Содержание к диссертации
Введение
1.Обзор литературы 7
1.1. Распространение и терапия при диктиокаулезе крупного рогатого скота 7
1.2. Иммунитет при гельминтозах 10
1.3. Иммунотропньїе лекарственные средства в терапии и профилактике заболеваний различной этиологии 25
2. Собственные исследования 37
2.1.Материалы и методы 37
2.2. Результаты исследований 46
2.2.1. Естественная резистентность телят в динамике их роста и заражения стронгилятами и диктиокаулами 46
2.2.2. Иммунный статус телят, спонтанно зараженных диктиокаулами 54
2.2.3. Токсикологическая характеристика препарата ферран 57
2.2.3.1 Острая токсичность феррана 57
2.2.3.2. Определение кумулятивных свойств препарата ферран 58
2.2.3.3. Изучение функционального состояния печени 63
2.2.4. Неспецифическая резистентность и иммунный статус телят, спонтанно зараженных стронгилятами и диктиокаулами на фоне комплексной терапии 69
2.2.5. Профилактика диктиокаулеза и стронгилятозов крупного рогатого скота 85
3. Заключение 96
4. Выводы 101
- Иммунитет при гельминтозах
- Иммунотропньїе лекарственные средства в терапии и профилактике заболеваний различной этиологии
- Результаты исследований
- Неспецифическая резистентность и иммунный статус телят, спонтанно зараженных стронгилятами и диктиокаулами на фоне комплексной терапии
Введение к работе
Актуальность проблемы. Диктиокаулез крупного рогатого скота широко распространен в различных частях земного шара. Зараженность молодняка крупного рогатого скота в отдельных областях России достигает от 9,9 до 88,4% (В.А. Стрельчик, 1969; A.M. Кравец, 1970; В.А. Безруков, 1972; А.А. Жуков, 1982; Р.Т. Сафиулин, 1983; К.А. Мальцев, 1999; С.Д. Дурдусов, 1994 и другие).
Многосторонние и глубокие исследования по патогенезу диктиокаулеза проведены Н.П. Цветаевой (1954, 1964), Д.И. Панасюком (1960,1964), J. Michel (1956), Г.И. Горликовой (1970).
В настоящее время вся система мер борьбы с этими гельминтозами основана на систематической дегельминтизации животных, которая приносит большую экономическую пользу. Однако, несмотря на наличие высокоэффективных нематодоцидных антгельминтиков и проводимых мероприятий, вследствие беспрерывной реинвазии, животные остаются постоянно зараженными гельминтами, в том числе и диктиокаулами.
Вместе с тем известно, что гельминты являются мощным фактором вторичной иммунологической недостаточности и иммунодефицитов (Е. С. Лейкина, 1976, 1983; Э. X. Даугалиева, 1981, 1984, 1986, 1989; О.Г.Полетаева, 1983; Н. И. Тумольская, М. В. Якубовский, 1983; О. Barriga, 1984 и др., И. А. Гаджиева, 1986; И. С. Каныгина, 1989; С. И. Пономарь, 1990; Т.Р. Кораблева, 1991; Э.Х. Даугалиева, К.Г. Курочкина, 2000 и другие).
В последние годы очень много усилий посвящено изучению иммунодефицитов, возникающих у животных в различные периоды жизни, в связи с чем, ученые много внимания уделяют иммуностимулирующей терапии и иммунопрофилактике (J. A. Drews, 1980; В. Я. Арион, 1981 и др.). Проблема стимуляции защитных
функций организма, на наш взгляд, является принципиально важной, так как, формирование иммунитета у животных в более поздние сроки приводит к низкой устойчивости к различным инфекционным заболеваниям (L. Moretta, et al, 1975; D. R. Hutcheson, 1990; И. В. Слипец, 1990 и др.).
Поэтому актуальным становится решение проблем изыскания средств и разработки методов коррекции иммунного ответа организма животных на внедрение возбудителей болезней вообще, и гельминтов, в частности.
Одним из средств коррекции иммунного ответа являются
иммуномодуляторы, такие, как левамизол, метилурацил,
полиоксидоний, ветан и др., применение которых совместно с
антгельминтиками значительно повышает эффективность
противогельминтозных мероприятий (А. В. Ившина с соавт., 1983; А.В.Максимов, Б. Н. Сафронов, 1986; Э. X. Даугалиева, 1984, 1986; И. А. Гаджиева, 1986; К.С.Балаян, 1987; A. Lui, 1976; A. Sykes, 1979; Н. Nogami, 1980; J. Otternes et al., 1981; H. Gordon, 1981; E. Cartner, 1981; M. Schnaper, T. Aune, 1986; A.B. Аринкин, 2000 и др.).
