Содержание к диссертации
Введение
1. Краткая характеристика основных клеточных и гуморальных элементов участвующих в иммунном ответе 9
2. Паразитоценозы и ассоциации паразитов и их роль в заболеваемости сельскохозяйственных животных 16
3. Иммунологические и гематологические проявления паразитозов у животных 25
4.Иммунный статус животных при введении антгельминтных препаратов 38
2. Материалы и методы исследования 45
2. Результаты исследований 60
2.1. Возрастная и сезонная динамика ассоциативных инвазий грубо шерстных и тонкорунных овец в Республике Бурятия 60
2.2. Влияние ассоциативных инвазий на организм спонтанно заражен ных овец бурят-монгольской грубошерстной и бурятского типа забай кальской тонкорунной пород 66
2.2.1. Морфологические показатели крови овец 66
2.2.2. Динамика белков и их фракций в сыворотке кровиовец 75
2.3. Иммунологический статус овец бурят-монгольской грубошерст ной и бурятского типа забайкальской тонкорунной пород при ассоциа тивной инвазии эймериями и стронгилятами желудочно-кишечного тракта в эксперименте. 80
2.3.1. Динамика копрологических данных овец 80
2.3.2. Гематологические показатели организма ягнят 82
2.3.3. Изменение уровня общего белка и белковых фракций в сыворотке крови овец 88
2.3.4. Фагоцитарная активность нейтрофилов крови овец 93
2.3.5. Лизоцимная активность сыворотки крови овец 96
2.3.6. Концентрация циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови у овец 98
2.3.7. Динамика Т - и В - лимфоцитов в крови у овец 100
2.4. Сравнительная эффективность антгельминтных препаратов на фоне ассоциативных паразитозов у овец 104
2.5. Влияние антгельминтной терапии на иммунный статус овец, спонтанно зараженных желудочно-кишечными стронгилятами 108
3. Обсуждение полученных результатов 123
Выводы 150
- Паразитоценозы и ассоциации паразитов и их роль в заболеваемости сельскохозяйственных животных
- Влияние ассоциативных инвазий на организм спонтанно заражен ных овец бурят-монгольской грубошерстной и бурятского типа забай кальской тонкорунной пород
- Иммунологический статус овец бурят-монгольской грубошерст ной и бурятского типа забайкальской тонкорунной пород при ассоциа тивной инвазии эймериями и стронгилятами желудочно-кишечного тракта в эксперименте.
- Сравнительная эффективность антгельминтных препаратов на фоне ассоциативных паразитозов у овец
Введение к работе
Актуальность работы. Повышение эффективности овцеводства Бурятии в значительной мере может быть достигнуто разведением тех видов животных, которые в данных природных и экономических условиях дают максимальное количество продукции при минимальных затратах труда и средств. С этих позиций особую значимость приобретает возрождение генофонда аборигенных бурятских овец (в 1993 году в Бурятию завезена бурят-монгольская грубошерстная порода овец из Внутренней Монголии (КНР)), отличающихся высокой приспособленностью к суровому климату региона.
Одним из факторов, тормозящим развитие овцеводства, является заболеваемость животных паразитарными болезнями, которые в большинстве случаев протекают в виде различных ассоциативных инвазий. Среди их многообразия одно из ведущих мест занимают эймериозно-гельминтозные заболевания овец. Поэтому с целью сохранения здорового поголовья аборигенных бурятских овец возникает необходимость изменения стратегии и тактики противопаразитарных мероприятий, основанных на глубоком знании региональной эпизоотологии паразитозов.
Вместе с тем, осуществление лечебно-профилактических мероприятий без знаний основных процессов, происходящих в системе «паразит-хозяин», не представляется возможным. Недостаточная изученность роли различных клеточных элементов в формировании иммунных сдвигов на фоне эймериозно-гельминтозного заражения и познание механизмов защитных реакций организма при этом определяет значимость подобных исследований. В этой связи актуальность изучения адаптационных процессов овец данной породы к местным условиям, в том числе их иммунобиологической реактивности при паразитозах, очевидна.
В условиях иммунодефицита, обусловленного заражением гельминтами, дегельминтизацией, не всегда удается достичь нужного лечебного эффекта, в связи с супрессивной активностью некоторых препаратов (Ма-мыкова О.И., 1989; Смирнов П.Н. с соавт., 1997; Сивков Г.С. с соавт., 1998; Даугалиева Э.Х., 2000 и др.). Поэтому изучение иммунотропной активности противопаразитарных средств является актуальным и своевременным.
Таким образом, необходимость настоящего исследования диктуется тем, что, во-первых, изучение проблемы паразитозов животных остается актуальным, во-вторых - впервые изучается иммунобиологическая реактивность организма овец бурят-монгольской грубошерстной и бурятского типа забайкальской тонкорунной пород при спонтанной и экспериментальной эймериозно-гельминтозной инвазии и на фоне антгельминтной терапии, в конкретной природно-климатической зоне.
Цель и задачи исследований. Цель настоящей работы - выявление особенностей возрастной и сезонной динамики желудочно-кишечных паразитозов овец бурят-монгольской грубошерстной и бурятского типа забайкальской тонкорунной пород и оценка влияния эймериозно-гельминтозных инвазий и антгельминтиков на иммунобиологическую реактивность овец в условиях Республики Бурятия.
В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:
Исследовать в сравнительном аспекте возрастную и сезонную динамику эймериозно-гельминтозной инвазии овец бурят-монгольской грубошерстной и бурятского типа забайкальской тонкорунной пород в степной зоне Республики Бурятия.
Определить при спонтанном и экспериментальном заражении эйме-риями и желудочно-кишечными гельминтами гематологический и белковый профиль организма ягнят бурят-монгольской грубошерстной и бурятского типа забайкальской тонкорунной пород.
