Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 12
1.1. Эффективность препаратов авермектинового ряда при паразитарных болезнях животных 12
1.2. Фармако-токсикологические свойства авермектинов 39
1.3. Влияние авермектинов на иммунный статус животных 45
2. Собственные исследования 51
2.1. Материалы и методы 51
2.2. Результаты исследований
2.2.1. Авертин и его лекарственные формы 68
2.2.2. Состав и технология изготовления авертина инъекционного 68
2.2.3. Состав и технология изготовления авертина-порошка 69
2.2.4. Параметры токсичности лекарственных форм авертина
2.2.4.1. Острое токсическое воздействие авертина инъекционного 69
2.2.4.2. Острое токсическое воздействие авертина-порошка 78
2.2.5. Изучение отдаленных последствий лекарственных форм авертина 86
2.2.5.1. Оценка эмбриотропного действия 86
2.2.5.2. Оценка мутагенного действия 89
2.2.6. Изучение иммунотоксических свойств лекарственных форм авертина 93
2.2.6.1. Оценка Т-клеточного звена иммунной системы 94
2.2.6.2. Оценка В-клеточного звена иммунной системы. Кинетика В-лимфоцитов 96
2.2.6.3. Определение аллергизирующих свойств авертина и
ивомека 99
2.2.6.4. Оценка Т-клеточного звена иммунной системы 100
2.2.6.5. Оценка В-клеточного звена иммунной системы 102
2.2.6.6. Определение аллергизирующих свойств авертина-порошка... 103
2.2.7. Определение остаточных количеств лекарственных форм авертина в органах и тканях животных 104
2.2.7.1. Методика определения авертина в органах и тканях животных методом флуоресцентной ВЭЖХ 105
2.2.7.2. Остаточные количества авертина в тканях и органах крупного рогатого скота 109
2.2.7.3. Остаточные количества авертина в тканях и органах свиней 111
2.2.7.4. Остаточные количества авертина-порошка в органах молодняка крупного рогатого скота 112
2.2.7.5. Остаточные количества авертина-порошка в органах и тканях свиней 113
2.2.7.6. Остаточные количества авертина-порошка в молоке коров 114
2.2.8. Терапевтическая эффективность лекарственных форм авертина при паразитарных болезнях животных 116
2.2.8.1. Эффективность авертина инъекционного при нематодозах овец 116
2.2.8.2. Эффективность авертина инъекционного при эстрозе овец 121
2.2.8.3. Эффективность авертина инъекционного при псороптозе овец 122
2.2.8.4. Эффективность авертина инъекционного при мелофагозе овец 123
2.2.8.5. Эффективность авертина инъекционного при нематодозах крупного рогатого скота 124
2.2.8.6. Эффективность авертина инъекционного при гиподерматозе крупного рогатого скота 126
2.2.8.7. Эффективность авертина инъекционного при саркоптозе крупного рогатого скота 128
2.2.9. Антипаразитарная активность авертина-порошка 129
2.2.9.1. Эффективность авертина-порошка при нематодозах овец 129
2.2.9.2. Эффективность авертина-порошка при эстрозе овец 132
2.2.9.3. Эффективность авертина-порошка при псороптозе овец 133
2.2.9.4. Эффективность авертина-порошка при мелофагозе овец 133
2.2.9.5. Оценка переносимости авертина-порошка овцами 134
2.2.9.6. Эффективность авертина-порошка при гиподерматозе крупного рогатого скота 134
2.2.9.7. Эффективность авертина-порошка при нематодозах крупного рогатого скота 136
2.2.9.8. Эффективность авертина-порошка при саркоптозе крупного рогатого скота 138
2.2.9.9. Эффективность авертина-порошка при нематодозах лошадей 139
2.2.9.10. Эффективность авертина-порошка при гастрофилезе и ринэстрозе лошадей 141
2.3. Выявить особенности течения и обосновать мероприятия по лечению и профилактике нематодироза у животных 142
2.3.1. Распространение, видовой состав и сроки развития Nematodims spathiger у мелкого рогатого скота 142
2.4. Изучение возрастного и полового состава популяции, сроков преимагинального развития и продолжительности жизни нематодир у ягнят 150
