Содержание к диссертации
Введение
I. Обзор литературы 7
1. Авермектинсодержащие препараты в борьбе с паразитозами животных 9
1.1 Препараты на основе ивермектина Ивомек, Баймек, Ивертин и др. : 9
1.2 Препараты на основе натуральных авермектинов: Аверсект-1, Ниацид, Ниацид-гранулы, Аверсект, Авертин и др . 19
1.3 Дектомакс 23
1.4 Препараты, содержащие в качестве действующего веществамоксидиктин и милбемицин 24
2. Различные лекарственные формы авермектинсодержащихпрепаратов 28
II. Собственные исследования 33
1. Материалы и методы 33
2 Эпизотология наиболее распространенных паразитозов в Рязанской области 34
3. Технология получения нового противопаразитарного препарата ниацид-премикс на основе авермектинов. 41
3.1 Культивирование продуцента, выделение из биомассы ихимическая очистка авермектинов 41
3.2 Подбор ингридиентов и оптимизация рецептуры препарата 44
3.3 Оптимизация последовательности операций при изготовлении препарата. 53
4. Изучение основных характеристик препарата ниацид-премикс . 54
4.1 Сохранность и стабильность препарата. 54
4.2 Токсикологические параметры препарата. 56
4.2.1. Острая токсичность. 56
4.2.2. Хроническая токсичность. 57
4.3 Действие препарата ниацид-премикс наиммуннобиологические показатели организма животных 58
4.3.1. Показатели клеточного и гуморального иммунитета 58
4.3.2. Действие препарата на показатели естественной резистентности59
4.3.3. Гематологические и биохимические показатели крови животных. 61
4.4 Переносимость препарата ниацид-премикс 63
5. Изучение противопаразитарной эффективности ниацид премикс. 65
5.1 Эффективность препарата при лечении паразитозов свиней. 65
5.2 Эффективность ниацид-премикс против эктопаразитов крупного рогатого скота. 68
6. Экономическая эффективность препарата 69
Обсуждение результатов 72
Выводы 79
Практическое использование результатов 80
Библиографический список 81
Приложения 109
- Препараты на основе натуральных авермектинов: Аверсект-1, Ниацид, Ниацид-гранулы, Аверсект, Авертин и др
- Различные лекарственные формы авермектинсодержащихпрепаратов
- Эпизотология наиболее распространенных паразитозов в Рязанской области
- Изучение основных характеристик препарата ниацид-премикс
Введение к работе
Актуальность проблемы. Среди широкого круга лекарственных средств, применяемых против паразитозов в ветеринарии в последнее время, ведущее место занимают препараты авермектинового ряда. Это связано с тем, что препараты на основе авермектинов обладают широким спектром действия и более экологически чистые, чем известные химические аналоги. Ранее во многих странах мира наиболее широко применялся препарат Ивомек, созданный учеными фирмы MSD (W.C. Campbell, V.W. Benz, 1984; W.C. Campbell, M. Easterbrook, 1985; J.C.J.W. Knox, K.S. Marbury and others, 1989) и содержащий в качестве действующего вещества (ДВ) комплекс химически модифицированных, т.е. гидрированных авермектинов Bia и В]Ь - ивермектин.
Ивермектин используется в качестве действующего начала большинства и других зарубежных противопаразитарных препаратов (Ивомек плюс, Баймек, Пандекс, Ивомек пурон и др.).
Работы по созданию отечественной; технологии биосинтеза авермектинов были начаты в конце 80-х годов учеными МГП «Бифидум» и успешно завершились созданием препаратов Аверсект-1, Ниацид, Аверсект-2 ( Мосин В.А., Дриняев В.А., Мирзаев М.Н., 1992; 1994; Мирзаев М.Н., Девришов Д.А., Савченков, 1995). Научно-техническая информация, полученная при этом, послужила основой создания других отечественных авермектинсодержащих препаратов для защиты растений и животных от широкого круга паразитов (клещи, вши, тли, колорадский жук, гельминты). В ранних публикациях по авермектиновой проблеме отмечалось, что препараты на основе модифицированных авермектинов менее токсичны и более эффективны, но это оказалось не совсем соответствующим действительности. На самом деле, как показывают публикации последнего времени, препараты Аверсект-2, Ниацид, Авертин, содержащие в своем составе натуральные авермектины, относятся к IV
классу токсичности и в терапевтических дозах безвредны для животных. Это свидетельствует о том, что, выбранное отечественными учеными направление по созданию противопаразитарных препаратов на основе немодифицированных авермектинов, оказалось весьма полезным и перспективным. Сказанное подтверждается и тем, что в настоящее время в РФ зарегистрирован ряд отечественных авермектинсодержащих препаратов (Аверсект-2, Авертин, Ниацид), хорошо зарекомендовавших себя в ветеринарии при лечении и профилактике широкого спектра паразитозов животных.