Изучить влияние эймериозно-стронгилятозной инвазии на функциональное состояние клеточного и гуморального звеньев иммунологи-
6 ческой защиты организма овец бурят-монгольской фубошерстной и бурятского типа забайкальской тонкорунной пород в эксперименте.
Провести сравнительный анализ эффективности антгельминтиков — альбамелина и аверсекта - 2 при эймериозно-гельминтозных инвазиях овец.
Оценить действие альбамелина и аверсекта - 2 на комплекс иммунобиологических показателей организма овец зараженных стронгиля-тами желудочно-кишечного тракта.
Научная новизна. Впервые изучена возрастная и сезонная динамика желудочно-кишечных инвазий у овец бурят-монгольской фубошерстной породы в условиях степной зоны Республики Бурятия, а также комплексно исследованы показатели морфологического состава крови, иммунобиологической реактивности овец бурят-монгольской фубошерстной и бурятского типа забайкальской тонкорунной пород в норме и при инвазионной патологии (эймериозно-гельминтозной инвазии). Представлены новые сведения по сравнительному анализу воздействия антгельминтиков альбамелина и аверсекта - 2 на иммунный статус овец спонтанно зараженных стронгилятами желудочно-кишечного тракта.
Практическая значимость. Результаты исследований расширяют представления о степени влияния эймериозно-гельминтозной инвазии и антгельминтиков (альбамелина, аверсекта-2) на иммунный статус овец, что следует учитывать в комплексной оценке последствий этих воздействий на организм.
Полученные данные показывают, что у ягнят при эймериозно-гельминтозных инвазиях наблюдается нестабильность в гуморальных и клеточных специфических и неспецифических факторах иммунологической защиты, что свидетельствует о возможном развитии вторичного иммунодефицита ого состояния и является теоретической основой для разработки методов корригирующей терапии.
Выявление особенности эпизоотологии, сезонной и возрастной динамики смешанных инвазий овец фубошерстных и тонкорунных пород могут учитываться при организации и проведении противопаразитарных лечебно-профилактических мероприятий в овцеводческих хозяйствах Республики Бурятия.
Материалы исследований используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедре паразитологии и фармакологии БГСХА и в научных исследованиях отдела паразитологии ГНУ научно-исследовательского института ветеринарии Восточной Сибири СО РАСХН, г. Чита.
На защиту выносятся следующие положения:
Возрастная и сезонная динамика желудочно-кишечных инвазий у овец в условиях степной зоны Республики Бурятия.
Показатели морфологического и белкового состава крови овец при спонтанной инвазии эймериями и гельминтами.
Влияние эймериозно-стронгилятозной инвазии на комплекс показателей иммунобиологической реактивности овец в эксперименте.
Сравнительный анализ эффективности антгельминтной терапии авер-сектом-2 и альбамелином при эймериозно-гельминтозных инвазиях овец.
Влияние аверсекта-2 и альбамелина на иммунный статус овец инвази-рованных желудочно-кишечными стронгилятами.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на региональном научно-практическом симпозиуме, посвященном 60-летию кафедры паразитологии Бурятской Государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова и 120-летию академика К.И. Скрябина (Улан-Удэ, 1998), научно-практической конференции ветеринарных специалистов и сотрудников БГСХА им. В.Р. Филиппова, посвященной 55-летию Победы (Улан-Удэ, 2000), 1-ой международной конференции, посвященной 70-летию Башкирскому государственному аграр- ному университету (Уфа, 2000), межрегиональной научной конференции, посвященной 60-летию образованию кафедры гистологии и патанатомии БГСХА (Улан-Удэ, 2001), 1-ой международной юбилейной конференции, посвященной 1 і 0-летию со дня открытия проф. К.Н. Виноградовым сибирской двуустки у человек (Томск, 2001).
Публикации результатов исследований. Основные результаты научных исследований отражены в восьми работах.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 196 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложения. Работа иллюстрирована 17 таблицами и 32 рисунками. Список литературы включает 360 источников, из них 53 иностранных.
II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Паразитоценозы и ассоциации паразитов и их роль в заболеваемости сельскохозяйственных животных
В.И. Вернандский (1926) в своих работах о биосфере подчеркивал, что на каждом участке нашей планеты, где существует жизнь, она возможна только в виде ассоциаций (комплексов взаимосвязанных популяциями видов, относящихся к различным таксонам). К.И. Скрябин (1925), систематически исследуя гельминтов, отмечал, что несколько видов гельминтов, пребывающих одновременно в одном хозяине, связаны определенными отношениями не только с хозяином, друг с другом, но и с другими видами паразитов, населяющих этого хозяина. Отечественные ученые (Догель В.А., 1949; Гиляров М.С., 1978; Па-насюк Д.И., 1981, 1984; Петров Ю.Ф., 1985) заключают, что не только гельминты способны формировать сообщество, его формируют также вирусы, бактерии, грибы, простейшие и членистоногие. Такое сообщество получило название паразитоценоз. Теория паразитоценоза была обоснована Е.Н. Павловским (1934, 1937). Автор определил его как совокупность населения организма в его различных органах и частях тела. В процессе эволюции между ними сложились определенные взаимоотношения, которые оказывают большое влияние на организм хозяина и при определенных условиях вызывают ассоциативные заболевания. В понимании Е.Н. Павловского (1955), инфекционная и паразитарная болезнь есть расстройство здоровья организма, вызываемое действием со- членов паразитоценоза, в том числе основного возбудителя болезни, на организм и взаимным влиянием организма больного на его паразитоценоз, при способствующем влиянии факторов среды. Ю.Ф. Петров с соавт. (1998) отмечают, что в зависимости от характера взаимодействия между сочленами паразитоценоза и окружающей среды, которая может быть благоприятной для организма хозяина, болезнь может не развиваться или протекать в легкой стадии. При неблагоприятном характере взаимодействия для организма хозяина болезнь протекает тяжело, нередко с летальным исходом. А.П. Маркевич (1985) предложил новое понятие «микропаразитоце-ноз». Микропаразитоценозы формируются у одной особи соответствующего вида хозяина (овцы, лошади и т.п.) из микропопуляций, имеющихся в его теле паразитов и проникших дополнительно в организм свободножи-вущих, условно-патогенных паразитов (в широком понятии). Д.И. Панасюк (1986) считает, что в зависимости от количества видов паразитов и симбионтов в организме хозяина следует различать моно - и полипаразитарные экологические системы. На основании анализа литературы и собственных исследований Д.И. Панасюк (1984) заключает, что паразитоценоз - это открытая, постоянно меняющаяся во времени равновесная система экологически связанных паразитических организмов и симбионтов, на разных стадиях развития принадлежащих к разным таксонам, локализующимся как внутри, так и на покровах одного из них, именуемого хозяином. Развитие гнотобиологии показывает, что в наше время трудно найти живой организм, даже на уровне клетки, в котором не были бы обнаружены живые существа, относящиеся к другим таксонам.