Цель и задачи исследований. Цель настоящей работы — определение иммунобиологической реактивности телят при диктиокаулезе и определение путей коррекции иммунного статуса на фоне комплексной терапии..
Для достижения этой цели необходимо было решить следующие задачи:
-определить иммунобиологическую реактивность и естественную резистентность телят, спонтанно зараженных диктиокаулами и стронгилятами желудочно-кишечного тракта;
-изыскать пути повышения иммунного статуса телят при диктиокаулезе и стронгилятозах желудочно-кишечного тракта;
- изучить фармакотоксикологические свойства феррана;
-разработать комплексную терапию при диктиокаулезе крупного рогатого скота.
Научная новизна. В работе впервые изучена естественная
резистентность и иммунобиологическая реактивность телят при
спонтанном диктиокаулезе. Впервые определены
иммуномодулирующие свойства нового препарата - магнитоактивного кластерного органического соединения железа (ферран). Изучены его иммунотропные и токсикофармакологические свойства. Изучено влияние препарата на физиологический ииммунный статус животных. Данные по острой токсичности, куммуляции и иммунотропным свойствам были использованы при разработке наставления по применению феррана в ветеринарии.
Практическая значимость работы. На основании данных, полученных при изучении иммунобиологической реактивности телят спонтанно зараженных диктиокаулами, даны предложения по коррекции иммунного ответа с использованием иммуномодулятора ферран. Ветеринарной практике после всестороннего изучения предложен иммуномодулятор ферран.
Научная разработка автора вошла в Наставление по применению феррана в ветеринарии, утверждено Департаментом ветеринарии №13-4-03/0254 от 23.11.2001 г.
Пути реализации. Результаты исследований могут быть
использованы при корректировке противодиктиокаулезных
мероприятий и в педагогическом процессе при подготовке специалистов ветеринарной профессии.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены:
на заседаниях ученого совета ВИГИС (1999,2000,2001 г.);
на ученом совете НГСХА (2002,2003);
на 12 Международной межвузовской научно-практической конференции в Санкт-Петербурге, 2001 г.;
на конференции, посвященной теории и практике борьбы с паразитарными болезнями, Москва, 2001 г.;
Внедрение. Результаты исследований под авторским надзором с положительным эффектом в 1999 - 2003 гг. внедрены в ряде районов и областей Российской Федерации. Материалы исследований включены в нормативно-техническую документацию по применению ферана (МСХ РФ, 2001)
Основные положения, выносимые на защиту:
Динамика иммунобиологической реактивности телят, спонтанно зараженных диктиокаулами;
Иммунотропные и токсикологические свойства препарата ферран;
Терапевтическая эффективность комплексных препаратов;
Публиукации. По материалам исследований опубликовано 6 работ, в которых изложены основные положения и выводы по изучаемому вопросу.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 125 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений. Работа иллюстрирована 31 таблицами и 4 рисунками. Список использованной литературы содержит 192 источника, из них 121 отечественных и 71 иностранных автора. Приложение на 2 страницах.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Иммунитет при гельминтозах
Первое бесспорное доказательство наличия приобретенного иммунитета к паразитам было опубликовано Теобальдом Смитом (Smith) и Ф.Л. Кильбурном (Kilbourne) в 1893 году. Они показали, что выздоровление после первого приступа техасской лихорадки сопровождается невосприимчивостью к последующим заражениям. В1899 году Рабиновичем и Кемпнером (Rabinowisch L.,Kempner W.) было обнаружено, что крыса преобретает иммунитет после выздоровления от первичной инфекции , вызванной Trypanosoma lewisi. Но основные понятия и закономерности формирования иммунитета при гельминтозах изучены лишь несколько десятилетий назад . Изучение иммунитета при гельминтозах началось лишь несколько десятилетий назад. Основоположниками школы иммунологии при гельминтозах в нашей стране являются: Р.С.Шульц, Н.П.Шихобалова, Э.А.Давтян, Е.С.Лейкина, В.С.Ершов, Д.И.Панасюк и др. Термином "иммунитет", по мнению Р.В.Петрова (1987), обозначают способ защиты организма от живых тел и веществ, несущих на себе признаки генетической чужеродности. В понятие живых тел и веществ, несущих на себе признаки работы чужеродного генома, могут быть включены бактерии, вирусы, простейшие, черви, белки, клетки, ткани, измененные аутоантигены, в том числе раковые. В генетическом аспекте иммунитет рассматривают, как способность организма отличать чужеродный материал от "своего", что жизненно важно. Количественное и качественное "постоянство" внутренней среды, называется гомеостазом, обеспечивается реакциями взаимодействия между системой иммунитета и биологически активными агентами (антигенами). Иммунитет одно из проявлений гомеостаза. Поэтому иммунитет является свойством всего живого. В создании иммунитета участвует весь организм как целостная система, все защитные механизмы которого взаимосвязаны в этих функциях. Наряду с факторами специфической защиты действуют многочисленные неспецифические факторы. Иммунитет - это приспособительный признак организма, проявление естественного искуственного отбора, результат длительной эволюции, обусловленный изменчивостью как организма паразита, так и организма хозяина (Я.Е.Котляков, 1986). В последнее время по иммунологии гельминтозов выполнен ряд работ имеющих большое теоретическое и практическое значение в расшифровке механизма иммунитета и новых подходов в лечении и профилактике этих заболеваний (И.И.Озерецковская, 1976; Е.С.Лейкина, 1976, 1984; А.И.Збарский, 1985; Э.Х.Даугалиева, В.В.Филиппов, 1991; И.С.
