Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы 9
2.1. Характеристика иммунной системы млекопитающих 9
2.2. Характеристика лимфоидных клеток крови 14
2.3. Иммуноглобулины 19
2.4. Морфология и функциональное значение тимуса в системе иммунологического надзора
2.5. Структура и иммунологическая функция селезенки 25
2.6. Морфофункциональная характеристика лимфатических узлов... 28
2.7. Особенности иммунного ответа при микозах 29
3. Собственные исследования 35
3.1. Материалы и методы исследований 35
3.2. Результаты исследований 40
3.2.1. Морфологические показатели органов системы иммунитета белых лабораторных мышей при антигенной стимуляции вакцинным штаммом гриба рода Trichophyton 40
3.2.1.1. Динамика морфологических показателей тимуса 40
3.2.1.2. Динамика морфологических показателей
3.2.1.3. Динамика морфологических показателей регионарных лимфатических узлов 96
3.2.2 Динамика морфологических показателей крови белых лабораторных мышей при антигенной стимуляции вакцинным штаммом гриба рода Trichophyton
3.2.3. Динамика показателей крови телят при антигенной стимуляции вакцинным штаммом гриба рода Trichophyton 114
4. Обсуждение результатов исследований 124
5. Выводы 128
6. Практические предложения 129
Список литературы 130
- Характеристика лимфоидных клеток крови
- Морфология и функциональное значение тимуса в системе иммунологического надзора
- Морфологические показатели органов системы иммунитета белых лабораторных мышей при антигенной стимуляции вакцинным штаммом гриба рода Trichophyton
- Динамика морфологических показателей крови белых лабораторных мышей при антигенной стимуляции вакцинным штаммом гриба рода Trichophyton
Введение к работе
Актуальность темы В настоящее время общепризнанна тенденция к ухудшению экологического состояния, что ведет к снижению иммунного статуса животных и людей, и, как следствие, вызывает рост численности заболеваний микозами.
По| широте распространения микозы подразделяют на следующие группы: микозы с глобальным распространением; микозы, регистрируемые на ограниченных географических территориях; микозы, встречаемые в определенных климатических зонах. Типичными представителями микозов с глобальным распространением являются дерматомикозы. В частности, трихофития крупного рогатого скота, обусловленная Т. verrucosum, официально зарегистрирована более, чем в 120 странах на всех континентах (СВ. Петрович, 1989).
Ранее считалось, что зоофильная трихофития встречается, главным образом, у сельских жителей. За последние годы выявлен рост заболеваемости мелких животных трихофитией в городах с одновременным возрастанием числа заражения городских жителей зооантропонозной трихофитией.
Подобная ситуация связана с изменениями в системе патогенный агент — хозяин с акцентом на иммунный ответ последнего, так как поражение дерматофитами происходит, в подавляющем большинстве случаев, на фоне различных иммунодефицитных состояний (Дж. Дик, 1982).
Но даже в свете всех накопленных данных, до сих пор остается недостаточно изученным иммуногенез при микотических инфекциях. У авторов нет единого мнения по механизму развития иммунитета против грибов-возбудителей.
Таким образом, в настоящее время актуален вопрос более углубленного изучения морфологических проявлений иммунных реакций макроорганизма при микозах.
Цель и задачи исследований.
Целью выполнения работы явилось изучение динамики иммуноморфологических изменений при трихофитии крупного рогатого скота на лабораторных и сельскохозяйственных животных.
Для достижения выбранной цели были определены следующие задачи:
1. Провести моделирование антигенной нагрузки при заболевании трихофитией на лабораторных моделях - белых лабораторных мышах.
2. Изучить морфологические показатели крови и иммунокомпетентных органов белых лабораторных мышей на протяжении всех этапов становления адаптивного иммунного ответа.
3. Провести моделирование течения заболевания трихофитией у телят
3-х месячного возраста.
4. Изучить морфофункциональные показатели крови, характеризующие состояние иммунной системы на всем протяжении становления адаптивного иммунного ответа.
Научная новизна работы.
Впервые на основании морфологического и статистического анализа иммунокомпетентных органов у лабораторных мышей определено соответствие иммуноморфологических изменений стадиям развития адаптивного иммунного ответа.
На основании показателей крови, у телят, выявлена слабовыраженная первичная ответная реакция гуморального звена иммунитета на введение вакцинного штамма трихофитона.