Например, разные виды, яйца, личинки и половозрелые Metastrongylus spp., являются резер-вуарными хозяевами вирусов чумы свиней (Sen Н. et al., 1961), а в поло-возоелых формах и личинках D. filaria обнаружены эшерихии, пастереллы, столбнячная палочка (Панасюк Д.И., Васильев А.П., Ганюшкин В.Я., 1970). Д.И. Панасюк (1985) на основании собственных и изучения других работ делает заключение, что как паразиты, так и симбионты, проникая в организм хозяев, могут создавать 3 экологические формы сосуществования: 1) Суперпаразитизм (суперсимбиоз), - популяции каждого внедрившегося вида паразитов рассредоточены в тканях и органах ее хозяина. 2) Аллобиофория (гиперпаразитизм) - особи одних видов паразитов находятся внутри особей других видов. 3) Смешанная форма - по типу суперпаразитизма и гиперпаразитизма. Она наиболее распространенна в природе. Е.Н. Павловский (1955) указывал, что между сочленами паразитоце-ноза устанавливаются сложные взаимоотношения, проявляющиеся как си-нергетические, в иных случаях как конкурентные или антагонистические. В природе различают 6 основных типов взаимодействия между организмами: нейтрализм, аменсализм, комменсализм, конкуренция, жертва-эксплуататор, мутуализм. Из них в паразитоценозе удалось выявить 5 типов: нейтрализм, аменсализм, комменсализм, синергизм, антагонизм. Антагонизм (интерфиренция), как указывает Д.И. Панасюк (1984), широко,распространен в паразитоценозе, при этом взаимодействие организмов приводит к частичной или полной гибели одного из видов, или в результате этих отношений организмы меняют степень своей патогенности и вирулентности, образуются слабопатогенные, непатогенные или атипичные формы паразитов. При интенсивной инвазии овец Н. contortus снижается зараженность маршаллагиями и, наоборот, при интенсивной инвазии маршаллагиями уменьшается интенсинвазированность гемонхами (Родионов П.В., 1966; Панасюк Д.И. с соавт., 1978). С. Mapes, R. Coop (1973) отмечали отрицательное влияние нематод сычуга овец Н. contortus на развитие нематоды кишечника Н. battus. З.А. Янгуразова с соавт. (1976) установила, что паразитирование нематоды Syphacia ovelata в эксперименте на мышах способствует качественному и количественному изменению микрофлоры кишечника. О существовании определенной антагонистической взаимосвязи между отдельными сочленами паразитоценоза сообщают также В.В. Филиппов, Э.Х. Даугалиева (1984), М.Ш. Акбаев (1985), Л.И. Лопаткина (1986), Т.Н. Грязнева, Л.Я. Ставцева (1991), Э.Х. Даугалиева с соавт. (1994). Антагонистические взаимодействия организмов между собой в па-разитоценозе чаще осуществляются путем выделения одним из сочленов или некоторыми из них в окружающую среду органических ингибитаров, которые тормозят рост или препятствуют размножению других видов. Влияние может совершаться также путем изменения окружающего субстрата в благоприятную или неблагоприятную сторону, быстрым исчерпыванием пищевых средств. Циркулируя в крови, токсические вещества, выделяемые антагонистами, могут воздействовать на своих противников на значительном расстоянии (пространственный антагонизм). Антагонисты могут менять рН и температуру среды в сторону, неприемлемую для противника. Антагонизм является одним из ведущих путей к установлению моноинфекции или моноинвазии (Панасюк Д.И., 1984). Большую ценность для расшифровки взаимодействия сочленов в па-разитоценозе, представляют работы, выполненные на стыке биологии, физики, биофизики, математики.
