Содержание к диссертации
Введение
ЧАСТЬ I Обзор литературы 12
ГЛАВА 1. Экология возбудителя криптоспоридиоза 12
1.1. Источники и основные пути поступления ооцист криптоспоридии в окружающую среду 12
1.2. Обсемененность объектов окружающей среды ооцистами криптоспоридии 20
1.3. Сроки выживаемости ооцист криптоспоридии в воде и почве 27
1.4. Мероприятия по предупреждению и снижению обсеменения окружающей среды ооцистми криптоспоридии 30
ЧАСТЬ II Собственные исследования 39
ГЛАВА 2. Краткая характеристика объектов работы и природно-климатических условий в исследуемых районах
2.1. Объекты работы 39
2.2. Природно-климатические особенности районов исследования 42
2.3. Гидрологические особенности поверхностных водных объектов Курской области 47
2.4. Животный мир Курской области 49
2.4.1. Дикие животные 49
2.4.2. Домашние животные 51
ГЛАВА 3. Материалы, методы и объем исследований 53
3.1. Материал исследований 53
3.2. Методы санитарно-паразитологических исследований 53
3.3. Объем исследований 56
3.4. Статистические методы 57
ГЛАВА 4. Изучение распространения возбудителя криптоспоридиоза в природных и синантропних биоценозах Курской области
4.1. Выявление ооцист криптоспоридий в фекалиях диких и домашних животных 58
4.2. Изучение обсеменения ооцистами криптоспоридий различных объектов окружающей среды 69
4.3. Выявление путей поступления инвазионного материала криптоспоридий в объекты окружающей среды 76
ГЛАВА 5. Мероприятия по снижению риска заражения населения и животных возбудителем криптоспоридиоза 82
5.1. Изыскание средств и способов дезинвазии объектов 82
окружающей среды
5.1.1. Влияние дезсредств на ооцисты криптоспоридий 83
5.1.2. Влияние дезсредств на ооцисты криптоспоридий находящихся в воде, почве, навозе 85
5.2. Разработка системы эколо-паразитологического мониторинга в 89
очагах криптоспоридиоза
Заключение 95
Выводы 104
Практические рекомендации 106
Литература
- Обсемененность объектов окружающей среды ооцистами криптоспоридии
- Гидрологические особенности поверхностных водных объектов Курской области
- Методы санитарно-паразитологических исследований
- Изучение обсеменения ооцистами криптоспоридий различных объектов окружающей среды
Введение к работе
Актуальность темы
В последние десятилетия XX и в начале XXI века в России отмечается катастрофическое ухудшение экологической ситуации, связанное с интенсивной антропогенной нагрузкой на объекты окружающей среды. Это закономерно обусловило необходимость пересмотра взглядов на сложившуюся в нашей стране напряженную эпидемическую ситуацию по паразитарным болезням. Особое внимание обращает на себя значительный рост кишечных протозойных болезней, передающихся водным путем, в первую очередь лямблиоза и криптоспоридиоза.
По данным Г.Г. Онищенко, в 2005 г. в стране зарегистрировано 19 случаев криптоспоридиоза. В большинстве территорий Российской Федерации не проводится расшифровка острых кишечных инфекций неустановленной этиологии, которые могут приходиться на криптоспоридиозную инвазию.
Например, в Вологодской области при обследовании больных из групп острых кишечных инфекций неустановленной этиологии в 70 % случаев был выявлен криптоспоридиоз, в 10 % - лямблиоз и в 5 % - микстинфекция с бактериальными и паразитарными возбудителями (Мокиенко А.В. и др., 2008).
Криптоспоридиоз — протозойная инвазия человека и животных, особенно опасная для детей младшего возраста и лиц с иммунодефицитом. Инфекции желудочно-кишечного тракта, вызванные криптоспоридиями, зарегистрированы во всех возрастных группах и на всех континентах, за исключением Антарктиды. Такое широкое распространение криптоспоридиоза связано с большим количеством природных и синантропных резервуаров инвазии, низкой инфицирующей дозой и высокой резистентностью возбудителя к дезинфектантам и противопаразитарным препаратам.