2.5. Особенности эпизоотического процесса при нематодирозе 161
Заключение 164
Выводы 176
Практические предложения 180
Список использованной литературы
- Фармако-токсикологические свойства авермектинов
- Состав и технология изготовления авертина инъекционного
- Методика определения авертина в органах и тканях животных методом флуоресцентной ВЭЖХ
- Эффективность авертина инъекционного при гиподерматозе крупного рогатого скота
Фармако-токсикологические свойства авермектинов
Механизм действия авермектинсодержащих препаратов состоит в том, что попадая в организм беспозвоночных, авермектины стимулируют выброс из нервных окончаний гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК) и усиливают ее связь со специальными рецепторами, блокируя тем самым передачу нервных импульсов, что вызывает паралич, а затем и гибель клещей, насекомых и круглых червей. Авермектины не действуют на цестод и трематод, потому что у плоских червей отсутствуют нервно-мускульные узлы (ГАМК-синапс). Известно, что авермектины не действуют также на ацетилхолинергическую систему млекопитающих и, следовательно, неопасны для них в рекомендуемых дозах (L. С. Fritz, С. С. Wang et al., 1979; L. S. Kass et al., 1980, 1984; C. P. Albrecht, M. Sherman, 1983; R. Scott, I. Duce etal., 1985).
Губительное действие авермектинов распространяется на многих возбудителей заболеваний животных: нематод, клещей, мух, кровососок, личинок оводов, блох, вшей и т. п., а также вредителей растений: колорадского жука, капустной и репной белянки, паутинного клеща, яблонной плодожорки, тлей и др. (Т. А. Рябчинская, Г. Л. Харченко, Т. С. Стерлина и др., 1995; В. Н. Чижов, Н. В. Березина, Э. Г. Десяткова, 1995; В. Н. Чижов, В. А. Дриняев, Н.В.Березина, 1998; В. Н. Чижов, В. А. Юркив, 1999).
Ивермектины выпускают в разных лекарственных формах - ивомек инъекционный, ивомек плюс, ивомек пурон, ивомек-ф, ивомек премикс, эквалан (BarthD., 1983; BremnerK. С. et al., 1983; Swan J. Е., Harvey R. J., 1984; Benz J. W., 1985; Лемехов П. A., 1987; Архипов И. А. и др. 1995; 1996). Затем на основе различных штаммов Streptomyces avermitilis были разработаны и предложены ветеринарной практике другие антипаразитарные препараты широкого спектра действия - цидектин, аверсект-2, универм, рустамектин, ниацид, а также новый представитель группы авермектинов -дектомакс пролонгированного действия (действующее вещество дорамектин). Во всем мире, включая страны СНГ, интерес к препаратам авермектинового ряда растет из года в год. Их тщательно изучают со всех точек зрения ученые разных стран. За рубежом насчитывается более трех тысяч публикаций, из которых более половины посвящено только препаратам, действующим веществом которых является ивермектин. Эти публикации собраны в специальные библиографические справочники (Ivermectin, 1986, 1988, 1989, 1990). Проанализировать каждую публикацию в данном литературном обзоре невозможно. Зарубежная и отечественная литература достаточно полно представлена работами по эффективности препаратов авермектинового ряда против экто- и эндопаразитов, поэтому мы проанализируем только основные терапевтические работы. В организме животных редко встречается один вид паразитов. Чаще их несколько и они находятся в сложных взаимоотношениях как друг с другом, так и организмом хозяина, причиняя большой экономический ущерб животноводству. Совсем недавно против каждого возбудителя применяли индивидуальный препарат, поэтому овец, например, зараженных чесоточными клещами, диктиокаулами, стронгилоидами, личинками оводов, приходилось обрабатывать три и более раз.