Впервые, морфологически описан процесс становления иммунного ответа на внедрение возбудителя дерматофитоза.
Выявлен критический период в становлении адаптивного иммунитета на 10-15 сутки от заражения возбудителем трихофитии.
Определено соответствие этапов становления противомикотического адаптивного иммунного ответа у лабораторных и сельскохозяйственных моделей.
Теоретическая и практическая значимость.
Полученные данные дополняют и расширяют сведения о морфологических изменениях в иммунных органах животных на всех этапах становления антимикотического иммунитета.
Установленные закономерности дают теоретическую базу ветеринарным специалистам для использования различных групп лечебных средств при комплексной терапии и профилактики дерматофитозов.
Результаты исследования могут быть использованы для оценки морфофункционального состояния иммунной системы при течении дерматомикозов у различных видов животных.
Установленный критический период дает основания рекомендовать практикующим ветеринарным врачам проводить иммунную коррекцию в 10
• 15 сутки заболевания трихофитией.
Полученные данные могут быть использованы в учебном процессе на ветеринарных и биологических факультетах, а также при написании учебников, учебных пособий, монографий.
Апробация работы.
Основные положения работы были доложены и получили положительную оценку на:
• X международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Энтузиазм и творчество молодых ученых в развитии фундаментальной и прикладной науки» г. Троицк (13-15 ноября 2006);
• 71, 72, 73 научно-практических конференциях СтГАУ (2007, 2008, 2009 гг.);
• Всероссийской научно-практической конференции, г. Новочеркасск, ГНУ СКЗНИВИ (2007);
• Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессоров В.Н. Жеденова, Г.М. Удовина, Н.В. Садовского (Оренбург, 21-23 октября 2008).
Публикации.
По теме диссертации опубликовано 6 работ, в том числе 1 в журнале, из списка, рекомендованного ВАК РФ для защиты кандидатских диссертаций.
Внедрение.
Полученные данные внедрены в учебный процесс при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по дисциплине патологическая анатомия сельскохозяйственных животных и как справочный материал при научно-исследовательских работах по патоморфологии животных в ФГОУ ВПО «Алтайский государственный аграрный университет», «Башкирский государственный аграрный университет», «Кубанский государственный аграрный университет», «Брянская государственная сельскохозяйственная академия», «Великолукская государственная сельскохозяйственная академия», « Вятская государственная сельскохозяйственная академия», «Ивановская государственная сельскохозяйственная академия», «Кабардино-Балкарская государственная сельскохозяйственная академия» «Самарская государственная сельскохозяйственная академия», «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».
Благодарность.
Выражаем благодарность доктору биологических наук, Заслуженному деятелю науки, профессору кафедры эпизоотологии и микробиологии ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет» А.Ф. Дмитриеву за консультативную помоидь в выполнении научной работы, а также Генеральному директору ФГУП «Ставропольская биофабрика» доктору ветеринарных наук В.И. Заерко и его заместителям, кандидату ветеринарных наук А.П. Сурмило и А. Бугаеву за предоставление экспериментального материала для проведения исследовательской части работы.
Объем и структура диссертации.
Обилий объем работы составляет 140 страниц машинописного текста, включает 111 рисунков, 10 таблиц. Диссертация включает следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения и список литературы. Список использованной литературы включает 123 источника, в том числе 24 иностранных авторов.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Воздействие микотических антигенов индуцирует становление адаптивного иммунного ответа у телят и белых лабораторных мышей, преимущественно, клеточного звена.
2. Морфологические изменения в иммунных органах у белых лабораторных мышей регистрируются, начиная с первого часа после введения вакцинных антигенов, степень их' проявлений зависит от временного фактора.