Так, в последние годы проведены важные исследования в области физических полей биологических объектов, и установлено, что взаимодействие микроорганизмов осуществляется и путем изменения электрического потенциала, электропроводимости и электромагнитных излучений (Молин Ю.Н., 1982; Гуляев Ю.В., 1983). Е.Н. Павловский (1955) для определения паразитоценоза применил понятие «синергизм» - сосуществование двух организмов, которое приводит к результату, недостижимому каждым из взаимодействующих пар организмов в отдельности. Панасюк Д.И. (1984) синергетические взаимоотношения сводит к следующим понятиям: 1) К изменениям условий обитания, вследствие чего они становятся более благоприятными для других сочленов паразитоцено-за. 2) К образованию веществ, благоприятствующих размножению других видов. 3) К разрушению токсинов, выделяемых одними видами - сочленами паразитоценоза против других. 4) К изменению физиологии одного организма другим. 5) К активному подавлению специфических и неспецифических клеточных и гуморальных факторов иммунитета организма хозяина, что позволяет другим видам легко проникать в этот организм и размножаться в нем. 6) К инокуляции через барьеры организма хозяина микрофлоры личинками гельминтов, обладающих ферментами проницаемости (гиалуронидазой) или специальными приспособлениями (стилетами и т.п.). Д.И. Панасюк с соавт. (1969) изучая взаимное влияние гетеракисов, аскаридий и тифозных бактерий в организме кур, выявили наличие синер-гетических взаимоотношений между гетеракисами и аскаридиями, а также между S. gallinarum, A. galli и Н. gallinarum. Y.M. Rutter, R.Y. Beer (1975) заражали поросят гнотобионтов яйцами трихоцефалов. Наибольший выход личинок гельминта в кишечнике отмечали при введении культуры Lactobacillus и негемолитического штамма Е. coli. Опыты, проведенные М.А. Сидоровым с соавт. (1984) по экспериментальному заражению крупного рогатого скота пастереллами и диктиокаулами показали, что совместное введение этих возбудителей уже через несколько часов приводило к молниеносной форме заболевания. Многие авторы указывают на синергизм эймерий и нематод. Так, В.В. Шаповалов (1973) сообщает, что S. papillosus и ряд кокцидий (Е. аг-loingi, Е. intricata и др.) в опытах на ягнятах ведут себя как синергисты. Подобные отношения между этими видами паразитов наблюдали и М.М. Искаков (1989), А.Н. Островский, М.Н. Кувичкин (1989).
Влияние ассоциативных инвазий на организм спонтанно заражен ных овец бурят-монгольской грубошерстной и бурятского типа забай кальской тонкорунной пород
Представления об адаптационно-защитных реакциях организма при патологических состояниях в значительной мере связаны с количественно-качественной оценкой изменений морфологического состава крови. Результаты наших исследований показали, что ответная реакция организма ягнят обеих пород по отношению к гельминтам и простейшим проявляется изменением состава крови (таблицы 3 и 4). Так, у подопытных ягнят бурят-монгольской грубошерстной и бурятского типа забайкальской тонкорунной пород впервые вышедших на пастбище отмечается уменьшение количества эритроцитов к августу до 6,3 ±0,16 млн./мкл (Р 0,001) и 5,8±0,42 млн./мкл (Р 0,001), соответственно (рис. 12). Затем этот показатель крови несколько увеличился и составил в январе у грубошерстных овец - 9,1± 0,24x10 млн./мкл (Р 0,001) (контроль - 9,8±0,23 млн./мкл (Р 0,001)), у тонкорунных 8,4±0,09 млн./мкл (Р 0,001) (контроль -8,5±0,13 млн./мкл (Р 0,001)). До конца наблюдений (май) уровень эритроцитов не достиг контрольных величин. Одним из показателей, характеризующих реактивность организма, является количество лейкоцитов. На протяжении всего летне-осеннего периода исследований у тонкорунных и грубошерстных ягнят отмечали лейкоцитоз до 15,4±0,34 тыс./мкл (Р 0,001) и 15,5±0,29 тыс./мкл (Р 0,001), соответственно (рис. 13). Зимний и весенний периоды наблюдений характеризуются некоторым снижением числа лейкоцитов в крови зараженных овец обеих пород и к маю их количество составило у тонкорунных двенадцатимесячных овец 9,1 ±0,08 тыс./мкл (Р 0,001) (7,7±0,22 тыс./мкл (Р 0,001) в контроле), у грубошерстных - 9,8±0,15 тыс./мкл (Р 0,001) против 8,9±0,08 тыс./мкл (Р 0,001) в контроле. При исследовании состава лейкоцитов обращает на себя внимание эо-зинофильная реакция крови организма зараженных животных (рис. 14). Наибольшее число эозинофилов приходилось на август и составило у грубошерстных ягнят 10,2±0,49 % (Р 0,001) против 3,5±0,19 % (Р 0,001) в контроле, у тонкорунных - 10,4±0,37 % (Р 0,001) против 2,9±0,23 % (Р 0,001) в контроле. К маю количество этих клеток снизилось до 6,25±0,16 % (Р 0,001) (грубошерстные овцы) и до 7,0±0,27 % (Р 0,001) (тонкорунные овцы), но все же было выше контрольных данных на 2,5 % и на 4,4 %. На протяжении всего периода исследований отмечали моноцитоз. Число моноцитов с июня до сентября у тонкорунных и до октября у грубошерстных ягнят повышалось соответственно с 2,3±0,16 % (Р 0,001) и 2,8±0,25 % (P 0,001) до 5,13±0,23 % (P 0,001) и 5,5±0,38 % (P 0,0C1), затем постепенно снижалось и в мае составило 2,3±0,16 % (Р 0,001) и 3,0±0,19 % (Р 0,001) соответственно. Подобные изменения отмечали и в динамике лимфоцитов. У тонкорунных и грубошерстных ягнят лимфоцитоз достигал 62,6-66,4 % и 62,4-68,3 % против 45,0-61,5 % и 45,0-62,1 % в контроле соответственно (рис. 15).