Каныгина, 1989; Э.Х.Даугалиева, Л.И.Глухова, 1992, 1998 и др.). Многочисленные исследования роли иммунной системы при инвазионных заболеваниях, широко развернувшихся в последнее время, показали, что защитные реакции при гельминтозах в сущности не отличаются от таковых при инфекционных заболеваниях и основываются на клеточной и гуморальной защите. Особое значение в иммуногенезе паразитарных болезней животных имеют жизненный цикл паразита, его антигенная пластичность и изменчивость (Я.Е. Котляков, 1986). К отличительным особенностям гельминтов относят: неспособность паразитов размножаться в организме хозяина (за редким исключением); у многих относительно большие размеры; своеобразие путей миграции; воздействие на органы различных антигенов в процессе их стадийного развития; гематофагия; у некоторых выхождение личинок или их яиц из организма хозяина с разрывом или закупоркой кровеносных сосудов (Р.С. Шульц, 1976), а также развитие у паразитов маскирующих механизмов. Иммунитет при гельминтозах характеризуется слабой степенью напряженности, особенно при однократном попадании заразного начала в организм хозяина, относительно коротким сроком действия. Интенсивность иммунного ответа зависит от числа гельминтов, поступающих в организм (Э.Х.Даугалиева, К.Г.Курочкина, А.В.Аринкин, 1996), активности отдельных генераций гельминтов, числа повторных заражений и, конечно, от физиологического состояния макроорганизма. Иммунитет животного изменяется в процессе онтогенеза гельминта (В.С.Ершов, 1966). J.Sprent (1959) предположил, что в системе паразито-хозяинных отношений формируется "адаптационная толерантность", ведущая к снижению иммунореактивности. Это происходит потому, что антигены паразита похожи на антигены хозяина. В дальнейшем Damian R.T. (1964) исследовал явление молекулярной мимикрии у гельминтов и высказал предположение о том, что паразиты могут вырабатывать антигены хозяина в качестве "эволюционной хитрости" для ослабления эффективности иммунного ответа. В организме хозяина развитию паразита способствует такой фактор, как иммунологическая индукция. Она заключается в особенности гельминтов изменять процесс синтеза белка в зависимости от особенностей протеиногенеза у промежуточного и окончательного хозяина с образованием общих белковых антигенов (A.Capron et al., 1968). В настоящее время обнаружена способность тканевых гельминтов выделять иммунодепрессивные вещества, способствующие развитию паразита в организме хозяина (G.Svet-Moldavski et al., 1969). Таким образом, у паразита развиваются определенные свойства, позволяющие ослабить защитные реакции хозяина. К ним относятся имитирование антигена хозяина ("молекулярная мимикрия"), способность к быстрому изменению АГ, опережающая развитие эффекторных механизмов иммунной системы, выделение иммунодепрессивных индукций, задержка передачи информации об антигене иммунокомпетентными клетками блокирующими антителами или электростатическими барьерами.