Характеристика лимфоидных клеток крови
Клетки белой крови - лейкоциты, являются основой антимикробной защиты организма. В эту группу входят основные эффекторы иммунных и воспалительных реакций (Ф. Дж. Шиффман, 2007). В клетках белой крови различают гранулярные и агранулярные лейкоциты. К зернистым лейкоцитам относятся нейтрофилы, эозинофилы и базофилы, к незернистым - лимфоциты и моноциты (Е.С.Воронин и др., 2002). Нейтрофильные гранулоциты являются важнейшими клеточными элементами линии первой защиты макроорганизма от воздействия патогенов (И.Г. Козлов, Р.Т. Сайгитов и др., 2002). Эта функция осуществляется посредством последовательных стадий: хемотаксиса, фагоцитоза, уничтожения микроорганизмов. Нейтрофилы распознают инородные организмы при помощи рецепторов к опсонинам. Фиксация сывороточного IgG и комплемента на бактериях делает их распознаваемыми для гранулоцитов. Нейтрофил имеет рецепторы для Fc-фрагмента молекулы иммуноглобулина и продуктов каскада комплемента. Эти рецепторы инициируют процессы захвата, поглощения и адгезии инородных объектов (Ф. Дж. Шиффман, 2007).
Жизненный цикл нейтрофилов последовательно протекает в трех средах - костном мозге, крови и тканях. В костном мозге формируется митотический пул, который включает стадию миелобласта, промиелоцита и миелоцита, далее во 2 стадию образуется метамиелоцит и палочко- или сегментоядерный нейтрофил (А.А. Славинский, 1999).
В костном мозге период созревания от миелобласта до зрелого нейтрофила занимает около 14 суток. Из костного мозга нейтрофилы проникают в кровь, где циркулируют около 10 часов, после чего они выходят из мелких сосудов в соединительную ткань, где зрелый нейтрофил живет 1-2 дня (А.А. Славинский, Г.В.Никитина, 1999). В кровеносных сосудах только половина гранулоцитов находится в движении, другая обратимо прилипает к эндотелиальной поверхности микрососудистого русла — пристеночные нейтрофилы. Установлено, что главный резерв пристеночных нейтрофилов — микрососуды легких (Г.И. Козинец, 2004).
Эозинофилы имеют двудольчатое ядро и цитоплазму, заполненную отчетливо видимыми гранулами, приобретающими красный цвет после окрашивания по Романовскому-Гимзе. Эозинофильные гранулоциты проходят те же стадии созревания, что и нейтрофильные, в течение 3-4 дней. Эозинофилы циркулируют в кровеносном русле 6-16 часов, мигрируют в ткани, где сохраняют свою активность несколько дней. Общий жизненный цикл составляет 8-12 дней. Эозинофилы играют особую роль в борьбе с паразитами и контроле аллергических реакций. Подобно нейтрофилам, эозинофилы способны к хемотаксису, фагоцитозу и обладают бактерицидной активностью. По мнению Ф. Бернета (1971), эозинофилы являются подвижными «мусорщиками». Они играют важнейшую роль в фагоцитозе комплексов антиген-антитело, в секреции ряда ферментов, в формировании противопаразитарных защитных реакций, во взаимодействии с базофилами (Е.Б. Бажибина и др., 2007; Ф.Дж. Шиффман, 2007). Базофилы — это самая малочисленная группа циркулирующих гранулоцитов. Только у юных форм базофильных лейкоцитов сегментация ядерных долей выражена. Молодые клетки содержат наибольшее количество гранул по периферии цитоплазмы, в процессе созревания гранулы становятся пылевидными и глыбкообразными. Дифференцировка базофилов в костном мозге длится 1,5-5 суток, далее клетки поступают в кровь, где период их полужизни составляет около 6 часов. Базофилы мигрируют в специфические ткани, где через 1-2 суток после осуществления основной, эффекторной, функции гибнут (Л.А. Гарбуз, 1999). Базофилы принимают участие в регуляции микроциркуляции, проницаемости сосудов, трофике тканей, в иммунных и воспалительных реакциях, особенно аллергических, базирующихся на IgE-зависимых механизмах. Установлено, что гранулы цитоплазмы базофилов содержат гепарин, гистамин, простагландины, фактор, активирующий тромбоциты, и хемотаксический фактор анафилаксии (К. Pauksen, L. Efman, А. К. Ulfgen, 1994).
Моноциты циркулируют в периферической крови в виде крупных клеток с цитоплазмой синего или серого цвета с почкообразным или складчатым ядром, содержащим нежно-сетчатый хроматин (Ф. Дж. Шиффман, 2007). Моноциты циркулируют в кровотоке 1-1,5 суток, а затем попадают в периферические ткани, где трансформируются в макрофаги ретикулоэндотелиальной системы. В тканях продолжительность жизни макрофагов довольно значительна, в среднем составляет 30 суток (Е. Б. Бажибина и др., 2007).
