Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Биоморфологические особенности штаммов echinococcus granulosus 13
1.1. Литературный обзор 13
1.2. Материалы и методы 30
1.3. Результаты исследований 3 4
1.3.1. Эпизоотологические особенности штаммов Е. granulosus 34
1.3.2. Биологические особенности штаммов Е. granulosus 40
1.3.2.1. Сроки преимагиналъного развития Е. granulosus у собак 40
1.3:2.2. Восприимчивость лабораторных мышей к внутрибрюшинному заражению протосколексами Е. granulosus от разных хозяев 41
1.3.3. Морфологические особенности штаммов Е. granulosus 44
1.4. Обсуждение результатов 52
1.5. Заключение 59
ГЛАВА 2. Разработка и испытание лекарственных препаратов при гельминтозах собак 61
2.1. Литературный обзор 61
2.2. Материалы и методы 77
2.3. Результаты исследований 80
2.3.1. Испытание новых лекарственных препаратов при цестодозах собак 80
2.3.1.1. Разработка и изучение эффективности гидробунида при цестодозах собак 80
2.3.1.2. Эффективность эпсипрантела (цестекса) при эхинококкозе собак 81
2.3.2. Разработка и изучение химиопрофилактического действия 10%-ной силиконовой суспензии азинокса и азинпрола в экспериментальных условиях при цестодозах собак 83
2.3.3. Испытание эффективности таблеток гидробунида при цестодозах собак в производственных условиях 85
2.3.4. Химиопрофилактическая эффективность азинпрола в производственных условиях 86
2.3.5. Испытание эффективности новых комбинированных лекарственных форм препаратов при гельминтозах собак 88
2.3.5.1. Разработка и изучение эффективности азинила 88
2.3.5.2. Оценка антигелъминтной эффективности зарубежных комбинированных форм препаратов при гельминтозах собак 93
2.3.5.2.1. Оценка антигелъминтной эффективности пратела при гельминтозах собак 94
2.3.5.2.2. Оценка антигелъминтной эффективности азипирина при гельминтозах собак 95
2.3.5.2.3. Оценка антигелъминтной эффективности препарата дронтал джуниор при нематодозах собак 96
2.4. Обсуждение результатов 98
2.5. Заключение 104
ГЛАВА 3. Дирофиляриоз собак 106
3.1. Литературный обзор 106
3.1.1. Биология и морфология дирофилярий 106
3.1.2. Распространение дирофиляриоза собак 111
3.1.3. Диагностика дирофиляриоза 125
3.1.4. Влияние дирофилярий на организм собак 131
3.1.5. Терапия и профилактика дирофиляриоза собак 136
3.2. Материалы и методы 145
3.3. Результаты исследований 150
3.3.1. Аспекты эпизоотологии дирофиляриоза собак в Московском регионе 150
3.3.2. Прижизненная диагностика и влияние дирофилярий на организм животных 157
3.3.2.1. Сравнительное изучение эффективности методов обнаружения микрофилярий в крови собак 157
3.3.2.2. Жизнеспособность микрофилярий D. immitis в цитратной крови собак при хранении 159
3.3.2.3. Клинические проявления дирофиляриоза собак 160
3.3.2.4. Морфологические и биохимические изменения крови при дирофиляриозе собак 164
3.3.3. Терапия и профилактика дирофиляриоза 169
3.4. Обсуждение результатов 173
3.5. Заключение 180
Выводы
- Восприимчивость лабораторных мышей к внутрибрюшинному заражению протосколексами Е. granulosus от разных хозяев
- Разработка и изучение химиопрофилактического действия 10%-ной силиконовой суспензии азинокса и азинпрола в экспериментальных условиях при цестодозах собак
- Оценка антигелъминтной эффективности препарата дронтал джуниор при нематодозах собак
- Сравнительное изучение эффективности методов обнаружения микрофилярий в крови собак
Введение к работе
Актуальность проблемы. В начале XXI века паразитарные болезни продолжают наносить значительный ущерб человечеству. Это касается не только негативного воздействия на здоровье людей и животных, но и является следствием больших экономических потерь, связанных с сокращением валового национального продукта и затратами общества на лечение и ликвидацию последствий массового распространения инвазионных болезней. Значительную эпидемическую опасность для жителей как городской, так и сельской местности представляют собаки, поскольку они являются хозяевами ряда гельминтов, опасных для человека. Эта опасность многократно возрастает из-за большого числа неконтролируемых бродячих животных. Так, число зарегистрированных больных токсокарозом людей в России за последние 15 лет увеличилось более чем в 100 раз. Произошел трехкратный рост заболеваемости эхинококкозами, причем 14,4% среди больных составляют дети (СергиевВ.П., Филатов Н.Н., 2006). Отмечено резкое увеличение распространенности и риска заражения дирофиляриозом — единственным в умеренном климате гельминтозом с трансмиссивным путем передачи через комаров. В последние годы, как в России, так и в странах Западной Европы дирофиляриоз продвигается на север. Случаи дирофиляриоза человека зарегистрированы в 39 субъектах Российской Федерации, расположенных в пределах 41 - 58 с.ш. Основная масса больных -518 чел. (90,9%) зарегистрирована в Европейской части России, в том числе, в зоне устойчивого риска - 386, в зоне низкого риска - 96 и в зоне умеренного риска - 36 случаев (Дарченкова Н.Н. и др., 2009).