Иммунотропньїе лекарственные средства в терапии и профилактике заболеваний различной этиологии
Иммунотропная терапия — это активное воздействие на иммунную систему с целью нормализации ее функционального состояния. Подобное воздействие бывает необходимо в случаях нарушений иммунного статуса, как врожденного, так и приобретенного (P.M. Хаитов и Б.В. Пинегин, 1997). Авторы выделяют три основные группы нарушений иммунной системы, которые несомненно, требуют применения иммунотропной терапии: иммунодефециты, аутоиммунные заболевания и аллергопатология. Иммунореабилитация - комплекс иммунотропных воздействий, направленных на восстановление до нормальных величин параметров иммунной системы больного, в т.ч. и в тех случаях, когда зафиксировано клиническое выздоровление животного. Р.И. Сениашвили (1990-1999), разработавший данное направление клинической иммунологии, рассматривает иммунореабилитацию как комплекс мероприятий, направленных на восстановление иммунной реактивности больного, включая как медикаментозные, так и не медикаментозные средства. Таким образом, иммунотропная терапия, конечной целью которой является иммунореабилитация, включает значительный арсенал способов и приемов воздействия: применение лекарственных препаратов (естественного происхождения и синтетических), фитотерапии, физиотерапии, рефлексотерапии и др. В борьбе против различных патологических агентов внешнего и внутреннего характера признается наиболее перспективным использовать терапевтические средства, стимулирующие и регулирующие защитные механизмы иммунитета (иммуномодуляторы). Иммунокоррекция предполагает использование фармакологических средств для изменения функциональной активности иммунной системы. Они могут увеличивать или снижать уровень иммунного ответа.
Специфическая иммунокоррекция ограничивается действием одного антигена, а неспецифическая — вызывает более общие изменения в иммунном ответе и приводит к изменению реактивности организма ко многим различным антигенам. В настоящее время нет общепринятой классификации иммунотропных препаратов. Наиболее полной на наш взгляд является классификация предложенная Д.К. Новиковым (1998). I. Препараты бактериального и грибкового происхождения: вакцины (например, БЦЖ применяют для лечения рака), пирогенал, продигиозан (липополисахариды бактерий); грибкового - нуклеат натрия (дрожжевые нуклеиновые кислоты). Они симулируют макрофаги, гранулоциты и лимфоциты. И. Препараты животного происхождения: тактивин, тималин (пептиды тимуса животных), стимулируют преимущественно Т-лимфоциты, спленин (экстракт селезенки) умеренно стимулирует разные показатели иммунитета, миелопид (лептиды костного мозга) избирательно стимулирует В-лимфоциты, синтез антител. III. Препараты растительного происхождения: экстракты и настойки эхинацеи, женьшеня, золотого корня, элеутерококка и др. растений, обладающих иммуностимулирующим эффектом. IV. Природные, синтетические, генно-инженерные препараты: микроэлементы и витамины, особенно при их недостатке в организме, компенсируют возникающие при этом иммунодефециты. Мумие — комплекс микроэлементов и других природных веществ, стимулирует регенерацию тканей и иммунитета. Левамизол (декарис) - противогельминтный препарат, а также диуцифон (противолепрозный) стимулируют Т-лимфоциты и другие показатели иммунитета. Дибазол, тимоген (дипептид) также оказывают благоприятное воздействие на показатели иммунитета. Интерфероны. Для профилактики и лечения вирусных инфекций используют генно-инженерные, рекомбинантные интерфероны, близкие по свойствам у - интерферону Т-лимфоцитов (реаферон и др.). Интерферон индуцируют в клетках синтез протеинкиназ и эндонуклеаз, блокирующих синтез вирусных белков и расщепляющих вирусную РНК. Одновременно они являются иммуномодуляторами -активируют фагоциты, ЕК, но могут угнетать синтез антител, подавлять пролиферацию опухолевых клеток. Интерферогены — вещества индуцирующие синтез интерферонов в организме, оказывают сходный с интерфероном эффект. Это липополисахариды, полианионы, двунитчатые РНК и др. Цитокины и интерлейкины получают генно-инженерными методами и используют для иммунотерапии. Например, ИЛ-3 применяют для лечения анемий и лейкопений, ИЛ-2 для лечения опухолей. Хотя механизмы действия представителей разных групп могут отличаться и зачастую не совсем понятны, в основном, они направлены на иммунологическую активацию клеток и связаны с дисбалансом цитоплазматических нуклеотидов, таких, как циклический аденозин монофосфат. От того, насколько полноценно функционирует иммунная система, зависят многие процессы нормальной жизнедеятельности организма. Таким образом, ветеринарная наука стоит перед необходимостью разработки методологии выявления заболеваний иммунной системы животных с целью их профилактики и своевременной терапии (Ю.Н. Федоров, О.А.Верховский, 1996). В настоящее время написано огромное количество работ о применении иммуностимуляторов и иммуномодуляторов при различных заболеваниях не только людей, но и животных. Больших успехов достигли при лечении инфекционных заболеваний, где на ряду с антибиотиками применяются иммуностимуляторы. Так, В.М. Земсков (1991) в своей работе показал перспективы развития иммуномодуляции и представил новейшие сведения об иммуностимулирующих свойствах образуемых иммунной системой ряда веществ. LP. Revillard et al. (1991) показали, что наибольший эффект в борьбе с ВИЧ - играет одновременное применение противовирусных препаратов и имуномодулирующих средств. Применительно к наиболее распространенным гепатитам к настоящему времени сформировались 2 основных направления иммунотерапии. Первое направление представлено средствами и способами повышения антивирусной устойчивости организма, второе -средствами и способами подавления иммунных реакций повреждения гепатоцитов. Наиболее распространенным препаратом с иммуностимулирующими свойствами является левамизол, который применяют как антгельминтный препарат. Механизм его действия заключается в том, что он восстанавливает эффекторные функции периферических Т-клеток и фагоцитов, а также стимулирует превращение Т-лимфоцитов предшественников в функционирующие клетки.
