Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 10
1.1. Арахноэнтомозы плотоядных животных как сформировавшиеся
паразитарные системы 10
1.2. Меры борьбы и новые инсектоакарициды при арахноэнтомозах плотоядных в современной ветеринарной практике 24
2. Собственные исследования 37
2.1. Материалы и методы исследований 37
2.2. Результаты исследований 51
2.2.1. Физико-химические свойства препарата инсакар 51
2.2.2. Сравнительная оценка фармако-токсикологических и инсектоакарицидных свойств препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» 52
2.2.2.1. Острая токсичность препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» при введении в желудок 52
2.2.2.2. Изучение острой накожной токсичности препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» 55
2.2.2.3. Изучение кумулятивных свойств препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» 57
2.2.2.4. Местное действие препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс»
на кожу 61
2.2.2.5. Действие препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» на конъюнктиву глаза 62
2.2.2.6. Кожно-резорбтивное действие препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» 63
2.2.2.7. Оценка сравнительной эффективности акарицидных свойств препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» 71
2.2.3. Изучение аллергизирующих свойств препарата «Инсакар плюс» 77
2.2.4. Изучение иммунотоксических свойств препарата «Инсакар плюс» 78
2.2.4.1. Оценка Т-клеточного звена иммунной системы 78
2.2.4.2. Реакция прямой гемаглютинаци 81
2.2.5. Изучение овоцидного действия препарата «Инсакар плюс» в лабораторных условиях 85
2.2.6. Изучение терапевтической эффективности препарата «Инсакар плюс» при энтомозах и акарозах плотоядных животных в производственных условиях 86
2.2.7. Изучение профилактической эффективности препарата «Инсакар плюс» при иксодидозах собак 91
2.2.8. Изучение сравнительной эффективности препаратов «Инсакар плюс» и «Инспектор Тотал С» при демодекозе собак 91
2.2.9. Схема и способы лечения арахноэнтомозов плотоядных животных препаратом «Инсакар плюс» 94
3. Обсуждение полученных результатов 96
4. Выводы 107
5. Практические предложения 109
6. Список использованной литературы
- Меры борьбы и новые инсектоакарициды при арахноэнтомозах плотоядных в современной ветеринарной практике
- Сравнительная оценка фармако-токсикологических и инсектоакарицидных свойств препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс»
- Оценка сравнительной эффективности акарицидных свойств препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс»
- Изучение профилактической эффективности препарата «Инсакар плюс» при иксодидозах собак
Введение к работе
Актуальность темы. Арахноэнтомозы плотоядных животных
распространены повсеместно: встречаются на всех материках, где обитают плотоядные животные, они имеют широкий ареал и проникают с животными во всё новые места обитания. (Галузо И.Г., 1950; Беклемишев В.Н., 1955; Бердыев А., 1981; Непоклонов А.А., Брюшинина Г.Г., Ивашкова Е.И., 1983; Алексеев А.Н., 1985; Водянов А.А., 1986; Василевич Ф.И., 1986; Кербабаев Э.Б., 1998; Mueller R.S., 2007 и др.).
В развитии кожных заболеваний плотоядных животных важную роль играют эктопаразиты. Наиболее распространены из арахнозов плотоядных животных саркоптоз, нотоэдроз, отодектоз и демодекоз. К паукообразным принадлежит и группа иксодовых клещей - наружных паразитов животных, зарегистрированных в качестве биологических переносчиков кровепаразитов (пироплазмы) собак. Немаловажную роль в развитии кожных заболеваний играют энтомозы, вызванные блохами, вшами и власоедами. По данным А.М. Титаренко (2000), И.Е. Рогозиной (2004, 2005), Т.С. Катаевой (2009) и др. в последние годы отмечена тенденция к увеличению распространения арахноэнтомозов плотоядных. Это связано с повышением поголовья собак и кошек, увеличением популяции бродячих животных (источников инвазии), содержанием собак и кошек на низком уровне ветеринарного обслуживания.
В настоящее время в ветеринарной практике используется большое количество ветеринарных препаратов с инсектицидным и акарицидным действием. Необходимость применения данных препаратов связано с тем, что заболевания, вызываемые насекомыми и клещами, инвазивны и причиняют значительный ущерб здоровью животных: кровососущие насекомые, клещи, блохи при укусах вызывают беспокойство и стресс; инокулируя при укусе биологически активные вещества и, выделяя продукты жизнедеятельности, они вызывают раздражение, воспалительную, аллергическую реакцию, токсикоз; при паразитировании клещей травмируется кожа, нарушается ее целостность, открываются ворота инфекции. При высокой степени инвазии возможно развитие анемии, истощение, снижение иммунитета. Иксодиды являются переносчиками опасных инфекций и инвазий (пироплазмоз, эрлихиоз, боррелиоз и т.д.) (Непоклонов А.А. с соавт., 1983; Тимофеев Б.А., 1992).