Гематологический профиль зараженных овец в период наибольшей интенсивности инвазии в июле-сентябре характеризовался кроме того нейтро-фильным лейкоцитозом с увеличением содержания палочкоядерных нейтро-филов у грубошерстных ягнят до 5,0±0,24 % (Р 0,001) против 2,9±0,29 % (Р 0,001) в контроле и у тонкорунных ягнят до 5,6±0,18 % (Р 0,001) против 1,4±0,18 (Р 0,001) в контроле, снижением сегментоядерных нейтрофилов у тонкорунных и фубошерстных ягнят соответственно на 21,9 % и 18,9 % (Р 0,001) и появлением в крови базофилов до 0,7±0,18 % (Р 0,001) (тонкорунные овцы) и до 0,4±0,34 % (Р 0,001) (грубошерстные овцы). Таким образом, подводя итог изучению динамики морфологического состава крови подопытных ягнят обеих пород на фоне постоянного заражения в естественных условиях, следует отметить, что характер изменений гематологической картины для обеих пород животных был однотипен. Сдвиги в морфологическом составе крови выявлялись на протяжении всего периода исследований, а наиболее выраженный их характер отмечался в период наибольшей интенсивности инвазии в августе-сентябре. При этом динамика форменных элементов крови характеризовалась угнетением эритропоэза и усилением действия леикопоэтического аппарата, к основным проявлениям которого можно отнести эозинофилию, лимфоцитоз, моноцитоз и лейкоцитоз со сдвигом влево нейтрофильного звена. По-видимому, изменения, наблюдаемые в крови зараженных гельминтами и эймериями ягнят, в динамике инвазионного процесса, зависели, прежде всего, от количественного и качественного состава паразитоценоза, характера хозяино-паразитных отношений, от возраста, породы овец и условий содержания животных. Белки сыворотки крови находятся в состоянии динамического равновесия, и концентрация общего белка определяется в первую очередь характером происходящих в организме процессов. Его качественное и количественное содержание служит важным показателем состояния зараженного организма ягнят. Поэтому представляет интерес определения динамики белков и их фракций в сыворотке крови ягнят по сезонам года в процессе заражения эймериями и гельминтами. Результаты исследования уровня общего белка и его фракций в крови зараженных гельминтами и эймериями и интактных (контрольных) ягнят обеих пород приведены в таблицах 4 и 5. Сравнивая концентрацию общего белка у опытных и контрольных ягнят, установлено, что она существенным образом достоверно изменяется. Так, у зараженных ягнят тонкорунных и фубошерстных пород к марту наблюдается постепенное уменьшение количества общего белка соответственно с 64,1 ±0,41 г/л до 60,6±0,35 г/л (Р 0,001) и с 58,1 ±0,43 г/л до 50,1±0,24 г/л (Р 0,001), в основном за счет альбуминов. Количество этой белковой фракции достигло наименьшего значения у тонкорунных подопытных овец в январе (12,7±0,18 г/л (Р 0,001)), у фубошерстных в марте (15,1±0,57 г/л (Р 0,001)), при контрольных величинах соответственно 34,8±0,22 и 30,7±0,14 г/л (Р 0,001). Однако к маю (конец наблюдений) происходило увеличение концентрации общего белка и альбуминов. Но, несмотря, на тенденцию к росту эти показатели оставались низкими: общий белок - 63,4±0,45 г/л, против 69,1±0,38 г/л в контроле (Р 0,001) (фу-бошерстные овцы) и 56,8±0,44 г/л против 64,0±0,45 г/л (Р 0,001) (тонкорунные овцы), альбумины - 15,8±1,64 г/л против 30,6±0,16 г/л в контроле (Р 0,001) (грубошерстные овцы) и 14,4±0,27 г/л против 31,3±0,2 г/л (Р 0,001) (тонкорунные овцы). Анализ данных таблиц 5 и 6 показывает, что изменяется и содержание всех глобулиновых фракций. Динамика альфа-глобулиновой фракции белка зараженных ягнят колеблется на протяжении всего периода исследований по сравнению с контрольными величинами. Так, достоверно низкий уровень этого показателя наблюдается у грубошерстных ягнят в августе - 9,2±0,33 г/л (13,4±0,54 в контроле) и у тонкорунных ягнят в сентябре - 6,5±0,25 г/л (11,9±0,22 г/л в контроле).
Более высокий его уровень отмечался у зараженных грубошерстных ягнят в январе и тонкорунных в марте на 4,9 г/л и 0,4 г/л, соответственно. У подопытных ягнят обеих пород достоверно увеличивалось содержание бета - глобулинов. Их концентрация была наибольшей у грубошерстных и у тонкорунных ягнят в сентябре, соответственно 15,1±0,69 г/л (9Д±0,32 в контроле) и 13,4±0,72 г/л (6,6±0,24 в контроле). Затем отмечается некоторое снижение содержания бета - глобулинов. Однако до конца опыта концентрация бета - глобулинов оставалась высокой по сравнению с контролем. На протяжении всего периода исследований мы регистрировали достоверное повышение гамма-глобулиновых фракций (IgGl и IgG2) (рис. 16). Особенно характерно накопление IgGl, наивысшие показатели которого приходились на 12-тимесячный возраст ягнят тонкорунных и грубошерстных пород. В мае они составили соответственно 13,2±0,43 г/л (10,7±0,19 г/л в контроле) и 16,5±0,52 г/л (12,5±0,16 г/л в контроле). К маю происходило увеличение и IgG2 до 9,0±0,32 г/л, против 8,5±0,10 г/л в контроле у БМГ ягнят, до 10,6±0,22 против 8,3±0,25 г/л у БТЗТ ягнят. Таким образом, сопоставляя динамику изменений белкового спектра сыворотки крови зараженных и интактных ягнят бурятского типа забайкальской тонкорунной и бурят-монгольской грубошерстной пород в уело- виях постоянного инвазирования, выявили, что первичное заражение и ре-инвазии животных гельминтами и простейшими приводят к снижению общего белка, в основном за счет альбуминов и альфа - глобулинов, и увеличению бета - и гамма (IgGl и IgG2)-nno6ynHHOB. Нами впервые выявлено, что в организме ягнят бурят-монгольской грубошерстной породы по сравнению с ягнятами бурятского типа забайкальской тонкорунной породы под действием антигенов паразитов, микрофлоры и факторов окружающей среды более интенсивно протекают иммунобиологические процессы, о чем косвенно говорят следующие изменения: более высокий уровень общего белка, альбуминов, бета - и гамма -глобулинов (IgGl и IgG2).
Иммунологический статус овец бурят-монгольской грубошерст ной и бурятского типа забайкальской тонкорунной пород при ассоциа тивной инвазии эймериями и стронгилятами желудочно-кишечного тракта в эксперименте.