Макрофаг тканей - уникальная клетка, продуцирующая более 60 биологически активных веществ, в том числе, ряд хемокинов, многие цитокины, оказывающие провоспалительное действие, вещества антибактериальной направленности, - лизоцим, кислые гидролазы, катионные белки, лактоферрин, перекись водорода, кислород и т.д. (B.C. Пауков, С.А. Даабуль и др., 2005). Секретируемые мононуклеарными фагоцитами цитокины во многом определяют дальнейшее развитие Т клеточного ответа (А.Н. Ильинской и др. 2005; Е. Giacommini, Е. Lona, L. Ferroni et. al., 2001). Также, имеются данные о возможном действии цитокинов не только пара- и аутокринным образом, но и эндокринно (И.А. Щепкин, Н.В. Гердынцева, Н.В. Васильев, 1994; Г.И. Васильева, И.А. Иванова, СЮ. Тюкавкина, 2000).
В селезенке макрофаги ответственны за утилизацию сенсибилизированных и стареющих эритроцитов. Это, также, и антигенпредставляющие клетки, выделяющие антигенные субстраты и передающие их лимфоцитам, что приводит к запуску иммунных реакций (P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин, 2000). Помимо всего, макрофаги являются весьма существенным звеном системы ауторегуляции при репаративных процессах, выступают важнейшим регулятором межклеточных и клеточно-матриксных взаимоотношений (Я. Карр, 1978; И.Я. Учитель, 1978; М.А. Пальцев, А.А. Иванов, 1995).
Лимфоциты - небольшие мононуклеарные клетки, координирующие и осуществляющие иммунный ответ за счет продуцирования воспалительных цитокинов и антигенспецифических связывающих рецепторов (Ф. Дж. Шиффман, 2007). Лимфоцит - функциональная и морфологическая единица иммунной системы. Изучение проявлений функций лимфоцитов открывает возможность к пониманию основ иммунных реакций и выявлению корреляционных связей между морфологией и функцией (В.Г. Тяжелова, 2003).
Морфология и функциональное значение тимуса в системе иммунологического надзора
Вилочковая железа, тимус, впервые была обнаружена анатомами эпохи Возрождения. Из-за своей специфической формы, напоминающей лист почитаемого в древности растения тимиана (или виллы), железа получила название тимус (вилочковая) (3. Кемилева,1984). Тимус - лимфоэпителиальный орган, дольчатый, розовато-серого цвета. Шейная доля прилегает к трахее справа и слева, грудная — находится в грудной полости и граничит с перикардом (Т.М. Николаенко, 2002). Тимус - главный лимфоцитообразующий орган. Представляет собой эпителиальный тяж, окруженный соединительной тканью (Ю.И. Афанасьев, Н.А. Юрина, Б.В. Алешин и др., 2002). В эмбриогенезе тимус развивается и начинает функционировать раньше всех других лимфоидных органов (В.Г. Галактионов, 2005). У крупного рогатого скота он закладывается на 25 — 27 сутки в виде трубчатых выпячиваний эктодермы третьего-четвертого жаберных карманов головной кишки. На 7-8 неделе в зачаток тимуса мигрируют лимфоидные клетки из костного мозга (А.А. Ярилин, И.М. Беляков, 1996).
Тимус представляет собой массу лимфоидной ткани, состоящей из отдельных долек. Паренхима тимуса состоит из коркового вещества, расположенного по периферии долек, и мозгового, занимающего центральную часть долек. Строма тимуса представлена ретикулярными клетками - эпителиоретикулоцитами. В петлях этой сети находятся лимфоциты тимуса (тимоциты), плазматические клетки, макрофаги, гранулоциты. В корковом веществе лимфоциты лежат более плотно, чем в мозговом, поэтому на окрашенных препаратах оно выглядит более темным (Ю.И. Бородин и др., 1987; А.А. Ковалев, 2002; М. Lecler, V.J. Arneodo et al, 1993).