Большим прогрессом в терапии паразитарных болезней стали препараты авермектинового ряда - препараты широкого спектра антипаразитарного действия, когда достаточно однократного введения препарата для достижения 100%-ного эффекта при смешанных паразитозах животных. Анализ зарубежных публикаций показывает высокую терапевтическую эффективность (99,8-100%) ивомека и ивермектинсодержащих препаратов против нематод пищеварительного тракта крупного и мелкого рогатого скота в дозе 0,2 мг/кг массы животного по ДВ (I. Armour, К. Bairden, I. М. Preston, 1980; D. Barth, 1983; W. Н. Leaning, 1984, С. Mage, 1985).
Широкое распространение получил ивомек в борьбе с псороптозами овец, крупного рогатого скота, кроликов при двукратном использовании с интервалом 7-12 дней по 200мкг/кг (D. Barth, I. Н. Sutheralsnd, 1983; А. С. Wilkins, I. Conroy, Р. Но, W. Shanny, 1980; H. Prosl, A. G. Kanout, 1985). Однако высказано мнение (H. Prosl, A. G.Kanout,1985), что однократное введение под кожу кроликов ивомека в указанной дозе лишь снижает проявление клинической картины псороптоза, даже введение 400 мкг/кг как однократно, так и двукратно с интервалом 4-5 дней, не избавляет кроликов от клещей, уже через 17-39 дней после второй инъекции препарата от 36 до 44% животных имели клещей у основания слухового прохода. Этот факт говорит о том, что к моменту появления личинок концентрация ивомека в ликворе стала значительно меньше минимальной эффективной дозы (МЭД).
Зудневую чесотку у свиней излечивают методом аппликации ивомека дозой 300 мкг/кг или введением под кожу при двукратной обработке с интервалом 12-14 дней (Ж. Ж. Шапулатов, 1988).
В эпизоотологии псороптоза большое значение имеет и то, что терапевтическое действие ивомека начинается спустя несколько дней после инъекции. Установлено, что после введения 200 мкг/кг ивомека Psoroptes ovis способны перезаражать здоровых овец еще в течение 5 дней после введения препарата, даже при дозе 400 мкг/кг Ps. cuniculi остаются живыми и способны еще развиваться в течение 6 cyTOK(Frossard Т. L., 1981; Guillot F. S., MeleneyW.P., 1982).
Состав и технология изготовления авертина инъекционного
Постановка реакции. 0,5 мл испытуемой сыворотки разводили от 1:4 до 1:64 после предварительной инактивации на водяной бане при температуре 56С в течение 30 минут. К каждому разведению добавляли по 0,5 мл 3%-ной взвеси эритроцитов барана, после чего пробирки с растворами помещали на 2 часа в термостат при температуре 37С, а затем на 24 часа в холодильник. Искомым считали последнее разведение, в котором еще имеются агглютинирующие эритроциты.
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Для реакции можно использовать эритроциты барана или петуха, полученные в 3 мл гепаринизированного физиологического раствора и отмытые в центрифуге трижды по 5 минут при 1500 об/мин в забуференном физиологическом растворе (ЗФР). Сыворотку крови предварительно инактивировали при 56С 30 минут на водяной бане. Для адсорбции сыворотки эритроцитами готовили 50%-ную взвесь эритроцитов на ЗФР. Затем на одну часть эритроцитов брали 3 части сыворотки - разведение 1:4 и инкубировали 20 минут, а затем центрифугировали 10 минут при 500 об/мин и отсасывали надосадочную жидкость.
Следующий этап - сенсибилизация эритроцитов. Для этого к 2,5-3,0 мл антигена (в качестве антигена использовали сухую белковую фракцию в рабочей концентрации - 2 мг белка в 1 мл) в ЗФР добавляли 0,1 мл отмытого осадка эритроцитов и при постоянном размешивании добавляли 0,1 мл 0,25%-ного водного раствора глутарового альдегида. Инкубировали 1 час при комнатной температуре, отмывали 3 раза в ЗФР по 10 мин при 1500 об/мин и затем делали 0,4%-ную взвесь на ЗФР.