В то же время нельзя не отметить наличие определенных недостатков у известных препаратов отечественных и зарубежных производителей -они неудобны для применения крупным животным, когда вводят более 5-6 мл препарата и приходится делать инъекции в разных местах. Кроме того, известно, что длительное применение одних и тех же препаратов ведет к адаптации паразитов к ним, т.е. отбору резистентных форм паразитов. Поэтому не вызывает сомнений актуальность исследований, направленных на создание новых форм и композиций авермектинсодержащих препаратов широкого спектра действия.
Цель и задачи работыЦелью работы является разработка технологии; получения новой композиции противопаразитарного препарата в форме премикса и изучение основных параметров безопасности и эффективности его
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
-оптимизировать компонентный составав препарата, содержащий авермектины и другие ингредиенты;
-изучить острую и хроническую токсичность препарата;
-изучить действие препарата на основные иммунобиологические показатели организма животных;
-установить эффективность препарата против паразитов животных;
- испытать препарат в производственных условиях;
-разработать проект нормативно-технической документации на препарат;
Научная новизна. Впервые разработана технология получения новой
композиции противопаразитарного препарата в форме премикса не
имеющего аналогов нигде в мире. На основе авермектинов,
продуцируемых Streptomycis avermitilis, пшеничных отрубей и
биологически активных минералов типа цеолитов. Цеолиты — обладают
сорбционными, каталитическими, молекулярно-ситовыми,
ионообменными свойствами. Они способны адсорбировать на себя и выносить из кишечника токсические вещества, нормализуют баланс минеральных компонентов в организме.
Практическая ценность работы. Для профилактики и лечения паразитозов крупного рогатого скота предложена новая форма препарата, содержащего в качестве действующего' вещества натуральные авермектины.. Результаты работы вошли в разрабатываемую в настоящее время нормативно-техническую документацию (НТД) — Технические условия на производство препарата и Наставления по его применению в ветеринарной практике.
Положения, выносимые на защиту:
Технология получения новой формы противопаразитарного препарата на основе ^модифицированных авермектинов, циалитов и отрубей; пшеничных.
Данные по изучению токсикологической и \\иммунобиологической\\ характеристики препарата.
Результаты апробации препарата в лабораторных и производственных условиях.
Апробация. Результаты диссертационной работы представлены на международной практической конференции посвященной 80-летнему юбилею
ветеринарной службы Монголии. г.Улан-Батор, 2003г.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 3 работы.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 109 страницах и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, сведения о практическом использовании результатов, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы, который включает 203 источников, в. том числе 73 иностранных, и приложение. Иллюстрационный материал диссертации включает 10 рисунков и 19 таблиц.