Отмечая факторы, влияющие на эпидемические и эпизоотические процессы при паразитозах, необходимо сослаться на Б.Л. Черкасского (2008), который полагал, что эпидемический процесс при инфекционных и инвазионных болезнях в современных условиях характеризуется качественным своеобразием. Наиболее значимы в этом своеобразии
следующие факторы: искусственно изменяемая эволюция возбудителей под воздействием химических, физических и биологических факторов научно-технического развития; снижение естественной сопротивляемости людей и животных к возбудителям разных болезней под воздействием различных химических соединений, физических факторов, лекарственных препаратов, нервно-эмоционального напряжения и т.п.; смена или активизация механизмов передачи возбудителей болезни в результате меняющихся условий жизни.
Цель и задачи исследований. Целью нашей работы было охарактеризовать штаммы Echinococcus granulosus по их биологическим и морфологическим свойствам и эпизоотологическим особенностям, разработать и испытать новые лекарственные формы препаратов при цестодозах и смешанных гельминтозах собак, изучить эпизоотическую ситуацию по дирофиляриозу собак в Московском регионе, усовершенствовать прижизненную диагностику и испытать новые средства и схемы терапии и профилактики инвазии.
Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
Изучить особенности распространения ларвального эхинококкоза сельскохозяйственных животных с выявлением активно функционирующих циклов паразита в разных регионах СНГ.
Уточнить сроки развития разных штаммов Е. granulosus до имагинальной стадии в организме собак.
Выявить восприимчивость лабораторных мышей к заражению Е. granulosus от разных хозяев.
Сравнить морфологические признаки штаммов (личинок и взрослых цестод) Е. granulosus.
Провести испытания по разработке и оценке эффективности в экспериментальных и производственных условиях новых
7 цестодоцидных и комбинированных форм препаратов для терапии и профилактики цестодозов и смешанных гельминтозов собак.
Изучить распространение, сезонную и возрастную динамику дирофиляриоза собак в Московском регионе.
Разработать новый метод и провести сравнительное изучение эффективности методов обнаружения микрофилярий в крови собак.
Установить сроки жизнеспособности микрофилярий в крови собак при хранении.
Установить клинические проявления дирофиляриоза собак, выявить влияние вида возбудителя и степени инвазии на гематологические показатели животных.
Разработать оптимальные схемы терапии и профилактики дирофиляриоза собак.
Научная новизна. Впервые выявлены активно функционирующие циклы Е. granulosus в разных регионах СНГ. Установлены различия свиного, бычьего, овечьего и верблюжьего штаммов Е. granulosus по срокам развития у дефинитивного хозяина (собаки), особенностям развития вторичных ларвоцист у лабораторных мышей, морфологии личинок и взрослых форм паразита.
Усовершенствована и испытана в экспериментальных и производственных условиях лекарственная форма празиквантела с полимерами — азинпрол. Оптимальное соотношение названных компонентов позволило значительно (до 6 месяцев) продлить профилактическое действие празиквантела против цестод и снизить кратность обработки собак до 2 раз в год. Разработана лекарственная форма и изучены в экспериментальных и производственных условиях цестодоцидные свойства ресинтезированного препарата бунамидина гидрохлорида. Разработана комбинированная лекарственная форма на основе азинокса и нилверма — азинил, изучены ее фармакотоксикологические и терапевтические свойства при смешанных гельминтозах собак.
Впервые в Московском регионе выявлено распространение дирофиляриоза собак. Установлены два вида дирофилярий: D. immitis и D. repens. Выяснено влияние пола, породы и условий содержания собак на зараженность дирофиляриями. Разработан и испытан в производственных условиях метод прижизненной диагностики дирофиляриоза собак. Установлены сроки жизнеспособности микрофилярий в пробах крови собак при хранении. Выявлено влияние дирофилярий на организм собак в зависимости от вида возбудителя и степени инвазии. Впервые в России изучено макрофилярицидное действие препаратов меларсомина и абиктина. Разработана и испытана в производственных условиях наиболее рациональная схема профилактики дирофиляриоза собак абиктином в условиях Центрального региона России.
Практическая ценность и внедрение результатов исследований. Материалы исследований, выполненные автором самостоятельно, а также совместно с другими учеными и специалистами были использованы при подготовке следующих нормативных документов:
Рекомендации по борьбе с имагинальным и ларвальным эхинококкозом сельскохозяйственных животных. Утверждены Главным управлением ветеринарии с Государственной ветеринарной инспекцией 31.10.90г. № 043-4.
Таблетки гидробунида. Технические условия ТУ 10.07.117-91. Утверждены ГУВ при Госкомиссии Совмина СССР по продовольствию и закупкам 16.04.91г.
Временное наставление по применению таблеток гидробунида при цестодозах собак. Утверждено ГУВ ГК Совмина СССР по продовольствию и закупкам № 043-5 от 16.04.91г.
Временное наставление по применению азинпрола при цестодозах собак. Утверждено ГУВ ГК Совмина СССР по продовольствию и закупкам № 044-3 от 24.01.91г.