На протяжении многих лет основными методами борьбы с эктопаразитами животных остается применение химических средств. Начиная с 1950-х годов массовое использование химических инсектоакарицидов способствовало появлению резистентных популяций вредных насекомых и клещей (Brown A.W.F., 1976; Рославцева С.А., 1988; Сальникова О.Г., Яровая Н.В., 2011).
Актуальной задачей для ветеринарных специалистов является разработка
новых препаратов, а также поиск иной стратегии применения существующих
инсектоакарицидных средств, в результате чего свести к минимуму
формирование устойчивых популяций эктопаразитов. Для интенсификации
борьбы с арахноэнтомозами животных необходимо применять
комбинированные препараты с разным механизмом действия, что уменьшит развитие лекарственной устойчивости, повысит эффективность обработок,
сократит кратность обработок, снизит затраты, уменьшит токсичность воздействия на животных.
Комбинации препаратов с разным механизмом действия не только более надежны, но и уменьшают развитие лекарственной устойчивости. Привыкание у насекомых приводит к снижению эффекта при длительном использовании препаратов. Поэтому целесообразна ротация различных средств с определенной периодичностью. Обработки животных обязательно сочетают с применением регуляторов роста и размножения насекомых для их уничтожения в окружающей среде (Стринадкин П.С., Андричук Б.В., Домацкий Н.И., 1982; Богданов М.Р., Мигранов М.Г., 1994; Дьяченко Ю.В., Водянов А.А., 1997; Грапов А.Ф., 1999; Енгашев С.В., Ларионов С.В., 2002; Соколов В.Д., Андреева Н.Л., Ноздрин Г.А. и др., 2003).
Для расширения ассортимента отечественных средств, эффективных и
безопасных в применении, на базе института гельминтологии (ВИГИС)
разработан новый препарат с инсектоакарицидным действием «Инсакар».
Изначально было предложено 4 композиции препарата с различным
качественным и количественным составом активных компонентов
(бензилбензоат, фипронил, перипроксифен). По результатам ранее проведенных исследований в лабораторных условиях выделили композицию-4 (с последующим названием «Инсакар плюс»), которая показала выраженную острую акарицидную активность и продолжительное остаточное действие в течение 30 дней. Кроме того, выделили композицию-1 (с последующим названием «Инсакар»), которая также обладала продолжительным остаточным действием в течение 30 дней, но 100% гибель клещей при первом контакте с обработанной поверхностью наступала на порядок дольше (Арисов М.В. и др., 2011). В исследованиях М.В. Арисова (2010, 2011) были представлены данные о высокой инсектицидной эффективности обеих композиций препарата при энтомозах собак.
На первом этапе нашей работы было определение более эффективной, безвредной и экономичной композиции из ранее выделенных двух препаратов с различным качественным и количественным содержанием активных компонентов: инсакар, содержащий в качестве действующих веществ фипронил 9%, пирипроксифен 2% и вспомогательные компоненты; инсакар плюс, содержащий в качестве ДВ бензилбензоат 20%, фипронил 5%, пирипроксифен 2% и вспомогательные компоненты.
Цель и задачи исследований. Цель работы – на основе
экспериментальных исследований определить более эффективную,
безвредную и экономичную композицию из двух препаратов «Инсакар» и
«Инсакар плюс» с различным качественным и количественным содержанием
активных компонентов, а также изучить фармако-токсикологические свойства и
лечебно-профилактическую эффективность выбранного препарата при
арахноэнтомозах плотоядных животных.
Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:
- на основании фармако-токсикологических исследований и оценки
сравнительной инсектоакарицидной эффективности препаратов «Инсакар» и
«Инсакар плюс» определить более безвредную, эффективную и экономичную
композицию;
- изучить аллергизирующие и имунотоксикологические свойства
препарата;
- изучить овоцидное действие препарата в лабораторных условиях;
- изучить лечебно-профилактическую эффективность препарата при
арахноэнтомозах плотоядных животных;
- разработать схему и способы лечения арахноэнтомозов плотоядных
животных препаратом «Инсакар».
- разработать инструкцию по применению капель инсектоакарицидных
«Инсакар» при арахноэнтомозах плотоядных животных.