Препараты на основе натуральных авермектинов: Аверсект-1, Ниацид, Ниацид-гранулы, Аверсект, Авертин и др
Таким образом, удачная комбинация 1%-ного раствора ивермектина и 10%-ного раствора клорсулона при подкожном введении из расчета 1 мл/50 кг веса животного обеспечивает максимальную эффективность препарата при трематодозах и нематодозах жвачных животных [31]. Специальная лекарственная форма ивермектина для лошадей -Эквалан представляет собой препарат пастообразной консистенции, содержащий 1,87% ивермектина. В Казахстане испытан! Эквалан при параскаридозе, оксиурозе, стронгилятозах пищеварительного тракта и гастрофилезе лошадей. Пасту задавали per os индивидуально в дозе 200 мкг/кг по ивермектину. Против всех паразитов получена 100%-ная эффективность [59]. Исследованиями иностранных ученых показана высокая эффективность ивермектина в форме пасты при паразитозах лошадей [175, 176]. Эквалан применялся при нематодозах овец. Препарат вводили в дозе 200 мкг/кг. ЭЭ Эквалана составила 98 - 100% против Haemonhus contortus, Ost. Circumcincta, Trichostongylus axei [175]. Ивомек премикс для свиней — представляет собой сыпучую смесь, содержащую 0.6% ивермектина. Применяется с кормом групповым способом или индивидуально. Эффективен против аскарид, эзофагостом, метастронгил, вшей, чесоточных клещей. Рекомендован только для свиней на откорме. Препарат дают в течение 7 дней, 333 г Ивомек - премикса добавляют на 1 т корма. Ивомек - премикс показал 100%-ную эффективность при параскаридозе, гастрофилезе и стронгилятозах пищеварительного тракта лошадей. Аналогичная эффективность выявлена при оллуланозе, аскаридозе и эзофагостомозе свиней [36,115]. Отмечена 92-98%-ная эффективность болюсов, содержащих ивермектин в дозе 10 мкг/кг и более при нематодозах желудочно — кишечного тракта и дыхательных путей у телят [194]. L2 Препараты, содержащие в качестве действующего вещества натуральные авермектины аверсект-1, ниацид, ниацид-гранулы и др.. Аверсект-1 (АС-1) - прозрачная, вязкая жидкость светло-желтого цвета. Препарат разработан учеными Mill «Бифидум» НПО «Биотехнология»(Техническиеусловия№ от 1992г). Действующее вещество представляет собой комплекс природных авермектинов с преимущественным содержанием группы В. Изготовители препарата рекомендуют применять его при экто- и эндопаразитозах крупного рогатого скота. Форма выпуска флаконы 50-100 мл. инъекционный раствор. Доза для жвачных - 1 мл / 50 кг массы животного.
В результате применения АС-1 учеными было сделано заключение о высокой эффективности АС-1 при диктиокаулезе и стронгилятозах пищеварительного тракта: ЭЭ составила 97-100 %, ИЭ-96.6- 99.7 % [66]. Эффективность Аверсекта при подкожном введении была . нестабильной при трихостронгилоидозах крупного рогатого скота. Однако при диктиокаулезе данный препарат показал 100%-ную эффективность [5, 30,72]. При некоторых нематодозах свиней Аверсект, инъецированный подкожно в дозе 1 мл / 33 кг или 1 мл / 50 кг массы животного, обладает: при оллуланозе 100%-ной и 57,14%-ной эффективностью, при аскаридозе -100 и 58.8%-ной, при эзофагостомозе - 97 и 100%-ной и при трихоцефалезе 52,3 и 40.1%-ной, соответственно дозам препарата [35]. Как указывают некоторые авторы [118], по своему нематодоцидному действию I мл Аверсекта эквивалентен 1 мл Ивомека. В результате токсикологической оценки аверсектиновой мази, действующим началом которой, является природный авермектиновыи комплекс, установлено, что мазь не является токсичной [88]. Величина СК50 для изолированных, клешей Psoroptes cuniculi после воздействия аверсектина и Аверсекта составили 0,0003 и 0,0006% соответственно, а Ивомека - 0,0005%. Акарицидная активность аверсектина in vitro по отношению к Psoroptes cuniculi в 1,6 раза выше, чем у Ивомека. Однако Аверсект был менее активен. Авторы это объясняют смягчением его действия ингредиентами, входящими в состав Аверсекта. Токсичность аверсектина и Аверсекта была проверена на белых мышах, кроликах, овцах и телятах. Препараты вводили через рот в дозах от 30 до 100 мкг/кг. Величина ЛД50 для белых мышей аверсектина и Аверсекта по ДВ была одинаковой и составила 52 мг/кг, а ивермектина — 25-40 мг/кг. ЛД50 Аверсекта превысила 5000 мг/кг. Кроликам, овцам и телятам Аверсект применяли при псороптозе. Он оказался эффективным при двукратной инъекции через 8 дней в дозе 0,5-1 мл на 50 кг живой массы. В результате испытаний Аверсекта при подкожном введении на 200 спонтанно инвазированных овцах установлена 100 %-ная эффективность при диктиокаулезе [67]. В результате гельминтоово- и лярвоскопических исследований через 14 дней после введения Аверсекта-установлена высокая эффективность против диктиокаул, нематодир и других стронгилят, а также против кровососок. На мониезий препарат не действовал [114]. Аверсект -2 - прозрачный инъекционный раствор, содержащий 1% авермектинового комплекса (Аверсектин С) на водно-спиртово-полимерной основе. Дозировка и показание к применению аналогичны Аверсекту (АС-1). По данным исследователей при легочных и желудочно-кишечных нематодозах крупного рогатого скота Аверсект показал 100%-ную эффективность [6,24]. Установлена 100%-ная эффективность Аверсекта, инъецированного однократно в дозе 1 мл /33 кг или 1 мл/50 кг, при аскаридозе, эзофагостомозе и оллуланозе [45]. Дуотин - представитель группы МЦЛ, стерильный раствор для подкожных инъекций, содержащий 1 % абамектина. Предназначен для лечения крупного рогатого скота от экто- и эндопаразитов. Дуотин рекомендуется применять в дозе 1 мл на 50 кг массы животного.