В зависимости от соотношения эпителиальных и лимфоидных клеток и их функционального состояния в дольке тимуса разными авторами выделяется разное количество зон. По данным В.А. Труфакина (1983), различают 4 зоны. Наружный подкапсулярный слой - в нем происходит образование Т-лимфоцитов из претимических лимфоцитов. Внутренний кортикальный слой (собственно корковое вещество) — в нем происходит накопление и антигенное формирование Т-лимфоцитов. По данным М.Р. Сапина и соавт. (1982), долька тимуса состоит из 5 зон — подкапсулярной, центральной зоны коркового вещества, зоны, пограничной с мозговым веществом, центральной зоны мозгового вещества и зоны, пограничной с корковым веществом. По К.А. Зуфарову и К.Р. Тухтаеву (1987), при исследовании органа следует выделять 3 зоны: корковую, корково-медуллярную и мозговую. Важной особенностью тимуса является постоянно высокий уровень митозов (Н.Н. Мушкамбаров, С.Л. Кузнецов, 2003). Тимус содержит иммунокомпетентные лимфоидные клетки (тимоциты) (Т.М. Николаенко, 2002). Почти одновременно с открытием роли тимуса в иммунитете было установлено, что часть его функций реализуются с помощью гуморальных факторов, регулирующих различные этапы дифференцировки тимоцитов (С.А. Ястребова, В.Е. Сергеева, И.В. Спирин, 2004).
По литературным данным, до 95% незрелых тимоцитов гибнет в тимусе, не покидая его. Гибель тимоцитов в тимусе обусловлена апоптозом (Л.А. Певницкий, 1996). Роль тимуса в созревании и регулировании иммунной системы весьма значительна. По концепции Ф. Бернета (1971), иммунологические функции тимуса следующие: - дифференциация лимфоцитов как собственных, так и поступивших из других лимфоидных органов; - индукция иммунокомпетентности клеткам предшественникам лимфоцитов; - регуляция иммунологических функций других лимфоидных органов. Особенностью организации тимуса является наличие двух элементарных структурно-гистологических единиц, - фолликулов Кларка и телец Гассаля (В.Г. Галактионов, 2005). Основу паренхимы тимуса составляет эпителиальная ткань, в которой межклеточные промежутки расширены, поэтому клетки приобрели звездчатую форму, отчего вся ткань похожа на ретикулярную. Клетки эпителиального ретикулума в периферической части долек снабжены длинными и тонкими отростками, а между клетками остаются широкие промежутки, заполненные лимфоцитами (А.А. Ковалев, 2002). В медуллярной части дольки эпителиальные клетки оставляют между собой небольшие щели, в результате чего здесь отмечается более рыхлое расположение лимфоцитов. Это и обусловливает более интенсивное окрашивание ядерными красителями коркового вещества долек. Эпителиальные клетки тимуса отличаются большей величиной и светлой окраской. Периодически одна — две клетки гипертрофируются, на них наслаиваются соседние эпителиальные элементы, образуя тельце Гассаля — простое (с одним центром) или сложное (с двумя и более центрами наслаивания) (В.Л. Быков, 1997).
При многих заболеваниях тимус подвергается очень быстрому прогрессивному уменьшению веса и объема, которое зависит от убыли лимфоцитов и спадания (коллапса) ретикулоэпителия тимуса. Это явление получило название акцидентальной инволюции, в противоположность возрастной физиологической инволюции, которая наступает по мере развития половых желез, причем, железистая ткань тимуса постепенно замещается жировой клетчаткой. Изучение гистологической структуры тимуса при акцидентальной инволюции показывает, что в вилочковой железе идет распад лимфоцитов с фагоцитозом их макрофагами на месте, а возможно, и вымыванием на периферию. Убыль лимфоцитов сопровождается нарастающим коллапсом долек вилочковой железы, пролиферирующие, при этом, клетки ретикулума превращаются в тимические тельца. Далее зашедший процесс приводит к атрофии органа, иногда с падением его веса в 8-10 раз по сравнению с нормой (B.C. Иванов, 2003).
Многие ученые исследуют структуру тимуса при различных патологических процессах. При антигенной стимуляции плодов крыс Н.А. Волошин и А.Г. Яхница (1987) обнаружили выраженные изменения в тимусе. Площадь, занятая корковым веществом, уменьшалась, а площадь мозгового вещества возрастала. Увеличилось количество лимфоцитов с отчетливо выраженными пикнотическими ядрами. Возрастала доля эпителиоретикулоцитов. Вначале воздействия уменьшалось количество малых лимфоцитов и увеличивалось количество больших лимфоцитов. Затем количество малых лимфоцитов увеличивалось, больших снижалось. У средних лимфоцитов на всем протяжении наблюдалась тенденция к снижению. O.K. Хмельницкий и др. (1990) при инфицировании морских свинок условно-патогенными грибами зарегистрировали резкое уменьшение концентрации Т- лимфоцитов в тимусе.