Наблюдается тенденция увеличения числа вспышек криптоспоридиоза, по сравнению с лямблиозом. Обращает на себя внимание и масштаб вспышек криптоспоридиоза, вызываемых употреблением питьевой воды, обсемененной ооцистами криптоспоридий: 1989 г. - около 130 тыс., 1993 г. -более 400 тыс. больных (Ford Т, 1999). Это приводит к тому, что в последние годы специалистами уделяется серьезное внимание исследованиям Cryptosporidium parvum.
Распространенность криптоспоридиоза среди населения Российской Федерации варьирует от 2,4 до 4,9 %, в Москве заболеваемость инвазией составляет 3,65 %, в Санкт-Петербурге - 2,7 %, в Нижегородской области -3,2 % соответственно (Лысенко А. Я. и др., 2002). Результаты исследований Н.А. Самофаловой (2006) показывают, что питьевая вода шахтных и трубчатых колодцев, колодцев фильтров, родников и каптажей родников Курской области контаминирована ооцистами криптоспоридий, что указывают на необходимость выявления источников криптоспоридиозной инвазии, изучения обсемененности объектов окружающей среды инвазионным материалом криптоспоридий и определения особенностей циркуляции возбудителя криптоспоридиоза в природных и синантропных биоценозах Центрально-Черноземной зоны на примере Курской области.
С учетом этого, нами, начиная с 2004 года, на базе НИЛ
«Паразитология» Курского государственного университета проводились
специальные исследования, направленные на решение заданий научно-
исследовательской работы по теме: «Эколого-паразитологический
мониторинг на территории Курской области», № госрегистрации 01.2.006
08190 (2006-2010 гг.). Тема настоящего исследования является составной
частью научно-технической программы Межведомственной
координационной программы фундаментальных и приоритетных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса Российской Федерации на 2006-2010 гг., задание 02: «Проведение поиска новых методологических подходов для получения фундаментальных
знаний об экологических особенностях формирования паразитоценозов, биоценотических взаимоотношениях и генетической структуре их сочленов, об эпизоотическом процессе, механизмах иммунитета и разработка относительно простых и экономических средств диагностики, специфической профилактики и борьбы с паразитарными болезнями».
Цель работы
Изучение распространения возбудителя криптоспоридиоза в природных и синантропных биоценозах Центрально-Черноземной зоны (на примере Курской области) и на основе полученных результатов разработка системы эколого-паразитологического мониторинга за объектами окружающей среды.
Задачи исследования:
исследовать фекалии диких и домашних животных на наличие ооцист криптоспоридий;
изучить обсемененность ооцистами криптоспоридий почвы и воды поверхностных водных объектов Курской области;
изучить пути попадания инвазионного материала в объекты окружающей среды;
изучить особенности воздействия дезинфектантов (экопав, офаль, бицин) на жизнеспособность ооцист криптоспоридий;
разработать мероприятия по улучшению качества объектов окружающей среды по паразитологическим показателям и предложить систему эколого-паразитологического мониторинга в очагах криптоспоридиоза в условиях Центрально-Черноземной зоны России (на примере Курской области).
Научная новизна
В Центрально-Черноземной зоне установлены источники криптоспоридиозной инвазии и пути поступления возбудителя криптоспоридиоза в объекты окружающей среды.
Ооцисты криптоспоридий выявлены в фекалиях диких животных: бобров (44,3±1,2 %), выдр (43,3±1,3 %), ондатр (38,4±1,1 %), зайцев (33,3±1,2 %), кабанов (34,2±1,2 %), лисиц (8,3±1,2 %), полевок (15,9±1,1 %) и домашних животных: телят (49,1 ±1,2 %), поросят (42,2±1,1 %).