Дуотин (абамектин, авермектин В1) в экспериментах зарубежных авторов [157, 197, 202] оказался высокоэффективным препаратом против нематод пищеварительного тракта (гемонхов, остертагий, трихостронгил, кооперий, хабертий, эзофагостом) и дыхательных путей (диктиокаул) у крупного рогатого скота. Показано, что эффективность Дуотина при подкожном введении в рекомендуемой изготовителем дозе составляет 90,5% при парафиляриозе лошадей [44]. При лечении нематодозов крупного рогатого скота на Алтае сообщается о высокой эффективности Дуотина [68]. 100%-ая эффективность при диктиокаулезе и гиподерматозе жвачных животных. В отношении трихостронгилид ЭЭ была 84.3 —100% [5,6]. Авторами констатируется исключительно высокая эффективность дуотина при экто- и эндопаразитозах крупного рогатого скота. Так, на 98 % снизилось количество личинок возбудителя диктиокаулеза, ИЭ составила 99.7 % [13]. По их мнению, Дуотин обеспечивает 100 %-ную эффективность против гемонхов, трихостронгил и 99,6 %-ную — против
Различные лекарственные формы авермектинсодержащихпрепаратов
В настоящее время известно значительное количество различных лекарственных форм акарицидов, инсектицидов, содержащих в качестве ДВ химические вещества или метаболиты различных микроорганизмов-продуцентов, (болюсы, суспензии, пасты, порошки, растворы и др).
Такое широкое разнообразие форм препаратов, созданных на основе метаболитов микроорганизмов, подтверждает их преимущество перед химическими как в плане экологии, так и по широте спектра противопаразитарной активности. Именно по этой причине поиск новых биологических соединений, которые могут служить основой удобных и безопасных для применения в животноводстве препаратов, является актуальной проблемой ветеринарной медицины и биотехнологии.
Значительный интерес для биотехнологов представляет и наличие возможности расширения спектра препаратов за счет селекции новых высокоактивных продуцентов не только «классических» авермектинов, но и милбемицинов, моксидектина. Получение сверхпродуцентов указанных биологически активных веществ (БАВ) может способствовать как резкому снижению себестоимости готовых лекарственных средств, так и повышению их противопаразитарной активности. Наметившийся в последнее время отбор резистентных форм паразитов к Ивомеку, Цидектину также является сигналом к ускорению работ по созданию новых рецептур лекарственных средств.
Таким образом, анализируя представленную литературную информацию о современных противопаразитарных. препаратах, можно подчеркнуть, что в последнее время в ветеринарии применяются различные формы препаратов. Нельзя не отметить также наметившуюся тенденцию к замене химических препаратов на более экологически чистые биологические. В этом плане особое внимание уделяется авермектинам, обладающим очень широким спектром антипаразитарной активности и практически безвредным для теплокровных в рекомендованных дозах.
