препарата в отношении музейных штаммов эшерихий была на уровне – 6,25 мкг/мл. Бактери-цидное действие препарата в отношении изученных культур превышало бакте-риостатическое соответственно в 2 раза.
Клинические симптомы острого отравления белых мышей и белых крыс со-провождались непродолжительным периодом возбуждения с усилением двига-тельной активности у большинства особей, мыши издавали при этом писк. Белые крысы были настолько возбуждены в этот период, что у них отмечалась агрессив-ность. За непродолжительным периодом возбуждения развивалось резко выра-женное угнетение, состояние глубокого сна, переходящее затем в кому. Животные не реагировали на световой и тактильный раздражители, не при-нимали корм. У больных крыс и мышей отмечалась резко выраженная жажда. К моменту гибели животных отмечалось учащенное дыхание и сердцебиение. Ды-хание часто становилось поверхностным прерывистым. Развивалась синюшность кожи и слизистых оболочек. Смерть, как правило, наступала в состоянии глубоко-го угнетения.
Белые крысы 4500,0 5303,1 8115,7(7160-9080) 10814,0 12191,7 ±479, Патологоанатомические изменения острого отравления лабораторных жи-вотных (крыс и мышей) характеризовались гемодинамическими расстройствами, повсеместным застоем венозной крови в подкожной клетчатке и внутренних ор-ганах. Желудок при вскрытии был пуст, слизистая была гиперемирована, в под-слизистой дна его отмечались мелкоточечные едва заметные кровоизлияния. Сли-зистая оболочка тонкого отдела кишечника была гиперемирована, с наличием в ней мелкоточечных кровоизлияний. В просвете тонкого отдела кишечника у от-дельных крыс и мышей отмечалось скопление значительного количества слизи. Печень, почки были полнокровны, незначительно увеличивались, окраска была неравномерной с фиолетовым оттенком. У большинства трупов легкие были ги-перемированы с наличием отечной жидкости. Сердце было растянуто, предсердия были заполнены темно-вишневого цвета кровью. Под эпикардом, особенно в об-ласти ушек, отмечены множественные кровоизлияния.
Патологоанатомические изменения острого отравления лабораторных жи-вотных (крыс и мышей) характеризовались гемодинамическими расстройствами, повсеместным застоем венозной крови в подкожной клетчатке и внутренних ор-ганах. Желудок при вскрытии был пуст, слизистая оболочка была гиперемирова-на, в подслизистой дна его наблюдались мелкоточечные едва заметные кровоиз-лияния. Слизистая оболочка тонкого отдела кишечника то же была гиперемиро-ванной с наличием мелкоточечных кровоизлияний. В просвете тонкого отдела кишечника у отдельных крыс и мышей отмечалось скопление значительного ко-личества слизи. Печень, почки были полнокровными и незначительно увеличен-ными, окраска была неравномерной с фиолетовым оттенком. У большинства тру-пов легкие были гиперемированы с наличием отечной жидкости. Сердце было растянуто, предсердия заполнялись темно-вишневого цвета кровью. Под эпикар-дом, особенно в области ушек наблюдались множественные кровоизлияния.
Влияние тетраметра на организм коров при однократном внутриматочном введении изучали на 12 коровах красно-пестрой породы, 3-5 отела, массой 500-550 кг, которые были разделены на 3 группы по 4 животных в каждой. Первая группа служила контролем и препарат животным не вводили. Второй группе внутриматочно вводили препарат тетраметр в терапевтической дозе 100 мл на животное, а 3 группе – в 3-кратной терапевтической дозе (300 мл). Препарат вво-дили в полость матки с помощью шприца Жане, предварительно подогрев до тем-пературы 37-40С. Установлено, что применение тетраметра в изученных дозах не оказывало существенного влияния на клинический статус, поведение и аппетит животных. В течение опыта частота пульса, количество дыхательных движений, сердечных толчков и сокращения рубца находились в пределах нормы.