Результаты исследований
Опыт проведен на 15 телятах в возрасте 2-2,5 месяцев. Животных разделили на 2 группы: 1 группа (10 голов) - подопытная, находилась на пастбище в период с мая по октябрь месяцы, 2 группа - контрольная, находилась в стационаре, не выпасалась. Исследования проводились в течение 7 месяцев. Гематологические показатели (табл. П. Изменения в количестве эритроцитов и лейкоцитов наблюдали в течение всего периода исследований (7 месяцев). У всех подопытных животных, спонтанно заражавшихся, наблюдали более медленное увеличение, как эритроцитов, так и лейкоцитов, чем у контрольных, т.е. не выпасавшихся телят. Изменения, отмеченные нами в гемограмме крови, указывают на лейкоцитоз, наблюдавшийся с июля по октябрь месяцы, период наиболее активного заражения животных. Следует отметить, что лейкоцитоз сопровождался эозинофилией, приходящейся на август-октябрь месяцы с 5,8±0,2 до 7,8±0,1 %, лимфоцитоз приходился на июль месяц 70,8±2,8 %. Увеличение общего количества моноцитов отмечено в сентябре (до 7,0±0,1). Уровень клеточных факторов естественной резистентности телят определяли по фагоцитарной активности нейтрофилов. Как видно из таблицы 2 и рис. 1, у животных контрольной группы фагоцитарная активность нейтрофилов с возрастом увеличивалась и к концу опыта достигала 40,2±1,4%. У подопытных животных наблюдали уменьшение фагоцитарной активности нейтрофилов в июне-августе и сентябре, достигшие 27,2±2,4%, что было ниже контрольных животных в 1,4 раза. К концу наблюдений (октябрь месяц), фагоцитарная активность нейтрофилов подопытных животных была в 1,3 раза ниже контрольных. С возрастом животных отмечали увеличение комплементарной активности у животных контрольной незараженной группы с 7,4±1,0 до 10,2±0,7%. У спонтанно заражавшихся телят снижение комплементарной активности отмечали с августа по октябрь (с 4,8±1,0 до 3,0±0,4%) (табл.3, рис.2). В динамике гетерофильных агглютининов отмечали снижение титра у подопытных телят до 2,0 ±0,2 logs в июле и августе, в октябре -титр антител увеличился и достиг 3,8 ±0,2 logs, но был ниже, чем у контрольных незараженных телят в 1,2 раза (табл.4, рис.3).