Фенапэг. Технические условия ТУ 9310-029-00008064-96. Утверждены Департаментом ветеринарии МСХРФ 14.05.96г.
Наставление по применению фенапэга при цестодозах собак. Утверждено Департаментом ветеринарии МСХ РФ 14.05.96г. № 13-4-2/605.
СанПиН 3.2.569-96 «Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации», Москва. Минздрав России, 1997. — 166 с. (Утверждены 31.10.96г.)
Азинил. Технические условия на опытную партию ТУ ОП 93-84-00008064-97. Утверждены Департаментом ветеринарии МСХ РФ 18.11.97г.
Временное наставление по применению азинила при гельминтозах собак и кошек. Утверждено Департаментом ветеринарии МСХ РФ 18.11.97г. №13-4-2/1085.
Инструкция о мероприятиях по предупреждению и ликвидации заболеваний животных гельминтозами. — М.: Информагротех. МСХиП РФ, 1999.- 72 с.
Методические указания по лабораторной диагностике цистного эхинококкоза и гидатидоза животных. Одобрены секцией «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии 27.09.2001г.
Методические указания МУ 3.2.1756-03. «Эпидемиологический надзор за паразитарными болезнями», Москва. Минздрав России, 2003. - 84 с. (Утверждены 28.03.2003 г.)
13.СанПиН 3.2.1333-03 «Профилактика паразитарных болезней на
территории Российской Федерации», Москва, Минздрав России, 2003. -
68 с. (Утверждены 28.05. 2003 г.) 14. Рекомендации по профилактике дирофиляриоза собак. Одобрены
секцией «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной
медицины Россельхозакадемии 23.05.2003г.
15. Методические рекомендации по лабораторной диагностике цистного
(Echinococcus granulosus) и альвеолярного (Echinococcus multilocularis)
эхинококкозов и гидатидозов животных. Одобрены секцией
«Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины
Россельхозакадемии 28.05.2004г.
16. Методические указания МУ 1880-04 «Профилактика дирофиляриоза»,
Москва, Минздрав России, 2004. - 29 с. (Утверждены 03.03.2004г.)
17.Рекомендации по диагностике, лечению и профилактике дирофиляриоза собак в Московском регионе. Одобрены секцией «Инвазионные болезни животных» отделения ветеринарной медицины РАСХН 29.05.2008г. Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены на Ученых советах и отчетных научных конференциях ВИГИС (1987 - 2009); пятой Закавказской конференции по паразитологии (Ереван, 1987); пятой национальной конференции по паразитологии (Варна, 1987); 12-й, 15-й международных конференциях «Всемирной ассоциации за прогресс ветеринарной паразитологии» (Монреаль, 1987, Иокогама, 1995); научных конференциях ВОГ «Гельминтология сегодня: проблемы и перспективы» (Москва, 1989), «Эколого-биологические и фаунистические аспекты гельминтозов» (Ереван, 1991), «Гельминтозоонозы — меры борьбы и профилактика» (Москва, 1994), «Актуальные вопросы теоретической и прикладной трематодологии и цестодологии» (Москва, 1997), «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 1999, 2002 - 2005, 2007 - 2009); Всесоюзных научно-практических конференциях «Современное состояние и перспективы оздоровления хозяйств от эхинококкоза и цистицеркоза» (Фрунзе, 1987, Чимкент, 1989, Караганда, 1990, Москва, 1993); седьмом Международном конгрессе паразитологов (Париж, 1990); научно-практическом совещании «Паразитарное загрязнение мегаполиса Москвы» (Москва, 1994); четвертой Международной научной конференции, посвященной 125-летию со дня рождения академика К.И. Скрябина и 70-летию кафедры медицинской
биологии и общей генетики Витебского государственного медицинского университета «Современные проблемы общей, медицинской и ветеринарной паразитологии» (Витебск, 2004); межрегиональной научной конференции Российской Федерации служебного собаководства (Москва, 2004); 6 - 8, 12, 15 Международных конгрессах по проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных (Москва, 1998 — 2000, 2004, 2007).
Личный вклад соискателя. Представленная диссертационная работа является результатом 23-летних научных исследований автора. Основная часть работы выполнялась под руководством академика РАСХН Бессонова А.С. Все исследования по биолого-морфологической характеристике штаммов Echinococcus granulosus и дирофиляриозу собак выполнены соискателем лично, часть раздела по разработке и испытанию новых лекарственных форм препаратов при цестодозах собак выполнена совместно с кандидатом ветеринарных наук Белоусовым М.Н., не возражающим в использовании результатов совместных исследований. Основные положения, выносимые на защиту.
Биоморфологические особенности штаммов Echinococcus granulosus.
Разработка и испытание цестодоцидных лекарственных форм для терапии и профилактики цестодозов собак.
Разработка и испытание комбинированных лекарственных форм препаратов при смешанных гельминтозах собак.
Эпизоотология дирофиляриоза собак в Московском регионе.
Прижизненная диагностика дирофиляриоза и влияние инвазии на организм собак в зависимости от вида возбудителя.