Постановка реакции. Для реакции брали V-образные планшеты. Во все лунки закапывали по 25 мкл физиологического раствора, в первый ряд вносили испытуемые сыворотки 0,25 мл. Петлей делали разведение от 1:2 до 1:256. После пипетирования сывороток в каждую лунку вносили по 25 мкл 0,4%-ной взвеси сенсибилизированных эритроцитов. После раскапывания всех компонентов планшеты покачать, не отрывая от стола
Реакцию комплементарной активности сыворотки крови ставили по методу Вагнера Г.Ф. (1963). На каждую пробирку сыворотки крови брали три центрифужные пробирки. В первые две опытные наливали по 0,59 мл физиологического раствора, в третью - 0,59 мл дистиллированной воды. Во все пробирки наливали по 0,1 мл исследуемой сыворотки и смешивали. Затем инкубировали в течение 30 минут при 37С, а контрольную - при 56С. После инкубации во все пробирки доливали по 4 мл гемолитической смеси, центрифугировали и через 15 минут колориметрировали. Расчет активности комплемента определяли числовым показателем экстинции. Для этого показатель экстинции опыта делили на показания экстинции контроля и умножали на 100.
Антипаразитарную эффективность лекарственных форм изучали на спонтанно инвазированных животных разных видов и разного возраста. Зараженность животных гельминтами до и после введения препаратов устанавливали по результатам дву- или трехкратного гельминтоово- и лярвоскопического исследования проб фекалий методами Фюллеборна, Бермана, последовательного промывания (Котельников Г.А., 1974, 1984; Котельников Г.А., Хренов В.М., 1980; Мигачева Л.Д., Котельников Г.А., 1989). Интенсивность инвазии определяли по данным убоя животных и полного гельминтологического исследования печени, легких, сычуга, тонкого и толстого отделов кишечника по методу К.И. Скрябина (1928). Собранных гельминтов определяли до вида.
Зараженность животных акарозами до опыта и при оценке результатов учитывали по данным количественного и качественного подсчета клещей при микроскопии соскобов кожи с зараженных участков, в то же время, обращая внимание на наличие характерных клинических признаков заболевания: зуд, "забои", оголенные участки тела и висящая клоками шерсть (инструкция по борьбе с саркоптоидозами овец и коз, 1981; Ремез В.И.,1989; Абуладзе К.И., Гильденблат А.А., Дзасохов Г.С. и др., 1978).
Микроскопию соскобов кожи на наличие клещей выполняли самостоятельно, а иногда в ветеринарных лабораториях. Для этого материал (соскоб кожи) помещали в чашки Петри, подогревали до температуры 27-30С и исследовали под лупой МБС или малом увеличении микроскопа в затемненном поле зрения. Если в сухом материале клещей не обнаруживали, то в него добавляли 10%-ный раствор едкого натрия или калия, оставляли на 30 минут или подогревали сразу, а затем просматривали.
Опыты по оценке эффективности лекарственных форм авертина при гиподерматозе крупного рогатого скота, эстрозе овец проводили в тех хозяйствах, где животные в предыдущий летний период выпасались на пастбище, неблагополучном по энтомозам. При эстрозе овец результаты лечения учитывали по данным убоя и вскрытия животных через 40-45 дней после введения препаратов. Личинок оводов собирали, подсчитывали и их количество сопоставляли с данными от нелеченных животных.
Методика определения авертина в органах и тканях животных методом флуоресцентной ВЭЖХ
О влиянии авертина инъекционного на клеточное звено иммунитета судили по выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа к аутологичным розеткообразующим клеткам (ауто-РОК).