Морфологические показатели органов системы иммунитета белых лабораторных мышей при антигенной стимуляции вакцинным штаммом гриба рода Trichophyton
В качестве адекватной биологической модели для изучения динамики изменений в органах иммуногенеза при стимуляции антигенами вакцинного штамма гриба рода Trichophyton нами были использованы белые лабораторные мыши, как универсальные подопытные животные (В .Я Антонов, 1981, Jann Hau, Gerald L. Van Hoosier, 2003).
Через 1 час после введения вакцины подкапсулярная зона выражена, лимфоциты в ней располагаются цепочками (рис.3), очагово обеднена лимфоцитами. Отмечается заметно большее размножение тимоцитов ближе к мозговому веществу. Тимоциты располагаются плотными цепочками (рис.3). В мозговом веществе лимфоциты также располагаются цепочками (рис.4).
Толщина коркового вещества достигает 420,9 ± 13,2 мкм (рис, 12, таб.3). Абсолютное количество лимфоцитов в данной области составляет 210,5 ± 9,3 клеток (рис.14). Относительное количество лимфоцитов — 0,50 ± 0,04 клеток (рис.15, таб.4). Процентное соотношение малых, средних и больших лимфоцитов составляет 57%, 42%, 1%, соответственно (рис.16). Толщина мозгового вещества составляет 267,6 ± 12,2 мкм (рис.12, таб.3). Абсолютное количество лимфоцитов в мозговом веществе - 74,7 ± 2,8 клеток (рис.14). Относительное количество лимфоцитов в мозговом веществе - 0,28 ± 0,02 клеток (рис.15, таб.4). Процентное соотношение малых, средних и больших лимфоцитов составляет 30%, 67% , 3% , соответственно (рис.17, таб.5).
Цепочки лимфоцитов в мозговом веществе тимуса на первый час эксперимента. Окраска гематоксилином и эозином. О6.40, ок.10. На 2 час после введения вакцины подкапсулярная зона имеет как области, обедненные лимфоцитарными клетками, так и области обильного их скопления (рис.5). Плотность клеток в подкапсулярной зоне ниже, чем в корковом веществе. Толщина коркового вещества незначительно увеличилась и достигает 530,2 ± 19,2 мкм (рис.12, таб.3). Абсолютное количество лимфоцитов в корковом веществе составляет 251,2 ± 8,4 клеток (рис.14). Относительное количество лимфоцитов составляет 0,37 ± 0,03 (рис.15, таб.4). Процентное соотношение малых, средних и больших лимфоцитов составляет 63%, 36%, 1%, соответственно (рис.16). Тимоциты в корковом веществе располагаются гроздьями (рис.6). Толщина мозгового вещества уменьшилось до 301,9 ± 28,6 мкм (рис.12, таб.3). Абсолютное количество лимфоцитов в мозговом веществе увеличилось и составляет 104,2 ± 3,0 клеток (рис.14). Относительное количество лимфоцитов в мозговом веществе составляет 0,35 ± 0,04 клеток (рис.15, таб.4). Процентное соотношение малых, средних и больших лимфоцитов составляет 67%, 33%, 0%, соответственно (рис.17, таб.5). В мозговом веществе лимфоциты расположены диффузно (рис.7). Соотношение коркового и мозгового веществ составляет 1,75 ± 0,23 (рис.13, таб.3).