Осуществлена эколого-паразитологическая оценка воды и почвы на наличие ооцист криптоспоридий. Экстенсивные показатели контаминации воды составляют: в пробах р. Сейм - 28,6±1,1 %, р. Тускарь - 20,1±1,1 %, р. Свапа - 23,5±1,2 %; почвы: с мест выпаса скота - 22,3±1,2 %, около поверхностных водных объектов - 18,8±1,1 %, с мест обитания диких животных- 13,7±1,1%.
Интенсивность обсемененности воды поверхностных водных объектов Курской области ооцистами криптоспоридий варьирует от 1,8±0,1 до 4,1±0,2, почвы - от 2,2,±0,1 до 6,6±0,1.
Установлены пути поступления инвазионного материала криптоспоридий в окружающую среду. Основными из них являются навоз и навозные стоки, экстенсивный показатель которых составляет в среднем 71,3±1,3 %, сточные воды - 43,7±1,2 %, паводковые и ливневые воды -45,0±1,1 % соответственно.
Обосновано применение трех дезинфектантов для дезинвазии навоза и осадков сточных вод от ооцист- криптоспоридий при следующих режимах: экопав - 3%-й раствор в дозе 10 % объема обрабатываемого материала в течение 180 мин; бицин - 2-3%-й раствор в дозе 10% объема обрабатываемого материала в течение 120-180 мин.; офаль - 3%-й раствор в дозе 10% объема обрабатываемого материала в течение 180 мин.
Разработана система эколого-паразитологического мониторинга в очагах криптоспоридиоза, обеспечивающая исключение или снижение обсемененности ооцистами криптоспоридий объектов окружающей среды.
Практическая значимость
На основании результатов исследования фекалий диких и домашних животных на ооцисты криптоспоридий, изучения особенностей циркуляции возбудителя криптоспоридиоза в окружающей среде была предложена система эколого-паразитологического мониторинга в очагах криптоспоридиоза. Внедрение ее в практику ветеринарными лечебницами Золотзгхинского района Курской области обеспечивает снижение зараженности домашних животных в 2 раза и способствует уменьшению риска новых заражений людей и животных криптоспоридиозом.
Внедрение материалов исследования в практику
Материалы исследований использованы при подготовке с нашим участием следующих нормативно-методических документов:
МУК 4.2.1884-04 «Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов» (утверждены Минздравом Российской Федерации 3 марта 2004 г);
МУК 3.2.1756-04 «Эпидемиологический надзор за паразитарными болезнями» (утверждены Минздравом Российской Федерации 28 марта 2003г.);
МУК 4.2.1881-04 «Санитарно-паразитологические исследования плодово-овощной, плодово-ягодной и растительной продукции» (утверждены Минздравом Российской Федерации 3 марта 2004 г);
МУ 3.2.1882 - «Профилактика лямблиоза» (утверждены Минздравом Российской Федерации 3 марта 2004 г);
методические рекомендации «Мероприятия по охране объектов окружающей среды от загрязнения ооцистами криптоспоридий» (утверждены директором департамента «Экологической безопасности и природопользования Курской области» 1.04.2008 г.).
Результаты проведенных нами исследований учитываются при планировании профилактических мероприятий в ветеринарных лечебницах
Золотухинского района Курской области.
Материалы диссертационной работы вошли в циклы лекций по курсам: «Общие вопросы паразитологии» (специальность «Социально-культурный сервис и туризм»); «Санитарно-паразитологический мониторинг» (специальность «Экология») на естественно-географическом факультете; «Экология» на индустриально-педагогическом факультете и факультете искусств Курского государственного университета; использованы при проведении семинаров по профилактике паразитарных болезней для учителей и сотрудников, а также для родителей и учащихся муниципального образовательного учреждения (МОУ) «Жерновецкая средняя общеобразовательная школа» Золотухинского района, МОУ «Средняя общеобразовательная школа с углубленным изучением отдельных предметов № 6 г. Курска».