В зарубежных странах разработка препаратов авермектинового ряда осуществляется на основе ивермектина - химически модифицированных авермектинов. В то время как в Российской Федерации наиболее широкоеразвитие получило направление по созданию препаратов на основе натуральных авермектинов. По имеющимся на сегодня литературным данным гидрированные авермектины, как основа противопаразитарных препаратов, не обнаруживает никаких преимуществ перед природными аналогами. Так отечественные препараты Аверсект, Ниацид, Рустомектин, созданные на; основе научно-технических данных, полученных учеными НПО «Биотехнология» -Mill «Бифидум», ни по эффективности, ни по стабильности и безвредности не уступают импортным аналогам- Ивомек, Баймек и др.
Из изложенного становится понятным перспективность исследований по созданию новых форм противопаразитарных препаратов, содержащих в качестве ДВ натуральные авермектины. Создаваемые препараты при этом должны быть удобными в применении и высокоэффективными против широкого спектра экто- и эндопаразитов различных видов животных.
Однако из литературных данных известно, что препараты,, изготовленные на основе авермектинов, более экологически чистые, чем их химические аналоги, и поиск новых соединений, удобных и безопасных для применения в животноводстве, более безопасных для организма животных, длительно сохраняющих активность и экологически безопасных для окружающей среды, является актуальной проблемой ветеринарной медицины.
Учитывая изложенное, целью нашей работы является получение новой лекарственной формы противопаразитарного препарата на основе комплекса натуральных авермектинов и циалитов.
Это связано с тем, что требования к лекарственным средствам постоянно растут. Если до недавнего времени основным требованием к противопаразитарным препаратам было эффективность, соответствиеобщепринятым органолептическим показателям (консистенция, цвет запах и др.), то в последнее время большое внимание уделяется каждому из компонентов, входящих в состав препарата. На самом деле, современное лекарственное средство является сбалансированным соотношением множества ингредиентов. Действующее вещество препарата совместно со всеми другими ингредиентами обеспечивает лечебно-профилактическое качество препарата и поэтому возникает необходимость тщательного подбора, контроля и соблюдения технологических операций при его изготовлении.
В процессе приготовления оптимальных рецептур препаратов существенное значение имеет подбор вспомогательных компонентов, не обладающих фармакологической активностью, но обеспечивающих растворение, эмульгирование, суспензирование действующего вещества.
Как правило, вспомогательные вещества должны быть индеферентными по своим физиологическим действиям на организм, достаточно устойчивы к воздействию различных химических, физических и биологических факторов среды. Они не должны оказывать влияние на физиологическую активность лекарственных веществ и хорошо высвобождать их. Понятно также, что вспомогательные компоненты должны по возможности усиливать влияние действующего вещества и тормозить проявление отдельных нежелательных свойств компонентов, обеспечивать необходимую консистенцию и форму, соответствующую разработанному способу применения [15].
Эпизотология наиболее распространенных паразитозов в Рязанской области
Для оценки общего состояния по распространенности паразитарных заболеваний в хозяйствах Рязанской области нами проведены исследования проб фекалий и соскобов кожи животных в период 1999-2003 гг. Параллельно проводилась также работа по анализу данных районных ветеринарных лабораторий, ежегодно фиксировавших динамикупаразитозов по хозяйствам области. В итоге этих исследований установлено, что в целом по области наиболее распространенным паразитозом крупного рогатого скота является гиподерматоз. При этом экстенсивность инвазии в период 1998-2003 гг. находится примерно на одном уровне Х-У . Из полученных результатов видно также, что наиболее инвазированными являются хозяйства Касимовского и Ермишинского районов, а в хозяйствах Пителенского и Михайловского районов животные поражены гиподерматозом в наименьшей степени (Табл. 1).
Анализ данных динамики паразитозов по отдельным хозяйствам области проведен в 20 хозяйствах и установлено, что наиболее часто встречаются гиподерматоз, коровьи вши и аскаридоз свиней и диктиокаулез. Привлекает внимание то, что значительная степень инвазии псороптозом отмечена только в АОЗТ «Заречное»(Табл.№5).