Научная новизна. По результатам доклинических и клинических исследований двух препаратов выделен препарат «Инсакар плюс», показавший лучшую эффективность.
Изучены фармако-токсикологические свойства препарата «Инсакар плюс», результаты которых позволили научно обосновать безвредность препарата для животных в терапетических и повышенных дозах. Изучена лечебно-профилактическая эффективность препарата «Инсакар плюс» при арахноэнтомозах плотоядных животных. Разработаны схема и способы лечения арахноэнтомозов плотоядных животных препаратом «Инсакар плюс».
Разработана Инструкция по применению капель инсектоакарицидных «Инсакар» при арахноэнтомозах плотоядных животных.
По результатам исследований получен патент на изобретение РФ № 2456982 от 27 июля 2012 года «Инсектоакарицидное средство для лечения плотоядных животных».
Практическая значимость. Дано научно-практическое обоснование применения в ветеринарии нового инсектоакарицидного препарата «Инсакар». Разработаны схема и способы лечения арахноэнтомозов плотоядных животных препаратом «Инсакар».
Разработана и утверждена на Ученом Совете ГНУ «ВИГИС» Инструкция по применению капель инсектоакарицидных “Инсакар” при арахноэнтомозах плотоядных животных (протокол №7 от 29.09.2011).
Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях Ученого Совета ВИГИС 2011-2013 гг.; на научно-практических конференциях ««Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (г. Москва, 2011; 2012 гг.).
Личный вклад диссертанта. Представленная диссертационная работа
является результатом 3-летних научных исследований автора. Работа по
проведению фармако-токсикологических исследований и оценки
сравнительной инсектоакарицидной эффективности препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» и изучению лечебно-профилактической эффективности
препарата «Инсакар плюс» при арахноэнтомозах плотоядных животных выполнены автором самостоятельно.
Схема и способы лечения арахноэнтомозов плотоядных животных
препаратом «Инсакар», Инструкция по применению капель
инсектоакарицидных «Инсакар» при арахноэнтомозах плотоядных животных
разработаны совместно с научным руководителем. Диссертация выполнена
под научным руководством доктора ветеринарных наук, ведущего научного
сотрудника лаборатории иммунологии ГНУ «Всероссийский научно-
исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина»
Россельхозакадемии, Арисова Михаила Владимировича, который оказывал
научно-методическую помощь при проведении исследований, анализе
полученных данных. Статьи, написанные в соавторстве, включают не менее
80% материалов в исследованиях аспиранта.
Основные положения, выносимые на защиту:
- сравнительная оценка препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» по
фармако-токсикологическим и инсектоакарицидным свойствам;
результаты исследований аллергических и иммунотоксических свойств препарата «Инсакар плюс»;
результаты изучения овоцидного действия препарата «Инсакар плюс» в лабораторных условиях и лечебно-профилактической эффективности при арахноэнтомозах плотоядных животных;
Меры борьбы и новые инсектоакарициды при арахноэнтомозах плотоядных в современной ветеринарной практике
R.S. Mueller (2004,2007) в своих работах отмечал, что демодекоз характеризуется развитием фолликулярных папул. Поражения встречаются чаще всего в области морды и конечностей. Автор отмечает, что демодекозный клещ встречается у разных видов животных, включая собак и кошек. Демодекоз у собак вызывается D. canis, а у кошек D. cati (D. folliculorum var. cati) и D. gatoi — с коротким телом. Клинически демодекоз проявляется чаще у собак, чем у кошек.