Оптимальные схемы терапии и профилактики дирофиляриоза собак.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 77 научных работ, в том
числе 18 работ в изданиях, рекомендованных ВАК РФ для докторских
12 диссертаций, в которых изложены основные положения и выводы по изучаемым вопросам.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 244 страницах компьютерного текста, включает 30 таблиц, 15 рисунков, состоит из введения, 3 глав собственных исследований с обзором литературы, выводов и практических предложений. Список литературы включает 536 источников, в том числе 256 отечественных и 280 зарубежных авторов.
Восприимчивость лабораторных мышей к внутрибрюшинному заражению протосколексами Е. granulosus от разных хозяев
Биологические особенности штаммов изучали по срокам преимагинального развития Е. granulosus у собак и восприимчивости беспородных белых мышей к внутрибрюшинному заражению протосколексами от разных хозяев. Для заражения собак и мышей использовали протосколексы из ларвоцист печени овец из Казахстана, крупного рогатого скота из Молдавии, свиней из Белоруссии и верблюдов из Узбекистана.
Опыт по срокам преимагинального развития штаммов Е. granulosus провели в марте-мае 1988 года на 22 беспородных собаках в возрасте до 1 года на базе экспериментального хозяйства ВИГИС «Курилово». Животных содержали на огороженной площадке с бетонированным покрытием в индивидуальных металлических клетках с поддонами. Кормили согласно нормам сырым мясом (калтыки), поили водой из артезианской скважины. Уход осуществляли с соблюдением мер личной профилактики (WHO, 1981). За 14 суток до заражения собак дегельминтизировали дронталом с последующим трехкратным гельминтоовоскопическим исследованием методом Щербовича и последовательного промывания. В опыте использовали собак, свободных от гельминтов. Перед заражением собак оценивали жизнеспособность протосколексов по окрашиванию 0,01%-ным водным раствором генцианвиолета. Погибшие протосколексы приобретали синюю окраску, а живые не окрашивались и при подогреве до 37 С активно двигались (Латуне Ю.Ю., 1958). Каждой собаке скормили индивидуально с молоком по 25000±1100 жизнеспособных протосколексов. В течение опыта наблюдали за общим состоянием собак. Начиная с 30-го дня после заражения, ежедневно фекалии собак исследовали методами последовательного промывания и Щербовича до обнаружения в них яиц или члеников паразита.
Для определения приживаемости протосколексов на 75-й день после заражения всех собак усыпили, предварительно выдержав сутки на голодной диете, и тонкий кишечник подвергли полному гельминтологическому вскрытию. Кишечник разделили на 5-6 равных отрезков, каждый из которых разрезали продольно, поместили в стеклянный цилиндр емкостью їли исследовали отдельно путем промывания теплой водой. Цестоды постепенно отходили от слизистой и оседали на дне цилиндра. Для полного извлечения гельминтов слизистую оболочку кишечника тщательно соскабливали шпателем. Соскоб несколько раз промывали, надосадочную жидкость после просветления осторожно удаляли, а осадок порциями просматривали в чашках Петри под микроскопом (МБС-1 х16) и подсчитывали число паразитов. Приживаемость паразитов определяли в процентах по отношению числа обнаруженных гельминтов в кишечнике собак к дозе заражения.
Опыт по восприимчивости лабораторных мышей к внутрибрюшинному заражению протосколексами Е. granulosus от разных хозяев провели в 1988-1989 г.г. на базе вивария ВИГИС. Фертильные ларвоцисты получали от спонтанно инвазированных Е. granulosus овец из Казахстана, свиней из Белоруссии, крупного рогатого скота из Молдавии и верблюдов из Узбекистана. Цисты, выделенные из печени животных, промывали проточной холодной водой в течение 10 мин. Для стерилизации ларвоцист последние помещали на 10-15 мин. в 0,5%-ный раствор перманганата калия, затем наружную стенку цисты обрабатывали 1%-ным спиртовым раствором йода. Стерильным шприцем отсасывали эхинококковую жидкость. С помощью ножниц и пинцета рассекали оболочку цисты и, придерживая ее пинцетом, стерильной пипеткой, введенной в образовавшуюся полость, соскабливали и собирали выводковые капсулы с протосколексами. Жидкость с протосколексами отстаивали в течение 10-15 мин. при комнатной температуре, затем осторожно сливали, а осадок из протосколексов 5-6 раз промывали в стерильном растворе Хэнкса с антибиотиками (2000 ЕД/мл бензпенициллина натриевой соли и 1 мг/мл стрептомицина сульфата). Жизнеспособность и инвазионность протосколексов определяли по их двигательной активности при нагревании до 39С и наличию пламеневидных (протонефридиальных) клеток (Smyth J.D., Barrett N.J., 1980). Для обнаружения пламеневидных клеток взвесь протосколексов помещали на предметное стекло, покрывали покровным и микроскопировали в иммерсионной системе, слегка надавливая на покровное стекло препаровальной иглой. При внимательном наблюдении мерцание пламеневидных клеток отмечали в области, окружающей крючья инвагинированных протосколексов. Жизнеспособность протосколексов, извлеченных из ларвоцист, колебалась в пределах 75 - 90%, все они имели развитые пламеневидные клетки.