Результаты копрологических исследований показывает, что уже в июне месяце, т.е. после выгона животных на пастбище они заразились стронгилятами желудочно-кишечного тракта, причем интенсивность инвазии нарастала до конца наблюдений. Животные контрольной группы также заразились, но интенсивность инвазии их была ниже в 25,5 раза к концу опыта (таблица 5, рис.4). В октябре месяце был проведен убой всех подопытных и контрольных телят. При полном гельминтологическом вскрытии желудочно-кишечного тракта были найдены диктиокаулы, гемонхи, нематодиры, хабертии, мониезии. Количество гельминтов варьировало довольно широко (табл.6). Таким образом, спонтанное заражение телят стронгилятами и диктиокаулами вызывает снижение естественной резистентности организма животных, что выражается в замедленном росте телят, отставании в физиологическом и иммунологическом развитии. Результаты наших исследований и многочисленные литературные данные свидетельствуют о глубоких изменениях в иммунобиологических механизмах защиты организма животных под влиянием гельминтозов. В результате изучения естественной резистентности телят здоровых и спонтанно зараженных стронгилятами и диктиокаулами установлено, что клеточные и гуморальные реакции организма животных имеют различную степень выраженности. Иммунный статус телят, спонтанно зараженных диктиокаулами Важнейшей качественной характеристикой состояния здоровья животных рассматриваемое как интегральный показатель сложного взаимодействия хозяино-паразитарных отношений при гельминтозах является определение резистентности и иммунного статуса животных. Иммунная система, участвуя в поддержании гомеостаза, во многом определяет устойчивость организма к воздействию различных экологических факторов (Д.Н.Маянский, 1992, Р.М.Хаитов с соавт., 1995, M.Holsapple et al., 1991; J.Hilgers, 1995 и др.). Определенный диагностический интерес при гельминтозах животных представляет изучение содержания клеточных и гуморальных факторов иммунитета, который обеспечивает стимуляцию фагоцитоза и элиминацию из организма макромолекул, осуществляя неспецифическую защиту организма до формирования истинных механизмов иммунологического гомеостаза. Проведенные нами исследования показали, что изменения субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови здоровых животных отличаются от показателей зараженных животных. Под опытом находилось 20 телят в возрасте 6-8 месяцев, которых разделили на 4 группы (первая - контрольная не зараженная, вторая-зараженная только стронгилятами желудочно-кишечного тракта, третья-диктиокаулами, четвертая -стронгилятами и диктиокаулами. Было установлено, что изменения клеточного иммунитета у зараженных животных имеют однонаправленный характер, т.е. выявлено повышение Т-супрессоров, за счет снижения Т-хелперов, а также соотношение Т-хелперов Т-супрессорам, т.е. индекс иммунорегуляции был ниже 1. Данные по субпопуляционному составу лимфоцитов периферической крови у обследованных групп животных представлены в таблице 7. Исследование иммунного статуса не является полным без оценки гуморальных факторов и содержания фагоцитирующих клеток. Это связано с патогенетической ролью интерлейкинов, комплемента и его ключевых СЗ, С5 компонентов, иммуноглобулинов при гельминтозах животных. Нашими исследованиями установлено, что развитие заболевания у животных, зараженных только стронгилятами, ведет к снижению фагоцитоза, а при смешанных инвазиях их количество несколько повышается (таблица 8). В 1-й группе зараженных животных отмечалось снижение уровней IgM и процентного содержания фагоцитирующих клеток, повышение концентраций IgA в сыворотке. Снижение содержания фагоцитирующих клеток связано с повреждающим действием гельминтов, которые вызывают генерацию активных форм кислорода и окислительную деструкцию фагоцита.
При смешанных инвазиях гибель фагоцитирующих клеток запускает иммунные механизмы воспаления. Следует отметить, что изменения клеточного и гуморального иммунитета обнаруживается у животных спонтанно зараженных стронгилятами и диктиокаулами. Снижение содержания фагоцитирующих клеток крови наряду с атрофическими и субатрофическими изменениями слизистой оболочки бронхов при диктиокаулезе могут привести к развитию вторичных иммунодефицитов. При стронгилятозах и диктиокаулезе происходит снижение уровня иммуноглобулинов и показателя фагоцитирующих клеток. Таким образом, у животных спонтанно зараженных гельминтами (стронгилятами и диктиокаулами) развиваются глубокие изменения в иммунной системе, которые можно определить как вторичные иммунодефициты. Интенсивность и характер этих изменений зависят от количества гельминтов и их состава. С целью коррекции иммунного ответа при диктиокаулезе, нам было предложено изучить иммуномодулятор нового класса ферран, и наши данные были использованы при оформлении фармакотоксикологических и протективных свойств препарата. 2.2.3. Токсикологическая характеристика препарата ферран Т Ферран - это 5% спиртовая суспензия магнитоактивного кластарного органического соединения железа. По внешнему виду препарат представляет собой жидкость с черным осадком, после встряхивания которой образуется мелкодисперсная суспензия. 2.2.3.1. Острая токсичность феррана Препарат смешивали с водой и после тщательного, но не энергичного взбалтывания (при сильном взбалтывании, происходит чрезмерное вспенивание раствора) происходит равномерное распределение препарата в растворе и затем перорально вводили белым мышам. Как видно из таблицы 9 животные при пероральном введении препарата давали различные реакции на введение. При более высоких дозах препарата гибель белых мышей не достигала 100%-ой смертности до дозы 7620,1 мг/кг. При обработке экспериментальных данных по определению токсичности препарата было определено, что - Опыт проведен совместно с Саушкиным В.В. среднесмертельная доза препарата составила 4707,8 мг/кг массы тела самцов белых мышей.