Апробация работы
Материалы исследований по теме диссертации обсуждены на научно-практических конференциях «Интеграция медицины и образования» (Курск, 2006, 2007), «Диверсификация и стратегия медицины и образования» (Курск, 2006, 2007), «Научные подходы к решению региональных гигиенических проблем сохранения здоровья человека» (Липецк, 2005), «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2005) и объединенной сессии Координационного совещания по ветеринарной паразитологии, Центрального совета Общества гельминтологов РАН и секции «Инвазионные болезни животных» РАСХН (Москва, 2008).
Публикации
Основные результаты исследований отражены в 15 публикациях, из них 4 статьи опубликованы в журналах и сборниках работ, включенных в перечень ВАК, и 5 работ - в официальных материалах Федерального центра Госсанэпиднадзора Минздрава России.
Положения, выносимые на защиту
Эколого-паразитологическая характеристика объектов окружающей среды на территории Курской области: источники криптоспоридиозной инвазии и пути поступления ооцист криптоспоридий в окружающую среду.
Система эколого-паразитологического мониторинга и мероприятия по снижению риска заражения населения и животных криптоспоридиозом как основа профилактики данной инвазии в Курской области.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 128 страницах машинописного текста, состоит из введения, пяти глав, одна из которых посвящена обзору литературы, а четыре - собственным исследованиям, заключения, выводов, практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 25 таблицами, 13 рисунками. Список литературы включает 197 наименований, в том числе 119 работ отечественных и 78 - иностранных авторов. Приложение к диссертации включает акты и справки по внедрению результатов научных достижений.
Обсемененность объектов окружающей среды ооцистами криптоспоридии
Анализ данных литературы (Лысенко А.Я. и Лавдовская М.В., 1993; Романенко Н.А., Евдокимов В.В., 2004) показывает, что вопросам изучения сроков выживаемости ооцист криптоспоридий в окружающей среде посвящено крайне мало работ. Это одна из слабых сторон в изучении эпидемиологии криптоспоридиоза.
Наличие сведений о сроках сохранения жизнеспособности ооцистами в окружающей среде и устойчивости их к воздействию различных экологических факторов очень важны и необходимы при решении вопроса о выявлении основных факторов и путей передачи возбудителя криптоспоридиоза, риска заражения ими людей и животных, а также профилактики заболевания.
А.Я. Лысенко и М.В. Лавдовская (1992) сообщают, что ооцисты криптоспоридий устойчивы во внешней среде и при благоприятных условиях сохраняют способность к инфицированию сравнительно долго. В водной суспензии они начинают терять инвазионность через 2-6 месяцев, при этом сохраняя жизнеспособность до 6-9 месяцев, а инфективность для культуры клеток вплоть до 12 месяцев. Замораживание или нагревание до 65 С делает ооцисты неинвазионными через 30 мин.
По данным А.Я. Лысенко (2002) ооцисты криптоспоридий могут выживать и быть инвазионными в течение 18 месяцев при температуре 4С, а также сохранять свою инвазионность при - 10С, но при нагревании до 72С они погибают в течение одной минуты.
J. Heine, J. Boch (1981) указывают, что ооцисты криптоспоридий не теряют инвазионности в течение трех месяцев при температуре 5С, но погибают при -18С в течение суток и нагревании до 65С в течение 15 минут.
Экспериментальные исследования Campbell А.Т. (1995) представленные в табл. 2 показывают сроки сохранения жизнеспособности ооцист криптоспоридий при различных температурных условиях разных объектов исследования. Замораживание и оттаивание, а также нагревание до 62,5С приводит к разрушению ооцист криптоспоридий (Angus K.W., 1984).