Для заражения использовали 300 самцов аутбредных белых мышей массой 14 - 16 г, разделенных на 4 подопытные и 1 контрольную группы по 60 животных в каждой. Всем подопытным животным ввели внутрибрюшинно по 1000±105 жизнеспособных протосколексов в 0,2 — 0,5 мл стерильного раствора Хэнкса с антибиотиками. Мышам первой группы ввели протосколексы из ларвоцист Е. granulosus от- овцы, второй — верблюда, третьей — свиньи, четвертой — крупного рогатого скота. Контрольным мышам ввели только стерильный раствор Хэнкса, в том же объеме, что и подопытным животным. Вскрытие мышей проводили через 6, 12 и 15 месяцев после введения протосколексов равными частями (по 20 животных). Учитывали количество развившихся ларвоцист, определяли их размеры, локализацию, физиологическое состояние, фертильность.
Морфологию протосколексов и взрослых цестод Е. granulosus изучали по нескольким критериям (число и размеры хоботковых крючьев, общая длина стробилы и количество члеников). Для исследования, отбирали фертильные ларвоцисты размером 3 - 6 см в диаметре из печени спонтанно инвазированных овец, свиней, крупного рогатого скота и верблюдов из разных регионов. Жизнеспособные протосколексы фиксировали в 2,5%-ном глутаровом альдегиде на фосфатном буфере (рН 7,4). Перед измерением протосколексы просветляли не менее 2 часов в 40%-ной молочной кислоте под покровным стеклом с грузом, добиваясь расположения крючьев в одной плоскости. Подсчет общего количества и размеры крючьев проводили под микроскопом при увеличении 350 — 700, пользуясь калибровочным окулярным микрометром. Исследовали ларвоцисты не менее чем от 5 хозяев каждого вида, а из каждой ларвоцисты не менее 50 протосколексов. От взрослых цестод исследовали обычно 20 - 40 сколексов. Изучали число, форму и расположение крючьев на хоботке, измеряя длину 2 больших и 2 малых крючьев в каждом сколексе.
Разработка и изучение химиопрофилактического действия 10%-ной силиконовой суспензии азинокса и азинпрола в экспериментальных условиях при цестодозах собак
У собак первой группы, которой вводили 10%-ную силиконовую суспензию без отвердителя в 5-кратной терапевтической дозе по празиквантелу, было отмечено начало выделения яиц и члеников цестод на 85, 91 и 98 сутки после первичного заражения. При вскрытии собак этой группы через 3,5 месяца после заражения у животных обнаружили в кишечнике 12, 18 и 20 тыс. экз. Е. granulosus и 2, 3 и 5 экз. Т. hydatigena.
У собак второй группы, получивших аналогичную силиконовую суспензию препарата в 10-кратной терапевтической дозе, было отмечено начало выделения яиц на 98 сутки после первичного заражения. При вскрытии через 3,5 месяца после заражения у собак этой группы обнаружили 12,22 и 25 тыс. экз. E.granulosus и 0, 2 и 3 экз.Г. hydatigena.
У собак третьей группы, обработанных азинпролом (10%-ная силиконовая суспензия азинокса с отвердителем) в 5-кратной терапевтической дозе, не отмечали выделений яиц и члеников цестод в течение всего срока наблюдения (180 дней). При вскрытии через 6 месяцев после первого заражения у одной собаки в кишечнике обнаружили 1400 экз. незрелых Е. granulosus (длина стробил которых соответствовала таковой 22-дневных цестод) и 1 экз. Т. hydatigena длиной 25 см с незрелыми члениками. Две другие собаки из этой группы были свободны от гельминтов. В четвертой группе, обработанной азинпролом в 10-кратной терапевтической дозе, собаки не выделяли яиц и члеников цестод в течение 6 месяцев (срок наблюдения). При вскрытии животных через 6 месяцев у двух собак обнаружили в кишечнике незрелые Е. granulosus (с одним члеником) в количестве 500 и 1800 экз. и 3 экз. Т. hydatigena длиной 15, 18 и 25 см с неполовозрелыми члениками. Третья собака этой группы была свободна от гельминтов. У собак контрольной группы обнаружили от 40 до ПО тыс. экз. половозрелых Е. granulosus и от 2 до 8 экз. половозрелых Т. hydatigena. Таким образом, азинокс в 10%-ной силиконовой суспензии в 5- и 10-кратных терапевтических дозах профилактировал заражение собак цестодами в течение 30 дней. Выделение яиц и члеников цестод было отмечено на 85 -98 сутки после заражения. Азинпрол в 5- и 10-кратных терапевтических дозах полностью профилактировал заражение собак цестодами в первые 3,5 месяца и подавлял развитие цестод еще в течение 2,5 месяцев. Выделение яиц и члеников цестод в течение 6 месяцев (срок наблюдения) не отмечали. В 1991 году нами совместно с сотрудниками ВНИТИГ (г. Уфа) разработаны технические условия на производство опытной партии таблеток гидробунида — ТУ 10.07.117-91 и временное наставление по его применению при цестодозах собак № 043-5 от 16. 04. 1991 г. В 1991 - 1992 г.г. на экспериментальном заводе ВНИТИГ наработано 2000 кг препарата и нами проведены широкие производственные испытания эффективности таблеток гидробунида на приотарных собаках в неблагополучных по ларвальным цестодозам зонах: Кызылординской и Западно-Казахстанской областях Казахстана. Испытания провели на 2900 собаках препаратом в дозе 50 мг/кг по ДВ с кратностью применения 8 раз в год в совхозах Сырдарьинского района, Кызылординской области и с кратностью применения 4 раза в год в совхозах Джамбейтинского района, Западно-Казахстанской области. Контрольно-диагностическую дегельминтизацию собак проводили 1%-ным раствором ареколина выборочно 1 раз в квартал. Средняя зараженность собак Джамбейтинского района, Западно-Казахстанской области по данным ветотчетности на 01. 01. 1991 г. составляла: Е. granulosus — 1,8% , М. multiceps - 6,1% и Т. hydatigena - 20,3%, а в Сырдарьинском районе, Кызылординской области - 3,4%, 7,2% и 12,9% соответственно. Результаты производственных испытаний таблеток гидробунида отражены в таблице 12.