Относительное количество лимфоцитов в мозговом веществе - 0,33 ± 0,04 клеток (рис.15, таб.4). Процентное соотношение малых, средних и больших лимфоцитов составляет 51%, 47%, 2%, соответственно (рис.17, таб.5). В мозговом веществе сосуды кровенаполнены (рис.10). Лимфоциты располагаются цепочками. Соотношение коркового и мозгового веществ 2,42 ±0,38 (рис.13, таб.3). На 4 час после введения вакцины картина гистологического строения тимуса значительных визуальных различий не имела. Наблюдалась гиперемия сосудов органа, пролиферация лимфоцитов как в корковом, так и в мозговом веществе (рис.11). Толщина коркового вещества достигает 866,0 ±47,3 мкм (рис.12, таб.3). Абсолютное количество лимфоцитов в корковом веществе - 184 ± 12,67 клеток (рис.14). Относительное количество лимфоцитов в корковом веществе составляет 0,21 ± 0,03 клеток (рис.15, таб.4). Процентное соотношение малых, средних и больших лимфоцитов составляет 69%, 29%, 2%, соответственно (рис.16). Толщина мозгового вещества составляет 310,0 ± 36,4 мкм (рис.12, таб.3). Абсолютное количество лимфоцитов в мозговом веществе - 102,6 ± 5,6 клеток (рис.14). Относительное количество лимфоцитов в мозговом веществе - 0,33 ± 0,06 клеток (рис.15, таб.4).
Подкапсулярная зона тимуса на 1 сутки эксперимента, отсутствие видимой пролиферации лимфоцитов. Окраска гематоксилином и эозином. О6.40, ок.10. Толщина коркового вещества составляет 435 ± 10,6 мкм (рис.28, таб.3). Абсолютное количество лимфоцитов в корковом веществе достигает 241,4 ± 4,8 (рис.30). Относительное количество лимфоцитов в корковом веществе — 0,55 ± 0,02 клеток (рис.31, таб.4). Процентное соотношение малых, средних и больших лимфоцитов составляет 79%, 20%, 1%, соответственно (рис.32). В корковом веществе имеют место незначительные периваскулярные отеки (рис.20). Лимфоциты расположены большей частью хаотично, ближе к мозговому веществу образуют цепочки. Толщина мозгового вещества составляет 275,0 ± 7,0 мкм (рис.28). Абсолютное количество лимфоцитов в мозговом веществе — 90,8 ± 3,7 клеток (рис.30, таб.3). Относительное количество лимфоцитов в мозговом веществе — 0,33 ± 0,02 клеток (рис.31, таб.4). Процентное соотношение малых, средних и больших лимфоцитов составляет 80%, 19%, 1%, соответственно (рис.33). В мозговом веществе выявляются деформированные лимфоциты. На границе между корковым и мозговым веществами, а также в мозговом веществе выявлено большое количество сосудов, стенка которых инфильтрирована лимфоцитами (рис.21). Скопление лимфатических клеток обнаружено так же в полости сосудов (рис.22). Встречаются кровеносные сосуды, находящиеся в состоянии запустения, но со стенками, инфильтрированными лимфоцитами. Соотношение корково-мозгового вещества- 1,58 ± 0,08 (рис.29, таб.3).
На 2 сутки после введения вакцины периваскулярные отеки отсутствуют. Под капсулой встречается очаговое размножение лимфоцитов (рис.23). Толщина коркового вещества составляет 337,2 ± 23,7 мкм (рис.28, таб.3). Абсолютное количество лимфоцитов в корковом веществе - 249,1 ± 2,8 клеток (рис.30). Относительное количество лимфоцитов в корковом веществе - 0,74 ± 0,06 клеток (рис.31, таб.4). Процентное соотношение малых, средних и больших лимфоцитов составляет 79%, 19%, 2%, соответственно (рис.32). В корковом веществе лимфоциты расположены, преимущественно, диффузно. Иногда встречаются гроздевидное расположение лимфоцитов (рис.23).
Динамика морфологических показателей крови белых лабораторных мышей при антигенной стимуляции вакцинным штаммом гриба рода Trichophyton
В период с 1 по 4 час эксперимента в крови экспериментальных мышей отмечено снижение числа сегментоядерных нейтрофилов с 11,0 ± 3 до 8,0 ± 0 клеток, с одновременным увеличением количества юных нейтрофилов с 4,0 ± 2 до 9,95 ± 3 клеток. Соотношение остальных типов лейкоцитов остается примерно на одном уровне (таб.7).
В период с 10 по 15 сутки количество лимфоцитов увеличивается с 65,0 ± 9 до 79,0 ± 14, с последующим снижением до 71,7 ± 7,1 к 30 суткам. Количество моноцитов уменьшается с 7,0 ± 3 (на 10 сутки) до 1,1 ±0,5 к 30 суткам. Максимальное количество сегментоядерных нейтрофилов на 10 сутки (19 ± 1,52), минимальное - на 15 сутки (10,44 ± 7,31), после чего происходит увеличение их соотношения до 17,6 ±1,5 клеток.