Определение выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ). В опыте использовали 40 мышей линии СВА массой 18-20 г, из которых сформировали 4 группы (опыт №1): мышам 1-ой группы вводили препарат авертин в дозе 2 мл/50 кг живой массы однократно, подкожно, параллельно с введением препарата вводили 10%, суспензию ЭБ внутрибрюшинно в дозе 0,3 мл на мышь; 2-ой группе вводили авертин по то же схеме, но в дозе 1 мл/50 кг живой массы; 3-ей группе вводили препарат ивомек однократно, подкожно в дозе ОД мл/50 кг живой массы параллельно с введением 10% суспензии ЭБ внутрибрюшинно в дозе 0,3 мл на мышь; 4-ая группа служила контролем, животным вводили только 10%-ную суспензию ЭБ. Через 5 дней после сенсибилизации всем подопытным животным вводили разрешающую дозу 2%-ной суспензии ЭБ в количестве 0,02 мл в правую лапку, а в левую - физраствор в дозе 0,02 мл. Контрольным животным вводили в правую лапку только 2%-ную суспензию ЭБ. Через 24 часа животных забивали, отрезали лапки на уровне голеностопного сустава и взвешивали на торзионных весах для учета индекса стимуляции по формуле: рез-ты опыта - рез-ты контроля ИС= х100% рез-ты контроля
Результаты исследований представлены в таблице 2.2.6.1.21. Полученные данные позволяют заключить, что авертин инъекционный не обладает иммуностимулирующими свойствами во всех испытанных дозах (1 и 2 мл/50 кг живой массы), и незначительно угнетает Т-клеточное звено иммунитета.
Изменения в динамике аутологических розеткообразующих клеток у мышей дает представление о влиянии препарата на клеточный иммунитет, что выражается в повышении функциональной активности Т-лимфоцитов. Под опыт №2 было взято 90 мышей линии СВА весом 18-20 г, которых разделили на 3 группы по следующей схеме: животным 1-ой группы вводили авертин в дозе 1 мл/50 кг живой массы подкожно однократно; 2-ая группа получала ивомек в дозе 1 мл/50 кг массы тела подкожно однократно; 3-я группа служила контролем и препарат не получала. Исследования проводили на 5, 10, 15 и 20 дни после введения препаратов. Результаты исследований представлены в таблице 2.2.6.1.22.
При даче препарата авертин интактным мышам, кинетика ауто-РОК характеризовалась понижением как абсолютного, так и относительного количества розеткообразующих клеток в крови мышей.
Снижение ауто-РОК было более выражено у животных 2-ой группы, которые получали препарат ивомек в дозе 1 мл/50 кг массы тела. У животных контрольной группы количество ауто-РОК на протяжении всего периода исследований находилось в пределах 0,9-1,2% в 1 мкл крови. Таблица 2.2.6.1.22.
Изменения в динамике показателей аутологичных розеткообразущих клеток у мышей дает нам представление о влиянии препаратов авертин и ивомек на клеточный иммунитет, что выражается в снижении функциональной активности Т-лимфоцитов в течение 15 дней после дачи препарата, однако по ауто-РОК изменения более выражены у животных 2-ой группы.
В опыте было использовано 60 мышей линии СВА. Авертин инъекционный вводили одной группе животных (20 голов) в дозе 1 мл/50 кг однократно, перорально; второй группе вводили препарат ивомек в дозе 1 мл/50 кг однократно, подкожно (20 голов); третья группа (20 голов) служила контролем и препарат не получала (табл. 2.2.6.23.).