В 1991 году нами разработаны технические условия на производство опытной партии лекарственной формы азинокса пролонгированного действия - азинпрола — ТУ 10.07.78-91 и временное наставление по его применению при цестодозах собак № 044-3 от 24.01.1991 г.
Азинпрол - лекарственная форма азинокса (празиквантела) пролонгированного действия, представляющая собой стерильную двухкомпонентную систему, состоящую из 10%-ной суспензии действующего вещества в силиконовом каучуке (компонент № 1) и отвердителя вулканизатора (компонент № 2). Азинокс длительно выделяется из азинпрола, оказывая при этом лечебно-профилактическое действие против преимагинальных и имагинальных форм цестод.
Нами было наработано в лабораторных условиях 500 доз азинпрола и в 1991 - 1992 г.г. проведены широкие производственные испытания препарата на приотарных собаках в неблагополучных по ларвальным цестодозам зонах: Кызылординской и Западно-Казахстанской областях. Испытания провели на 186 приотарных собаках в совхозах «Первомайский», «50 лет СССР» и имени Амангельды Сырдарьинского района, Кызылординской области и совхозе «Косубинский» Джамбейтинского района, Западно-Казахстанской области с кратностью применения 2 раза в год (через 6 месяцев). Азинпрол вводили подкожно с соблюдением правил асептики. Компоненты в соотношении 25:1 (компонент № 1: компонент № 2) непосредственно перед введением смешивали в шприце и инъецировали в залопаточную область в объеме 0,26 мл/кг (компонент № 1 - 0,25 мл, компонент № 2 — 0,01 мл) или 25 мг ДВ/кг (пятикратная терапевтическая доза по празиквантелу). Первую обработку приотарных собак азинпролом провели в марте перед перегоном овец на летние пастбища до стрижки и купки. Весеннюю обработку собак азинпролом провели в сочетании с антирабической вакцинацией собак. Антирабическую вакцину «АЗВИ» вводили подкожно в область шеи с противоположной стороны от места введения азинпрола. Вторую профилактическую обработку собак азинпролом провели осенью перед отбивкой ягнят до осенней стрижки и купки овец. Контрольно-диагностическую обработку собак проводили 2 раза в год 1%-ным раствором ареколина. Результаты химиопрофилактической эффективности азинпрола в производственных условиях отражены в таблице 13.
Оценка антигелъминтной эффективности препарата дронтал джуниор при нематодозах собак
Комбинация антгельминтиков обычно повышает их эффективность или увеличивает спектр антигельминтного действия. Для создания комбинированной лекарственной формы — азинила в качестве действующей основы мы выбрали вещества, обладающие высокой противопаразитарной эффективностью (празиквантел и тетрамизол). В качестве корригирующих добавок использовали сухое молоко и пивные дрожжи, которые снизили токсические свойства тетрамизола, позволили замаскировать неприятный вкус и запах препаратов и рационально их дозировать. Изучение токсических свойств азинила позволило отнести его согласно ГОСТ 12.1.007.-76 к 3 классу опасности. Препарат хорошо переносился собаками и кошками разных пород, возраста и пола, не вызывая побочных явлений и осложнений в терапевтических дозах и в дозе, превышающей терапевтическую в 4 раза.
По заданию ВЕТФАРМСОВЕТА Департамента ветеринарии Минсельхозпрода РФ нами проведены испытания эффективности при гельминтозах собак трех зарубежных препаратов с целью их регистрации и разрешения для применения в России.
Таблетки прател («ЛЕК», Словения) и азипирин («Фармация-АД», Болгария), испытанные однократно в дозах, рекомендованных фирмами, при смешанных гельминтозах собак со слабой и средней степенью интенсивности инвазии, показали 100%-ную эффективность. Суспензия дронтал джуниор («Байер», Германия), испытанная однократно в дозе, рекомендованной фирмой, при токсаскариозе и унцинариозе взрослых собак и токсокарозе щенков со слабой и средней степенью интенсивности инвазии, также показала 100%-ную эффективность. Все препараты хорошо переносились животными, побочных эффектов от их применения не отмечено.
При высокой интенсивности инвазии (более 500 яиц гельминтов в 1 г фекалий) мы считаем целесообразным для всех перечисленных препаратов их повторное применение через сутки. На все испытанные препараты составлены подробные отчеты и отправлены в ВЕТФАРМСОВЕТ с рекомендацией зарегистрировать их в России.