Имеются сообщения о том, что ооцисты, выделяемые с фекалиями зараженного хозяина, устойчивы к неблагоприятным условиям и способны длительно сохраняться во внешней среде. M.J. Arrowood, К. Donaldson (1996) в экспериментах на телятах установили, что ооцисты Cryptosporidium parvum зимой при температуре от -1 до -10 С и летом - от +8 до +29 С сохраняют жизнеспособность и инвазионность не менее 3 недель, а по данным S. Tzipori et. al. (1998) - от 4-6 месяцев до одного года.
Установлено, что ооцисты криптоспоридий сохраняют инвазионность после выдержки в воде при + 15 С в течение 7 мес, при колебаниях от +10 до 30 С - 14 дней; при -10 С - 7; при -20С - 5 часов; в 35%-м растворе поваренной соли - 40 дней (Fayer R., Nerad Т., 1996). В СанПиНе 3.2.1333-03 «Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации» имеются данные о сроках выживаемости ооцист криптоспоридий в почве до 3-х недель.
Ооцисты криптоспоридий довольно устойчивы во внешней среде. В воде при температуре 20-25 С они сохраняют жизнеспособность до 4 месяцев, при 0-5 С - свыше 10 месяцев, замораживание и нагревание до 65 С действуют на них губительно.
Анализ данных литературы показывает, что вода является наиболее благоприятной для выживания ооцист криптоспоридий в окружающей среде.
Отсутствие единого мнения о сроках выживаемости ооцист в окружающей среде указывает на необходимость проведения специальных экспериментальных исследований, в том числе и в условиях Курской магнитной аномалии.
Большинство авторов отмечают, что выживаемость ооцист криптоспоридий зависит от температуры окружающей среды и влажности климата, что отражено при изучении сезонных изменений распространения крипто споридиоза.
Вспышки криптоспоридиоза отмечаются во все сезоны года, но чаще в весенне-летнее время и в период массовых отелов. По результатам исследований Никитина В.Ф. (2007) данная инвазия проявляется и при наступлении холодов - в осенне-зимнее время, что обусловлено ростом численности мышевидных грызунов на скотных дворах в связи с миграцией их с полей. Экстенсивность заражения грызунов в скотоводческих помещениях достигает высоких процентов. Зараженность домовых мышей достигла 63,6 %, полевых мышей - 29,4 %, обыкновенных серых полевок -18,2 %. Такой факт подтверждается исследованиями, что в хозяйствах с видимым ветеринарно-санитарным благополучием, но с большим количеством в помещениях мышей, криптоспоридиоз телят был частым диагнозом.
Наибольшая инвазированность животных отмечается в теплый период года, когда температура окружающей среды благоприятствует длительному сохранению жизнеспособности ооцист во внешней среде.
Р.Б. Гасанов (1994) отмечал наивысший рост инвазированности ягнят в Вологодской области весной (до 95 %). Вероятно, это связано с массовыми окотами и ростом численности животных.
Гидрологические особенности поверхностных водных объектов Курской области
Курская область расположена в бассейнах рек Днепр и Дон (соответственно 78 % и 22 % территории области). Всего в области насчитывается 902 постоянных сменных водотоков, из которых 188 имеют длину более 10 км. Из наиболее значительных рек к бассейну Днепра относятся Сейм (приток Десны) со своими притоками Тускарь и Свапа, а также Псел (приток Днепра). Бассейн Дона представляют верховья рек Тим, Кшень, Олым (все - притоки реки Сосна), а также Оскол (приток реки Северский Донец).
Наиболее распространенными загрязняющими веществами поверхностных вод в Курской области - соединения металлов железа и меди (в большей степени - природный фактор), легкоокисляемые органические вещества (по БПК5), фосфаты, нитриты, аммонийный азот, нефтепродукты.
Основной объем промышленного и коммунального водопотребления в области приходится на реку Сейм с притоками Тускарь и Свапа (в бассейне Днепра), где размещены крупнейшие промышленные центры города Курск (предприятия теплоэнергетики, машиностроения, химической промышленности), Железногорск (Михайловский горно-обогатительный комбинат), Курчатов (Курская атомная электростанция).