Как видно из данных табл.№4 распространенность гиподерматоза в колхозе «Приокский» и СПК «Новая жизнь» колеблется в пределах 4-36% и 12,5-50,6% соответственно. Коровьи вши в отдельных хозяйствах встречаются у подавляющего большинства животных, Так, в ДСХО «Новый путь» и СПК «Ока» в отдельные годы наблюдалось 100% поражение животных, а в период 1998-2003 гг. в указанных хозяйствах инвазированность коров составляет 30-100%, табл.№5
Таким образом, в хозяйствах Рязанской области наиболее значимыми паразитозами КРС являются гиподерматоз, коровьи вши и псороптоз. Эти заболевания встречаются практически во всех хозяйствах, наносят значительный экономический ущерб и поэтому борьба с ними на основе новых экологически чистых и эффективных противопаразитарных средств является актуальной и требующей своего решения задачей.3. Технология получения нового противопаразитарного препарата Ниацид — премикс на основе авермектинов
Препарат Ниацид — премикс в качестве действующего вещества содержит полный комплекс натуральных, т.е. негидрированных авермектинов или комплекс из 2-х компонентов-Віа и Btb, известный как Абамектин (Авермектин).
Как уже отмечалось выше, по своей химической: природе авермектины относятся к макроциклическим лактонам и в своем составе содержат 8 компонентов, отличающихся сочетанием радикалов СНз, СгН5, ОН, Н, ОСНз и имеют молекулярную массу в пределах 859-805D. В практической биотехнологии наиболее часто используются биологически активные формы Віа и Вів, имеющие молекулярную массу 873 D и 859 D и суммарную формулу С48Н72О4 и С48Н70О14 соответственно. Хорошо известно, что биосинтез таких относительно крупных молекул микроорганизмами, осуществляется на стадии вторичного метаболизма. С точки зрения биотехнологии это свидетельствует о необходимости строгого контроля и оптимизации стадии культивирования продуцента целевого продукта в стационарной фазе.
Как известно, авермектиновый комплекс, продуцируемый микроорганизмом S. avermitilis, локализован в биомассе продуцента, т.е. в отличие от многих известных биологически активных веществ, продуцируемых стрептомицетами, авермектины не выделяются в КЖ.
Поэтому, если не проконтролировать процесс биосинтеза, особенно, на конечной стадии, когда начинается лизис мицелия продуцента, возможны большие потери целевого продукта [80].
Для оптимального ведения биосинтеза важным является также правильный подбор исходных условий культивирования продуцентов. Поэтому уточнение влияния инокулята на развитие целевых культур является важным: этапом отработки технологических процессов микробиосинтеза.
Для получения авермектинового комплекса микроорганизм Streptomyces avermitilis ВНИИСХМ -56 культивировали в глубинных условиях (колбы качалочные на 750мл, ферментаторы 250 л) на средах, содержащих в качестве основных ингредиентов:соевую муку 1,0-1,2%; дрожжи кормовые - 0,4-0,6%; кукурузныйэкстракт 0,3-0,4%; глюкоза - 2,0-4,0 %, картофельный отвар - 0,3-0,8%.
В качестве инокулята использовали 36-часовой вегетативный посевной материал (ВПМ), который вносили в ферментационную среду в количестве 3-5% от объема среды. Это количество инокулята является оптимальным для изучаемой культуры и используемых режимов культивирования. Экспериментально показано, что скорость роста микроорганизма возрастает с увеличением количества инокулята, но внесение в среду более 10% инокулята не выгодно. Все изложенное хорошо видно из данных рис. 2, показывающих, что скорость роста продуцента авермектинов в период 0-48 час.при плотности посева 1%, 5%, 10% и 20% составляет 0,8; 1,4; 1,8; 1,9; 2,08;2,02г/л.час.
Изучение основных характеристик препарата ниацид-премикс
Одним из важнейших параметров фармацевтических средств является их стабильность. От этого параметра зависят условия хранения, время хранения и другие важные характеристики, определяющие в целом терапевтические и коммерческие качества препарата. Поэтому представляется естественным то, что при разработке новых лекарственных средств обязательно устанавливаются параметры стабильности, как действующего вещества, так и готовой формы препарата. Для упрощения работ по определению стабильности препаратов предложен метод «ускоренного старения», заключающийся в хранении исследуемых образцов препарата при относительно высоких температурах.