Наши выводы о недостаточной эффективности однократных обработок комбинированными антгельминтиками при высокой степени интенсивности инвазии (в особенности нематодами) подкреплены и результатами исследований в школе подготовки собак-поводырей (РППШСП). Через 2 недели после однократной обработки препаратом дронтал-плюс у 10 из 47 животных были обнаружены яйца нематод (Т. leonina — 9 случаев, U. stenocephala — 1 случай), т.е. свободными от инвазии оказались лишь 78,7% собак.
Следует отметить, что многие фирмы-производители акцентируют внимание владельцев животных на простоте использования таких препаратов, то есть однократном профилактическом применении в определенные сезоны года, в определенном возрасте животного, перед прививкой, перед случкой и т.д., не акцентируя внимание на необходимости предварительных паразитологических исследований. Результаты наших пятнадцатилетних исследований показывают, что процент квартирных собак и кошек, зараженных гельминтами, невысок. Обработки животных этой группы без предварительных исследований могут привести к ненужной фармакологической нагрузке на организм, неполному освобождению от паразитов, быстрому возникновению у гельминтов резистентности к препаратам. Следовательно, внимание владельцев домашних плотоядных следует акцентировать, в первую очередь, на проведение периодических копроскопических исследований, что позволит решить вопрос о необходимости дегельминтизации, правильно подобрать необходимый антгельминтик и кратность его применения, и обеспечит полное освобождение животного от паразитов.
Разработан и испытан при цестодозах собак отечественный препарат гидробунид. Гидробунид в дозе 50 мг/кг при однократном применении обладает 100%-ной эффективностью против крупных цестод (тений мультицепсов, дипилидий), ЭЭ против эхинококков составила 80 - 91,7%.
Таблетки эпсипрантела в дозе 5 мг/кг однократно при экспериментальном эхинококкозе собак показали ЭЭ, равную 80,0%, ИЭ — 99,8.
Испытана химиопрофилактическая эффективность новой лекарственной формы празиквантела пролонгированного действия — азинпрола. Азинпрол в 5-кратной терапевтической дозе по празиквантелу при подкожном применении при экспериментальном эхинококкозе и тениозе собак полностью профилактировал заражение собак цестодами в первые 3,5 месяца и подавлял развитие цестод в следующие 2,5 месяца. Выделение яиц и члеников цестод в течение 6 месяцев (срок наблюдения) не отмечали. Азинпрол, испытанный в производственных условиях на приотарных собаках с кратностью применения 2 раза в год, показал профилактическую эффективность против цестод на 99,5%.
Разработан и испытан новый комплексный препарат — азинил, представляющий собой сложный порошок, на основе действующих веществ празиквантела и тетрамизола гидрохлорида и корригирующих добавок в виде сухого молока и пивных дрожжей. Препарат относится к классу умеренно токсических веществ и хорошо переносится собаками и кошками в 4-кратных терапевтических дозах. Препарат в дозе 2,5 мг/кг по празиквантелу и 7,5 мг/кг по тетрамизолу при двукратном применении высокоэффективен (100%) при цестодозах и нематодозах собак и кошек.
Препарат прател — комбинированная лекарственная форма в виде таблеток, содержащих 50 мг празиквантела и 144 мг пирантела эмбоната, из расчета 1 таблетка на 10 кг массы тела однократно, показал у собак 100%- ную эффективность при слабой и средней степени интенсивности токсокароза, токсаскариоза, унцинариоза, дипилидиоза и тениоза.
Сравнительное изучение эффективности методов обнаружения микрофилярий в крови собак
Впервые цикл развития D. immitis был расшифрован В. Grassi и G. Noe в 1900 году, которые выяснили, что развитие этого паразита происходит в мальпигиевых сосудах комаров. В настоящее время в качестве промежуточных хозяев установлены комары родов Aedes, Culex, Anopheles и др. Развитие личинок в комарах происходит при температуре выше 14 С. Через 10 - 15 дней у них проходит две линьки, из стадии Li они развиваются в инвазионную стадию L3 и проходят в хоботок комара. Заражение потенциальных хозяев происходит в процессе питания комаров кровью, при этом микродирофилярии проникают из хоботка комара в кровь дефинитивного хозяина. В течение 85 - 120 дней личинки L3 завершают соматическую миграцию в грудной клетке хозяина, проходят две линьки до стадии L5 (ювенальные черви), входят в сосудистое русло, проникая в периферические вены, и достигают легочных артерий преимущественно в каудальной части легких. Для развития личинок L5 в половозрелых червей, отрождающих микрофилярий, необходимо еще 3 месяца созревания. Таким образом, развитие D. immitis в организме собак до половозрелой стадии продолжается 8-9 месяцев, а средняя продолжительность жизни половозрелых червей в окончательном хозяине до 5 лет у собак и до 2,5 лет у кошек. Циркуляция микрофилярий в крови возможна до 2,5 лет после гибели взрослых червей.
Развитие D. immitis в организме собак в условиях России впервые изучено И.А. Архиповым и Д.Р. Архиповой (2004). По их данным, при подкожном заражении 5 собак в дозе 20 инвазионных личинок на животное, микрофилярий в крови у одной собаки начали обнаруживать спустя 30 недель после заражения, у другой — на 31, у остальных — на 33 — 36 неделях опыта. Средняя продолжительность препатентного периода составила 33,6±1,3 недель (235 дней).