Иксодидозы - временное паразитирование иксодовых клещей на наземных позвоночных животных (крупного рогатого скота, лошадей, плотоядных животных и др.) и птиц. Ветеринарное значение они имеют как активные гематофаги и переносчики инфекционных и протозойных болезней. По систематическому положению относятся к классу Arachnida, семейству Ixodidae. Иксодовые клещи это раздельнополые хелицеровые членистоногие (тип Arthropoda) с непостоянной температурой тела, они являются представителями класса паукообразные (Arachnoidea), отряда паразитиформных (Parasitiformes), семейства Ixodidae (Суворова E.K., 1908; Галузо И.Г., 1947; Померанцев Б.И., 1950; Колонин Г.В., 1978, 1981;
Тагильцев А.А., Тарасевич Л.Н., Богданов И.И. и др., 1990; Кербабаев Э.Б., 1986, 1998, 2004; Белименко В.В., Христиановский П.И., Саруханян А.Р., 2008; Chinery W.A., 1973). Иксодовые клещи являются переносчиками возбудителей опасных бактериальных, вирусных, риккетсиозных и протозойных заболеваний человека и животных (клещевого энцефалита, чумы, туляремии, возвратного тифа, лихорадки КУ, Крым-Конго геморрагической лихорадки, пироплазмидозов). Поэтому иксодидозы животных представляют особый интерес для ветеринарии и медицины (Беклемишев В.Н.,1955; Балашов Ю.С., 1967; Чунихин СП., 1985; Алексеев А.Н., 1985). Патогенное воздействие на животных происходит при постоянном нападении иксодовых клещей. При этом у животных нарастает беспокойство, интоксикация и анемия, а в местах прикрепления клещей развивается воспалительный процесс с геморрагическим синдромом в дермальном слое, а при инфицировании возникают вторичные явления, зуд и дерматиты (Соболев H.A., Никольский С.Н., Никитин М.О., 1937; Балашов Ю.С., 1982; Поляков В.А., Узаков У.Я., Веселкин Г.А., 1990; Vasuki V., Rajavel A.R., 1992; Labuda M., Kozuch O., Zuffova E., Eleckova E., Hails R.S., Nutall P.A., 1997; Wirth M.C., Delecluse A., Walton W.E., 2001).
По данным Т. Г. Мельниковой (1963), В.А.Полякова, У.Я.Узакова, Г.А.Веселкина (1990) секреты слюнных желез клещей всасываются в кровь, вызывая интоксикацию организма с нарушением функций сердечнососудистой, нервной, дыхательной и пищеварительной систем. В секретах слюнных желез клещей обнаружены антигенные и ядовитые свойства, сильные антикоагулянты: - ингибиторы, тромбокиназы (Markwardt F., 1963).
Изучением иксодид более подробно начали заниматься в начале 20 века (Павловский Е.Н., 1926; Лотоцкий Б.В., 1945; Галузо И.Г., 1947, 1948, 1950; Померанцев Б.И., 1948, 1950 и др.). По данным Ю.С. Балашова (1998), Э.Б. Кербабаева (1998) иксодовые клещи распространены повсеместно, а вид Ixodes uriae может встречаться на побережьях Арктики и Антарктики.
Согласно работам Т.В.Новиковой, Н.В.Молотовой, H.A.Рыбакова и др. (2004), O.Л.Куликовой, Г.А.Саипова (2007), клещи являются космополитами, они встречаются в пустыне и в прохладном климате, но больше всего предпочитают высокую влажность и тепло.
По данным Н.И.Агринского (1962), В.В.Белименко,
П.И.Христиановского, А.Р.Саруханяна (2008) иксодовые клещи способны перезимовывать, переносить затопление мест их обитания в течение 12 суток. В голодном состоянии самки иксодовых клещей могут жить до 7 лет.
По данным Л.B.Бабенко, P.Л.Наумова (1973), Ю.С.Балашова (1961, 1962, 1998) в природных условиях клещи могут перезимовывать, находясь в различных фазах развития. Также авторы отмечают, что многие имаго иксодовых клещей могут долго находиться в голодном состоянии, такие виды как I. ricinus, Н. asiaticum в голодном состоянии в природных биотопах сохраняют жизнеспособность в течение двух лет.
В.В.Белименко, П.И.Христиановский, А.Р. Саруханян (2008) отмечают, что на территории Российской Федерации в 1960-80-е годы случаи нападения иксодовых клещей на собак регистрировали, в сельской местности и пригородах (на даче, охоте и т.д.), тогда как в 1990-2000 гг. подавляющее большинство случаев нападения клещей происходит на территории самих городов (в парках, скверах, и даже во дворах).
Экологические изменения, вызванные антропогенным воздействием: строительство коттеджей, баз отдыха в пригородной зоне, массовое расширение дачных участков, возрастающее число перемещений животных (собак и кошек) увеличивает контакт человека и домашних животных с природными очагами, что приводит к образованию благоприятных условий для обитания клещей и их прокормителей. Кроме этого повышенная загазованность атмосферного воздуха и пониженная концентрация кислорода, выраженная разобщенность мест обитания клещей, значительное разнообразие местных климатических условий, незначительное видовое разнообразие прокормителей (собаки, кошки, синантропные грызуны), высокая плотность транспорта, приводит к значительному росту в популяции аномальных клещей. При этом двигательная активность клещей и их агрессивность возрастает с ростом интенсивности заражения (Гордиенко Л.H., В.Г.Федоров, Нестеров И.А., 2000; Новикова Т.В., Молотова Н.В., Рыбаков H.A. и др., 2004; Бессонов A.C., 2004; Христиановский П.И., Белименко В.В., 2004).