Неспецифическая резистентность и иммунный статус телят, спонтанно зараженных стронгилятами и диктиокаулами на фоне комплексной терапии
Под опыт взяли 30 телят, спонтанно зараженных диктиокаулами и стронгилятами, которых разделили на 3 группы: 1-ая служила контролем, 2-ую - продегельминтизировали нилвермом из расчета 10 мг/кг, 3-ей -после дегельминтизации нильвермом вводили перорально ферран в растворе с питьевой водой двукратно из расчета 5 мг/голову. Результаты изучения влияния препарата на состояние комплементарной активности сыворотки крови животных представлены в таблице 18. Активность комплемента у здоровых телят находилась в пределах от 8,9±0,16 до 9,7±0,18%. У зараженных диктиокаулами и стронгилятами желудочно кишечного тракта животных (2 группа) она динамично понижалась и к концу опыта уступала контрольному показателю в 4,22 раза. Введение препарата после дегельминтизации способствовало значительному повышению комплементарной активности сыворотки крови. К 3 дню опыта она превышала контрольный показатель в 1,6 раза, к 7, 14, 21, 35 и 60 дням - в 2,08; 2,9; 3,89; 4,36 и 3,18 раза. Восстановление иммунного баланса Т- и В-клеток регистрировали в крови телят 3 группы. После дегельминтизации и введения феррана Т-Е-РОК-лимфоциты пришли в норму к 14 дню опыта, а к 21,35 и 60 дням превышали контрольные цифры здоровых телят 1 группы, соответственно в 1,06; 1,05 и 1,03 раза (на 2,9, 2,7 и 1,5%). Значительно активизировались Т-хелперы, которые к этим срокам были выше, чем в контроле в 1,09; 1,17 и 1,08 раза (на 2,2; 3,9 и 1,9%). Подобным образом изменялась динамика В-ЕАС-лимфоцитов, которые также, достигнув к 14 дню контрольного уровня, в последующие сроки достоверно превышали его. Под влиянием препарата Т-супрессоры постепенно уменьшались, пришли в норму к 14 дню эксперимента и до конца опытов оставались в пределах физиологических норм. Динамика Т- и В-лимфоцитов в лимфатическом узле Исследование динамики Т- и В-лимфоцитов в наружном паховом лимфатическом узле телят (таблица 21) показало, что стронгиляты (2 группа) вызывают угнетение Т-Е-РОК-лимфоцитов в органе и активизируют Т-супрессоров. Применение Феррана после дегельминтизации телят (3 группа) способствовало полной нормализации в лимфоузле уровня этих некомпетентных клеток к 14 дню опыта. В последующие сроки опыта Т-Е-РОК-лимфоциты превышали контроль на 21 и 35 дни, соответственно в 1,09 и 1,11 раза (на 3,1 и 3,7%), В-ЕАС-лимфоциты - в 1,08; 1,03 раза (на 2,0 и 0,7%). На 60 день Т-Е-РОК и В-ЕАС-клетки были контроля.
Т-хелперы с 7 дня достигли контрольного значения и превышали его на 7; 14; 21; 35 и 60 дни в 1,09; 1,34; 1,46; 1,41 и 1,36 раза (на 1,7; 5,8; 8,1; 7,3 и 6,3%). Реакция Т-супрессоров в лимфатическом узле телят 3 группы пришли в норму к 7 дню и в последующие сроки находилась в пределах физиологических границ. Результаты исследования динамики Т- и В-лимфоцитов в селезенке представлены в таблице 22. Из данных таблицы видно, что у телят зараженных диктиокаулами и стронгилятами в селезенке регистрируется истощение уровня Т- и В-лимфоцитов (как относительного, так и абсолютного числа). Этот процесс динамично прогрессировал до конца опытов и у оставшихся телят 2 группы Т-лимфоциты уступали контрольному показателю телят 1 группы к 60 дню эксперимента на 14,9% (54,1 млн.) или в 2,0 (и 1,74) раза (рис. ); В-лимфоциты - на 20,8% (91,0 млн.), или в 2,26 (2,38) раза (рис. ). Иммунизация телят способствовало повышению уровня Т- и В-лимфоцитов в селезенке, но была недостаточной, ибо показатели здесь не достигли контрольного уровня и уступали ей в конце опыта. К 7 дню опыта количество Т-лимфоцитов в тимусе превышало контрольное значение на 44,7 млн. (в 1,1 раза), к 14 дню - на 158,4 млн. (в 1,36 раза), к 21 дню - на 111,2 млн. (в 1,25 раза), к 35 дню - на 60,5 (в 1,14 раза), к 60 дню - на 16,6 млн. (в 1,03 раза). Таким образом, уровня и уступали ей в конце опыта по относительному и абсолютному уровню Т-лимфоцитов на 2,9% (8,6 млн.), или в 1,1 (1,07) раза, по уровню способствует активизации в организме продукции Т- и В-лимфоцитов и увеличению их содержания в