Качественный анализ состояния водных объектов в местах водопользования проводили по следующим показателям: физико-химическим, микробиологическим и паразитологическим.
С 2002 г. Прослеживается положительная динамика снижение удельного веса нестандартных проб воды водоемов по физико-химическим показателям: с 4,9%) до 2,4% (в 2005 г.); однако впервые с 2000 г. Отмечен рост количества нестандартных проб воды по бактериологическим показателям, удельный вес которых увеличился с 9,5% в 2004 г. до 11,1% в 2005. Удельный вес нестандартных проб воды на яйца гельминтов, опасных для человека увеличился с 0,2% до 0,3%. Неудовлетворительное качество воды водоемов по микробиологическим и паразитологическим показателям является опасным в эпидемиологическом отношении. Это свидетельствует о неэффективной работе очистных сооружений и плохой санитарной очистке населенных мест.
Исследования поверхностных водных объектов на территории Курской области на показатель паразитологического загрязнения ведется только в гельминтологическом отношении, т.е. проводятся методы на выявление яиц гельминтов, а на наличие цист и ооцист простейших патогенных для человека исследования не проводятся. Хотя данный показатель является немаловажным в распространение кишечных инфекций, как среди людей, так и среди животных.
В Курской области, как и во всей лесостепной зоне, обитают как лесные, так и степные виды. Кроме того, много животных (лисица, заяц-русак, летучая мышь), которые приспособлены к жизни в лесах и в открытых ландшафтах. Животный мир области очень разнообразен и включает более 300 видов позвоночных и несколько десятков тысяч беспозвоночных.
Из 57 видов млекопитающих диких животных лесов Курской области большой интерес представляют лоси, косули, кабаны, европейские олени. Они в прошлом были широко распространены, служили объектом охоты и истреблены человеком. Сейчас их численность мала и они находятся под охраной государства.
В лесах области обитают представители отряда хищных: волки, лисицы, енотовидные собаки, барсуки, куницы.
Плотность лисицы в более лесистых северо-западных и западных районов обычно выше, чем в малолесных восточных и южных. В Рыльском районе численность лисицы на 2007 г. составляет 411 особей (лесистость 13,5%), тогда как в Беловском 61 (лесистость 5,5%).
В небольшом количестве в лесах обитает белка. Повсеместно в области распространен заяц-русак. Популяция зайца-русака в начале 90-х годов претерпевает глубокую депрессию. Средняя численность на 1966-1976 гг. составляет 37500 особей, а на конец 2006 г. приходится 10454 особи. Резкое снижение численности зайца-русака связано с ухудшением условий обитания на сельскохозяйственных землях.
Многочисленными животными степных пространств области являются грызуны: крапчатый суслик, хомяк, мышь, полевка, реже большой тушканчик, серая крыса.
Методы санитарно-паразитологических исследований
Роль отдельных видов животных в обсеменении объектов окружающей среды ооцистами кишечных простейших далеко неравнозначно. Одним из показателей этого, могут служить результаты паразитологических исследований. Согласно которым мы определили зараженность домашних и диких животных Курской области и выяснили, что домашние животные являются основным источником контаминации ооцистами криптоспоридии объектов окружающей среды, однако необходимо учитывать природную очаговость криптоспоридиоза.
В условиях Центрально-Черноземной зоны России на территории Курской области до сих пор данных по обсемененности объектов окружающей среды ооцистами криптоспоридии нет, так как исследований такого рода никто не проводил.
Учитывая это, нами в 2004-2007 г. проведены эколого паразитологические исследования по изучению обсемененности ооцистами криптоспоридии природной воды (р. Сейм, р. Свапа, р. Тускарь) и почвы Золотухинскго Железногорского и Рыльского районов Курской области. Отбор проб воды проводился ежемесячно в трехкратной повторности с помощью современного прибора — пробоотборник-концентратор гидробиологический «ПробоКонГ» (Рис. 7). А обработку осуществляли по методике, рекомендуемой МУК 4.2.1884-04 «Санитарно микробиологический и санитарно-паразитологическй анализ воды поверхностных водных объектов».