Сравнительная оценка фармако-токсикологических и инсектоакарицидных свойств препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс»
Изучение сравнительной эффективности препаратов «Инсакар плюс» и «Инспектор Тотал С» при демодекозе собак проводили на базе ветеринарной клиники «Беланта» г. Москвы на 34 спонтанно зараженных собаках разных возрастов, пород и массы с разными формами и тяжестью течения болезни, зараженных Demodex canis. При клиническом обследовании наблюдали поражения на передней части морды, в области надбровных дуг, губ, щек, локтей и шеи. В указанных местах отмечали выпадение волос, сухость и утолщение кожи с образованием складок, которые покрыты отрубевидными чешуйками крошковидной консистенции. Диагноз подтверждали результатами микроскопии соскобов, взятых с нескольких мест пораженных участков. Животных разделили на 4 группы: животных 1 группы (13 собак) обрабатывали препаратом «Инсакар плюс», 2 группу (13 собак) - «Инспектор Тотал С», 3 группу (6 собак) обработали препаратом «Инспектор Тотал С» по методу и дозам применения препарата «Инсакар плюс», 4 группа (2 собаки) служили контролем, их не обрабатывали.
Раствор для наружного применения «Инспектор Тотал С» в 1 мл в качестве действующих веществ содержит фипронил – 10% и моксидектин – 2,5%, а также вспомогательные компоненты: спирт изопропиловый, полиэтиленгликоль, диметилсульфоксид.
Препарат «Инсакар плюс» применяли животным согласно разработанной временной инструкции по применению. Перед обработкой у животных предварительно очищали очаги поражений от чешуек и струпьев при помощи ватного тампона, смоченного теплым маслом. Препарат наносили накожно, втирая в пораженные участки с захватом по периферии до 2 см здоровой кожи в дозе 1,5 мл/ 2-10 кг массы тела двукратно с интервалом 15 суток. Наряду с применением препаратов назначали витамины и иммуностимуляторы согласно инструкциям. «Инспектор Тотал С» применяли животным согласно инструкции по применению путем капельного нанесения на сухую неповрежденную кожу в дозе 2,5 мл на 10-25 кг массы тела животного. Перед использованием у пипетки отламывали верхнюю часть. Препарат, раздвинув шерсть, наносили животным в места, недоступные для слизывания, непосредственно на кожу между лопатками у основания шеи. При обработке крупных животных содержимое пипеток наносили на кожу в 3-4 места. Обработку собак проводили 4-х кратно с интервалом 28 суток.
Третью группу собак обработали препаратом «Инспектор Тотал С» аналогично препарату «Инсакар плюс». Перед обработкой у животных предварительно очищали очаги поражений от чешуек и струпьев при помощи ватного тампона, смоченного теплым маслом. Препарат наносили накожно, втирая в пораженные участки с захватом по периферии до 2 см здоровой кожи в дозе 2,5 мл/ 10 кг массы тела двукратно с интервалом 20 дней. В зависимости от обширности демодекозной инвазии дозировку увеличивали до 1,5 мл/ 2 кг достаточную для обработки всех поражений. Наряду с применением препарата назначали витамины и иммуностимуляторы согласно инструкциям.
После каждой обработки за животными вели наблюдение: учитывали общее состояние, прием корма и воды, поведение, осматривали кожный покров, а через 15 суток после второй и четвертой обработок проводили микроскопию соскобов, взятых с нескольких мест пораженных участков кожи.
Все результаты исследований подвергли статистическому анализу по методике Стьюдента-Фишера (Н. А. Плохинский, 1978), с использованием методов современной прогностики.
Капли инсектоакарицидные “Инсакар” - композиция 1 (Инсакар) в качестве действующих веществ содержит: фипронил 9%, пирипроксифен 2%, гвоздичное масло и вспомогательные компоненты; композиция 2 (Инсакар плюс), содержит в качестве ДВ: бензилбензоат 20%, фипронил 5%, пирипроксифен 2%, гвоздичное масло и вспомогательные компоненты.
Препараты представляет собой прозрачную маслянистую жидкость светло-желтого цвета, со слабым специфическим запахом.
Препараты относятся к противопаразитарным средствам, активны против вшей, блох, власоедов, иксодовых, саркоптоидных и тромбидиформных клещей, паразитирующих на плотоядных животных.
Входящий в состав препарата фипронил обладает выраженным контактным инсектоакарицидным действием на личиночных и половозрелых фаз развития блох, вшей, власоедов, иксодовых и саркоптоидных клещей, паразитирующих на плотоядных животных.