На всех этапах эксперимента изменения показателей количества эритроцитов и гемоглобина в крови носили достоверно незначимый характер как в контрольной, так и в опытной группах, и составили, соответственно, 6,8 ± 0,5 1012/л. и 101,94 ± 2,65 г/л.
По результатам расчета видно, что в динамике изменений содержания лейкоцитов имеется следующая закономерность: количество лимфоцитов и сегментоядерных нейтрофилов снижается к 10 суткам до 3,668 ± 0,597 х109л и 1,464 ± 0,428 х10 л, соответственно. Количество юных и палочкоядерных нейтрофилов, напротив, увеличивается до 1,808 ± 0,506 х109л и 1,08 ± 0,533 х10 л, соответственно. С 10 по 30 сутки количество лимфоцитов и сегментоядерных нейтрофилов восстанавливается практически до уровня фоновых показателей, - 4,695 ± 0,763 х109л и 2,405 ± 0,432 х109л. Количество юных и палочкоядерных нейтрофилов к 30 суткам снизилось до значений фоновых показателей, - 0 - юных и 0,475 ± 0,198 х109л палочкоядерных нейтрофилов. Количество моноцитов также увеличивается к 10 суткам (0,668 ± 0,108x10 л) и остается высоким до окончания эксперимента. Количество базофилов постоянно увеличивалось до 30 суток и составляло 0,469 ±0,1 х109л.
Таким образом, в динамике морфологического состава крови на протяжении эксперимента выявлен критический период на 10 сутки, характеризующийся сменой тенденции от увеличения к снижению у юных и палочкоядерных нейтрофилов и сменой тенденции уменьшения к увеличению у лимфоцитов и сегментоядерных нейтрофилов. На всем протяжении эксперимента увеличивалось количество моноцитов и базофилов.
Изменения альбумин-глобулинового соотношения носили синусоидный характер, с пиками максимальных величин на 1, 10, 20 сутки и равнялись 0,54 ±0,11; 0,62 ± 0,05; 0,64 ± 0,05 г/л, соответственно (рис. 108, таб.13). Концентрация альбуминовых фракций также изменяла свои значения по синусоидному типу, с пиками на 1, 10, 20 сутки - 22,33 ± 3,31; 23,77 ± 1,61; 27,22 ± 0,86 г/л, соответственно (таб.13, рис. 109). На 15 сутки: уровень IgA резко снизился до 22,62 ±0,15 МЕ/мл; уровень IgM изменился статистически незначимо; IgG увеличился до 17,03 ± 0,46 МЕ/мл; IgE увеличился до 8,63 ±1,2 МЕ/мл. На 20 сутки: уровень IgA увеличился до 23,6 ± 0,26 МЕ/мл; уровень IgM изменился статистически незначимо; IgG увеличился до 18,47 ± 0,73 МЕ/мл; IgE снизился до 8,08 ± 1,05 МЕ/мл. На 30 сутки: уровень IgA увеличился до 25,11 ± 0,38 МЕ/мл; уровень IgM изменился статистически незначимо; IgG уменьшился до 16,27 ±0,13 МЕ/мл; IgE уменьшился до 5,63 ± 0,18 МЕ/мл (таб.10, рис.111).
Таким образом, на протяжении эксперимента происходит увеличение количества лейкоцитов с пиком на 5 сутки, после чего снижается и к 30 суткам становится ниже фоновых показателей. В показателях морфологического состава крови у телят выявлен критический период, соответствующий 10 суткам. В этот период происходит смена тенденций от снижения количества к увеличению у лимфоцитов и сегментоядерных нейтрофилов. Динамика концентраций юных и палочкоядерных нейтрофилов несла явно противоположный характер, количество их продолжало увеличиваться до 10 суток, после чего произошло снижение вплоть до 30 суток. К 30 суткам выявлено увеличение количества базофилов. Изменения концентрации IgM на протяжении эксперимента носили статистически незначимый характер. IgG увеличился, достигнув своего максимума на 20 сутки. Уровень IgA увеличился, достигая максимального значения на 10 сутки. Уровень IgE увеличился, достигая максимального значения на 15 сутки.