У ягнят первой группы (БМГ) после экспериментального заражения паразитами яйца стронгилят обнаруживались с 20-го дня после заражения, и их количество составило 8,3±2,02 в десяти полях микроскопа, с дальнейшим ростом их количества к 60 дню эксперимента до 73,0±3,22 яиц (табл. 7). Ооцисты эймерий выявлялись с 10-ого дня инвазии в количестве 33,0±19,59. Максимальное число их наблюдалось на 20-ый день (308,7± 19,59 ооцист). К 50-му дню после заражения отмечено полное прекращение выделения ооцист эймерий. У ягнят третьей группы (БТЗТ) наблюдалась аналогичная динамика копрологических показателей, только с иными цифровыми данными. Так, в фекалиях зараженных тонкорунных ягнят яйца нематод также обнаруживали на 20-ый день после заражения (10,3±0,88), причем их количество быстро нарастало и к 60-му дню насчитывалось 83,0±1,0 экземпляра в десяти полях микроскопа. На 10-ый день опытов также как у грубошерстных ягнят стали регистрировать выделение ооцист эймерий до 38,0±1,53 экз. Через 10 дней их число достигло наивысших величин - 318,7±7,12, затем к 40-му дню снизилось до 86,0±3,79 и к 50-му дню инвазии ооцисты эймерий не обнаруживались вследствие прекращения препатентного и патентного периодов развития у простейших. Анализируя полученные данные, можно заключить, что животные обеих пород после однократного экспериментального заражения оказались инвазированными эимериями и стронгилятами желудочно-кишечного тракта, однако интенсивность инвазии данными паразитами ягнят тонкорунной породы оказалась несколько выше по сравнению с таковой грубошерстных ягнят. Морфологические показатели крови и уровень гемоглобина являются одними из критериев оценки развития и тяжести патологического процесса, а также реактивности и резистентности организма. Поэтому в качестве диагностического теста состояния организма экспериментальных овец, нами было проведено исследование гематологических показателей. Экспериментальные данные показали (табл. 8), что у зараженных стронгилятами желудочно-кишечного тракта и эймериями тонкорунных и грубошерстных ягнят отмечаются значительные сдвиги в морфологических показателях состава крови, характер изменений которых был аналогичен гематологическим изменениям у спонтанно зараженных овец. У всех инвазированных животных в динамике инвазионного процесса достоверно уменьшается уровень гемоглобина и число эритроцитов и увеличивается количество лейкоцитов.
По сравнению с исходными данными концентрация гемоглобина уже на 2-ой день инвазии достоверно снизилась у ягнят первой группы (БМГ) на 20,2 г/л, у ягнят третьей группы (БТЗТ) на 23,0 г/л и динамично понижался до 30-го дня после заражения до 76,4±2,44 г/л у ягнят первой группы (БМГ) и до 75,1 ±0,99 г/л в третьей группе (БТЗТ). В то же время количество гемоглобина у контрольных ягнят на протяжении всего периода исследований оставалась в пределах 108,3-113,0 г/л (вторая группа (БМГ)) и 111,7-125,5 г/л (четвертая группа (БТЗТ)). Также из таблицы 8 видно, что динамично изменялось содержание эритроцитов в крови ягнят первой и третьей групп по сравнению с контрольными данными, где оно сохранялось почти на одном уровне. Снижение количества эритроцитов отмечали с первых дней после заражения. Минимальное их число было у тонкорунных на 20-ый и у грубошерстных ягнят на 30-ый дни опыта и составило 5,2±0,20 млн./мкл (Р 0,01) и 5,1±0,11 млн./мкл (P 0,01), с последующим подъемом до 7,3±0,17 млн./мкл (Р 0,001) и 7,0±0,11 млн./мкл (Р 0,001) к 60-му дню наблюдений, соответственно. У всех зараженных ягнят независимо от породы отмечается до 2-го дня исследования достоверное снижение числа лейкоцитов до 9,8±0,20 тыс./мкл (БМГ) и 9,4±0,35 тыс./мкл (БТЗТ) против 11,1 ±0,46 тыс./мкл (БМГ) и 12,0±0,41 тыс./мкл (БТЗТ) в контроле, с последующим их увеличением на 20-ый день после заражения. Так, у ягнят первой (БМГ) и третьей (БТЗТ) групп их количество составило на этот период соответственно 14,2±0,20 тыс./мкл и 14,5±0,25 тыс./мкл. В дальнейшем наблюдали тенденцию к снижению числа лейкоцитов, но все же их уровень у ягнят обеих пород к 60-му дню исследований оставался высоким по сравнению с данными контроля и составил соответственно 10,5±0,30 тыс./мкл (Р 0,001) и 9,9±0,06 тыс./мкл (Р 0,001) против контрольных 9,2±0,21 тыс./мкл (Р 0,001) и 9,5±0,23 тыс./мкл (Р 0,001). Существенные изменения обнаружены в лейкограмме крови организма подопытных зараженных ягнят. У ягнят обеих пород после инвазирования достоверно изменялось содержание эозинофилов в крови. Эозинофильная реакция проявлялась у ягнят первой и третьей групп уже на 2-ой день опыта - 3,7±0,67 и 4,7±0,33 % (против в контроле - 2,3±0,33 и 4,3±0,88 %) и достигла максимума на 30-ый день инвазии - 10,7±0,67 и 10,7±0,88 % (против контрольных - 3,3±0,33 и 4,0±0,0 %) соответственно. Затем количество эозинофилов упало и к концу наблюдений, на 60 день, их число составило у ягнят первой группы 5,0±0,0 % против 2,67±0,33 %, а у ягнят третьей группы 5,0±1,0 %, против 4,0±0,0 % в контроле. Обращает на себя внимание моноцитоз крови зараженных животных. Число моноцитов у ягнят первой группы повышалось и к 10-му дню наблюдений составило 5,0±0,0 % против контрольных величин - 3,3±0,33 %, затем отмечалась тенденция к уменьшению этого показателя. Аналогичным образом изменялось количество моноцитов и у ягнят третьей группы, за исключением того, что к 60-му дню исследований в их крови выявлялась моноцитопения (2,7±0,33 % против 4,0±0,29 % в контроле). Подобная картина наблюдается и в динамике лимфоцитов.