В своих исследованиях мы хранили; препарат при 35-40 С и этот режим считали экстремальным для препарата, т.к. уже через 6 месяцев активность снизилась примерно на 50%. При хранении препарата в режимах 5-7 С и 20-25 С активность препарата в течение 12 месяцев сохраняется на исходном уровне. Как показано в табл. №7 через 18 месяцев хранения активность снизилась на 20%.
Таким образом, из представленных данных можно заключить, что срок хранения препарата в нормальных (комнатных) условиях составляет не менее 12 месяцев и они совпадают с ранее полученными результатами о стабильности ДВ препарата. Как видно из данных таблицы 7 исходные характеристики авермектинового комплекса (абамектина) при хранении в течение 3-х лет не претерпевают существенных изменений, т.е. ДВ препарата Ниацид-премикс отличается высокой стабильностью.
Острую токсичность оценивали на белых беспородных мышах, получавших различную дозу препарата. Как показывают данные,представленные в табл.5, доза препарата по ДВ ниже 30-35 мг/кг мало токсична для мышей, а при скармливании препарата в дозе 60 мг/кг наблюдается 100%-ная гибель животных. Среднесмертельная доза, рассчитанная известным методом (Першин Г.Н., 1950), по ДВ составляет 44,875 мг/кг массы животных.
Интоксикация у мышей проявлялась в виде следующих признаков: угнетенное состояние, мышечный тремор, судороги, что характерно для отравления авермектинами из-за их нейротоксического действия. Из полученных результатов следует, что Ниацид-премикс можно отнести к малотоксичным веществам (IV класс, ГОСТ 12,1-007-76). Изучение параметров хронической токсичности препарата проводилось на беспородных белых крысах массой 110-120 г. Опытнойгруппе из 6 животных ежедневно скармливали препарат в дозе 50 мкг/кг. Другой группе из 6 животных скармливали ежедневно по 25 мкг/кг по ДВ, что соответствует примерно 1/1075 от LD5o. Контрольные животные ежедневно получали препарат без ДВ. В течение 3 месяцев наблюдений не отмечено негативного воздействия премикса на физиологическое состояние животных. По внешним признакам и по массе тела опытные и контрольные животные также не отличались. Эти данные свидетельствуют о том, что Ниацид-премикс при длительном скармливании не вызывает интоксикации животных и не обладает кумулятивными свойствами. 4.3 Действие препарата Ниацид-премикс на некоторые иммунобиологические показатели организма животных 4.3.1 Показатели клеточного и гуморального иммунитета Действие препарата Ниацид-премикс на Т - и В - клеточное звено иммунитета изучали на белых мышах массой 18-20 г. В опыте было исследовано 40 мышей, которых разделили на 2 группы. Первая группа получала премикс в дозе 200 мкг/кг по ДВ, вторая - контрольная получала препарат без ДВ. Полученные данные свидетельствуют о достоверном повышении числа ауто-РОК интактных животных на 5-7 сутки и дальнейшем снижение к 20-25 суткам до физиологической нормы. Относительное количество ауто-РОК в крови мышей, получавших препарат, на 2-е и 7-е сутки опыта составляет 3,9±0,51% и 4,7+0,38% соответственно, те же показатели в контроле составляют 2,1 ± 0,23% и 2,9 ±0,31%. На 20-25 сутки с начала опыта количество ауто-РОК в крови контрольных и опытных животных находится на одном уровне ив пределах физиологической нормы..3.2 Действие препарата на показатели естественной резистентности
В лабораторных условиях действие препарата Ниацид-премикс на показатели естественной резистентности животных изучали на белых мышах. Препарат давали с кормом в дозе 200 мкг/кг массы, бактерицидную активность сыворотки крови и содержание лизоцима контролировали до дачи препарата, через 7; 15 и 24 сутки после начала эксперимента. Данные таблицы №10 показывают некоторое повышение содержания лизоцима в сыворотке крови подопытных животных на 7-15 сутки после начала скармливания препарата, но к 25-30 суткам эти показатели в опыте и контроле практически выравниваются. Влияние препарата Ниацид-премикс на показатели естественнойрезистентности лабораторных мышей