крови, лимфатических узлах, селезенке и Т-лимфоцитов в тимусе. Влияние препарата на иммуноморфологическиереакции в лимфоидных органах Морфометрический анализ динамики площадей структурных компонентов лимфатического узла. В связи с тем, что при изучении влияния магнитоактивного органического соединения железа на содержание Т- и В-лимфоцитов в крови и лимфоидных органах телят были установлены позитивные изменения, мы, в соответствии с поставленными задачами, для более полного анализа иммуностимулирующего влияния магнитоактивного кластерного органического соединения железа изучили структуры Т- и В-зависимых зон лимфоидных органов. Т- и В-зависимые зоны лимфатических узлов и селезенки и структуру тимуса изучали у тех же животных у которых в указанных органах определяли процентное и абсолютное содержание Т- и В-лимфоцитов. Показатели измерения площадей исследованных структур приводим в относительных процентах к площади гистопрепарата. В наружном паховом лимфатическом узле телят в качестве тимуснезависимых В-зон исследовали лимфатические узелки и мякотные тяжи, в качестве тимусзависимых - Т-зон - паракортикальную зону. Для полного анализа иммуноморфологических перестроек площадь коркового плато. Результаты измерения площадей структурных компонентов на гистопрепарате лимфатического приведены в таблице 24. У контрольных телят статистически достоверных изменений площадей изученных структурных компонентов не обнаружили. Относительная площадь, занимаемая корковым плато на гистопрепарате, в среднем, у контрольных животных составила 19,08%, лимфатических узелков без светлых центров - 5,25%, со светлыми центрами - 1,37%, паракортикальной зоны - 10,06%, мякотных тяжей - 12,16%. Ярко выраженные иммуноморфологические перестройки наблюдали в лимфатическом узле телят 3 группы. Так, лимфоузелки со светлыми центрами к 35 дню эксперимента, занимали на гистопрепарате максимальную площадь, превышающую фоновый показатель в 22,0 раза, контрольный - в 13,2, у телят 2 группы, на данный срок, они не регистрировались.
Максимальный показатель площади мякотных тяжей отмечали на 14 день опыта. На этот срок он превышал фоновое значение в 1,89 раза, а данные телят 1 группы в 1,51, 2 группы - в 3,46, 3 группы - в 1,12 раза. Паракортикальная Т-зона также динамично и выражение увеличивалась в площади. Ее максимальный показатель регистрировали к 35 дню опыта. Он составил 15,0%, превысив фоновое значение в 1,74 раза, данные телят 1 группы в 1,45, 2 группы - в 3,06, 3 группы - в 1,56 раза. Расширение площадей Т- и В-зависимых зон лимфатического узла телят 3 группы происходило в основном за счет трансформаций в самих структурных компонентах, и частично за счет уменьшения площади коркового плато органа, которая имела минимальный показатель на 21 день опыта, уступая контролю в 1,17 раза. Морфометрический анализ динамики площадей структурных компонентов селезенки. Данные морфологических исследований селезенки телят представлены в таблице 21. Здесь в качестве тимуснезависимых В-зон изучали лимфоузелки без учета периваскулярных лимфоидных муфт, а в качестве тимусзависимых Т-зон - периваскулярные лимфоидные муфты. Для более полного анализа изменений структуры Т- и В-зон в селезенке, мы также измеряли площадь белой пульпы (в которую входят лимфоузелки с периваскулярными лимфоидными муфтами у красной пульпы органа. Анализ материала проведенных исследований показал, что у телят 1 контрольной группы на долю красной пульпы приходится в среднем 69,61% площади, белой пульпы - 24,3%, лимфоузелки без светлых центров 14,95%, со светлыми центрами - 1,42%. Стронгиляты желудочно-кишечного тракта (2 группа) способствовали деструктивным изменениям в органе. Они выражались в виде расширения площади, занимаемой красной пульпой. К 60 дню исследований они составили 94,4±0,49% и в 1,36 раза превышала показатель телят 1 группы. Площадь белой пульпы к концу опыта уступала контролю в 5,94 раза. При этом показатель площади, занимаемой периваскулярной муфтой была ниже контроля в 6,56 раза, лимфатическими узелками без светлых центров - в 5,6, со светлыми центрами - в 7,05 раза.