У подопытных грубошерстных ягнят лимфоцитоз достигал 53,0±0,58 % (Р 0,001) против 47,7±0,33 % (Р 0,001) в контроле, у тонкорунных -51,3±0,33 % (Р 0,001) против 44,3±0,88 % (Р 0,001) в контроле. К концу исследований в крови тонкорунных ягнят по сравнению с контролем выявлялась незначительная лимфоцитопения, составляющая 43,3±0,88 % (Р 0,001) против 45,0±1,53 % (Р 0,01). Таким образом, экспериментальное инвазирование ягнят стронгилятами желудочно-кишечного тракта и эймериями вызывает существенные гематологические изменения, выражающиеся анемией, эритропенией и лейкоцитозом. При анализе лейкограммы установлено, что при заражении имело место выраженная эозинофилия, незначительная базофилия, моно - и лимфоцитоз, нейтрофилия с регенеративным ядерным сдвигом влево. Кровь это важнейший фактор поддержания постоянства внутренней среды организма (гомеостаза). Состав крови в норме колеблется в очень небольших пределах, тогда как при развитии патологических процессов и нарушении функций органов и тканей меняется и морфологический, и белковый состав крови. Поэтому динамика белков и их фракций в сыворотке крови овец может служить важным показателем иммунобиологического состояния организма-хозяина и в какой-то мере служить тестом заражения животных. Данные уровня общего белка и его фракций в сыворотке крови представлены в таблице 9. Из таблицы видно, что неспецифические изменения крови вызваны патогенным действием стронгилят желудочно-кишечного тракта и эймерий. Это отображает, наряду с изменением морфологического состава крови, значительные колебания концентрации общего белка. Так, уже первое соприкосновение паразитов с тканями организма ягнят, их внедрение в стенку и эпителиальные клетки кишечника вызвали достоверное снижение концентрации общего белка. Оно прогрессировало до 20-го дня инвазии до 55,9±2,34 г/л при исходном уровне 68,1 ±0,24 г/л у ягнят первой группы, и 55,3±2,73 г/л при исходной величине 62,7±0,17 г/л у ягнят третьей группы. В последующие 40 суток наблюдалось повышение уровня общего белка у ягнят первой и третьей групп соответственно до 66,5±0,07 (Р 0,001) г/л и 60,3±0,07 (Р 0,001) г/л. Однако, несмотря на увеличение, эти показатели оставались достоверно ниже контрольных величин на 2,5 и 2,9 г/л. Уменьшение содержания общего белка происходит в основном за счет альбуминов.
Сравнительная эффективность антгельминтных препаратов на фоне ассоциативных паразитозов у овец
Нашими предыдущими исследованиями по изучению патогенного влияния смешанных форм инвазий на организм овец в естественных и экспериментальных условиях показано, что ответ макроорганизма на заражение различными видами паразитов со стороны ряда гуморальных и клеточных специфических и неспецифических факторов иммунитета неадекватный. Он свидетельствует о возможном развитии вторичного иммунодефицитного состояния, что является теоретической основой для разработки эффективных методов профилактики и терапии, направленных против возбудителей паразитарных болезней. В этом отношении представляют интерес препараты, обладающие широким антипаразитарным действием. Исследования проводили в условиях производства СПК «Удинский» Хоринского района Республики Бурятия, с целью определения эффективности альбамелина и аверсект-2 (фармации) при эймериозно-гельминтозной инвазии в сравнительном аспекте. Антгельминтную эффективность препаратов изучили на 350-ти овцематках бурят-монгольской грубошерстной породы в возрасте 1,5-2-ух лет спонтанно ин Базированных желудочно-кишечными паразитами. Животных разделили на две подопытные по 150 овец и одну контрольную (п=50) группы. Овцы находились в одинаковых условиях кормления и содержания. При однократном гельминтоовоскопическом исследовании фекалий овец до дегельминтизации была установлена 100,0 % зараженность животных эймериями и гельминтами (стронгилята желудочно-кишечного тракта, стронгилоидесы, мониезии). Овец 1-ой подопытной группы дегельминтизировали альбамелином в дозе 0,05 г/кг массы животного перорально, в форме водной суспензии. Овцам 2-ой подопытной группы иньецировали подкожно в бесшерстный уча- сток внутренней стороны предплечья аверсект-2 в дозе 1 мл/50 кг массы тела. Препараты применялись однократно. Эффективность антгельминтиков оценивали по результатам анализов проб фекалий по 10 % от каждой подопытной группы и 10 проб от контрольных овец по методу Дарлинга и микроско-пированием в одном поле зрения на 2, 6, 8 и 10 недели после дегельминтизации. Как видно из таблицы 15 альбамелин и аверсект-2 через две недели после дегельминтизации обеспечили 100,0 % антгельминтный эффект против стронгилят желудочно-кишечного тракта, стронгилоидесов и мониезий. Оба препарата после применения не повлияли на экстенсивность инвазии эйме-риями, которая равнялась 100,0 %, но уровень интенсивности инвазии понизился до 18-49 экз. через восемь недель после лечения, против исходных величин - 121,0-981,0 экз. в группе животных леченных аверсект-2.