Всего было исследовано 693 пробы воды: из реки Тускарь (Золотухинский р-он) - 246, реки Свапа (Железногорского р-он) - 222 и реки Сейм (Рыльский р-он) - 225.
Результаты исследований, представленные в табл. 16 показывают, что: в реках Курской области в местах отбора проб были выявлены ооцисты криптоспоридий в Тускаре - 20,1 %, Свапа - 23,5 % и Сейм -28,6% соответственно.
Среднее содержание патогенов воды было неодинаковым: 2,1 ±0,2 ооцист криптоспоридий в пробе воды из р. Тускарь, 2,4±0,1 экземпляров из р. Сейм, 2,2±0,2 из р. Свапа. Попадание ооцист криптоспоридий в поверхностные водные объекты обусловлено весенними паводковыми водами и стоками с животноводческих ферм вместе с талыми водами.
В летний период исследовано 78 проб воды, отобранных в реке Тускарь, 69 из реки Сейм и 66 из реки Свапа. Отмечена тенденция уменьшения не только числа положительных проб, но и количества инвазионного материала в них. Результаты исследования позволили выявить 18 (20,1±0,2%), 22 (28,6±0,1) и 18 (23,5±0,2) положительных проб. Это, по-видимому, связано с тем, что весной и в начале лета идет окот скота и в данное время в популяции домашних животных процент молодняка повышается, так как молодые особи более подвержены криптоспоридиозной инвазии за счет слабой иммунной системы, они и будут выступать как основные источники инвазионного материала, который попадает в реки с навозными стоками.
Обсемененность поверхностных водных объектов Курской области Наиболее высокие экстенсивные показатели обсемененности проб воды выявлены в реке Сейм (Рыльский район) и составляет в среднем 28,6 %, что в 1,4 и 1,2 раза выше, чем в реках Тускарь (Золотухинский район) и Свапа (Железногорский район) соответственно (рис 8).
Такой показатель мы получили за счет большого процента положительных проб фекального материала домашних и диких животных этого района. Как основных источников обсеменения объектов окружающей среды возбудителем криптоспоридиоза.
Для эколого-паразитологического анализа почвы на наличие ооцист криптоспоридий пробы почвы брали около поверхностных водных объектов с мест выпаса скота и обитания диких животных. Обработку осуществляли по методике, рекомендуемой МУК 4.2.796-99 «Методы санитарно-паразитологических исследований». Высушенные на воздухе мазки микроскопировали под иммерсией при увеличении микроскопа: окуляр 10х, объектив 100х. Ооцисты криптоспоридий окрашиваются в разные оттенки ярко-красного цвета и имеют вид округлых образований диаметром 5 мкм, сопутствующая микрофлора окрашивается в зеленый цвет (рис. 9).
Результаты исследований представленные в таб. 17 показывают, что: исследуемая нами почва обсеменена ооцистами криптоспоридий. Количество положительных проб в районах исследования различно.
Изучение обсеменения ооцистами криптоспоридий различных объектов окружающей среды
Необходимость проведения исследований по изучению наличия у новых дезинфицирующих средств ооцистоцидных свойств диктуется тем, что: — рекомендуемые для дезинфекции объектов окружающей среды препараты в нашей стране не испытываются на наличие у них ооцистоцидных свойств, а следовательно, не могут быть использованы в очагах инвазии; — отсутствуют химические препараты для дезинвазии окружающей среды в очагах криптоспоридиоза. Это снижает эффективность проводимых профилактических мероприятий и создает условия для сохранения риска новых заражений.