Как видно из таблицы 2.2.6.23., содержание ЕАС-розеткообразущих клеток в крови мышей контрольной группы существенно не отличалось в течение всего периода исследование и составило 19,4±2,6 - 20,9±1,4%. Таблица 2.2.6.2.23. Кинетика относительного количества В-лимфоцитов (%) в крови интактных . мышей после введения препаратов: авертин и ивомек. № группы Кол-во животных Препарат Дни исследования фон 1-ый 5-ый 10-ый 20-ый 1 20 Авертин 20,1 ±0,9 19,8±2,4 18,4±2,3 19,8 ±1,2 20,7 ±1,8Х) 2 20 Ивомек 20,0±1,1 18,6±1,2 16,6±2,7Х) 17,6±1,8Х) 18,8 ±1,9Х) 3 20 Контроль 19,8±1,2 20,2L_±0 9 20,9 ±1,4 20,7 ±3,6 19,4±2,6 Примечание: х) - достоверные данные. В динамике относительного количества В-лимфоцитов после введения препаратов авертина и ивомека наблюдали достоверное снижение ЕАС-РОК на 10-й и 15-й дни исследования. Затем количество В-лимфоцитов увеличилось, но более выражено в 1-ой группе. Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что препараты авертин и ивомек, введенные подкожно однократно в дозе 1 мл/50 кг снижают иммунный статус в течение 10-15 дней.
Определение антителообразующих клеток (АОК), Определение АОК в селезенке проводили в опыте на 45 мышах линии СВА. Животных разделили на 3 группы: 1-ой группе авертин вводили в дозе 1 мл/50 кг; 2-ой -ивомек в дозе 1 мл/50 кг, препараты вводили внутрибрюшинно одновременно с эритроцитами барана (ЭБ). Индекс стимуляции вычисляли по формуле: АОК в опыте ис= — АОК в контроле Число АОК считали в одной пробе среди 200 лимфоцитов. Таблица 2.2.6.2.24. Данные АОК после введения препаратов авертин и ивомек. № группы Препарат Доза Результаты исследований на АОК I пробы ИС 1 Авертин 1 мл/50 кг 15,8 0,8 2 Ивомек 1 мл/50 кг 15,6 0,8 3 ЭБ 2%-0,1 мл 16,2 0,9
Судя по данным, представленным в таблице 2.3.6.2.24, препараты авертин и ивомек угнетают трансформацию В-лимфоцитов в АОК в селезенке. Свойство препаратов незначительно угнетать иммунный ответ говорит о индеферентном отношении к В-клеточному звену иммунитета.
Определение титров гемаглютининое в сыворотке крови животных после введения авертина и ивомека. Под опыт взяли 30 мышей линии СВА и разделили их на 3 группы: животным 1-ой группы авертин вводили в дозе 1 мл/50 кг подкожно однократно вместе с внутрибрюшинной инъекцией этим мышам 10% суспензии ЭБ в дозе 0,5 мл. Животным 2-ой группы вводили ивомек в дозе 1 мл/50 кг массы тела по той же схеме. 3-ья группа животных служила контролем, ее иммунизировали только 10%-ной суспензией ЭБ. На 7-ой день после иммунизации все животные были убиты и определены титры общих антител и антитела классов М и G (табл. 2.2.6.2.25.).
Рассматривая титры общих антител и иммуноглобулинов М и G, следует отметить развитие защитных реакций, комплексно регулируемых на уровне всей иммунной системы организма. В их динамике самыми ранними являются неспецифические функции, предшествующие появлению естественных киллеров, прямой фагоцитной реакции и лизису комплексно-зависимых мембранных структур (КЗЛ) по альтернативному пути. Динамика появления антитела - опосредованных реакций обусловлена количеством антител, необходимых для их существования
Эффективность авертина инъекционного при гиподерматозе крупного рогатого скота
Поскольку не удавалось получить культуру личинок одного вида, в дальнейшем при вскрытии овец брали тонкий отдел кишечника (половозрелых гельминтов), фекалии из прямой кишки и часть содержимого толстого отдела кишечника. Фекалии помещали в бумажные пакеты, рассыпали тонким слоем и содержали их при комнатной температуре. Для получения чистой культуры яиц нематодир мы применили 4% раствор хлористого натрия (получено положительное решение на авторское свидетельство) для промывания кишечника, в результате получали целостную структуру самок нематодир. При этом способе мы получали живых нематодир, из яиц, которых больше получалось и развивалось инвазионных личинок. При определении вида нематодир из матрикса выбирали не более 100 самцов. Следуя этим путем, мы получили чистые культуры N. spathiger (Московская область) и N. oiratianus (Дагестанская АССР).