А у овец получивших альбамелин интенсивность эймериозной инвазии составила 11-50 ооцист в этот же срок наблюдений, при первоначальном уровне - 117,0-920,0 ооцист. М.Ш. Акбаев (1998) утверждает, что дегельминтизация не может про-филактировать реинвазию восприимчивых животных, если в окружающей среде сохраняется инвазионное начало. Это мнение было подтверждено и нашими последующими овоскопическими исследованиями фекалий от де-гельминтизированных овец, находящихся на пастбищном содержании. Так, в ходе исследований на 6, 8 и 10 недели после дегельминтизации животных получили следующие данные. После лечения альбамелином овцы в течение шести недель не выделяли яйца гельминтов, но сохранялась 100,0 % эймериозная инвазия при интенсивности инвазии от 11,0 до 72,0 ооцист. Первые яйца стронгилят желудочно-кишечного тракта (интенсивность инвазии 1,0-4,0, экстенсинвазированность 53,3 %) и мониезий (интенсивность инвазии 1,0-3,0, экстенсинвазированность 46,7 %) появились к восьмой неделе, а к десятой их количество увеличилось до 1,0-10,0 при экстенсинвазиро-ванности до 53,3 %, и 1,0-6,0 при экстенсинвазированности 46,7 %, но было меньше, чем у контрольных овец (интенсивность инвазии 3,0-15,0, экстен-синвазированность 100,0 % и интенсивность инвазии 1,0-13,0, экстенсинва-зированность 53,3 %). Кроме того, у овец к десятой недели в фекалиях были обнаружены яйца строигилоидесов (интенсивность инвазии 1,0-2,0, экстен-синвазированность 33,3 %). Несколько иная динамика выделения яиц гельминтов и ооцист эймерий прослеживалась у овец обработанных аверсектом-2. Так, полученные данные на 6, 8 и 10 недели после дегельминтизации свидетельствовали о том, что через 6-8 недель овцы были свободны от гельминтов и были зараженными эймериями на 73,3 %, при интенсивности инвазии 18,0-49,0, которая была значительно ниже контрольных данных (экстен-синвазированность 100,0 %, при интенсивности инвазии 322,0-1120,0 ооцист). Выделение яиц гельминтов отмечалось к десятой неделе после дегельминтизации. В этот период были обнаружены яйца мониезий (экстенсинва-зированность 33,3 %, при интенсивности инвазии 1,0-2,0), стронгилят желудочно-кишечного тракта (экстенсинвазированность 26,7 %, при интенсивности инвазии 1,0 экз.) и ооцисты эймерий (экстенсинвазированность 100,0 %, при интенсивности инвазии 20,0-51,0), численные значения которых были ниже по сравнению с копроовоскопическими данными контрольных овец. Таким образом, препараты широкого противопаразитарного действия альбамелин и аверсект-2 оказали 100 % терапевтический эффект против стронгилят желудочно-кишечного тракта, стронгилоидесов и мониезий и способствовали снижению интенсивности эймериозной инвазии. Полученные данные, кроме того, свидетельствуют об антгельминтной эффективности аверсекта-2 в течение восьми недель пастбищного периода в отличие от аль-бамелина, который профилактировал реинвазию овец до шести недель. Опыты проводили в условиях ОТФ «Хурумша» Иволгинского района Республики Бурятия и в лаборатории кафедры паразитологии и эпизоотологии БГСХА им. В.Р.Филиппова. Использовали 12 баранчиков-аналогов бурятского типа забайкальской тонкорунной породы в возрасте 8-ми месяцев, которых распределили на четыре группы. Первая, вторая и третья группы по три животных в каждой находились на пастбищном содержании и были спонтанно заражены желудочно-кишечными стронгилятами.
Четвертая группа (п=3) служила здоровым контролем. Ягнятам 1-ой опытной группы ввели подкожно аверсект-2 в дозе 1 мл /50 кг массы тела однократно. Ягнятам 2-ой опытной группы - перорально в виде водной суспензии альбамелин в дозе 0,05 г/кг, однократно. 3-ья группа служила зараженным контролем, 4-ая - здоровым контролем. Об иммунобиологической реактивности судили по морфологическим показателям крови, концентрации гемоглобина, общего белка и циркулирующих иммунных комплексов, лизоцимной активности сыворотки крови, по содержанию относительного и абсолютного количества Т — и В — лимфоцитов в крови. Изучение интересующих нас показателей проводили до введения препаратов и на 3,15 и 40-ой дни опыта (таблицы 16-17). По данным копроовоскопических исследований у овец (1 и 2 группы) после введения альбамелина и аверсекта до конца наблюдений не обнаруживались яйца гельминтов. А в группах «здоровый контроль» и «зараженный контроль» показатели инвазированности оставались на прежнем уровне. Результаты гематологических исследований (табл. 16) показали, что применение антгельминтиков неоднозначно повлияло на эритропоэз и лей-копоэз. Содержание гемоглобина (рис. 23) после дегельминтизации в 1-ой и 2-ой группах было достоверно выше по сравнению с исходным уровнем и зараженным контролем, исключение составили 3-й сутки, когда концентрация гемоглобина практически оставалась на прежнем уровне в группе «альбаме-лин» - 81,0±0,58 г/л, и продолжала снижаться в группе «аверсект» с 82,5± 1,76 г/л до 80,1 ±0,62 г/л (Р 0,001). Однако в последующем наблюдается повышение содержания гемоглобина, и к 15-му дню этот показатель достиг 91,67±1,28 г/л (1-ая группа) и 95, 7±1,17 г/л (2-ая группа). А к 40 дню уровень гемоглобина в обеих группах незначительно отличался между собой: в 1-ой группе концентрация гемоглобина составила 108,7±0,43 г/л (Р 0,001), во 2-ой - 109,7±0,48 г/л (Р 0,001), у интактных овец - 120,2±0,75 г/л (Р 0,001), в группе зараженных животных - 85,1 ±2,23 г/л. Большой скачок в количественном содержании эритроцитов заметен к 15-му дню наблюдений: в группе «альбамелин» до 8,6±0,39 млн. / мкл, в группе «аверсект» до 9,6±0,56 млн. / мкл. К 40-му дню число эритроцитов в этих группах не имели существенных отличий от уровня показателей - «здоровый контроль» (рис. 24).