Механизм действия фипронила заключается в блокировании ГАМК-зависимых рецепторов эктопаразитов, нарушении передачи нервных импульсов, что приводит к параличу и гибели насекомых и клещей.
Входящий в состав препарата бензилбензоат обладает острым акарицидным действием на личинок и имаго иксодовых, саркоптоидных и тромбидиформных клещей, а также обладает выраженным инсектицидным действием. Бензилбензоат проникает через хитиновый покров клеща и накапливается в организме паразита в токсических концентрациях, вызывая его гибель.
Оценка сравнительной эффективности акарицидных свойств препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс»
Эпикутанная проба. В течение 72 часов после нанесения испытуемого препарата сенсибилизированным и контрольным животным по характеру кожной реакции (отсутствие гиперемии, инфильтрации) обработанные участки не отличались у опытных и контрольных животных. Реакция оценена по шкале в баллах: 0 – видимой реакции нет. Отрицательная кожная реакция свидетельствует об отсутствии гиперчувствительности немедленного и замедленного типа как у сенсибилизированных, так и контрольных животных.
Внутрикожная проба. При введении препарата у сенсибилизированных и контрольных крыс на месте инъекции появилось покраснение в виде «пуговки». В течение 12 часов покраснение на месте введения препарата рассасывалось, и постепенно переходила в бледно-розовый оттенок в обеих группах с мелким шелушением эпидермиса. По истечении 24 часов на коже сенсибилизированных и контрольных животных отклонений не отмечено.
Конъюнктивальная и назальная пробы. Конъюнктивальная реакция при закапывании препарата не отличалась как у сенсибилизированных, так и у контрольных животных. В течение 1 часа отмечали покраснение всей конъюнктивы и склеры, в последующем покраснение переходило в легкое покраснение. Через 24, 48 часов не было отмечено каких-либо изменений слизистой оболочки и склеры глаз в обеих группах.
При оценке назальной реакции установлено, что при закапывании испытуемого препарата наблюдали чихание, усиление секреции слизи и незначительную гиперемию слизистой оболочки в обеих группах. Через 24, 48 часов ни каких отклонений на слизистой оболочке носа отмечено не было.
Всасывание веществ, попадающих на слизистые оболочки, происходит быстро и, соответственно, реакции в связи с этим развиваются также быстро, как аллергические, так и раздражающего характера. Отмеченные отклонения в течение 12 часов, при постановке конъюнктивальной и назальной проб в обеих группах свидетельствуют о слабо выраженном действии препарата на слизистые оболочки.
Изучение действия препарата на клеточное звено иммунитета предполагает использование тестов, дающих представление о функциональной активности Т-лимфоцитов. К таким реакциям относится реакция гиперчувствительности замедленного типа, которая направлена на определение способности различных препаратов, влиять на продукцию сенсибилизированных лимфоцитами медиаторов разнонаправленного действия, вовлекающих клетки в системы мононуклеаров (фагоцитов) в иммунный ответ, или наоборот, тормозящих миграцию. РГЗТ подтверждает наличие клеточнозависимого иммунитета. В основе этого процесса лежит иммунологическая специфическая реакция между АГ и Т-лимфоцитами.
Через 24 часа после разрешающей инъекции определили массу опытной (Мо) и контрольной (Мк) лап, по результатам которых вычислили индекс реакции ГЗТ (ИР) вычисляли для каждой мыши по формуле: ИР= Мо – Мк/ Мк. (таблицы 18, 19, 20, 21) Таблица 18 Контрольная группа
Результаты тестирования способности организма экспериментальных животных к антителопродукции против тимусзависимого антигена при введении испытуемого препарата представлены в таблицах 22-24. Таблица 22 Реакция гемагглютинации (разовая терапевтическая доза 0,02 мл/кг накожно, однократно)
Приведенные данные показывают, что накожное однократное применение испытуемого препарата в терапевтической и десятикратно увеличенной терапевтической дозах не вызывает изменение интенсивности антителопродукции против тимусзависимого антигена. Титр гемагглютининов в сыворотке крови животных, получивших различные дозы испытуемого препарата, не отличался от такового в контроле. На толерантность гуморального иммунного ответа к действию испытуемого препарата в испытанных дозах указывают также индексы действия препарата, равные 1,01 и 0,98 (таблица 25, рис. 9). Таблица 25 Интенсивность антителопродукции против тимусзависимого антигена у мышей при накожном применении препарата «Инсакар плюс» группа доза препарата кратность введения log Vi титра антител индекс действия (ид) 1 0,02 мл/кг однократно 5,7±0,34 1,01 2 0,2 мл/кг однократно 5,5±0,37 0,98 контроль - - 5,6±0,36 Рис. 9. Интенсивность антителопродукции против тимусзависимого антигена у мышей при накожном применении препарата «Инсакар плюс». 2.2.5. Изучение овоцидного действия препарата «Инсакар плюс» в лабораторных условиях.