Для дирофиляриоза характерна сезонность. Зараженность животных коррелирует с активностью комаров в период их лёта, которая приходится на апрель-октябрь. Пути распространения дирофиляриоза непосредственно связаны с комарами родов Aedes, Culex и Anopheles, пораженность которых личинками микрофилярий в очагах Ростовской области составила 31, 17 и 2,5% соответственно (С.А. Нагорный, А.А. Артамонова, 1999). По данным А.И. Шинкаренко (2005), в Волгоградской области в качестве промежуточных хозяев для D. immitis зарегистрированы комары видов Culex pipiens, С. modestus, Aedes caspius и Anopheles maculipennis, наименьшая зараженность комаров микрофиляриями наблюдается в мае -июне (0,01 - 0,03%), наивысшая - в августе - сентябре (0,05 - 0,08%). Экологическую нишу дирофилярий представляют, прежде всего, собаки. Возможно также заболевание волков, лисиц, хорьков, кошек. Согласно J.M. Doby et al. (1986) развитие одного поколения личинок D. immitis в организме промежуточного хозяина (комара) зависит от температуры и встречается как минимум в количестве 130 ЕРД (единиц развития дирофилярий). Одна ЕРД соответствует одному дню с температурой на 1 выше 14 С. При температуре ниже 14 С развитие личинок D. immitis в организме промежуточного хозяина прекращается. Возможная годовая популяция генераций паразита за один сезон может быть рассчитана и для Московской области, которая расположена в пределах 55 с.ш. центральной части Восточно-Европейской равнины, где продолжительность теплого сезона до 130 дней. Самый жаркий месяц — июль с дневной температурой воздуха +30 С и выше, в середине августа она снижается. В летний период условия окружающей среды в Московском регионе соответствуют идеальным для развития в комарах инвазионных личинок. Число годовых генераций инвазионных личинок, способных развиваться в комарах, составило в 2000 г. 2,3; в 2001 г. — 3,7 и в 2002 г. — 5,2 (Супряга В.Г., Бронштейн A.M., Ястреб В.Б. и др., 2004). Для сравнения: в Оттаве (Канада), для которой D. immitis является эндемичным видом, годовая по популяция генераций дирофилярий составляет 3,95 генерации в год (Schrey S.F.,TrautvetterE., 1998). D. repens паразитирует под кожей у собак, лисиц, волков. Кроме того, этот гельминтоз регистрируется и у человека. Самец D. repens 48 -70 мм длины, ширина 0,37 - 0,45 мм. Хвостовой конец самца имеет небольшие латеральные крылья и снабжен каудальными сосочками, количество и расположение которых может сильно варьировать. Преанальных сосочков обычно наблюдается два или четыре с одной и пять или шесть с другой стороны. Левая спикула (0,456 - 0,490 мм) значительно длиннее правой (0,185 - 0,206 мм), но она кажется обломанной. Самки 100 -170 мм длины, ширина 0,46 - 0,65 мм. Отверстие вульвы располагается на расстоянии 1,1-1,6 мм от головного конца (Петров А.М., 1931). Цикл развития происходит при участии тех же промежуточных хозяев, что и при дирофиляриозе сердца. Развитие D. repens до половозрелой стадии у собак продолжается около 6 месяцев, а продолжительность жизни паразита - 2 - 3 года. Д.Р. Архипова (2003) изучала развитие D. repens в организме собак по методике, аналогичной при изучении D. immitis. После экспериментального заражения 8 собак микрофилярии в крови впервые начали обнаруживать в крови через 25 и последующие недели после заражения. Средняя продолжительность препатентного периода составила 27,0±2,3 недель (193 дня). Следует отметить, что срок препатентного развития D. repens в организме собак на 6 недель короче, чем D. immitis. Дипеталонемозы (Акантохейлонематозы) собак У собак описаны три вида дипеталонем, которые локализуются в грудной и брюшной полостях и подкожной клетчатке. Они передаются, главным образом, через блох, вшей, пухоедов, клещей и мух, а их патогенное действие на дефинитивного хозяина изучено слабо. В России зарегистрирован вид D. dracunculoides, который описал Г.Р.Ярулин (1962) у лис в Дагестане. Размер самцов 24- 30 мм в длину и 0,16 - 0,21 мм в ширину. Задний конец тела спиралевидно закручен в четыре оборота. Хвостовой конец, как у самца, так и у самки снабжен двумя коническими заостренными латеральными отростками, что создает впечатление трифуркации на кончике хвоста. Длина самки 32 -60 мм, вульва расположена на расстоянии 1,30 - 1,85 мм от головного конца. Вид D. reconditum считается космополитом, однако в России пока не обнаружен. Размеры его несколько меньше, чем D. dracunculoides. Длина самца 9,3 - 17,1 мм, самки 20,7 - 25,2 мм.
Вид D. grassi обнаружен у собак в Италии. Он описан поверхностно, только по самкам, длина тела которых составляет 23 - 24 мм. Микрофилярии крупные с чехликом 0, 567 мм в длину в лимфатических сосудах собак (цит. по Сонину М.Д., 1975).