Провели заражения и перезаражения 16 ягнят в экспериментальном хозяйстве "Курилово" чистыми видами N. spathiger, N. oiratianus, а также смесью личинок обоих видов.
Следует отметить, что сроки преимагинального развития для вида N. spathiger - от 14 до 26 дней, сильно варьируют, в то же время для вида N. oiratianus они более-менее стабильны - 15-20 дней.
При экспериментальном заражении ягнят в осенний период сроки преимагинального развития удлиняются до 26 дней.
В опытах по динамике развития личинок N. spathiger из яиц в лабораторных условиях установили, что в течение 2-3 суток при комнатной температуре (20С) яйца нематодир развивались до стадии морулы. Затем проходили через стадию головастика и, продолжая удлиняться и развиваться, формировали узнаваемую личинку первой стадии за 9-Ю суток. Эта личинка заполнена темным зернистым материалом, хвост на этой стадии очень длинный и личинка вполне активна в оболочке.
Личинка второй стадии более инертна, чем первой (линьки проходят в яйце), и в течение 5 дней зернистый материал постепенно исчезает, и становится видимой внутренняя структура личинки. На 23-24 дни при 20-22С менее 20-30% инвазионных личинок выходит из яиц.
При низких температурах развитие происходит медленнее, инвазионные личинки развивались через 50-60 и более дней инкубации. При более высоких температурах развитие идет немного быстрее, но увеличивается процент яиц, не закончивших развитие.
Проведен ряд опытов по развитию яиц и личинок N. spathiger во внешней среде. Следует отметить, что условия внешней среды (температура, влажность) сильно влияют как на сам процесс развития яиц и личинок в фекалиях, так и на сами фекалии. Вначале 1-3 недели исследовали 1 г фекалий по методу Фюллеборна, учитывая количество яиц на разных стадиях развития.
Так, в пробе, заложенной 12.05.1991 г., мы обнаружены яйца на стадии бластомеров 02.06.1991 г. В тоже время 09.06.1991 г., т. е. через 28 дней, обнаруживали вышедшие из яиц инвазионные личинки.
Необходимо отметить, что в условиях Подмосковья фекалии овец более подвержены воздействию условий внешней среды (влага), чем в степной зоне (наиболее неблагополучная по нематодирозу).
Во втором опыте в пробе, заложенной 28.07.1992 г. мы обнаружили 13.10.1992 г. яйца с личинкой в пересчете на 1 г фекалий - 45,6 яиц. В тоже время 23.10.1992 года мы обнаружили как вышедшие инвазионные личинки, так и яйца с личинками, в пересчете на 1 г фекалий - 30,4 инвазионные личинки и 60,8 яиц с личинкой. При исследовании проб травы второго укоса, мы выделили меньше инвазионных личинок нематодир, чем в пробах травы первого укоса.
Яйца, яйца с личинкой и инвазионные личинки во внешней среде дольше сохраняются в фекалиях, чем без них. Так, в пробе культуры яиц (100 экз.) нематодир от 29.07.1992 г. на часовом стекле около 5% яиц не развились, в остальных - инвазионные личинки нематодир. При исследовании проб яиц через месяц установили, что из половины яиц вылупились инвазионные личинки. Важно отметить, что вышедшие инвазионные личинки из яиц были подвижными, но дальнейшие наблюдения показали, что инвазионные личинки становятся неподвижными, тело выпрямлено или изогнуто (7.12.1992 г.). При исследовании проб фекалий ягнят, впервые вышедших на пастбище, яйца нематодир мы обнаруживали на 21-25 дни после выгона их на пастбище.