Препараты, не обладающие овоцидной активностью, не могут обеспечить эффективного лечения животных, пораженных арахноэнтомозами, так как, уничтожая имагинальные стадии эктопаразитов, через определенное время заболевание возобновляется из-за появления личинок и имаго из сохраненных яиц клещей и насекомых.
В опытах по изучению овоцидного действия препарата использовали яйца иксодовых клещей. Препарат при помощи пульвелизатора (ручного) наносили на все яйца. Тестом овоцидного действия препарата являлось отсутствие развившихся из яиц личинок в опытах и нормальное развитие в контроле.
В результате изучения овоцидного действия препарата «Инсакар плюс» в лабораторных условиях было выявлено, что препарат обеспечивает гибель яиц клещей на 100 % (таблица 26). Таблица 26 Овоцидное действие препарата «Инсакар плюс» Группа Препарат (ДВ) Количество яиц в опыте, шт. Гибель яиц, шт. Гибель яиц, % 1 Инсакар плюс(фипронил,бензилбензоат,перипроксифен) 50 50 100 2 Вода 50 7 14 2.2.6. Изучение терапевтической эффективности препарата «Инсакар плюс» при энтомозах и акарозах плотоядных животных в производственных условиях.
Для подтверждения эффективности препарата «Инсакар плюс» с января по ноябрь 2011 - 2013 годах провели широкие производственные испытания в различных ветеринарных учреждениях г. Москвы и Московской области. Всего было подобрано и обработано 100 собак и 100 кошек разного возраста и пород, пораженных арахноэнтомозами.
1. Определение эффективности препарата проводили на спонтанно зараженных собаках и кошках разного возраста и пород в ветеринарном кабинете «Анимонда». Всего было обработано 7 собак, больных саркоптозом; 6 собак и 11 кошек, больных отодектозом; 5 кошек, больных нотоэдрозом; 3 собаки, зараженных Demodex canis.
Препарат наносили однократно (при демодекозе двукратно) накожно на пораженные участки с захватом по периферии до 1-2 см здоровой кожи в дозе 1,5 мл/ 2-10 кг (собаки) и 1 мл/ 3 кг (кошки) массы тела. При отодектозе в каждую ушную раковину больным животным с внутренней стороны закапывали по 3 капели / 1 кг веса с последующим легким массажем, сложив ушную раковину пополам. При применении препарата не отмечено каких-либо побочных явлений и осложнений.
Через 15 суток после обработок при клиническом и акарологическом исследовании опытных животных отмечали полное выздоровление.
2. В ветеринарной клинике «Беланта» исследования проводили с февраля по ноябрь 2011 года на спонтанно зараженных собаках и кошках разного возраста и пород. Всего было подобрано: 10 собак, зараженных Sarcoptes scabiei; 8 собак и 17 кошек, зараженных Otodectes cynotis; 11 кошек, зараженных Notoedres cati; 5 собак, зараженных Demodex canis. Диагноз, а также эффективность препарата подтверждали результатами микроскопии соскобов, взятых с пораженных участков.
Изучение профилактической эффективности препарата «Инсакар плюс» при иксодидозах собак
При оценке действия лекарственного препарата на иммунную систему информативным показателем является интенсивность продукции антител против тимусзависимого антигена (ЭБ), которая дает представление о функциональной активности трех клеточных систем – Т- и В- лимфоцитов, макрофагов и их кооперативном воздействии. В нашем случае титр антител определяли в реакции гемагглютинации (РГА), основанной на специфическом склеивании (лютинировать) Аг-несущих частиц (ЭБ), специфическими антителами, которые выработаны при сенсибилизации и содержащимися в сыворотке крови.
Приведенные данные показывают, что накожное однократное применение испытуемого препарата в терапевтической и десятикратно увеличенной дозах не вызывает изменений интенсивности антителопродукции против тимусзависимого антигена. Титр гемагглютининов в сыворотке крови животных, получивших различные дозы испытуемого препарата, не отличался от такового в контроле. На отсутствие негативного действия на гуморальный иммунный ответ к действию испытуемого препарата в испытанных дозах указывают также индексы действия препарата, равные 0,98 и 1,01.