Учитывая это, нами проведены специальные экспериментальные исследования по оценке ооцистоциднои активности следующих трех новых дезинфицирующих средств зарегистрированных в нашей стране: экопав, бицин и офаль. Объектами исследований служили ооцисты криптоспоридий, полученные от больных телят. Исследования проводились в два этапа. На первом - определялось губительное действие указанных дезинфектантов на чистую взвесь ооцист криптоспоридий, на втором — на различных эпидемически опасных объектах окружающей среды.
Исследования проводились в соответствии с методиками, рекомендованными МУК 4.2.796-99 «Методы санитарно-паразитологических исследований».
Жизнеспособность ооцист криптоспоридий после воздействия на них указанных дезинфектантов определяли при помощи люминесцентной микроскопии. В качестве люминофора применяли водный раствор акридинового оранжевого в разведении 1:500 - 1:1000.
У жизнеспособных ооцист криптоспоридий, подвергнутых воздействию химических веществ, оболочка слегка окрашивается в оранжевый цвет, цитоплазма остается неокрашенной и имеет темноватый оттенок. У погибших ооцист криптоспоридий цитоплазма и оболочка имеет красноватый цвет. У дегенерирующих ооцист цитоплазма темно-салатного цвета, ядра - ярко-салатные, четко выделяющиеся на фоне цитоплазмы.
Целью первого этапа исследований было не только определение наличия ооцистоцидных активности дезинфектантов, но и условий, при которых они проявляют их максимальные показатели.
Определение ооцистоцидных активности дезинфектантов проводили при концентрации их растворов: 0,1; 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 и экспозициях 30, 60, 90, 120 и 180 минут. Каждый опыт проводился в трехкратной повторности с постановкой контроля. Всего было выполнено 300 исследований, из которых 225 опытных и 75 контрольных. В каждом опыте было задействовано в среднем 1000±200 ооцист криптоспоридий. Результаты исследования, представленные в таблице 21 показывают, что все испытуемые дезинфектанты обладают ооцистоцидными свойствами.
Проявление их зависит от концентрации препарата и экспозиции. Испытуемые препараты необходимо оценить по степени их ооцистоцидного действия. При этом придерживались следующей схемы, рекомендуемой Н.А. Романенко с соавт. (2000): сильные, выраженные и слабые. К первым относятся те концентрации препарата и экспозиции, при которых обеспечивается гибель всех ооцист криптоспоридий.
Ко вторым - губительное действие которых превышает 50% ооцист и к третим - вызывающих гибель до 50% ооцист. Критерий экспозиции предусматривается в пределах 30 мин. Установлено, что при таком подходе; высокую ооцистоцидную активность проявляют: экопав — в концентрации 2 и 3%; бизин - 1-2 и 3%, а офаль — 3%.
Результаты исследований первого этапа послужили основой для отбора условий при которых соединения, обладающие сильными ооцистоцидными свойствами для проверки возможности их использования для дехинвазии эпидемически опасных объектов окружающей среды. В опытах были использованы нечистоты из выгребов уборных домовладений, навоз свиноферм и осадки сточных вод. Образцы нечистот, навоза, осадков сточных вод весом 0,5 кг/л обсеменяли ооцистами криптоспоридий (не менее 10000 экз.) тщательно перемешивали и помещали в емкости объемом 1,0 л. Содержимое емкостей обрабатывали 2 и 3% растворами экопава, бицина, и офаля, дозировками 5, 10 и 20% к объему испытуемой массы, с экспозицией 120 и 180 мин. Было поставлено 162 опыта и 16 контролей — всего 178.
Анализ результатов исследования (табл. 22 и 23) показали, что для дезинвазии нечистов, навоза свиней и осадков сточных вод могут быть использованы все три дезинфектанта при следующих режимах: - экопав - 3% раствор в дозе 10% объема обрабатываемого материала, в течение 180 мин; - бицин - 2-3%, 10% и 120-180 мин. соответственно; - офаль - 3%, 10% и 180 мин. соответственно.