Обобщая результаты оценки иммунотоксических свойств, следует отметить, что препарат «Инсакар плюс» в десятикратно увеличенной и терапевтической дозах не обладает иммунотоксическими свойствами.
В опытах по определению субхронической токсичности и влияния на организм плотоядных животных препарата «Инсакар плюс» автор диссертации не принимал участие, указанные опыты были проведены ранее научным руководителем. В субхронических экспериментах на крысах установлено, что доза препарата 1/5 от ЛД50 (8400 мг/кг) при накожном применении является токсичной – приводит снижению активности АЛТ и АСТ, повышению уровня мочевины и креатинина. Дозы 1/10 от ЛД50 (4200 мг/кг) и 1/20 от ЛД50 (2100 мг/кг) являются недействующими – не вызывали функциональных изменений в организме 104 животных. В исследованиях влияния препарата «Инсакар плюс» на организм собак было определено, что при пятидневном накожном нанесении живоным препарата в терапевтической, 3 и 5 раз увеличенных дозах не отмечено статистически достоверных изменений в физиологическом состоянии, морфологических и биохимических показателях крови и физико-химических показателях мочи. Препараты, не обладающие овоцидной активностью, не могут обеспечить эффективного лечения животных, пораженных арахноэнтомозами, так как, уничтожая имагинальные стадии эктопаразитов, через определенное время заболевание возобновляется из-за появления личинок и имаго из сохраненных яиц клещей и насекомых.
Препарат «Инсакар плюс» является комплексным, имеющий активные компоненты с овоцидным, лярвицидным и имагоцидным действием. По данным ранее проведенных исследований М.В. Арисовым (2011), препарат «Инсакар» на обработанных тест-поверхностях в лабораторных условиях показал выраженную острую акарицидную активность и продолжительное остаточное действие. Учитывая то, что овоцидное действие препарата не тестировалось, мы сочли важным провести указанное тестирование препарата «Инсакар плюс» в лабораторных условиях.
В опытах по изучению овоцидного действия препарата использовали яйца иксодовых клещей. Препарат при помощи пульверизатора (ручного) наносили на все яйца. Отсутствие развившихся из яиц личинок в опытах и нормальное развитие в контроле служило доказательством овоцидного действия препарата. В результате было выявлено, что препарат обеспечивает гибель яиц клещей на 100 %.
Для подтверждения эффективности препарата «Инсакар плюс» провели широкие производственные испытания в различных ветеринарных учреждениях г. Москвы, Московской и Смоленской области. Всего было подобрано и обработано 100 собак и 100 кошек разного возраста и пород, пораженных арахноэнтомозами. Полученные результаты в разных ветеринарных учреждениях были аналогичными, по данным которых при энтомозах, саркоптозе, нотоэдрозе и отодектозе однократная обработка препаратом «Инсакар» показала 100%-ную эффективность, а также высокую акарицидную эффективность при лечении демодекоза собак.
Изучение профилактической эффективности препарата «Инсакар плюс» при иксодидозах собак проводили в ветеринарных клиниках «Беланта» и «Зоомедик 1» г. Москвы, а также Успенской участковой ветеринарной лечебнице Вязниковского района Смоленской области. Всего было обработано 90 собак. В результате полученные данные во всех ветучреждениях показали, что профилактическая обработка препаратом «Инсакар плюс» собак от иксодидозов обеспечила продолжительный эффект (30 суток).
В сравнение препарату «Инсакар плюс» нам предоставили препарат «Инспектор Тотал С», обладающий, согласно инструкции, акарицидной эффективностью при демодекозе собак. Мы решили провести сравнительную оценку эффективности применения препаратов при демодекозе собак.
При изучении сравнительной эффективности препаратов «Инсакар плюс» и «Инспектор Тотал С» при демодекозе собак препарат «Инсакар плюс» при двукратной обработке показал 92,3 %-ную эффективность. Препарат «Инспектор Тотал С» при применении согласно инструкции не показал положительного терапевтического эффекта при демодекозе собак. При 2-х кратной обработке, применяя метод тотальной обработки поражений, препарат «Инспектор Тотал С» проявляет положительный эффект против клещей, но полного уничтожения не достигнуто. Через 30 суток после обработки клещи вновь начинали размножаться, а также начали проявляться и клинические признаки заболевания. При разработке инструкции по применению препарата и для дальнейшего его использования, было принято решение использовать общее название капли инсектоакариидные «Инсакар». В актах производственных 106 испытаний препарат «Инсакар плюс» также применяли под общим названием «Инсакар».
